邪毒壅盛证H22荷瘤小鼠肿瘤组织基因的表达特征研究

目的揭示H22荷瘤小鼠邪毒壅盛证肿瘤组织基因表达的特征。方法采用GeneChipMouseExon1．0STArray等技术及芯片分析方法，观察H22荷瘤小鼠邪毒壅盛、早期气虚、中期阳气虚及中晚期气阴阳虚证肿瘤组织基因表达的差异。结果筛选到邪毒壅盛证独特性高表达的基因32个，其中包括Tete3、Phf7、Ldhc等参与睾丸发育、精子或卵子发生的基因22个，Adipoq、Nream、Tnfaip6等与肿瘤有关的基因4个，以及Atp8b3、Pnpla3、Retn等其他功能的基因6个。筛选到邪毒壅盛证独特性低表达的基因2个，有Cort和LOC668417。结论邪毒壅盛证H22荷瘤小鼠肿瘤组织中存在大量独特性表达的基因，可能是该证候与其他证候区别的内在特征。     

正常气虚证小鼠甲状腺氧化磷酸化通路相关基因转录特征

目的:观察正常气虚证昆明小鼠甲状腺氧化磷酸化通路相关基因转录特征。方法:采用小鼠计量化辨证论治方法及Affymetrix GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array等技术,筛选正常气虚证昆明种小鼠检测其甲状腺基因差异表达的特征。结果:依据KEGG数据库小鼠氧化磷酸化通路与甲状腺芯片数据匹配后得到的85个基因,整体呈上调趋势,其中Ndufb3、Cox6b1、Atp5g3上调较为显著。结论:正常气虚证小鼠甲状腺氧化磷酸化通路相对表达量整体呈上调趋势,提示该通路总体处于比较活跃的代偿状态而非抑制。     

正常气虚小鼠下丘脑-垂体-睾丸轴相关基因转录的特征

目的:观察正常气虚小鼠下丘脑-垂体-睾丸轴与睾酮合成调节相关基因的转录特征。方法:采用小鼠标准化诊法和辨证方法,筛选出正常气虚小鼠与正常小鼠,采用GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array等技术,检测其下丘脑-垂体-睾丸轴有关基因的转录水平。结果:与正常对照小鼠比较,正常气虚小鼠下丘脑Gnrh1表达略增;垂体上Gnrh受体上调,但Cga、Fshb和Lhb下调;睾丸Cyp11a1、Cyp17a1、Hsd3b1、Hsd3b6等与睾酮合成相关酶一致上调。结论:正常小鼠出现气虚证时,垂体促性腺激素表达量略减,而睾丸合成睾酮的系列关键酶的表达活跃,这构成了正常气虚证小鼠下丘脑-垂体-睾丸轴的特征。     

UBE2D2基因在肝癌细胞中的作用及不同中医治法对其调控作用的影响

目的:观察不同中医治法对大鼠肝癌UBE2D2表达的调控差异,以及UBE2D2在人肝癌细胞增殖中的作用。方法:采用DEN诱发大鼠肝癌,分别经中药健脾益气、清热解毒、活血化瘀等治疗后,Affy-metrix rat 230A GeneChip arrays检测肝癌组织UBE2D2表达的差异;设计2个人UBE2D2基因siRNA靶点,将重组质粒经脂质体转入SMMC-7721人肝癌细胞株,MTT法检测细胞生长增殖情况、Realtime-PCR检测该基因的表达差异。结果:芯片结果显示,UBE2D2基因在大鼠肝癌形成后表达显著增加,不同中医治法对其具有不同程度的下调作用,其中健脾理气法下调作用较明显;采用MTT法筛选到1个UBE2D2基因RNA干扰有效靶序列,转染6 d后细胞的生长增殖得到了明显的抑制(与阴性对照组相比,P<0.01);实时荧光定量PCR检测表明,转染6 d后该基因的表达明显降低。结论:UBE2D2基因的高表达与肝癌细胞恶性增殖有关,而中药健脾理气治法对其具有下调作用。     

人铜锌超氧化物歧化酶基因在大肠杆菌中的高水平表达

人铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn Superoxide dismutase,SOD)是人体内超氧自由基(O·)的天然清除剂,实验证明,它对防止脂质过氧化、治疗冠心病、再灌流损伤(器育移植等)、关节炎及自家免疫等疾病有明显的疗效,是一个很有前途的活性多肽药物,因此,受到国内外研究者的高度重视。开展SOD的基因工程研究进而生产大量廉价的SOD产品具有重要的实用价值。本工作用化学法全合成了人铜锌SOD的基因,并在大肠杆菌中获得表达。     

降钙素基因的化学合成与克隆

本文报道用化学法全合成降钙素的基因。基因全长113碱基对。采用大肠杆菌偏爱密码子。整个基因分为6个片段合成。用T~4DNA连接酶一次连接成功,序列分析证明合成的基因序列与设计的一致。     

中医不同治法对成纤维细胞生长因子在大鼠肝癌中表达的影响

目的:观察成纤维细胞生长因子(FGF)在二乙基亚硝胺(DEN)诱发大鼠肝癌组织中的表达及不同中医治法的作用。方法:采用DEN诱发大鼠肝癌,随机分为正常组、模型组、喃氟啶组、抑癌扶正行气活血法组、清热解毒法组、行气活血法组、健脾扶正法组,应用Affymetrix Rat230A GeneChip及相关技术检测各组肝脏(含肝癌)FGF基因表达的差异。结果:Rat230A芯片中有24个FGFs、3个FGFRs、1个FGFBP,其中肝癌表达增加者15个,减少者13个。FGF13芯片读数(肝癌形成/正常肝脏)为10.8,FGF7芯片读数(正常肝脏/肝癌形成)为13.1。近10年有关FGFs文献857篇,涉及肝癌者仅49篇,仅3个基因(FGF1、FGF2及FGFR3)涉及。结论:FGFs基因在大鼠肝癌中的表达有一定意义,不同治疗方法对其表达水平存在差异。     

不同证候H22荷瘤小鼠肿瘤ABC转运蛋白家族基因转录特征

目的:观察不同证候H22荷瘤小鼠肿瘤组织ABC转运蛋白家族基因表达的特征。方法:对来源于早期邪毒壅盛和单纯气虚、中期阳气虚和中晚期气阴阳虚四种证候小鼠H22肿瘤组织4张Affymetrix GeneChip Mouse Exon 1.0 STArray数据标准化处理后,筛选其中的ABC转运蛋白基因进行差异分析。结果:从芯片中共筛选出与ABC转运蛋白有关的基因47个,以邪毒壅盛小鼠肿瘤基因转录最活跃,气虚次之,阳气虚最低;四种常见证候间共有25个基因转录具有明显差异;Abce1和Abcf1等7个基因中在四种常见证候肿瘤中转录水平最高。结论:Tap1(Abcb2)和Abcd2等6个高表达基因可能是邪毒壅盛型小鼠肿瘤增长快的重要因素;不同证候荷瘤小鼠肿瘤组织中的ABC转运蛋白基因转录既存在一定共性又存在很大差异,进一步证明了H22荷瘤小鼠证候客观存在的物质基础,为中医辨证论治提供分子依据。     

DEN诱发大鼠肝癌过程中肝组织基因表达谱的演变

目的:揭示肝癌诱发过程中肝组织基因表达谱的演变,为中医药防治原发性肝癌提供参考.方法:采用DEN诱发大鼠肝癌,分别于诱癌的第4周、8周、16周、20周(肝癌形成)切取肝(合肝癌)组织,常规提取RNA,Affymetrix Rat 230A GeneChip及技术检测大鼠肝组织基因表达的差异和演变.结果:在芯片的15710个基因中,正常组有9225个基因表达,诱癌4周表达增至9396个,8周增至9872个,16周增至10496个,20周有10420个.在肝癌诱发过程中,存在大量基因表达的消长以及高表达基因数的增加,其中部分已知基因的结果.结论:DEN诱发大鼠肝癌过程中基因组变化是十分复杂的,而且文献追踪表明,国内外对在这些基因的功能及其与肝癌发生、发展的关系大多不明确.因此,如何逐一找到那些起着关键作用的基因,进一步阐释其在肝癌的发生、发展和转归中的作用,及其与中医证候演变和相应治法的关系,是今后中医基础理论实验研究的重要方向.     

二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌组织下调的基因

  目的 运用基因芯片技术，观察二乙基亚硝胺（DEN）诱导大鼠肝癌（含肝）组织与正常对照大鼠肝组织比较表达下调的基因。方法 DEN诱发大鼠肝癌，应用Affymetrix Rat 230A GeneChip进行检测。结果 在芯片的15 710个基因中，剔除正常肝组织表达值读数在50以下的基因，正常肝脏基因表达大于肝癌基因的有248个，其中120个为EST片断，已知基因为128个。结论 DEN诱发大鼠肝癌的后基因组变化是十分复杂的，如何逐渐找到那些起着关键作用的基因，进一步阐释其在肝癌的发生、发展和转归中的作用，是今后工作的重点。