Ⅰ型登革病毒NS1蛋白特异性血清型单克隆抗体的制备及鉴定

目的研制Ⅰ型登革病毒(DEN1)非结构蛋白1(NS1)蛋白特异性单克隆抗体,鉴定其特异性。方法以具有良好免疫原性的DEN1重组NS1蛋白、DEN1全病毒及两者混合免疫共3种免疫方案,分别免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,杂交瘤细胞经间接ELISA法双筛I、FA和Western Blot进行mAbs的类型及亚类、特异性等鉴定。结果采用3种免疫方案免疫Balb/c小鼠,获得9株抗NS1蛋白的mAb,其亚类测定一株为IgG2a,另外8株为IgG1。这些mAbs与DEN1重组NS1蛋白和DEN1全病毒均结合,而且特异性好,仅1株杂交瘤分泌的单抗和其余3型DEN有交叉反应。结论成功获得了特异性针对DEN病毒NS1蛋白的特异性血清型mAb,将为进一步研究NS1蛋白的结构和功能及临床诊断试剂研发奠定基础。     

氯霉素乙酰基转移酶融合蛋白表达、纯化和鉴定

目的对氯霉素乙酰基转移酶(Chloramphenicol acetyltransferase,CAT)基因进行表达和纯化.方法通过PCR扩增编码CAT氨基酸序列的基因片断,并将之克隆入pGEX-2T载体.IPTG诱导蛋白融合表达,产物经琼脂糖亲和层析树脂纯化.免疫印迹鉴定纯化蛋白的抗原性.结果筛选得到的重组子诱导后表达相对分子质量约为52 600的CAT融合蛋白.树脂纯化及酶切后均得到高纯度的蛋白样品.纯化蛋白能与抗CAT抗体特异结合.结论本研究获得了CAT基因的融合表达蛋白,并对其完成纯化,为制备抗血清和抗体打下基础.     

广州市新发4例SARS患者SARS-CoV核衣壳蛋白和抗体变化规律

研究证明严重急性呼吸综合征(SARS)冠状病毒(CoV)的核衣壳蛋白(N)比较保守，具较强的免疫原性，在感染细胞中可大量的表达。作为病毒感染的靶标志物，检测N蛋白可能成为早期诊断的一种有用的方法。我们通过研究2003年12月至2004年1月在广州市新发4例SARS患者血液中的N蛋白和抗体的变化规律，探讨循环N蛋白在SARS早期诊断中的价值。     

免疫蛋白质组技术小鼠血清样品处理方法的比较分析

目的:建立适用于侵袭性真菌感染免疫蛋白质组学研究的小鼠血清样品处理方法.方法:用白蛋白和IgG去除试剂盒及CLEAN UP试剂盒处理血清,比较处理与未经处理样品的二维凝胶电泳图谱,以及ECL显色图谱的差异.并对该处理方法的稳定性和重复性进行初步评价.结果:用白蛋白和IgG去除试剂盒及CLEAN UP试剂盒处理小鼠血清样品的二维凝胶电泳图谱有更好的分辨率,其ECL显色图有更高的特异性和敏感性.且该处理方法重复性较好.结论:建立稳定的侵袭性真菌感染小鼠血清样品的处理方法,为进一步开展基于双向电泳的免疫蛋白质组学研究奠定了基础.     

侵袭性曲霉感染特异性抗体的筛选及其初步临床应用研究

目的 筛选出可用于侵袭性曲霉感染实验室早期诊断的特异性单克隆抗体.方法 应用单克隆抗体技术制备针对不同曲霉抗原的特异性抗曲霉单克隆抗体,根据单抗识别表位不同,初步筛选出两组灵敏度高、特异性强的单抗组合,并分别建立了双抗体夹心ELISA检测法.通过检测常见临床和环境分离曲霉株、马尔尼菲青霉及念珠菌培养液,感染动物模型标本,临床标本,初步评估检测方法的敏感性和特异性.并应用WB对抗体所识别靶标进行初步鉴定.结果 获得32株稳定分泌曲霉单抗的杂交瘤细胞株,建立了2种双抗体夹心ELISA法,第1种方法可识别环境和临床分离的19种曲霉.第2种方法仅特异性识别临床和环境分离的烟曲霉,与其他曲霉抗原无交叉.对同一种烟曲霉培养液而言,第1种方法可检测稀释度为第2种方法的10倍.WB分析显示该组单抗识别的靶标为相对分子质量在25 000～75 000之间的甘露聚糖蛋白.结论 本研究获得了可用于侵袭性曲霉感染实验室诊断的特异性单克隆抗体,单抗识别的抗原为相对分子质量在25 000～75 000之间的甘露聚糖蛋白.该抗原是侵袭性曲霉感染早期诊断的潜在标志物.     

轮状病毒无症状感染新生儿唾液和粪便中的SIgA含量

<正> 国外学者对新生儿轮状病毒(HRV)无症状感染者的血清、唾液和粪便中分泌型免疫球蛋白A(SIgA)含量研究颇多。在国内则仅限于测定腹泻新生儿粪便中SIgA含量。我们对本院产科婴儿室中13例粪便HRV阳性无症状、32例粪便HRV阴性的新生儿唾液和粪便中SIgA含量进行了测定,现报告如下。     

两种猪肺泡表面活性物质对离体灌洗鼠肺顺应性的改善作用

比较了用灌洗法和用粉碎法处理肺组织提取的两种猪肺泡表面活性物质（ＰＰＳ）对离体灌洗鼠肺顺应性的改善作用。结果：治疗后离体灌洗鼠肺静态肺顺应性恢复程度、压力容量滞后环面积的恢复程度，在对照组为－１．３９％±５．１６％，１．７４％±１８．４８％，在灌洗所得ＰＰＳ（ＬＰＰＳ）组和粉碎法所得ＰＰＳ（ＭＰＰＳ）组分别为９５．８４％±２０．９９％，８８．２±１６．０９％和６４．６７％±１８．２２％，３９．５２％±１６．０９％，均显著高于对照组（Ｐ＜０．０１），ＬＰＰＳ组和ＭＰＰＳ组比较，在前组均大于后组，有显著性差异（Ｐ＜０．０５）．提示：所提取的ＰＰＳ有不同程度的表面恬性，ＬＰＰＳ表面活性优于ＭＰＰＳ。     

抗烟曲霉单克隆抗体用于侵袭性烟曲霉感染病原学检测的实验研究

目的探讨自行研制的抗烟曲霉单克隆抗体在兔侵袭性烟曲霉感染动物模型中的应用。方法建立兔侵袭性烟曲霉感染动物模型;用双抗体夹心酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测兔血清中烟曲霉抗原;以免疫酶组织化学方法检测兔肺、肝、脾、肾组织中烟曲霉抗原。结果血清中烟曲霉抗原检测:接种烟曲霉抗原后24、48、72、96 h,血清中烟曲霉抗原检测阳性;免疫酶组织化学检测:接种后96 h,肺、肝、脾、肾组织免疫酶组织化学染色均为阳性。结论抗烟曲霉单克隆抗体在侵袭性烟曲霉感染的病原学诊断中有较大的应用前景。