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骨科门诊患者疼痛的护理 总被引:1,自引:1,他引:0
目的:探讨减轻骨科门诊患者疼痛的护理方法及措施。方法:对疼痛原因进行分析,分别采取心理护理及适当的药物镇痛、预防性用药等护理措施进行干预。结果:通过药物镇痛、预防性用药及护理,使患者思想轻松,提高了疼痛的阈值,增加了患者对疼痛的耐受力,减轻了患者的痛苦,减轻了其对机体的有害影响。结论:正确认识疼痛,掌握骨科领域各种原因所致疼痛的特点,有效地止痛,对骨科门诊患者十分重要。 相似文献
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HGPRT缺陷型T淋巴瘤细胞系的建立与鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
目的通过突变诱导次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)缺陷型的T淋巴瘤细胞系,为制备T细胞杂交瘤提供利于筛选的亲代细胞。方法通过乙基甲磺酸对Jurkat细胞进行突变,逐步提高培养液中6-巯基鸟嘌呤(6-TG)的浓度,筛选出对6-TG具有稳定抗性的单克隆细胞株Jur16-TG细胞。比较Jurkat细胞与Jur16-TG细胞在含6-TG培养液和HAT培养液中的生长情况。结果在含20μg/ml 6-TG的培养液中,Jur16-TG细胞能够稳定生长,而Jurkat细胞在培养1周后基本死亡。在HAT培养液中氨基喋呤的浓度为4×10-8mol/L或8×10-8mol/L时,Jur16-TG细胞4 d内基本死亡,而Jurkat细胞至少能存活7~10 d。Jur16-TG细胞与正常外周血淋巴细胞(PBL)的融合实验显示,35%的Jur16-TG细胞与PBL融合。结论突变筛选出的单克隆细胞株Jur16-TG具有6-TG抗性和在HAT培养液中不能生长的特性,证实该细胞为HGPRT缺陷型细胞株,并且该细胞株可有效地与原代淋巴细胞融合,从而为T细胞杂交瘤的制备提供了利于筛选的亲代永生化的T细胞。 相似文献
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目的:构建有功能的sHLA-A*0201-抗原肽四聚体,建立一套HLA Ⅰ类分子/抗原肽的四聚体制备技术。方法:利用基因工程及体外折叠技术构建sHLA-A*0201-LMP2A426-434复合物分子,并在BirA酶的作用下生物素化。与荧光标记的亲和素衍生物以分子数4:1结合而形成HLA-A*0201-LMP2A426-434四聚体。获得的四聚体对长期混合淋巴细胞培养中增殖的抗原特异性CTL进行检测,同时用细胞毒实验验证。结果:荧光标记的亲和素与生物素化的HLA-A*0201-抗原肽复合物分子正确结合,制备的四聚体能够与长期混合淋巴细胞培养出的特异性T细胞结合。结论:从结构与功能上证实成功地获得有功能的HLA-A*0201-抗原肽复合物四聚体。为进一步研究T细胞识别机制与功能奠定了基础,也为过程复杂的HLA-抗原肽四聚体制备提供了可行的免疫学监控方法。 相似文献
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可溶性HLA-A2-肽复合物的体外折叠与生物素化 总被引:8,自引:3,他引:8
目的 :可溶性HLA A2 抗原肽复合物的体外折叠复性与生物素化。方法 :原核高效表达的HLAH链及 β2m,在抗原肽 (EB病毒的膜潜伏蛋白LMP2A的NH2 CLGGLLTMV COOH残基 )的存在下 ,通过稀释复性折叠成HLA A2 抗原肽复合物 ,并在BirA酶的作用下进行生物素化 ,使生物素结合到HLA A2 抗原肽复合物中的H链C端。利用特异性抗体 (mAbW6 / 32和兔抗人 β2m抗体 )及链霉亲合素进行ELISA和Westernblot,检测稀释复性和生物素化的折叠产物。结果 :折叠复合物中 ,主要含有HLAH链聚合体、HLA A2 肽复合物单体及 β2m3种成分 ,其中H链聚合体与HLA A2单体可生物素化。结论 :成功地获得生物素化的HLA A2 抗原肽复合物单体 ,为进一步构建四聚体及制备人工抗原提呈细胞奠定了基础 ,也为过程复杂的HLA 抗原肽四聚体的制备提供了可行的免疫学监控方法 相似文献
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人β2m基因的克隆及表达 总被引:8,自引:1,他引:7
目的 克隆和表达HLA Ⅰ类分子轻链(β2m)基因,为人工制备HLA Ⅰ类分子提供基础。方法 利用逆转录PCR技术从Jeg-3细胞株中克隆β2m基因,与质粒pET22b( )重组,构建原核表达载体pET22b( )-β2m,转化宿主菌E.coli BL2l(DE3),诱导β2m基因高效表达,并采用双抗体夹心ELISA法对表达产物进行抗原性和功能鉴定。结果 酶切和测序证实β2m基因克隆和载体构建成功,目的蛋白在宿主菌中高效表达于包涵体中;通过包涵体的分离和纯化获得初步纯化的β2m,所制备的β2m能够与特异性抗体结合,并能与HLA 0281类分子重链形成具有天然构象的HLA 0281类分子。结论 人β2m基因能够在原核宿主中高效表达,表达产物具有形成HLA Ⅰ类分子的功能。 相似文献
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采用RT-PCR技术从HLA-A*0206和-A*0207阳性个体的PBMC中分别克隆出HLA-A*0206和-A*0207基因的全长cDNA序列,构建HLA-A*0206和-A*0207克隆载体。再利用PCR技术从构建的克隆载体中扩增HLA-A*0206和-A*0207的α链(重链)胞外段序列,分别经双酶切置换本室保存的HLA-A*0201-BSP重组体中的HLA-A*0201胞外段序列,使HLA-A*0206和-A*0207与BirA酶底物肽(BirA substrate peptide,BSP)序列融合,构建HLA-A*0206-BSP和-A*0207-BSP融合基因的表达载体,经限制性酶切和DNA测序证实。然后将该表达载体转化E.coliBL21(DE3)后获得表达产物,通过体外稀释复性,初步纯化的表达产物通过ELISA和Western blot检测证明能够与β2微球蛋白(HLA I类分子轻链)及HLA-A2限制性抗原肽(HBV core 18-27)折叠形成具有HLA I类分子天然构象的抗原肽/HLA-A2复合物单体。为进一步构建HLA-A*0206和-A*0207四聚体,探讨相应HLA-A2亚型的功能特点提供了物质基础。 相似文献
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sHLA-A*020-1抗原肽复合物的构建 总被引:1,自引:2,他引:1
以原核表达的sHLA A 0 2 0 1 BSP为重链 ,β2 m为轻链 ,与人工合成的EBV抗原肽LMP2A (4 2 6 4 34、NH2 CLGGLLTMV COOH )利用稀释法进行共折叠复性 ,形成可生物素化的可溶性HLA A 0 2 0 1抗原肽复合物。并利用仅与天然构象HLAI类分子结合的单抗W6 / 32 ,通过Dot ELISA和Westernblot对折叠产物的构象进行鉴定 ,证实复性后成功获得了天然构象的sHLA A 0 2 0 1 抗原肽复合物。为进一步组装可溶性HLA/抗原肽四聚体以及制备人工抗原提呈细胞奠定基础。 相似文献
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可溶性HLA-G1上调活化的同种反应性T细胞表达FasL促进其凋亡 总被引:1,自引:0,他引:1
目的探讨可溶性HLAG1对活化的同种反应性T细胞FasL表达及凋亡的影响。方法借助基因工程技术构建表达可溶性HLAG1的真核表达质粒;把重组质粒转染入宿主细胞,表达可溶性HLAG1并借助免疫亲和层析技术纯化可溶性HLAG1蛋白;用EB病毒转化的同种异体B淋巴细胞作为刺激细胞,通过长期混合淋巴细胞培养,激活同种反应性T细胞。活化T细胞经不同浓度可溶性HLAG1处理12h后,用Westernblot法检测其FasL表达情况;处理24h后,用FACS检测其凋亡情况。结果可溶性HLAG1能够上调活化的同种反应性T细胞表达FasL;能够促进活化的T细胞发生凋亡,且上述作用具有剂量依赖性。结论可溶性HLAG1分子能够使活化的同种反应性T细胞表达FasL升高,进而促进其凋亡。 相似文献