纳米中药升白液抗环磷酰胺所致小鼠免疫损伤的研究

目的:探究纳米中药升白液抗环磷酰胺所致小鼠免疫损伤的作用。方法:采用环磷酰胺(CTX)制备Balb/c小鼠免疫损伤模型,检测纳米中药升白液口服给药后不同时间段对环磷酰胺所致小鼠白细胞减少的保护作用。在纳米中药升白液口服给药8 d后,乙醚麻醉处死小鼠,称量胸腺、脾脏并计算其脏器指数;通过组织病理切片观察纳米中药升白液对小鼠肝脏、脾脏病理形态的影响。结果:CTX模型组白细胞数、胸腺及脾脏指数均明显低于正常对照组(P0.01);纳米中药升白液各剂量组给药8 d后的白细胞数、胸腺及脾脏指数均明显高于CTX模型组(P0.01或P0.05)。病理学检查显示,与正常对照组比较,CTX模型组脾组织和肝细胞坏死明显,脾脏和肝脏淤血明显,脾脏多核巨细胞反应明显,脾脏淋巴细胞数量减少;与CTX模型组比较,纳米中药升白液各剂量组脾组织和肝细胞坏死明显减轻,脾脏和肝脏淤血减轻,脾脏多核巨细胞反应明显减少,脾脏淋巴细胞数量回升(P0.05)。结论:纳米中药升白液对环磷酰胺所致的小鼠免疫损伤具有明显的防护作用。     

鉴定T淋巴细胞亚群的SPA-Ig直接花环法

用SPA-Ig 直接花环法检测T 淋巴细胞亚群,较间接荧光法简便、特异、经济,其方法如下。     

输注人PBMC建立“人-鼠”异种移植物抗宿主病模型1

目的:摸索X-GVHD模型的合适小鼠品系,建立稳定的“人-鼠”X-GVHD模型。方法:选取了裸鼠、NOD/SCID经亚致死剂量γ射线全身照射后,腹腔输注健康人外周血单核细胞(PBMC)建立异种X-GVHD模型。通过检测人T细胞在模型鼠外周血、组织、器官中的浸润情况等指标(采用流式细胞术和免疫组化技术),比较两种模型鼠中人免疫细胞的浸润率和各组生存时间,从而确定建立X-GVHD模型的合适小鼠品系,并摸索人PBMC的输注途径和合适细胞量,以及观察免疫细胞表型变化与功能的最佳时间窗口。结果:NOD/SCID鼠更适合诱导“人-鼠”X-GVHD模型的小鼠;腹腔输注途径和尾静脉输注途径对建立“人-鼠”X-GVHD模型无明显差异;腹腔输注5×107以上人PBMC可以成功建立“人-鼠”X-GVHD模型。在采用优化后的实验条件建立模型中,监测人T细胞表型动态变化与功能的最佳时间窗口为7~11 d;模型鼠的平均生存时间为(14.16±1.77)d。结论:NOD/SCID鼠通过腹腔注射5×107以上人PBMC可以成功建立“人-鼠”X-GVHD模型,7~11 d为监测人T细胞表型动态变化与功能的最佳时间。     

可诱导共刺激分子在系统性红斑狼疮患者外周血T淋巴细胞的表达

目的探讨可诱导共刺激分子(ICOS)在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血T淋巴细胞的表达。方法应用双色荧光抗体染色技术经流式细胞仪检测了33例SLE患者和16例正常人对照者外周血中T淋巴细胞表面ICOS的自然表达水平,同时收集SLE患者的实验室检查指标,并用SLE疾病活动指数(SLEDAI)来判定SLE患者疾病活动程度,比较分析不同组别SLE患者ICOS表达水平与SLEDAI的相关性。结果活动期SLE组T淋巴细胞ICOS表达水平明显高于正常人对照组(P<0.01)和非活动期SLE组(P<0.01),非活动期SLE组与正常人对照组T淋巴细胞ICOS表达水平则差异无统计学意义(P>0.05)。活动期组与非活动期组SLE患者T淋巴细胞ICOS表达水平均与SLEDAI呈显著正相关(r=0.71,P=0.001、r=0.56,P=0.03)。结论活动期SLE患者T淋巴细胞ICOS表达增高,ICOS可能与SLE的发病机制有关。     

血管内皮细胞系表达的HLA-G1抑制同种T细胞增殖及活性

目的研究血管内皮细胞系人脐静脉内皮细胞(ECV304)表达的HLAG1分子对同种异体T细胞增殖的作用。方法采用脂质体介导的DNA转染技术,将构建的真核表达质粒pcDNA3HLAG1转染ECV304,用免疫荧光法检测其表达的HLAG1分子。将表达HLAG1的ECV304与同种异体T细胞进行混合细胞培养后,用四甲基偶氮唑(MTT)比色法检测ECV304表达HLAG1对外周血T细胞增殖和抗原特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)杀伤活性的影响。结果ECV304转染pcDNA3HLAG1后可稳定表达HLAG1分子;转染空质粒pcDNA3和转染pcDNA3HLAG1的T细胞的刺激指数分别为(1.59±0.41)和(1.33±0.46),二组比较,差异有统计学意义(P<0.05);细胞毒实验显示,抗原特异性CTL对转染空质粒pcDNA3和转染pcDNA3HLAG1的ECV304的杀伤率分别为(64.81±3.07)%和(52.33±4.48)%,二组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论HLAG1分子可以抑制同种异体T细胞的增殖和CTL的细胞毒作用。     

sHLA-A*2402融合蛋白的制备与特性研究

本文用含有HLA-A*2402重链胞外段基因的质粒为模板进行PCR,利用下游引物拼接上依赖BirA的可生物化序列后,构建融合基因sHLA-A*2402-BSP,与质粒pET-21d重组后,在宿主菌E.coliBL21(DE3)中诱导表达。表达的融合蛋白与β2m及HLA-A*2402限制性抗原肽EB病毒BRLF1蛋白中的九肽NH2-TYPVLEEMF-COOH进行复性折叠,形成HLA-A*2402-抗原肽复合物单体,并用Westernblot和夹心ELISA法鉴定。证实成功地制备出sHLA-A*2402-生物素化序列融合蛋白并使之正确折叠复性。为研究在原核系统中表达、纯化与复性及体外构建MHCI类分子四聚体,探讨免疫识别机制奠定了基础。     

人工抗原提呈细胞的制备和应用的研究

目的 制备人工抗原提呈细胞（artificial antigen presenting cell,aAPC）并用它从HLA-A2阳性健康个体外周血单个核细胞（PBMC）中诱导和扩增特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）.方法 将HLA-A2-EBV四聚体分子和抗CD28抗体分子吸附固定在细胞大小的聚苯乙烯乳胶微球（5μm）表面制成aAPC;采用流式细胞仪表型分析;aAPC和HLA-A2阳性个体人外周血单核细胞进行混合淋巴细胞反应;用HLA-A＊0201-EBV四聚体染色法检测特异性CTL的频率;应用细胞内细胞因子染色法检测特异性CTL功能性细胞因子IFN-γ的分泌;采用LDH释放法检测特异性CTL的特异杀伤活性.结果 流式细胞仪分析显示微球表面吸附有HLA-A2-EBV四聚体分子和抗CD28抗体分子;四聚体检测及细胞内细胞因子染色法检测与经典细胞毒试验结果一致,结果表明aAPC在体外可诱导抗原特异性CTL的生成.结论 aAPC制备成功,并在体外有效地诱导抗原特异性CTL的生成.     

湖北省麻城市2010~2014年恶性肿瘤发病现状及趋势

[目的]分析麻城市居民恶性肿瘤发病流行特点和趋势,为开展肿瘤综合防治提供依据.[方法]运用描述流行病学研究,对麻城市2010～2014年12 252例恶性肿瘤患者的发病特征及趋势进行分析.[结果]恶性肿瘤年均发病率为212.09/10万(男性242.17/10万、女性178.49/10万)、中标率为167.47/10万(男性193.69/10万、女性139.74/10万),男女发病率差异有统计学意义(x2=275.934,P＜0.01);2010～2014年恶性肿瘤标化率呈上升趋势(x2趋势=31.028、P＜0.01);全人群癌发病率前5位依次为支气管和肺癌、胃癌、肝和肝内胆管癌、食管癌、肠癌,占全部肿瘤发病总数的69.47％;[结论]麻城市肿瘤发病率呈上升趋势,肺癌、消化系统肿瘤和女性乳腺癌是严重危害当地居民身体健康最主要的肿瘤,是当前肿瘤防治工作的重点.     

表达载体sHLA-A2-IgG1-Fc的构建与鉴定

目的构建表达载体pcDNA3.0-sHLA-A2-IgGl-Fc,为进一步真核表达可溶性HLA-A2-IgG1-Fc蛋白奠定基础。方法从T2细胞中提取总RNA,借助RT-PCR技术扩增包括信号肽的可溶性HLA-A2的cDNA序列并把其插入真核表达载体pcDNA3.0,然后经酶切和测序法鉴定;用PCR的方法从含IgG1-Fc基因的PIG质粒中扩增目的基因IgG1-Fc段,然后经酶切后插入前面构建好的表达载体pcDNA3.0-sHLA-A2中,最后经酶切和测序法鉴定。结果经酶切鉴定及测序分析,证实已将目的基因HLA-A2和IgG1-Fc片段插入载体pcDNA3.0。结论本研究成功构建表达载体pcDNA3.0-sHLA-A2-IgG1-Fc。