儿童反复呼吸道感染与免疫球蛋白G亚类缺陷

采用单克隆抗体酶联免疫吸附试验对5例年龄为2~8×8/12岁,反复呼吸道感染病儿的血清免疫球蛋白(Ig)G亚类作了测定,21名同龄健康小儿作为对照组.结果发现全部5例均有一种或一种以上IgG亚类缺乏:IgG_1缺乏症2例,IgG_2缺乏症、IgG_2—G_4缺乏症各1例,另1例常见变异型免疫缺陷病的血清4种IgG亚类均缺乏.该5例IgG亚类缺乏症的临床表现除反复上呼吸道感染外,尚有复发性口腔溃疡、反复脓皮病、急性中耳炎、慢性上颌窦炎、反复支气管炎.本文提示IgG亚类为一常见儿科疾病.     

自分泌IL-4对K562细胞诱导的CTL杀伤活性的影响

探讨ＩＬ－４基因修饰对Ｋ５６２细胞诱导的肿瘤特异性ＣＴＬ杀伤活性的促进作用及可能机理。采用逆转录病毒体ＬＸＳＮ将ＩＬ－４ ｃＤＮＡ导入Ｋ５６２细胞,经Ｇ４１８筛选后获得表达ＩＬ－４蛋白的Ｋ５６２克隆。以野生型和载体修饰的相应细胞为对照,检测了ＩＬ－４基因修饰Ｋ５６２细胞诱导的Ｔ细胞增殖反应,用＾５１铬（＾５１Ｃｒ）释放法检测ＣＴＬ杀伤活性。结果发现ＩＬ－４基因修饰的Ｋ５６２细胞诱导的Ｔ细胞增殖反应     

卡介苗接种预防毛细支气管炎婴儿日后发生喘息的探讨

为观察卡介苗（BCG）单用或联用干扰素γ（IFN-γ）和维生素A（VitA)对毛细支气管炎（毛支）患儿结核菌素纯蛋白衍化物（PPD）皮肤试验，喘息发作及单核细胞源性细胞因子白细胞介素18（IL-18）水平的变化。给予44例毛支患儿单纯BCG或合并IFN-γ/VitA治疗，于治疗前和3个月后进行PPD皮试，测定外周血单个核细胞体外产生IL-18的水平。随访时间平均1年，观察喘息发作情况，未接受BCG接种的19例毛支婴儿作为对照组。结果 BCG接种后PPD平均硬结直径大于干预前及毛支对照组恢复期，以合并IFN-γ，VitA治疗组更为突出。BCG接种组1年内喘息发作频率低于对照组恢复期。干预后IL18水平明显升高，尤以合并IFN-γ，VitA治疗组为高；PPD皮试强度与IL-18水平呈正相关。提示BCG可促进毛支患儿PPD皮试阳转率，增强IL-18活性，具有预防毛支患儿日后发展为哮喘的作用。IFN-γ，VitA可协同BCG的上述作用。     

白细胞介素-17对足细胞相关分子和凋亡的影响及其分子机制研究

目的 研究白细胞介素(interleukin,IL)-17对足细胞相关分子及其凋亡的影响,并探讨可能的分子机制.方法 以体外培养的足细胞作为研究对象,流式细胞仪检测不同浓度(1、10、50、100nm/ml)和不同作用时间(12、24、48、72h)IL-17对足细胞凋亡的影响;将足细胞分为空白对照组及100ng/ml IL-17诱导组,Real-time RT PCR法检测IL-17对足细胞相关分子Nephrin、WT1、Synaptopodin及阴离子蛋白Podocylaxin、凋亡受体Fas和FasL mRNA表达的影响;流式细胞仪检测足细胞Fas和FasL蛋白的表达;免疫细胞化学法检测足细胞WT1、Caspase8、Caspase3蛋白的表达.结果 (1)IL-17可促进足细胞凋亡,呈时间、剂量依赖性;同时IL-17可增加足细胞凋亡受体Fas的表达(P<0.01),并且增加其下游分子Caspase8、Caspase3的表达(P<0.01);(2)IL-17减低足细胞阴离子蛋白Podocylaxin的表达(P<0.05),对Nephrin、WT1、Synaptopodin的表达无影响(P>0.05).结论 IL-17可能通过抑制足细胞阴离子蛋白Podocylaxin表达,引起足细胞凋亡的方式来发挥对肾脏的损伤作用.     

大剂量静脉注射免疫球蛋白对新生儿肺炎T、B淋巴细胞功能的抑制作用

目的　观察两种剂量静脉注射免疫球蛋白（intravenous immunoglobulin，IVIG）对新生儿肺炎患儿的疗效及其免疫抑制作用，为IVIG在新生儿肺炎的应用提供依据。方法　随机选取41例新生儿肺炎患儿，分为对照组、500～700mg/kgIVIG组及1000～1200mg/kgIVIG组，后两组分别于病程第1～4天接受IVIG治疗，其余治疗三组相同。观察疗效并检测治疗前后患儿血清IgG、IgA、IgM和IgG亚类，T、B淋巴细胞增殖反应，外周血单个核细胞产生IgG亚类、IL-2、IL-4及IL-6能力。结果　两种剂量IVIG组患儿临床恢复情况与对照组相比差异无显著性。与对照组比较，大剂量IVIG组治疗后血清IgG及IgG亚类水平明显升高，但其T淋巴细胞增殖反应（40062±13274)～(24476±8241)cpm,B淋巴细胞增殖反应（1751±677)～(996±423）cpm,PBMC产生IL-2（472±201)～(185±83）ng/L及IgG     

丁酸氯维地平注射液的HPLC法测定

建立了高效液相色谱法测定丁酸氯维地平注射液。采用Venusil-XBP C18色谱柱,流动相为磷酸盐缓冲液(磷酸二氢铵1.15 g,加水900 ml溶解,用磷酸调至p H 4.0,再加水至1 L)∶乙腈(45∶55),检测波长240 nm。丁酸氯维地平在5~200μg/ml范围内线性关系良好,平均回收率为103.5%,RSD为1.6%。     

大鼠血清淀粉样物质P(SAP)基因的克隆及重组腺病毒制备

目的:制备能够表达大鼠血清淀粉样物质P(Serum amyloid P component,SAP)的重组腺病毒.方法:采用RT-PCR扩增的方法获取大鼠SAP,并将该基因采用定向克隆的方法克隆进入穿梭质粒pAdTraee-TO4中,进一步采用同源重组的方法将该质粒和腺病毒骨架质粒Adeasy-1在大肠杆菌BJ5183中同源重组,然后用脂质体介导的方法导入包装细胞HEK293中,产生表达目的基因的重组腺病毒,扩增病毒后用倍比稀释法测定其滴度.结果:通过PCR技术从重组穿梭质粒和重组腺病毒质粒中扩增出700 bp左右插入片段,测序结果和基因库中的基因序列一致.扩增后的重组腺病毒滴度为2.8×108pfu/ml.结论:成功构建了携带SAP基因的重组腺病毒载体Adeasy-1-SAP.为探讨SAP对肺纤维化的作用及其机制打下基础.     

噻唑蓝(MTT)法空斑形成实验在病毒检测中的应用

目的:探讨噻唑蓝(MTT)法空斑形成实验在病毒滴度检测中的应用。方法:用噻唑蓝(MTT)代替常规的中性红作为染色剂进行空斑形成实验MDCK和Hep-2细胞在12孔板上形成单层后,分别感染流感病毒和呼吸道合胞病毒,加入单层琼脂糖代替传统双层琼脂糖培养3-4天,用噻唑蓝(MTT)代替常规的中性红作为染色剂计数空斑。结果:⑴MTT法空斑形成实验检测流感病毒和RSV病毒滴度操作简单,时间短;⑵与常规中性红法空斑形成实验比较检测病毒滴度没有差异;⑶MTT法可以避免假空斑形成。结论:MTT法空斑形成实验可替代中性红法空斑形成实验,且更快速、准确。     

罗红霉素对哮喘儿童外周血单个核细胞Th1/Th2平衡的影响

目的观察不同浓度罗红霉素对哮喘儿童外周血单个核细胞(PBMC)中两个功能性亚群(TH1/TH2)功能状态的影响。方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测20例哮喘及19名健康儿童PBMC经不同浓度的罗红霉素体外干预培养后,上清中的IFN-γI、L-4I、L-10和IL-12水平变化。结果哮喘组儿童的PBMC分泌IL-4明显增多,IFN-γ/IL-4比值明显降低,哮喘组50μg/mL的罗红霉素可明显促进哮喘儿童PBMC分泌IFN-γ和IL-12,并可恢复TH1/TH2平衡,亦有促进IL-10分泌的倾向。结论50μg/mL的罗红霉素可明显促进IFN-γ及IL-12分泌,恢复哮喘儿童体内TH1/TH2平衡,并能促进IL-10分泌,有利于协调机体细胞和体液免疫的功能。     

IL-13和CD86对9HTE细胞株和哮喘患儿PBMC表达CD86水平的影响

目的 了解IL-13和CD86在哮喘发病中的作用及anti-CD86 McAb治疗哮喘的机理。方法 随机选择门诊哮喘急性发作期患儿30例，正常健康儿童30例作为健康对照组。分别用rhIL-13、TNF-α和rhIL-13 TNF-α干预9HTE人气道上皮细胞株和哮喘患儿外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell，PBMC)，用直接免疫荧光流式细胞术(FCM)检测9HTE人气道上皮细胞株表达CD86的百分率、PBMC中CD14^*细胞表达CD86的平均荧光强度(MFI)及脂多糖(LPS)刺激后PBMC中CD19^ CD86^ 双阳性细胞百分率。结果 (1)分别用TNF-α、rhIL-13和TNF-α rhIL-13干预9HTE细胞株后CD86的表达，三组之间表达的百分率差异无统计学意义；rhIL-13 anti-CD86 McAb干预9HTE细胞株后，9HTE细胞表达CD86水平较其他组降低，差异有统计学意义。(2)哮喘组中的空白组、IL-13组、TNF-α组、TNF-α IL-13组及anti-CD86组的CD14^ CD86^ 的平均荧光强度和CD19^ CD86^ 百分率均较相应的对照组高，差异有统计学意义。(3)TNF-α IL-13干预后，CD14^ CD86^ 的平均荧光强度和CD19^ CD86^ 百分率较对应的空白组、IL-13组和TNF-α组明显增高，差异有统计学意义；(4)anti-CD86 McAb干预后，CD14^ CD86^ 的平均荧光强度和CD19^ CD86^ 百分率较对应的其他组明显减低，差异有统计学意义。结论 IL-13可诱导9HTE细胞株、PBMC中的CD14^ 细胞和CD19^ 细胞表达CD86；anti-CD86 McAb可阻断9HTE细胞株、PBMC中的CD14^ 细胞和CD19^ 细胞表达CD86。提示IL-13和CD86在哮喘发病中起重要作用，anti-CD86 McAb治疗哮喘具有一定的可行性。