高校医学检验专业实验教学改革初探

医学检验专业实验教学的主要目的是培养学生掌握一定的检验医学相关实验操作技能,这对培养具有较强的实际操作应用能力的检验医师起着重要的作用。作者通过参与南京医科大学医学检验系本科生的实验带教工作,提出医学检验系本科生实验教学目前存在的问题及解决措施,从而探索医学检验实验教学改革的新途径。     

完全胸腔镜与传统开放肺叶切除术对非小细胞肺癌患者围手术期影响的比较

目的:比较完全胸腔镜与传统开放行非小细胞肺癌肺叶切除术对患者围手术期临床疗效?创伤及急性期反应?方法:将40例非小细胞肺癌患者分为完全胸腔镜手术(VATS)组和传统开放手术(TOS)组,每组20例?比较肺叶切除术围手术期临床疗以及血浆游离DNA浓度和血清C反应蛋白(CRP)水平,并进行统计分析?结果:两组无死亡病例,均未出现术后不良并发症,VATS组无中转开胸?两组的手术时间?清扫淋巴结站数及个数?术后引流时间?引流量无统计学差异(P > 0.05)?VATS组的术中失血量?术后疼痛评分?术后下床活动日?术后住院天数明显低于TOS组,有统计学差异(P < 0.05)?两组术前血浆DNA浓度和CRP水平无统计学差异(P > 0.05),术后第1?3和5天各时间点VATS组血浆DNA浓度和CRP水平均明显低于同时间点TOS组(P < 0.05)?结论:完全胸腔镜下非小细胞肺癌肺叶切除术与传统开放手术相比,围手术期疗效没有明显差异,却明显减轻了对机体的创伤?急性期反应和病人的痛苦,具有明确的微创性?     

肺癌细胞抑制CD4+T细胞 IFN-γ基因表达的机制研究

目的:研究肺癌细胞能否直接影响CD4+T 细胞干扰素-γ(IFN-γ)基因启动子甲基化水平?方法:ELISA法检测肺癌组(n = 30)及健康对照组(n = 30)血浆IFN-γ水平;免疫磁珠分选两组外周血CD4+T 细胞(n = 8),提取DNA后经亚硫酸氢盐修饰,PCR扩增 IFN-γ基因启动子进行TA克隆测序,测序结果采用生物信息学软件进行分析;建立健康人CD4+T 细胞与肺腺癌细胞株SPC-A1体外Transwell共培养体系(n = 6),并设健康人CD4+T 细胞单独培养为对照组,培养5 d后分别收集CD4+T 细胞?CD4+T 细胞按上述法进行TA克隆测序?同时CD4+T 细胞经anti-CD3?anti-CD28刺激6?24 h,ELISA法检测两组上清IFN-γ表达水平,RT-PCR检测CD4+T 细胞IFN-γ mRNA表达水平?结果:肺癌组血浆IFN-γ水平显著低于健康对照组[(69.30 ± 38.56) pg/ml vs (92.62 ± 34.75) pg/ml,P = 0.017];肺癌组CD4+T 细胞IFN-γ基因启动子甲基化水平显著高于健康对照组(84.6% vs 68.6%,P < 0.001);肺癌患者血浆IFN-γ水平与其基因启动子甲基化率呈负相关(r = -0.850 3,P = 0.010 7)?体外Transwell共培养实验中,与对照组相比,实验组CD4+T 细胞anti-CD3?anti-CD28刺激6?24 h,IFN-γ表达水平显著下降[6 h:(14.53 ± 7.12) pg/ml vs (36.14 ± 23.51) pg/ml,24 h:(7.81 ± 4.02) pg/ml vs (24.85 ± 15.58) pg/ml],6 h对照组CD4+T 细胞IFN-γ mRNA表达水平为实验组的2.37倍?实验组CD4+T 细胞IFN-γ基因启动子甲基化水平显著高于对照组(85.4% vs 70.9%)?结论:肺癌细胞可诱导CD4+T 细胞IFN-γ基因启动子发生高甲基化,进而导致IFN-γ基因表达下调,可能对肺癌患者的免疫抑制起重要作用?     

甲基化CpG结合域重组蛋白的表达与鉴定

目的:在大肠杆菌中表达甲基化CpG结合域(methyl-CpG-binding domain,MBD)重组蛋白?方法:对人甲基化CpG结合蛋白2(methyl-CpG-binding protein 2,Mecp2)的MBD区行密码子优化,将人工合成的DNA克隆至原核表达载体pGS21a,在大肠杆菌E. coli Rosetta(DE3)中诱导表达,通过SDS-PAGE和Western blot鉴定蛋白表达;镍亲和层析柱纯化重组蛋白?表面等离子共振分析重组MBD蛋白与甲基化DNA的结合能力?结果:酶切和核酸测序证实,成功构建了含密码子优化的MBD基因的原核表达载体?SDS-PAGE和Western blot结果显示,MBD重组蛋白在大肠杆菌中得到表达?亲和层析法纯化后获得了相对分子量为38 000的MBD重组蛋白?SPR分析显示MBD重组蛋白能特异结合甲基化DNA?结论:成功构建含密码子优化的MBD基因的原核表达载体,MBD重组蛋白能在大肠杆菌中表达?     

分子诊断学的一些研究进展

分子诊断学是以分子生物学理论和技术为基础,利用分子生物学技术研究人体生物大分子的存在、结构及其表达调控,从而为疾病的预测、诊断、治疗和预防提供信息和决策依据。目前分子诊断已广泛应用于临床,能进行分子诊断的疾病涉及染色体疾病、感染性疾病、单基因疾病、多基因疾病及恶性肿瘤等,分子诊断技术已成为     

泌尿系统感染主要病原菌分布及耐药性分析

目的 了解南京医科大学第一附属医院泌尿系统感染的主要病原菌分布及耐药情况.方法 收集2011年1月1日-12月31日南京医科大学第一附属医院泌尿系统感染患者的中段尿培养阳性菌株,采用api系统鉴定菌种,并用纸片扩散法进行药敏试验.结果 分离的1129株菌株中,革兰阴性菌667株,占59.1％;革兰阳性菌266株,占23.5％;假丝酵母菌属196株,占17.4％.革兰阴性菌中,大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌及奇异变形杆菌对碳青霉烯类抗生素高度敏感;鲍曼不动杆菌与铜绿假单胞菌对头孢类及青霉素酶抑制剂等大部分抗菌药物的耐药率都在50％以上.革兰阳性球菌中粪肠球菌和鸟肠球菌对万古霉素和替考拉宁完全敏感,对利奈唑胺耐药率较低(＜10％).假丝酵母菌中的白假丝酵母菌和光滑假丝酵母菌主要对伏立康唑及氟康唑耐药率较高,为47.2％～60.0％,对两性霉素和制霉菌素全部敏感.结论 南京医科大学第一附属医院泌尿系统感染以革兰阴性菌为主,耐药形势严峻. abstract： objective to investigate the distribution and drug resistance of major pathogens for urinary tract infections in the first affiliated hospital of nanjing medical university.methods strains from midstream urine culture of patients with urinary tract infections were collected during january 1 and december 31,2011.all strains were identified by api system,and disk diffusion method was used for drug sensitivity test.results totally 1129 strains were isolated,in which 667 (59.1％ ) were gram-negative strains,266 (23.5％) were gram-positive strains,and 196 (17.4) were candida.among gram-negative strains,escherichia coli,klebsiella pneumoniae and proteus mirabilis were highly sensitive to carbapenem antibiotics; while acinetobacter baumannii and pseudomonas aeruginosa were highly resistant to most antibiotics including cephalosporins and penicillinase inhibitor,and the resistance rates were over 50％.among gram-positive strains,the major strains enterococcus avium and enterococcusfaecalis were completely sensitive to vancomycin and teicoplanin,and highly sensitive to linezolid (resistance rate below 10％ ).candida albicans and candida glabrata were highly resistant to voriconazole and fluconazole (with the resistance rates of 47.2％ - 60.0％ ), but were completely sensitive to amphotericin and nystatin.conclusion gram-negative strains account for most urinary tract infections in the first affiliated hospital of nanjing medical university with high drug resistance rates.     

血清CA19-9、CEA水平与胰腺癌预后的关系

目的:探讨胰腺癌患术前血清中CA19-9与CEA表达情况对预后的影响.方法:回顾分析医院2012年1月~2013年12月128例胰腺癌患临床病理资料,应用Kaplan-Meier法、Log-rank检验及Cox回归分析CA19-9和CEA水平与患生存时间的关系.血清中CA19-9 >39 U/mL,CEA >4.7 ng/mL被视为表达增高.结果:128例患平均年龄为62岁,中位生存期为12.2月,其中CA19-9和CEA的表达水平增高的比例分别为78.1%,37.5%.CA19-9、CEA升高组患的预后明显差于正常组(CA19-9, P=0.027;CEA,P=0.036).Cox多因素回归分析显示淋巴结转移、CA19-9 >39 U/mL、CEA >4.7 ng/mL是影响胰腺癌患预后的独立因素.结论:术前CA19-9、CEA水平与胰腺患生存时间密切相关,能有效评估患的预后.     

卵巢癌患者外周血单个核细胞Toll样受体2的表达及其诱导的IL-10表达

目的:观察Toll样受体2(Toll-like receptors 2,TLR2)在卵巢癌患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)中的表达及其诱导IL-10的表达水平,初步探索TLR2在卵巢癌发生发展中的作用机制?方法:收集20例卵巢癌患者?20例妇科良性疾病患者及20例同期健康体检女性EDTA抗凝外周全血,采用荧光定量PCR技术检测3组PBMC中TLR2的表达水平,并比较3组表达差异情况?TLR1?TLR2和TLR6相应配体刺激PBMC,细胞中细胞因子IL-10表达水平采用荧光定量PCR技术进行检测;流式细胞技术(FACS)检测各组IL-10分泌水平?结果:各组PBMC中TLR2均有表达;卵巢癌组PBMC 中TLR2表达量显著高于良性疾病组和健康对照组(P < 0.05),良性疾病组TLR2表达水平与健康对照组间无显著性差异;各组PBMC经TLR2的配体HKLM刺激24 h后,卵巢癌组IL-10 mRNA表达明显增强,分别为良性疾病组和健康对照组的2.25?2.33倍,妇科良性疾病组IL-10 mRNA表达水平与健康对照组间无显著差异;TLR6配体FSL-1刺激后,卵巢癌组IL-10 mRNA表达水平分别为良性疾病组和健康对照组的1.95?2.16倍,差异具有统计学意义(P < 0.05),而良性疾病组与健康对照组间无显著差异?FACS结果显示各组PBMC经TLR1的配体Pam3CSK4刺激24 h后,卵巢癌组?良性疾病组及健康对照组IL-10分泌水平中位值(M)分别为46.70?61.53?31.11 pg/ml,差异无统计学意义;经TLR2配体HKLM刺激24 h后,卵巢癌组IL-10分泌水平(M = 150.46 pg/ml)显著高于良性疾病组(M = 38.86 pg/ml)及健康对照组(M = 44.93 pg/ml),差异有统计学意义(P < 0.05),良性疾病组与健康对照组间无显著性改变;TLR6配体FSL-1刺激24 h后,卵巢癌组?良性疾病组及健康对照组IL-10分泌水平中位值分别为20.20?31.12?35.48 pg/ml,3组间无显著差异?结论:卵巢癌患者PBMC中TLR2表达水平显著增高,经其介导的细胞因子IL-10表达水平的改变可能与卵巢癌的免疫抑制相关,在卵巢癌的肿瘤免疫逃逸中发挥重要作用?     

2011年江苏省福氏志贺菌分子流行病学及整合子分析

目的 检测2011年江苏省分离的福氏志贺菌的耐药性和分子同源性,并分析整合子介导其耐药的机制.方法 连续收集2011年1至12月江苏省8个城市72株福氏志贺菌.采用纸片扩散法检测菌株对抗菌药物的敏感性,采用脉冲场凝胶电泳（PFGE）进行分子同源性检测,PCR-限制性片段长度多态性（RFLP）进行整合子检测及分类,联合RFLP和DNA测序技术分析整合子携带的耐药基因.采用Fisher精确概率法对Ⅰ类整合子阳性和阴性菌株耐药情况进行比较.结果 72株福氏志贺菌对临床常用药物的耐药水平较高,对氨苄西林、萘啶酸和四环素的耐药率高达80.0％以上.菌株血清型以2a（31,43.1％）、1a（16,22.2％）和2b（15,20.8％）为主.PFGE聚类分析结果显示,72株福氏志贺菌中有18种为具有同源性的克隆,涉及47株菌,11种克隆在同一城市内传播,7种克隆在两个不同的城市传播.Ⅰ类、Ⅱ类和非典型Ⅰ类整合子广泛分布于福氏志贺菌中,检出率分别为77.8％（56/72）,86.1％ （62/72）和90.3％ （65/72）,未检测到Ⅲ类整合子.DNA测序显示Ⅰ类整合子中携带dfrA1-aadA1和aacA4-cmlA1基因盒,Ⅱ类和非典型Ⅰ类整合子可变区分别携带基因盒dfrA1-sat1-aadA1和bla oxa-30-aadA1.Ⅰ类整合子阳性组福氏志贺菌对氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸、庆大霉素、萘啶酸、诺氟沙星、四环素和复方磺胺甲噁唑这7种抗菌药物的耐药率明显高于Ⅰ类整合子阴性组（P＜0.01）.结论 2011年江苏省福氏志贺菌耐药严重,整合子在福氏志贺菌中广泛存在,并参与多重耐药的形成过程.     

临床微生物学理论教学改革探讨

对临床微生物学理论课进行系列教学改革,采用高等教育出版社出版的国家＂十一五＂规划教材《临床检验病原生物学》,实行双语教学,引入临床病例分析,介绍科研进展,组织学术性的演讲比赛和建立多元化的考核体系,同时通过问卷调查和交流等手段倾听学生的意见,充分调动学生学习积极性,培养学生综合能力,提高教学效果,培养适应时代发展、与临床紧密结合的高素质临床微生物学人才。