外周血细胞形态学报告方式应规范化——《ICSH外周血细胞形态特征的命名和分级标准化建议》的解读与应用

结合国际血液学标准化委员会2015年发布的《ICSH外周血细胞形态特征的命名和分级标准化建议》和实验室实际工作,制定了规范化的外周血细胞形态学报告方式。报告方式主要对血液分析仪筛查后,对外周血细胞形态复检的异常红细胞、白细胞和血小板加以规范化命名及分级,旨在更好地辅助临床诊断。     

结核分枝杆菌mRNA在利福平快速药敏试验中的初步应用

目的　建立一种Mycobacteriumtuberculosis(结核分枝杆菌 ,MTB)mRNA快速敏感的检测方法并初步探讨其在利福平快速药敏试验中的应用。方法　用超声粉碎和Tripure试剂提取MTB总RNA ,针对α抗原 85B的特定编码序列建立MTBmRNA的RT PCR检测方法 ;观察MTB在含 1、2、4 μg/ml利福平的液体培养基中生长时 ,85BmRNA的动态改变 ,确定快速检测利福平耐药菌株的最佳药物浓度和时间点 ,比较RT PCR和快速培养法对 2 0株临床分离菌株利福平耐药性检测的差异性。结果　 85BmRNA的RT PCR最低检测下限为 10 0 0个细菌。 85BmRNA的动态结果表明 ,在 4 μg/ml利福平中培养 2 4h为最佳药物浓度和时间点。RT PCR和快速培养法对 2 0株临床菌株利福平药敏试验检测结果无显著差异 (χ2 =0 .5 ,P >0 .0 5 ) ,但前者能显著缩短药敏检测周期。结论　检测结核分枝杆菌mRNA的RT PCR方法可望应用于利福平快速药敏试验     

血清CA19-9、CEA水平与胰腺癌预后的关系

目的:探讨胰腺癌患术前血清中CA19-9与CEA表达情况对预后的影响.方法:回顾分析医院2012年1月~2013年12月128例胰腺癌患临床病理资料,应用Kaplan-Meier法、Log-rank检验及Cox回归分析CA19-9和CEA水平与患生存时间的关系.血清中CA19-9 >39 U/mL,CEA >4.7 ng/mL被视为表达增高.结果:128例患平均年龄为62岁,中位生存期为12.2月,其中CA19-9和CEA的表达水平增高的比例分别为78.1%,37.5%.CA19-9、CEA升高组患的预后明显差于正常组(CA19-9, P=0.027;CEA,P=0.036).Cox多因素回归分析显示淋巴结转移、CA19-9 >39 U/mL、CEA >4.7 ng/mL是影响胰腺癌患预后的独立因素.结论:术前CA19-9、CEA水平与胰腺患生存时间密切相关,能有效评估患的预后.     

泌尿系统感染主要病原菌分布及耐药性分析

目的 了解南京医科大学第一附属医院泌尿系统感染的主要病原菌分布及耐药情况.方法 收集2011年1月1日-12月31日南京医科大学第一附属医院泌尿系统感染患者的中段尿培养阳性菌株,采用api系统鉴定菌种,并用纸片扩散法进行药敏试验.结果 分离的1129株菌株中,革兰阴性菌667株,占59.1％;革兰阳性菌266株,占23.5％;假丝酵母菌属196株,占17.4％.革兰阴性菌中,大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌及奇异变形杆菌对碳青霉烯类抗生素高度敏感;鲍曼不动杆菌与铜绿假单胞菌对头孢类及青霉素酶抑制剂等大部分抗菌药物的耐药率都在50％以上.革兰阳性球菌中粪肠球菌和鸟肠球菌对万古霉素和替考拉宁完全敏感,对利奈唑胺耐药率较低(＜10％).假丝酵母菌中的白假丝酵母菌和光滑假丝酵母菌主要对伏立康唑及氟康唑耐药率较高,为47.2％～60.0％,对两性霉素和制霉菌素全部敏感.结论 南京医科大学第一附属医院泌尿系统感染以革兰阴性菌为主,耐药形势严峻. abstract： objective to investigate the distribution and drug resistance of major pathogens for urinary tract infections in the first affiliated hospital of nanjing medical university.methods strains from midstream urine culture of patients with urinary tract infections were collected during january 1 and december 31,2011.all strains were identified by api system,and disk diffusion method was used for drug sensitivity test.results totally 1129 strains were isolated,in which 667 (59.1％ ) were gram-negative strains,266 (23.5％) were gram-positive strains,and 196 (17.4) were candida.among gram-negative strains,escherichia coli,klebsiella pneumoniae and proteus mirabilis were highly sensitive to carbapenem antibiotics; while acinetobacter baumannii and pseudomonas aeruginosa were highly resistant to most antibiotics including cephalosporins and penicillinase inhibitor,and the resistance rates were over 50％.among gram-positive strains,the major strains enterococcus avium and enterococcusfaecalis were completely sensitive to vancomycin and teicoplanin,and highly sensitive to linezolid (resistance rate below 10％ ).candida albicans and candida glabrata were highly resistant to voriconazole and fluconazole (with the resistance rates of 47.2％ - 60.0％ ), but were completely sensitive to amphotericin and nystatin.conclusion gram-negative strains account for most urinary tract infections in the first affiliated hospital of nanjing medical university with high drug resistance rates.     

实时荧光定量PCR检测血浆结核分枝杆菌DNA的初步临床应用

目的 评价实时荧光定量PCR技术检测血浆（或血清）结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）DNA的技术。方法 建立实时荧光定期量PCR方法测定血浆MTB DNA,分别检测临床确诊的55例结核病患者血清43份,血浆25份以及非结核肺部疾病患者血清18份,健康体检血清18份和健康体检者血浆11份的MTB DNA含量。结果 18例非结板肺疾病患者血清、18例健康体检者血清以及11例健康体检者血浆MTB DNA全部阴性。55例初诊结核患者中10例（18．2％）治疗前血浆（或血清）MTB DNA阳性。在痰涂片阴性的18例结核患者中,血浆（或血清）MTB DNA阳性检出率为27．8％（5／18）,其特异性达100％。结论 本研究证实了结核患者血浆（或血清）循环MTB DNA的存在,其定量检测对痰涂片阴性及无痰患者的结核病诊断有重要参考价值。     

氧化低密度脂蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备抗氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)单克隆抗体(Ox-LDL mcAb)。方法以Ox-LDL为抗原,免疫Balb／c小鼠,用杂交瘤技术建立稳定分泌抗Ox-LDL mcAb的杂交瘤细胞,用protein A柱亲和层析法纯化腹水中mcAb,用ELISA,western- blot等鉴定其生物学活性。结果获得2株能稳定分泌Ox-LDL mcAb的杂交瘤细胞(6E9D,7G3C),均为IgG1亚型;染色体数目为100-106条;腹水效价为105;western-blot分析和ELISA检测证实2株mcAb均与Ox-LDL有较高的特异性。结论本实验成功制备了2株抗Ox-LDL特异性的mcAb,可用于Ox-LDL免疫检测方法的建立。     

甲基化特异性基因扩增检测过程中的质量控制

目的构建adenomatous polyposis coli(APC)基因启动子1A的甲基化阳性质粒标准品,对甲基化特异性基因扩增(meth-ylation specific PCR,MSP)的检测灵敏度进行质量控制.方法对脐血淋巴细胞DNA转甲基并化学修饰,制备甲基化阳性和阴性模板,MSP后获得目的片段,克隆到pMD18-T质粒载体,测序筛选阳性和阴性质粒标准品,紫外分光法对标准品定量,对10倍梯度稀释的质粒进行SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR来获得弱阳性质控品,对36份组织样本进行MSP检测.结果将MSP后电泳能显示的质粒(105拷贝/ml)作为弱阳性质控品.在加入弱阳性质控品后,2例阴性的样本最终定为阳性;11例未定结果的样本最终7例定为阳性,4例定为阴性.36例样本无质控品前的甲基化阳性率为25%,有质控品后的阳性率为50%,两次结果差异显著(P=0.001).结论构建了携带甲基化阳性的APC基因启动子的质粒标准品并制备了低拷贝的弱阳性质控品,可以对MSP检测灵敏度进行质量控制,降低了检测的假阴性率.     

血浆DNA定量检测在晚期肺癌患者个体化治疗中的应用

目的通过监测晚期肺癌患者化疗过程中血浆DNA水平的变化,探讨其在疗效预测以及个体化治疗中的应用。方法采集35名晚期肺癌患者化疗前、后静脉血,用磁珠法提取血浆循环DNA和内参照质粒DNA,双重荧光定量PCR技术进行DNA定量检测,以100名体检健康者为对照。结果晚期肺癌患者化疗前血浆DNA平均含量为66.4(33.1~105.0)ng/ml,显著高于健康对照组血浆DNA平均含量22.4(16.2~30.0)ng/ml(P<0.01)。一线药物化疗后,部分缓解组肺癌患者血浆DNA值较化疗前显著下降(P<0.01),且与病情稳定组、病情进展组患者血浆DNA值有显著差异(P均<0.05),而与健康对照组已无差异。生存曲线分析显示,化疗后血浆DNA<50 ng/ml的患者生存率高于血浆DNA≥50 ng/ml的患者(P<0.01)。结论血浆DNA的变化可敏感地反映晚期肺癌患者化疗疗效,在肿瘤个体化治疗中发挥重要作用。     

4种血浆游离DNA提取方法的比较

目的比较4种方法对血浆游离结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)DNA和质粒DNA的提取效率。方法MTBDNA和重组质粒DNA经紫外分光光度法准确定量并梯度稀释,建立标准品。构建含有一定浓度MTBDNA和质粒DNA的血浆,分别采用4种方法提取血浆游离DNA,采用实时荧光PCR技术定量检测模拟血浆中MTBDNA和质粒DNA的含量,比较各种方法的提取效率。结果4种方法中,磁珠法对MTBDNA和质粒DNA的提取效率最高,分别为52.8%和69.2%;相对丢失率最低,分别为40.1%和31.8%;重复性最好,其变异系数分别为26.7%和26.0%。结论在4种方法中,磁珠法对血浆游离DNA的提取效率最高,尤其适合于小片段DNA的提取。     

Lymph-X和Lymph-Y在筛查IM、ALL中的应用

摘要：目的：探讨Lymph-X和Lymph-Y在筛查IM、ALL中的应用价值。 方法：研究对象为1 500例健康体检者,110例IM、ALL、CLL及其他原因致外周血淋巴细胞升高患者。用Sysmex XE-2100血液分析仪检测血常规,统计Lymph-X和Lymph-Y参数并分析。 结果：健康体检者Lymph-X和Lymph-Y值与患者年龄、性别及淋巴细胞计数无相关性,参考区间分别为765.3~809.8、624.4~731.4。IM组的Lymph-X和Lymph-Y值分别为871.6±49.3和810.1±153.7,ALL组分别为885.8±70.4和884.9±244.4,明显高于对照组、CLL组以及淋巴细胞升高的其他疾病组（P<0.05）。当Lymph-X为839,Lymph-Y为755时,诊断IM的敏感性为94.4%,特异性为75.0%;当Lymph-X为836,Lymph-Y为792时,诊断ALL的敏感性为93.4%,特异性为75.2%。 结论：参数Lymph-X和Lymph-Y可用于IM、ALL的筛查。