表达鼠精子Cyritestin蛋白的减毒沙门氏菌疫苗株的构建及其鉴定

目的 构建表达鼠精子eyritestin蛋白的可口服减毒沙让氏菌活疫苗株。方法 应用质粒TAZ83／13，将之进行双酶切获得含有成熟cyritestin蛋白cDNA序列的酶切片段。将其插入表达载体yA3149中，构建重组质粒pCFL。将该重组质粒转入鼠沙门氏伤寒杆菌疫苗株X4632和X4550中，以获得重组菌株X4632（pCFL)和X4550（pCFL)。结果 该两种无抗药性的重组菌株在体外营养选择压力下，可较稳定地携带重组质粒传代繁殖。X4550(pCFL)在体内可较稳定地害居于Peyer‘s结，肠系膜淋巴结和脾脏；X4632（pCFL)可较稳定地定居于Peyer‘s结。二者均可表达被抗cyritestin单抗（mAb)识别的重组cyritestin蛋白。口服该疫苗菌株无明显的毒性作用。结论 X4632（pCFL),X4550（pCFL)疫苗株的构建，为研究以cyritestin为靶抗原的精子抗原避孕疫苗打下了基础。     

靶向干扰睾丸支持细胞功能的重组避孕疫苗的构建与表达

目的 构建含小鼠卵泡刺激素(亚单位(FSH-β)与闭锁因子(Ocln )特定基因片段的重组质粒,以期获得靶向干扰睾丸支持细胞功能的重组避孕疫苗.方法 运用PCR 技术,分别扩增小鼠FSH-β亚单位特定基因序列和闭锁因子第二个胞外环序列片段;定向克隆到pET28b表达载体中;并运用免疫印迹法对重组蛋白的表达做初步鉴定.结果 通过双酶切分析、测序鉴定证实特定的FSH-β亚单位和Ocln基因片断被成功克隆到pET28b中,且诱导表达的重组蛋白能够被抗小鼠FSH-β及抗O cln抗体所识别.结论 重组分子具有两种靶分子的抗原性,为进一步研究其生物学活性及免疫避孕效应奠定基础.     

精子膜蛋白Cyritestin单抗对鼠精卵结合和融合的抑制作用及其意义

目的 通过观察精子膜蛋白Cyritestin单抗对体外鼠精－鼠结合和融合作用的影响,探讨该蛋白在受精过程中的作用。方法 应用鼠Cyritestin单抗,通过体外受精试验观察该单抗预孵育不同浓度精子后,对精－卵结合和融合功能的影响;应用免疫细胞化学方法确定Cyritestin在精子表面的特异性定位。结果 不同精子浓度下,Cyritestin单抗均可显著降低体外精－卵的结合和融合能力;可使精－卵结合指数降低37.18%－79.00%,平均60.33%;使精－卵融合的受精指数降低51.66%－77.01%,平均66.90%;受精率下降32.28%－76.15%,平均57.41%。在精子项体反应前后,Cytitestin在精子表面均特异性定位于精子头部赤道区域和项体内膜区域。结论 Cyritestin在精－卵的结合和融合中均发挥重要生理作用。该蛋白作为精子靶抗原开发避孕疫苗的可能性值得深入研究。     

鼠受精素β亚单位胞外区的真核表达质粒pSG.SS.YL-Fβ.ECD的构建与表达

目的构建表达鼠受精素β（Fβ）胞外区的真核表达重组质粒pSG.SS.YL-Fβ.ECD并对其表达进行检测。方法应用PCR方法获得鼠Fβ的cDNA片断,将其插入pSG.SS.YL中,经酶切鉴定正确后转染HEK293细胞,并利用间接免疫荧光结合激光共聚焦技术对Fβ的表达进行检测。结果构建成功后的pSG.SS.YL-Fβ.ECD在HEK293细胞中能够表达Fβ。结论Fβ在真核细胞中的成功表达为后续研究Fβ的高表达对受精过程的影响奠定了基础。     

用视觉音符激活智慧的乐章--视觉治疗的临床应用研究

引言冰是沉睡的水,只有通过能量才能使之融化并变成动态的智慧之水。在视觉科学领域,缺损的视觉就是那块冰,而"视觉治疗"就是融化冰的巨大能量,只有使用"视觉治疗"才能使冰封的大脑变成灵动的智慧--改善视觉缺损,提出视觉功能。过去十年内视觉缺损被认为是不可逆的,因为成熟期的发育窗口已经关闭。但是,国外视觉科学家最近提出了关于视觉神经科学的新概念,即"视觉治疗",它能够逆转弱视,并提升成人单侧弱视视力。目前国内学界却对"视觉治疗"知之甚少,依然固守着传统的治疗方法。希望通过本文能够将最新的科学理念传播开来,给中国眼科学注入新…     

过表达Bcl-2肾小管上皮细胞株的建立及Bcl-2逆转录病毒对抗肾小管上皮细胞凋亡的研究

目的 建立稳定过表达Bcl-2蛋白的肾小管上皮细胞,探讨Bcl-2过表达对抗大鼠肾小管上皮细胞凋亡的作用.方法 Bcl-2逆转录病毒感染培养肾小管上皮细胞株HK-2,经G418抗性筛选,PCR鉴定并命名为HK-2Bcl-2;原位杂交检测细胞Bcl-2 mRNA表达水平;甘油诱导大鼠急性肾功能衰竭模型,采用含重组Bcl-2浓缩逆转录病毒液,感染大鼠肾小管上皮细胞,采用免疫组织化学法检测Bcl-2蛋白表达,原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡变化.结果 PCR和原位杂交显示G418抗性细胞克隆过表达Bcl-2;甘油注射后大鼠出现急性肾功能衰竭,Bcl-2逆转录病毒感染肾小管上皮细胞后,Bcl-2蛋白表达上调,并能显著对抗肾小管上皮细胞凋亡.结论 成功建立过表达Bcl-2蛋白的肾小管上皮细胞株HK-2Bcl-2;Bcl-2逆转录病毒显著抑制大鼠肾小管上皮细胞凋亡.     

153例肾癌术后生物化疗的临床分析

目的 :探讨肾癌切除术后生物化疗的作用。方法 :对 15 3例肾癌患者按治疗方法分为A、B、C三组 ,A组术后用白细胞介素 (IL) 2 ,B组术后用IL 2和α 干扰素 ,C组术后用IL 2、α 干扰素和氟铁龙联合治疗。结果 :通过随访比较 ,三组早期 (Ⅰ～Ⅱ期 )肾癌患者 5年生存率差异无显著性意义 ,晚期 (Ⅲ期以上 )肾癌患者 5年生存率差异有显著性意义 (P <0 .0 5 )。结论 :氟铁龙、IL 2和α 干扰素联合治疗对晚期肾癌有效     

多元化教学模式在泌尿外科的应用和思考

临床实习是让学生将学到的理论知识逐渐转化为临床解决实际问题的能力的主要方式.建立丰富广泛的临床典型病例资料库和教学专用影像资料库,并利用资料库进行教学是临床实习过程的重要教学手段,同时,安排准备充分的教学查房,并恰当运用多元化教学模式包括传统教学法、案例教学法、PBL教学法等进行教学,有利于提高实习教学效果和质量.     

FscB蛋白在鼠精子发生过程中的动态表达和迁移研究

目的:探讨一种新的睾丸特异性蛋白FSCB(Fibrous sheath CABYR binding protein)在精子内的精细动态表达和迁移过程,并研究该蛋白在正常和畸形精子中的形态定位特征.方法:应用过碘酸-希夫氏染色获得鼠睾丸曲精小管上皮中精子发生的时相性背景特征,然后应用间接免疫荧光方法对FSCB蛋白在睾丸和精子内的动态表达和迁移过程进行观察.结果:FSCB最初表达于长精细胞的第11步(时相Ⅺ),呈胞浆内弥漫性染色;随之从第11步(时相Ⅺ)至第15步(时相Ⅵ)表达逐渐加强;在精子形成的第15步(时相Ⅳ至时相Ⅵ)FscB开始向精子鞭毛迁移,最终于第16步(时相Ⅷ)FSCB蛋白整体局限定位于睾丸精子鞭毛上,胞浆内荧光染色消失.进一步研究显示该蛋自在正常精子中定位于鞭毛主段、精子头部、鞭毛颈段、中段和末段均无表达.在畸形精子中,该蛋白表达存在3种异常改变:①鞭毛内无阳性表达;②表达节段前移并缩短,提示这类精子缺乏中段;③呈现间断分布的串珠状改变.结论:FSCB是纤维鞘的重要组成蛋白,在精子纤维鞘形成的后期装配于其表面,可能是纤维鞘生物合成的最后装配步骤.该蛋白在畸形精子中存在明显表达异常,其表达异常与精子运动功能之间的关系有待深入研究.     

提高泌尿外科临床医生教学能力的几点体会和思考

在临床上一个普遍现象是医生通常特别重视临床和科研,而往往在有意或无意的情况下,忽略了临床教学的重要性。事实上．在大部分的临床科室,均有包括进修生、研究生、实习生和见习生等各种层次的教学任务,那么如何使各类学员在相应科室学习和轮转的过程中以及有限的时间内学到应有的专科理论和技术．达到教学要求,现结合自己从事泌尿外科临床和教学工作19余年来的经验和体会,