热休克蛋白对树突状细胞成熟的影响研究

目的:探讨热休克蛋白(HSP)对树突状细胞(DCs)成熟的影响,同时对其形态学动态变化进行研究。方法:从肝癌组织中提取HSP(gp96 )抗原肽复合物;肝癌细胞进行热休克处理诱导其表面表达HSP,再用DiI荧光标记;将两种HSP与DCs混合培养,动态观察DCs捕获抗原和成熟过程中的形态学变化。流式细胞仪检测不同情况下热休克蛋白对DCs成熟表型的影响。结果:使用DiI标记的方法良好地显示了DCs摄取抗原的形态学变化;DCs通过直接接触、包绕、形成囊泡和伸出伪足且末端形成囊泡4种方式摄取抗原;热休克蛋白可促进DCs成熟表型的表达。结论:DiI是适合DCs形态学研究的良好的荧光标记物;DCs捕获抗原有4种不同方式;不同热休克蛋白均可促进DCs成熟,但提取的热休克蛋白作用更显著。     

甲状腺相关眼病患者干眼症患病率与泪膜功能及角膜状况研究

目的：研究甲状腺相关眼病(TAO)患者干眼症患病率与泪膜功能及角膜状况。

方法：选取2014-09/2016-08在本院接受治疗并确诊为TAO的患者218例436眼,依据TAO的临床活动度评分(CAS)把患者分成两组：评分≥4分为活动期患者,共72例144眼; 评分<4分为非活动期患者,共146例292眼; 依据患者病程情况分成三组,低于1a为短病程组,共133例266眼; 病程1～2a为中病程组,共40例80眼,大于2a为长病程组,共45例90眼; 对比患者进行角膜荧光素染色(FS)、泪膜破裂时间(BUT)和泪液分泌试验(S I t)检测情况。

结果：患者218例中共有138例276眼诊断是干眼症; 其中活动期患者患病率高于非活动期患者,差异有统计学意义(P<0.05),短病程组患者患病率高于中病程组和长病程组,和长病程组对比差异有统计学意义(P<0.05); 三组不同病程患者在BUT与S I t检测方面比较,差异无统计学意义(P>0.05),在FL检测方面对比差异有统计学意义(P<0.05); 非活动期患者和活动期患者在FS、BUT和S I t检测方面对比差异均有统计学意义(P<0.05)。

结论：多数TAO患者泪液分泌不充分、泪膜不够稳定,近1/3 TAO患者的角膜上皮出现损坏,患干眼病几率比正常人显著增加。     

间充质干细胞对脐血CIK／NK细胞CD69表达及培养体系中T调节细胞量比的影响

本研究通过Transwell细胞隔离培养体系探讨骨髓源间充质干细胞（MSC）对脐血（CB）来源细胞因子诱导杀伤细胞（CIK）／自然杀伤细胞（NK）CD69的表达以及对培养体系中CD4^＋CD25^＋T调节（Treg）细胞量比的影响。利用聚碳酯膜孔径0．4μm的Transwell隔离细胞培养系统将实验组分为隔离培养（Transwell）组和直接混合（mixture）培养组;将MSC和CIK／NK细胞按1：20、1：50和1：100的比例分别在Transwell组和mixture组中进行隔离和直接混合培养,每组6个重复孔;培养48小时后通过流式细胞术检测各纽CIK／NK细胞上CD69的表达以及培养体系中CD4^＋CD25^＋细胞量比的变化。结果显示：加入MSC的实验各组CB-CIK细胞和NK细胞上表达的CD69比例均显著低于对照组（P值均〈0．001）．Transwell组中的CIK和NK细胞上表达的CD69,在MSC的高浓度组（1：20组）均显著低于低浓度组（1：50组和1：100组）,其中CIK细胞组间的P值分别为0．046、0．020;NK细胞组间的P值均为0．000。mixture组中不同比例组问CIK细胞上表达的CD69无显著性差异,而NK细胞上CD69的表达在MSC的高浓度组（1：20组）均显著低于低浓度组（1：50组和1：100组）。加入MSC的CB—CIK／NK细胞体系中的CD4^＋CD25^＋细胞的量比不论在Transwell还是mixture组中均显著高于对照组（P值均〈0．01）;在Transwell组中．CIK／NK细胞体系中的CD4^＋CD25^＋细胞的量比在1：20组、1：50组均显著高于1：100组;在mixture各组中,CIK／NK细胞体系中的CD4^＋CD25^＋T调节细胞的量比均有显著性差异。MSC的高浓度组（1：20组）,CIK／NK细胞体系中的CD4^＋CD25^＋细胞量比在mixture组显著高于Transwell组;而在MSC的低浓度组（1：50纽和1：100组）,2纽体系中的C04^＋CD25^＋细胞量比无显著性差异。结论：MSC能以直接接触或间接作用的方式抑制异基因CIK／NK细胞的活化,这可能与MSC能上调培养体系中的CD4^＋CD25^＋Treg细胞量比有关,且这种作用与MSC的数量呈浓度依赖关系。     

大鼠皮肤的冷冻干燥保存

背景:细胞干燥保存的研究报道较多,组织器官是否适用于干燥保存,尚缺乏证据.目的:用海藻糖作为干燥保护剂,优化海藻糖载入大鼠皮肤的条件,探索皮肤干燥保存的可行性.设计、时间及地点:观察性实验,于2007-11/2008-11在西北大学生命科学学院组织工程实验室完成.材料:体质量150 g左右成年SD大鼠.海藻糖由Sigma公司提供.方法:通过控制海藻糖浓度(50,300,500,800,1 000 mmol/L)、负载时间(0.5,4,7,9 h)和温度[4℃、4～37℃(相转变)和37℃],优化海藻糖导入大鼠皮肤的条件.将负载海藻糖的皮肤置于含100 g/L二甲基亚砜的DMEM冷冻液中孵育,程序冷冻仪以1℃/min的速率降温至-80℃后移入冷冻干燥机中进行冻干.将冻干皮肤水化复苏后分别用双醋酸羧基荧光素(CFDA)、四甲基偶氮唑盐(MTT)检测皮肤活性,并以新鲜和甲醛固定皮肤的吸光度值作为阳性和阴性对照.以苏木精-伊红染色和观察皮肤组织结构,并进行自体移植.主要观察指标:海藻糖在不同加载浓度、孵育温度和时间载入大鼠皮肤的情况.冻干皮肤水化后的形态学、组织学变化及其自体移植后存活情况.结果:海藻糖浓度小于800 mmol/L,皮肤的海藻糖载入量随海藻糖浓度的升高而明显增(P<0.05),浓度大于800 mmol/L,海藻糖载入量差异不显著.孵育温度为37℃组和相转变组皮肤海藻糖载入量明显高于4℃组(P<0.05),相转变组与37℃组差异无统计学意义.皮肤孵育4,7,9 h的海藻糖载入量明显高于孵育0.5 h的载入量(P<0.05),孵育时间为4,7,9 h之间的海藻糖载入量差异不显著,但孵育7 h后皮肤的海藻糖载入量不再增加.实验以海藻糖浓度为800 mmol/L,孵育温度为37℃,孵育时间为7 h为优化的负载条件处理大鼠皮肤.冻干皮肤玻璃化状态良好,呈半透明状.水化后能够恢复到新鲜皮肤的大小和色泽,组织结构和细胞形态与新鲜皮肤组织无差别.冷冻干燥皮肤的活性明显高于甲醛固定的大鼠皮肤(P<0.05).冻干保存的皮肤水化后移植回自体大鼠,可存活长达13 d.结论:海藻糖可作为干燥保护剂进行大鼠皮肤冷冻干燥保存,海藻糖浓度为800 mmol/L,孵育温度为37℃,孵育时间为7 h是海藻糖载入大鼠皮肤的最佳条件.     

基质金属蛋白酶-2活性与成釉细胞瘤增殖生长关系的研究

目的 探讨基质金属蛋白酶-2（MMP-2）活性与成釉细胞瘤增殖生长的关系及其在成釉细胞瘤侵袭中的作用。方法 通过MMP-2抑制剂Ro31-9790抑制MMP-2活性进行干预处理,采用成釉细胞瘤细胞原代培养、瘤组织块裸鼠肾包膜下移植、MTT、流式细胞术、瘤体积测量和组织学检查等方法,观察MMP-2活性与成釉细胞瘤增殖生长的关系。结果 实验各组之间在同一时间点的细胞增殖活性均无显著性差异（P＞0.05）。G0/G1、G2/M期细胞比率以及凋亡细胞比率不随Ro31-9790浓度增加而增加,S期细胞比率也不随Ro31-9790浓度增加而减少。Ro31-9790治疗组瘤体积明显小于对照组（P＜0.05）,瘤体积增加也明显少于对照组（P＜0.01）。结论 Ro31-9790对成釉细胞瘤细胞的体外增殖活性无影响,但可抑制体内移植瘤的生长,MMP-2活性与成釉细胞瘤细胞的增殖活性无关,但与成釉细胞瘤的生长密切相关,可能是成釉细胞瘤局部侵袭的机制之一。     

骨髓间充质干细胞诱导分化为心肌细胞及其内向整流钾电流特征

[目的]体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为心肌细胞并探讨其内向整流钾电流(Ik1)特征.[方法]采用密度梯度离心法和贴壁培养法分离、纯化大鼠骨髓MSCs,在第3代细胞以5-氮杂胞苷进行诱导,用免疫细胞化学染色和RT-PCR方法鉴定诱导细胞,并采用全细胞膜片钳技术检测Ik1表达.[结果]诱导后细胞体积较诱导前增大,呈长梭形.14 d后细胞之间出现连接,排列方向渐趋一致.免疫细胞化学染色显示Desmin、αt-sarcomeric actin和心肌特异性cTnI呈阳性反应,RT-PCR结果表明诱导细胞有心肌β肌球蛋白重链表达.诱导细胞Ik1表达呈明显的不均一性,部分细胞Ik1与正常心室肌细胞相似,但Ik1电流密度总体上低于正常心室肌细胞.[结论]5-氮杂胞苷能在体外诱导MSCs向心肌细胞分化;诱导细胞Ik1表达不均一性提示可能有致心律失常潜能.     

陕西省2006-2017年肾综合征出血热流行特征及疫苗接种策略探讨

目的 分析陕西省2006-2017年肾综合征出血热（hemorrhagic fever with renal syndrome,HFRS）人间疫情流行特征,并探讨疫苗接种策略。方法 对陕西省2006-2017年HFRS疫情进行统计,采用描述流行病学方法对时间、地区和人群分布进行分析。结果 陕西省2006-2017年累计报告HFRS病例20 309例,死亡138例,HFRS发病具有季节性,主要集中在关中地区。2006-2017年HFRS发病人群中60岁以上人群所占比例呈上升趋势。发病人群中男女性别比为3.09:1;职业分布以农民为主,占73.58%。结论 结合2006-2017年陕西省HFRS发病年龄分布特征,建议今后陕西省HFRS接种可考虑60岁以上人群。     

流式细胞仪快速优化大鼠原代培养肝细胞基因转染

【目的】用流式细胞仪(FCM)快速检测外源性血管内皮生长因子基因(VEGF基因)在大鼠原代培养肝细胞转染表达，根据结果优化其转染表达条件。【方法】以加强型黄色荧光素蛋白(EYFP)为标记，用FCM快速检测重组质粒pIRES-EYFP／VEGF121在大鼠原代培养肝细胞中转染表达，根据结果优化pIRES-EYFP／VEGF121转染表达条件。【结果】pIRES-EYFP／VEGF121得以成功构建，并转染大鼠原代培养肝细胞；优化的转染表达条件：在细胞数密度O．1xl0^6／mL，质粒孵育时间30min，质粒与脂质体混合物孵育时间15min，质粒与脂质体比例为1：1O，转染时间2h，NAIR-1作转染培养液时，转染效率达17．5％。【结论】以EYFP为标记，FCM可简便快捷地检测并优化外源性VEGF基因在大鼠原代培养肝细胞转染表达，可为研究VEGF基因修饰大鼠原代培养肝细胞移植和肝基因治疗打基础。     

高效液相色谱法测定人子宫、输卵管及血清中氧氟沙星浓度

目的建立人组织及血清中氧氟沙星含量的HPLC测定方法。方法采用Hypersil C₁₈柱分离,流动相为乙腈-0.01 moL·L^-1磷酸盐缓冲液-0.5 moL·L^-1四丁基溴化铵(9∶91∶4, pH 2.5),流速1.0 mL·min^-1,在UV 294 nm处测定；样品经匀浆或用液氮冷冻研磨至粉末状，用1%曲拉通-100溶解，乙酸乙酯-异丙醇（9∶1）提取，HPLC测定。结果 氧氟沙星浓度在0.2～8.0 μg·mL^-1与峰高比呈线性关系,最小检测限40 ng·mL^-1,用本法对20例妇产科病人进行药物浓度测定,取得了满意的结果。结论此方法适用于人体组织中氧氟沙星浓度的测定，口服后氧氟沙星在人体组织中有良好的分布。     

人脐血及外周血CIK、NKT及NK细胞含量及意义

[目的]了解人脐血(CB)及不同来源外周血(PB)CIK细胞、NKT细胞和NK细胞的分布规律.[方法]通过流式细胞术检测不同来源标本中CD3 CD56 CIK细胞、Vα24 CD161 NKT细胞和CD3-CD56 NK细胞的比例,比较上述细胞分布的差异性.[结果]CB中CIK细胞、NK细胞的比例分别为1.37%±0.51%、7.07%±3.63%,均显著低于正常学龄前儿童外周血(C阳)及成人外周血(APB)(P＜0.01);而NKT细胞在CB、CPB和APB中比例均低,且三组间无显著性差异.[结论]CB中的抗肿瘤免疫效应细胞CIK细胞、NKT细胞及NK细胞含量均低,其中CIK细胞、NK细胞比例显著低于PB.