孕期妇女膳食指南依从性指数的建立和评价

目的依据《中国居民膳食指南(2016)》中孕期妇女膳食原则,建立和评价适用于基层孕期营养门诊工作的简便、有效膳食评估工具——孕期妇女膳食指南依从性指数。方法全面梳理《中国居民膳食指南(2016)》体系中《中国孕期妇女膳食指南》的核心条目,结合《中国孕期妇女平衡膳食宝塔》中膳食原则和推荐食物量建议,根据专家意见,确定该指数的关键考核点及相应赋值,建立该指数的评分计算体系。从"同济母婴健康队列"中随机抽取160名孕期妇女,对其孕早、中、晚三期膳食资料进行指数评分,评价该指数对膳食指南的依从性,并与妊娠期高血压的风险进行关联分析。结果建立的指数由13个考核点组成,赋值总分100。纳入研究的160名孕妇膳食指数评分为:孕早期(72.6±8.5)、孕中期(72.0±6.8)、孕晚期(75.1±7.6)分。该指数评分越高,孕妇各类食物摄入量达到推荐量范围内的比例越高,低于推荐量范围的比例越低。随着评分增加(每+10分),孕妇患妊娠高血压的风险越低,[OR (95%CI)]孕早期0.36(0.14,0.93),孕中期0.14 (0.03,0.60)。结论本研究建立的孕期妇女膳食指南依从性指数是一种简...     

miR-513a-5p慢病毒载体的构建及其对人骨肉瘤细胞放疗敏感性的影响

目的:构建miR-513a-5p慢病毒过表达载体,转染人骨肉瘤细胞株,观察miR-513a-5p对人骨肉瘤细胞放疗敏感性的影响。方法:PCR法扩增人miR-513a-5p基因,克隆入pLentis-CMV-GFP-MCS-PGK-PURO载体获得重组质粒pLentis-miR513a,双酶切鉴定并测序后将正确的重组质粒和对照质粒转染293FT细胞制备慢病毒,分别转染骨肉瘤HOS和U2OS细胞,qRT-PCR法及荧光显微镜鉴定转染结果。克隆形成实验、MTT法检测miR-513a-5p高表达HOS和U2OS细胞在X射线照射下细胞存活情况。结果:双酶切及测序结果确定成功构建miR-513a-5p慢病毒载体pLentis-miR513a。qRT-PCR结果提示,转染骨肉瘤细胞株后miR-513a-5p表达显著升高。克隆形成实验结果显示miR-513a-5p高表达后骨肉瘤细胞在X射线照射下细胞增殖减慢。MTT结果提示miR-513a-5p高表达骨肉瘤细胞经X射线照射后细胞存活减少。结论:成功构建了miR-513a-5p慢病毒载体,建立了高效稳定表达miR-513a-5p的骨肉瘤细胞株,高表达miR-513a-5p能显著增加X射线照射后骨肉瘤细胞的放疗敏感性。     

妊娠早、中期妇女血清25-羟维生素D-3与妊娠期糖尿病的关系探讨

目的:探讨妊娠早、中期妇女血清25-羟维生素D-3(25-OHD-3)与妊娠期糖尿病(GDM)的关系。方法:随机选取2018年1月至2021年12月在本院进行常规孕期检查的产妇作为研究对象,孕8～12周检测其空腹血糖(FBG)及糖化血红蛋白(HbAlc)水平,孕13～15周检测其血清25-OHD-3水平,孕24～28周行75 g口服葡萄糖耐量试验(OGTT),包括FBG、餐后1 h血糖(1 h PBG)、餐后2 h血糖(2 h PBG),并在空腹、服糖水后1 h和2 h均检测血清25-OHD-3。根据OGTT筛查结果,将其分为GDM组(n=100)及对照组(n=100)。比较2组孕早期FBG、HbAlc,孕中期血清25-OHD-3及孕中后期空腹、服糖水后1、2 h的血糖及25-OHD-3等指标的差异,并分析血清25-OHD-3水平与GDM发病的关系。结果:GDM组孕早期FBG、HbAlc及OGTT中FBG、1 h PBG、2 h PBG均高于对照组(P<0.05);GDM组血清25-OHD-3水平低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);两组孕妇存在孕期血清25-OH...     

DWI／MRI在急性脑梗死诊断中的表现及价值

目的探讨磁共振弥散加权成像（DWI）技术对于急性脑梗死的诊断应用价值。方法回顾性分析42例急性梗死患者的临床及MRI（T1WI、T2WI、FLAIR、DWI序列）的影像学表现。结果45例急性脑梗死患者共检出病灶53个，其中45个为新发责任病灶，7个为陈旧病灶。新发责任病灶中，T2WI显示病灶35个，阳性率76．09％。T1WI显示病灶33个，阳性率71．74％；T2WI不能判断病灶的发生时间；DWI显示病灶46个，阳性率100％。7个陈旧病灶均呈长T1长T2信号，FLAIR高信号，DWI未见信号改变。结论DWI技术在急性梗死的部位以及判断病程方面，较常规MRI优越。     

AF内固定系统治疗胸腰椎骨折67例分析

目的:观察AF内固定系统对胸腰椎骨折的治疗效果。方法:对67例胸腰椎骨折患者行AF钉内固定系统治疗,其中29例合并神经系统症状者加相应的减压治疗,术中植骨67例。结果:所有伤椎椎体高度恢复良好,生理曲度得到明显恢复,Coob’s角显著减小。随访8～19个月,平均随访10个月。29例合并神经症状者,25例得到改善,4例改善不明显。结论:AF内固定系统治疗胸腰椎骨折效果理想。     

肿瘤转移抑制基因Nm23-H1融合蛋白的表达纯化及其功能的初步研究

目的 利用人Nm23-H1基因原核表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化融合蛋白,并对蛋白其活性进行初步分析.方法 将重组质粒pET28a-Nm23-H1转化入E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达并鉴定.用金属螯合层析技术进行蛋白纯化,得到Nm23-H1融合蛋白,用SDS-PAGE及Western blot鉴定纯化蛋白,并用RP-HPLC法、电泳迁移率变动分析实验检测Nm23-H1融合蛋白的核苷二磷酸激酶(NDPK)活性及核酸内切酶(AP)修复活性.结果 转化溶原菌后能够表达目的 蛋白,蛋白表达量高,为可溶性蛋白.Ni2+柱纯化后得到Nm23-H1融合蛋白经SDS-PAGE及Western blot鉴定正确.RP-HPLC法就及电泳迁移率变动分析实验证明所纯化的Nm23-H1融合蛋白具有NDPK活性,不具有AP修复活性,但可以增加APE1蛋白的AP修复活性.结论 利用原核表达载体pET28a-Nm23-H1在E.coli BL21(DE3)中高效表达和纯化得到具有NDPK活性,但无AP修复活性的Nm23-H1融合蛋白,此蛋白可以增强APE1蛋白的AP修复活性,共同参与细胞的DNA损伤修复.     

兔抗人APE1多克隆抗体的制备及鉴定

目的:制备兔抗人脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶多克隆抗体并进行鉴定.方法:以纯化的全长APE1蛋白为抗原, 采用改良的快速免疫法制备兔抗人APE1多克隆抗体并进行特异性亲和纯化, ELISA、Western blot和免疫组化检测制备抗体的效价和特异性.结果:ELISA检测显示该抗体的效价达到1:128 000, 相对亲和力常数为8.96×10-6 mol/L.Western blot显示该抗体能与APE1蛋白特异性结合, 免疫组化检测显示阳性反应产物主要定位于细胞核.此外, 该抗体还可用于小鼠和大鼠组织APE1蛋白的检测.结论:制备的多克隆抗体特异性和效价良好, 不仅为今后深入研究人APE1蛋白的性质与功能提供了有用的实验工具, 还可用于检测小鼠和大鼠组织中APE1蛋白的表达.     

miRNA-122a靶基因预测及生物信息学分析

目的:利用基因芯片技术分析肝癌HepG2细胞和正常肝上皮LO2细胞中miRNA的表达,并对HepG2细胞中低表达的miRNA-122a进行靶基因预测及相关生物信息学分析,为以miRNA-122a为靶点的基因治疗提供理论和实验基础.方法:利用基因芯片技术检测HepG2细胞和LO2细胞中miRNA-122a表达水平,通过生物信息学预测miRNA-122a的靶基因,并对其靶基因进行功能富集分析(GO-analysis)、信号转导通路富集分析(Pathway-analysis)和蛋白质相互作用网络分析.结果:与LO2细胞比较,miRNA-122a在HepG2细胞中呈低表达.miRNA-122a预测靶基因有1 104个,其靶基因集合功能分别富集于碳水化合物生物合成、核苷酸代谢、细胞因子受体结合、细胞周期等生物学过程(P<0.001);信号转导通路显著富集于JAK-STAT信号通路、Wnt信号通路、MAPK信号通路、ErbB信号通路、细胞周期等信号转导通路(P<0.001).结论:miRNA-122a在HepG2细胞中呈现低表达,miRNA-122a预测靶基因集合显著富集在与肿瘤发生相关的信号通路中.     

miR-424慢病毒表达载体的构建及其对宫颈癌细胞增殖的影响

目的：构建hsa‐miR‐424基因慢病毒表达载体,并鉴定miR‐424在细胞内表达水平,研究hsa‐miR‐424对宫颈癌 He‐la 细胞增殖的影响。方法以人基因组 DNA 为模板,设计合成 miR‐424的上下游引物,PCR 扩增目的片段,回收产物将其连入pMD18T 载体中,进行测序。再以 pMD18T‐miR424为模板进行 PCR 扩增,将其中表达 pMD18T‐miR424的结构经酶切后插入pLentis‐CMV‐GFP‐MCS‐PGK‐PURO 载体,构建成 pLentis‐CMV‐GFP‐miR424‐PGK‐PURO ,在293T 细胞中与 pSPAX2、pMD2．G包装产生所需的慢病毒,再用含慢病毒的上清液感染 Hela 细胞。结果 miR‐424基因与慢病毒载体连接成功,测序结果证明了插入到质粒载体中的 miR‐424前体序列完全正确,成功构建 pLentis‐CMV‐GFP‐miR424重组慢病毒载体,用其感染宫颈癌Hela 细胞后上调 miR‐424的表达近60倍。采用 M TT 法检测增殖结果提示：感染 miR‐424慢病毒的宫颈癌 Hela 细胞株均存在细胞增殖减慢。结论成功的构建了 miR‐424慢病毒载体,建立了高效稳定表达 miR‐424的细胞株,并用含慢病毒的上清液感染宫颈癌 Hela 细胞,成功抑制了 Hela 细胞的增殖,为后续相关的研究奠定了良好的基础。     

人脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶单克隆抗体抗原表位的鉴定及应用

目的:研究鉴定人脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶单克隆抗体(hAPE1 mAb)的抗原表位,并建立定量检测hAPE1的ELISA一步法。方法:设计并合成APE1-15肽阵列,鉴定hAPE1 mAb 2-G1和4-F6的抗原表位,应用三维立体结构观察软件Molsoft.ICM-Pro模拟hAPE1 mAb抗原表位的立体结构;采用改良的过碘酸钠法标记抗体,以hAPE1 mAb为捕获抗体和酶标抗体,建立hAPE1的ELISA一步检测法。结果:APE1-15肽阵列检测结果和抗原表位三维结构显示,2-G1mAb的抗原表位对应为hAPE1天然蛋白氨基酸残基序列的76-90位和109-123位,位于氧化还原区域,为构象型抗原表位;4-F6 mAb的抗原表位对应为hAPE1天然蛋白氨基酸序列的109-147位,位于DNA修复内切酶活性区。ELISA一步法检测hAPE1蛋白的线性范围为8.0~200μg/L,最低检测限为2.0μg/L。平均批内变异系数为8.67%,平均批间变异系数为12.45%,平均回收率为105.47%。结论:hAPE1 2-G1 mAb和4-F6 mAb具有不同的抗原表位,成功建立的hAPE1 ELISA一步法为简便、快速、准确检测血清中hAPE1的含量奠定了基础。