| miR-424慢病毒表达载体的构建及其对宫颈癌细胞增殖的影响 |
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| 引用本文： | 李清,杨宇馨,戴楠,代晓燕,任涛,王东,卿毅.miR-424慢病毒表达载体的构建及其对宫颈癌细胞增殖的影响[J].重庆医学,2014(31). |
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| 作者姓名： | 李清 杨宇馨 戴楠 代晓燕 任涛 王东 卿毅 |
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| 作者单位： | 第三军医大学大坪医院野战外科研究所肿瘤中心,重庆,400042 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(81101993，81001000)。 |
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| 摘 要： | 目的：构建hsa‐miR‐424基因慢病毒表达载体，并鉴定miR‐424在细胞内表达水平，研究hsa‐miR‐424对宫颈癌 He‐la 细胞增殖的影响。方法以人基因组 DNA 为模板，设计合成 miR‐424的上下游引物，PCR 扩增目的片段，回收产物将其连入pMD18T 载体中，进行测序。再以 pMD18T‐miR424为模板进行 PCR 扩增，将其中表达 pMD18T‐miR424的结构经酶切后插入pLentis‐CMV‐GFP‐MCS‐PGK‐PURO 载体，构建成 pLentis‐CMV‐GFP‐miR424‐PGK‐PURO ，在293T 细胞中与 pSPAX2、pMD2．G包装产生所需的慢病毒，再用含慢病毒的上清液感染 Hela 细胞。结果 miR‐424基因与慢病毒载体连接成功，测序结果证明了插入到质粒载体中的 miR‐424前体序列完全正确，成功构建 pLentis‐CMV‐GFP‐miR424重组慢病毒载体，用其感染宫颈癌Hela 细胞后上调 miR‐424的表达近60倍。采用 M TT 法检测增殖结果提示：感染 miR‐424慢病毒的宫颈癌 Hela 细胞株均存在细胞增殖减慢。结论成功的构建了 miR‐424慢病毒载体，建立了高效稳定表达 miR‐424的细胞株，并用含慢病毒的上清液感染宫颈癌 Hela 细胞，成功抑制了 Hela 细胞的增殖，为后续相关的研究奠定了良好的基础。
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| 关 键 词： | Hela 细胞 细胞增殖 miR-424 慢病毒表达载体 |
Construction of the lentivirus vector containing the miR-424 gene and its influence on proliferation of cervical cancer cell line |
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| Li Qing,Yang Yuxin,Dai Nan,Dai Xiaoyan,Ren Tao,Wang Dong,Qing Yi.Construction of the lentivirus vector containing the miR-424 gene and its influence on proliferation of cervical cancer cell line[J].Chongqing Medical Journal,2014(31). |
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| Authors: | Li Qing Yang Yuxin Dai Nan Dai Xiaoyan Ren Tao Wang Dong Qing Yi |
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| Keywords: | Hela cells cell proliferation miR-424 lentivirus expression plasmid |
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