| 肿瘤转移抑制基因Nm23-H1融合蛋白的表达纯化及其功能的初步研究 |
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| 引用本文： | 张志敏,杨雪琴,许文,戴楠,曾林立,李增鹏,王东,王阁.肿瘤转移抑制基因Nm23-H1融合蛋白的表达纯化及其功能的初步研究[J].第三军医大学学报,2010,32(17). |
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| 作者姓名： | 张志敏 杨雪琴 许文 戴楠 曾林立 李增鹏 王东 王阁 |
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| 作者单位： | 1. 第三军医大学大坪医院野战外科研究所肿瘤中心,重庆,400042
2. 解放军第456医院肿瘤科,济南,250031 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金面上项目，第三军医大学大坪医院野战外科研究所"1135"优秀人才工程专项基金 |
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| 摘 要： | 目的 利用人Nm23-H1基因原核表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化融合蛋白,并对蛋白其活性进行初步分析.方法 将重组质粒pET28a-Nm23-H1转化入E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达并鉴定.用金属螯合层析技术进行蛋白纯化,得到Nm23-H1融合蛋白,用SDS-PAGE及Western blot鉴定纯化蛋白,并用RP-HPLC法、电泳迁移率变动分析实验检测Nm23-H1融合蛋白的核苷二磷酸激酶(NDPK)活性及核酸内切酶(AP)修复活性.结果 转化溶原菌后能够表达目的 蛋白,蛋白表达量高,为可溶性蛋白.Ni2+柱纯化后得到Nm23-H1融合蛋白经SDS-PAGE及Western blot鉴定正确.RP-HPLC法就及电泳迁移率变动分析实验证明所纯化的Nm23-H1融合蛋白具有NDPK活性,不具有AP修复活性,但可以增加APE1蛋白的AP修复活性.结论 利用原核表达载体pET28a-Nm23-H1在E.coli BL21(DE3)中高效表达和纯化得到具有NDPK活性,但无AP修复活性的Nm23-H1融合蛋白,此蛋白可以增强APE1蛋白的AP修复活性,共同参与细胞的DNA损伤修复.
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| 关 键 词： | Nm23-H1基因 原核表达 蛋白纯化 |
Purification of Nm23-H1 fusion protein expression and its function |
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| Zhang Zhimin,Yang Xueqin,Xu Wen,Dai Nan,Zeng Linli,Li Zengpeng,Wang Dong,Wang Ge.Purification of Nm23-H1 fusion protein expression and its function[J].Acta Academiae Medicinae Militaris Tertiae,2010,32(17). |
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| Authors: | Zhang Zhimin Yang Xueqin Xu Wen Dai Nan Zeng Linli Li Zengpeng Wang Dong Wang Ge |
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| Institution: | Zhang Zhimin1,Yang Xueqin1,Xu Wen2,Dai Nan1,Zeng Linli1,Li Zengpeng1,Wang Dong1,Wang Ge1 (1Cancer Center,Institute of Surgery Research,Daping Hospital,Third Military Medical University,Chongqing,400042,2 Department of Oncology,No. 456 Hospital of PLA,Jinan,Shandong,250031,China) |
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| Abstract: | Objective To construct the prokaryotic expression vector for human Nm23-H1 genes and purify its fusion protein and study its activity. Methods Recombinant plasmid pET28a-Nm23-H1 was transformed into E.coli BL21 (DE3) and its expression was induced and identified with IPTG. The expressed Nm23-H1 fusion protein was purified by affinity chromatographic with Ni2+ column and identified by SDS-PAGE and Western blotting. Immunogenicity and activity of Nm23-H1 fusion protein were analyzed by RP-HPLC and EMSA. Resul... |
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| Keywords: | Nm23-H1 gene prokaryotic expression protein purification |
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