系统性红斑狼疮患者血清IFN-α和IL-6的共同作用对造血干细胞定向分化为树突状细胞的影响

背景：系统性红斑狼疮与树突状细胞的功能活化密切相关。在体内,树突状细胞来源于造血干细胞,其分化成熟的过程受多种因素的影响。系统性红斑狼疮患者血清中存在细胞因子网络失调,以往研究多关注于单一因子的参与作用。 目的：课题创新性提出和观察系统性红斑狼疮患者血清α干扰素和白细胞介素6共同作用下对CD34+造血干细胞定向分化为树突状细胞的影响。 设计、时间及地点：分组对比观察,完全随机细胞学体外实验,于2006-05/2008-10在南京医科大学微生物与免疫学实验室完成。 材料：外周血标本取自50例就诊于南京医科大学第一附属医院风湿免疫科的系统性红斑狼疮患者,以及30例南京医科大学的健康志愿献血者。15份脐血标本取自南京医科大学附属南京妇幼保健院健康足月顺产的新生儿,产妇及其家属均对实验知情同意。 方法：无菌采集系统性红斑狼疮患者和正常对照者的外周静脉血,根据正常人血清中α干扰素、白细胞介素6的浓度,采用百分位数法求得血清α干扰素、白细胞介素6浓度的95%参考值范围,并以浓度超过此范围为异常升高。取新生儿脐血,Ficoll-Hypaque密度梯度离心法分离脐血单个核细胞,免疫磁珠法纯化CD34+造血干细胞,并诱导其定向分化为树突状细胞。在培养过程中设立6组,分别加入：正常对照血清、α干扰素升高的系统性红斑狼疮血清、白细胞介素6升高的系统性红斑狼疮血清、α干扰素和白细胞介素6同时升高的系统性红斑狼疮血清、混合α干扰素及白细胞介素6中和抗体的系统性红斑狼疮血清、混合外源性α干扰素和白细胞介素6的正常对照者血清,各组血清体积分数均为10%,培养14 d。 主要观察指标：流式细胞仪检测树突状细胞的表型,ELISA法检测树突状细胞分泌细胞因子的水平,混合淋巴细胞反应检测树突状细胞刺激同种异体T细胞增殖的能力,及其对T细胞亚群分化率影响。 结果：①与正常血清对照比较,α干扰素、白细胞介素6及二者同时升高的系统性红斑狼疮血清、混合外源性α干扰素和白细胞介素6的正常对照者血清诱导培养的树突状细胞其HLA-DR,CD80,CD86的表达均明显升高(P < 0.05),分泌白细胞介素12 的水平均明显降低(P < 0.05),刺激T细胞增殖能力均明显增强(P < 0.05)。混合α干扰素及白细胞介素6中和抗体的系统性红斑狼疮血清诱导培养的树突状细胞上述各项指标均恢复至正常血清对照水平。②与正常血清对照比较,白细胞介素6升高的系统性红斑狼疮血清其CD3+CD8−IFN-γ+、CD3+CD8+IFN-γ+细胞亚群百分率明显下降(P < 0.05);α干扰素升高的系统性红斑狼疮血清、α干扰素和白细胞介素6同时升高的系统性红斑狼疮血清、混合外源性α干扰素和白细胞介素6的正常对照者血清其CD3+CD8−IFN-γ+和CD3+CD8+IFN-γ+细胞亚群百分率均明显升高(P < 0.05)。 结论：系统性红斑狼疮血清α干扰素和白细胞介素6的共同作用对CD34+造血干细胞定向分化为树突状细胞产生了异常影响,可促进树突状细胞的表型成熟和功能活化,并间接影响T细胞亚群的分化,可能参与系统性红斑狼疮的发病。     

肾移植患者外周血中的CD4+ CD25+ CD127low/-调节性T细胞

背景：越来越多的实验在分析免疫耐受标志,以期能够更好地辅助患者进行移植后免疫抑制治疗。 目的：分析肾移植后患者外周血中CD4+ CD25+ CD127low/-调节性T细胞在肾移植免疫耐受中的作用。 方法：采集62例肾移植后患者(急性排斥反应组22例,移植稳定组40例)及20例健康对照者的外周抗凝血,经免疫染色,应用流式细胞仪分析CD4+ CD25+ CD127low/-调节性T细胞所占CD4+ T细胞百分含量,同时采用ELISA方法检测患者血清中白细胞介素2和白细胞介素10的质量浓度。 结果与结论：移植稳定组中CD4+ CD25+ CD127low/-调节性T细胞所占CD4+ T细胞百分含量显著高于健康对照组和急性反应排斥组(P < 0.01);CD4+ CD25+ CD127low/-调节性T细胞百分含量与白细胞介素2呈显著负相关(P < 0.05),与白细胞介素10呈显著正相关(P < 0.01)。提示CD4+ CD25+ CD127low/-调节性T细胞在肾移植后免疫耐受的机制中发挥了一定作用。     

Th1/Th2免疫应答系统在冠状动脉支架内再狭窄患者中的表达*☆

背景：支架再狭窄的机制尚未阐明,炎症失衡在多种疾病中起重要做用,可能与支架再狭窄有关。 目的：观察冠状动脉支架置入后支架内再狭窄患者辅助T细胞亚型Th1样细胞因子γ-干扰素、白细胞介素2和Th2样细胞因子白细胞介素4、白细胞介素10在血清中的分布特点。 方法：应用酶联免疫吸附法测定32例冠状动脉内支架置入后合并支架内再狭窄患者血清标本中γ-干扰素、白细胞介素2、白细胞介素4、白细胞介素10的浓度(实验2组),并与未行支架置入但排除冠心病患者30例(对照1组)、未行支架置入的冠心病患者30例(对照2组)及行支架置入但是无支架内狭窄患者30例(实验1组)进行比较。 结果与结论：对照2组血清中γ-干扰素、白细胞介素2、白细胞介素4、白细胞介素10的水平与对照1组相比,差异无显著性意义(P > 0.05);实验1组各指标与对照1组相比,差异亦无显著性意义(P > 0.05);实验2组患者血清中γ-干扰素、白细胞介素2水平高于其他3组(P < 0.01);白细胞介素4、白细胞介素10水平则低于对照1组和实验1组(P < 0.01)。结果表明支架内再狭窄患者存在Th1、Th2炎症水平的失衡,Th1型细胞因子上调,Th2型细胞因子下调,提示Th1/Th2失衡可能是冠状动脉支架内再狭窄的重要原因。 关键词：支架;冠心病;T淋巴细胞;辅助诱导;干扰素Ⅱ型;白细胞介素     

γ干扰素、白细胞介素4与CD25在角膜移植免疫排斥反应中的作用*☆

目的：角膜移植免疫排斥反应是一个多因素参与的调节过程，近年来研究表明细胞因子在角膜移植免疫中起重要作用。实验拟验证γ-干扰素、白细胞介素4及CD25在大鼠角膜移植免疫排斥反应中的作用。 方法：①实验于2006-10/2007-05在南方医科大学南方医院实验动物中心完成。选用Wistar大鼠24只，SD大鼠54只，实验方法符合动物伦理学要求。②将54只SD大鼠按随机数字表法分为3组，正常组6只，角膜移植组及地塞米松组均24只。后两组制备Wistar→SD角膜移植大鼠模型，受体选择右眼手术，供体提供双眼角膜。③用裂隙灯观察移植排斥情况；利用反转录-聚合酶链反应检测植片内γ-干扰素、CD25 mRNA的表达；应用酶联免疫吸附实验检测房水和血清中γ-干扰素、白细胞介素4含量；应用流式细胞术检测移植前后不同时相外周血淋巴细胞CD25的表达；术后第11天，应用免疫组织化学方法检测角膜CD4+，CD8+和CD25+ T细胞的表达。 结果：54只SD大鼠全部进入结果分析。①地塞米松组大鼠发生角膜移植排斥反应的时间长于角膜移植组(P=0.000)。②正常角膜植片无CD25、γ-干扰素mRNA表达，角膜移植组术后第11天角膜植片内γ-干扰素、CD25 mRNA的表达较地塞米松组增强(P < 0.05)。③角膜移植组角膜移植术后6，11 d血清γ-干扰素含量高于正常组（P < 0.05）；术后11 d含量高于术后6，24 d（P < 0.01）；地塞米松组术后6，11 d低于同期角膜移植组（P < 0.05）。④角膜移植组角膜移植术后6，11，24 d房水γ-干扰素、白细胞介素4含量均高于正常组（P < 0.05）；地塞米松组术后6，11 d均低于同期角膜移植组（P < 0.05~0.01）。⑤地塞米松组术后6，11 d外周血CD3+CD25+T/CD3+T比值低于同期角膜移植组（P < 0.05）。⑥术后第11天角膜移植组植片内CD4，CD8及CD25明显表达，地塞米松组CD4，CD8及CD25表达明显减弱。 结论：CD25、γ-干扰素和白细胞介素4在角膜移植免疫排斥反应过程中发挥重要的作用；促进白细胞介素4表达，抑制γ-干扰素及CD25产生，对降低角膜移植免疫排斥反应具有积极的作用。术后动态检测外周血CD25和γ-干扰素的表达有助于临床了解局部免疫反应程度并预测角膜移植排斥反应的发生。     

CpG寡脱氧核苷酸对外周血单个核细胞功能的影响：1型糖尿病患者与健康者对照

背景：有研究表明CpG寡脱氧核苷酸可增强外周血单个核细胞的功能,但对1型糖尿病患者的影响至今少有报道。 目的：观察CpG寡脱氧核苷酸对1型糖尿患者患者与健康志愿者外周血单个核细胞γ干扰素、白细胞介素12,10表达的影响。 方法：将1型糖尿病患者与健康志愿者的外周血单个核细胞根据刺激物不同分为空白对照组、CpG寡脱氧核苷酸组。用RT-PCR法检测外周血单个核细胞γ干扰素、白细胞介素12 mRNA和白细胞介素10 mRNA的表达。 结果与结论：1型糖尿患者γ干扰素和白细胞介素12 mRNA的表达明显低于健康志愿者(P < 0.01)。1型糖尿患者与健康志愿者外周血单个核细胞经CpG寡脱氧核苷酸组刺激后,γ干扰素和白细胞介素12 mRNA的表达增高(P < 0.01),白细胞介素10 mRNA的表达无差异(P > 0.05)。结果提示,CpG寡脱氧核苷酸可促进1型糖尿患者外周血单个核细胞表达γ干扰素和白细胞介素12。     

他克莫司处理供者树突状细胞在诱导大鼠同种心脏移植免疫耐受中的作用

背景：诱导供者特异性免疫耐受被认为是最终克服器官移植后排斥反应的有效途径，近年来关于未成熟树突状细胞在诱导免疫耐受中的重要作用日益受到关注。 目的：观察他克莫司处理的供者未成熟树突状细胞对大鼠同种异体心脏移植免疫耐受的影响，分析未成熟树突状细胞诱导免疫耐受的作用途径。 设计：随机对照动物实验。 材料：实验于2006-04/2006-12在青岛大学医学院附属医院动物实验中心完成。以45只Wistar大鼠为供体，45只SD大鼠为受体，行颈部心脏移植45例次。按随机数字表法分为3组，每组15例次，进行不同的预处理。 方法：对照组、未经他克莫司处理组及他克莫司处理组移植前7 d分别经尾静脉注射生理盐水、供者未成熟树突状细胞和他克莫司处理的未成熟树突状细胞。分别测定移植后SD大鼠与Wistar大鼠及第3品系Lewis大鼠的单向混合淋巴细胞反应。 主要观察指标：各组受体大鼠移植心脏存活时间、心肌病理及血清白细胞介素2、白细胞介素4、白细胞介素10、γ-干扰素含量变化。 结果：①未经他克莫司处理组大鼠的移植心脏存活时间较对照组明显延长（P < 0.01），他克莫司处理组大鼠的移植心脏存活时间进一步延长（P < 0.05）。②混合淋巴细胞培养结果显示为供者特异性。③各组大鼠血清白细胞介素2、γ-干扰素、白细胞介素4、白细胞介素10含量差异具有显著性意义（P < 0.01）。代表Th1的白细胞介素2、γ-干扰素水平明显降低，代表Th2的白细胞介素4、白细胞介素10水平明显增高。 结论：未成熟树突状细胞能够诱导同种异体大鼠心脏移植免疫耐受；他克莫司处理的未成熟树突状细胞能够加强这种免疫耐受，且这种耐受是供者特异性的。其可能主要通过调节T细胞免疫应答类型（Th1至Th2的免疫偏移）、诱导调节性T细胞和诱导T细胞失能等途径来参与免疫耐受的形成。     

人外周单个核细胞来源树突细胞成熟与肺炎支原体膜脂蛋白的影响*★

目的：实验着眼于肺炎支原体膜脂蛋白对人外周血单个核细胞来源的树突细胞的表型(CD83，CD86)及分泌细胞因子的作用，探讨肺炎支原体加重哮喘的机制是否是改变了树突细胞的性状。 方法：①对象：所有外周血采自正常人，志愿献血者为武汉大学医学院2005级硕士博士研究生6人；实验用肺炎支原体膜脂蛋白购自广州华银医药科技有限公司。②实验过程及分组：从肘静脉采集志愿者20 mL新鲜全血，以不连续密度梯度离心法及贴壁法获取单核细胞，加入重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子，重组人白细胞介素4培养5 d得到不成熟树突细胞后，分别予肺炎支原体膜脂蛋白，脂多糖和空白刺激再培养2 d。③评估：用流式细胞仪检测各组树突细胞表面表达CD83，CD86的情况，用酶联免疫吸附法检测各组树突细胞分泌白细胞介素12的水平。 结果：①肺炎支原体膜脂蛋白组树突细胞表达CD83，CD86高于未刺激组(P < 0.01,P < 0.01)；脂多糖组树突细胞表达CD83，CD86高于未刺激组(P < 0.01,P < 0.01)；肺炎支原体膜脂蛋白组树突细胞表达CD83较脂多糖组无差异，表达CD86高于脂多糖组(P < 0.05)。②肺炎支原体膜脂蛋白组树突细胞分泌白细胞介素12高于未刺激组(P < 0.01)；脂多糖组树突细胞分泌白细胞介素12高于未刺激组(P < 0.01)；肺炎支原体膜脂蛋白组树突细胞分泌白细胞介素12低于脂多糖组(P < 0.05)。 结论：肺炎支原体膜脂蛋白可刺激未成熟树突细胞分化成熟，但较脂多糖刺激的不同，前者刺激成熟的树突细胞在呈递抗原给T细胞时，可进一步使T细胞向Th2极化，导致Th1/Th2平衡失调，从而加重哮喘。     

白细胞介素3基因cDNA克隆与转导及其在脐血CD34+细胞中的表达

背景：单份脐血难以满足成人造血干细胞移植的要求,需对其进行体外扩增,这不仅需要较长的时间和较高的培养条件,而且容易导致干细胞自身分化,从而影响移植效果。 目的：克隆人白细胞介素3基因cDNA,构建其真核表达载体并转导脐血CD34+细胞,观察白细胞介素3的表达情况。 设计、时间及地点：细胞-基因组学体外实验,于2008年在承德医学院完成。 材料：健康成人外周血由承德市中心血站提供,脐血由承德市妇幼保健院提供,提供者对实验均知情同意。 方法：采集健康成人外周血,应用Ficoll密度梯度法分离单个核细胞,免疫磁珠法分离脐血CD34+细胞。提取白细胞介素3 mRNA,应用RT-PCT扩增白细胞介素3 cDNA,构建真核表达载体pcDNA3/IL-3。设立2组：实验组利用基因枪技术将pcDNA3/IL-3导入脐血CD34+细胞中,对照组未行转染。 主要观察指标：采用人白细胞介素3 ELISA试剂盒检测脐血CD34+细胞上清液中白细胞介素3水平。 结果：扩增的白细胞介素3基因cDNA理论上应为616 bp,实际PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后,紫外线下可见预期大小的条带,反转录合成的cDNA完整。BamHⅠ和XbaⅠ双酶切后,电泳可见616 bp的插入片段,与白细胞介素3基因序列相同。转染第1~7天,实验组脐血CD34+细胞上清液中白细胞介素3水平明显高于未转染对照组(t=3.46,P < 0.05)。 结论：白细胞介素3基因cDNA克隆成功,并成功构建了真核表达质粒pcDNA3/IL-3,pcDNA3/IL-3能在脐血CD34+细胞中短期有效表达。     

胚胎骨髓来源间充质干细胞对人Th17细胞的免疫调节*☆◆

背景：众多研究表明间充质干细胞能发挥免疫调节功能,抑制T细胞增殖。 目的：观察胚胎骨髓来源间充质干细胞对人Th17细胞的调节作用。 方法：将人胚胎骨髓间充质干细胞与正常人外周血单个核细胞或CD4+ T细胞以1∶10比例共培养4 d,以单个核细胞或CD4+T细胞单独培养为对照。应用实时定量PCR检测细胞白细胞介素17 mRNA表达,酶联免疫吸附试验检测细胞上清中白细胞介素17蛋白水平,流式细胞术检测Th17细胞数量。 结果与结论：胚胎骨髓来源间充质干细胞与单个核细胞共培养组白细胞介素17 mRNA表达水平明显高于单个核细胞组(P < 0.01)。与此一致的是,胚胎骨髓来源间充质干细胞与单个核细胞或CD4+T细胞共培养组细胞上清中白细胞介素17蛋白水平明显高于单个核细胞组、CD4+ T细胞组(P < 0.05,P < 0.01)。胚胎骨髓来源间充质干细胞与CD4+ T细胞共培养组Th17细胞数量明显高于CD4+ T细胞组(P < 0.01),但胚胎骨髓来源间充质干细胞本身并不表达白细胞介素17。表明胚胎骨髓来源间充质干细胞可促进人Th17细胞增殖。     

抑郁症自杀未遂患者若干生物学改变

目的:探讨抑郁症自杀未遂患者外周血中CD4+CD25+调节性T(Tr)细胞、白细胞介素2(IL-2)及IL-6水平与自杀行为间的关系。方法:患者组为44例抑郁症自杀未遂患者,对照组为30名健康正常者。患者组用选择性5-羟色胺再摄取抑制剂或文拉法辛治疗。治疗前后检测CD4+CD25+Tr、IL-2及IL-6。采用自杀未遂调查表评定两组严重程度。结果:患者组治疗前外周血中CD4+CD25+Tr、IL-2及IL-6均显著高于对照组(P<0.05或P<0.01)。患者组治疗后外周血中CD4+CD25+Tr、IL-2显著降低(P<0.01),IL-6变化不明显。两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。患者病情严重程度与血中CD4+CD25+Tr、IL-2、IL-6水平均无显著相关。结论:抑郁症自杀未遂患者处于免疫紊乱状态,CD4+CD25+Tr、IL-2、IL-6与自杀行为间存在一定的关系。     

Mental illness in England,in Scotland and in Scots living in England

Summary Beginning from the observation that Scots living in England have much higher rates of mental hospital admission than do the English, several hypotheses are proposed to account for this. Much of the excess in rates of mental illness is accounted for by those diagnosed as having alcohol-related disorders and behaviour and personality problems. The results of an examination of offical statistics in the two countries enabled some explanations to be offered. It was found that rates of admissions to mental hospitals are higher in Scotland than in England but not as high as those found among Scots migrants who have a much higher rate of readmission to hospitals than either of the other groups. In fact, if first admissions only are considered the rates of admission in Scotland are not only higher than rates for English natives but also higher than for Scottish migrants. It seems that Scots living in England are somewhat less likely to become mental patients than Scots in Scotland but that once they do achieve this status they are very much more likely to be readmitted on subsequent occasions. It was concluded that there might be two fairly distinct groups of migrants from Scotland to England who have different backgrounds, different reasons for migrating and different psychological characteristics. On the one hand there are stable, economically motivated migrants who move south for definite employment related reasons and who show few psychological symptoms. While on the other hand there is a group of migrants who perhaps have psychological problems and who move more in hope than expectation without definite prospects and who account for the high rates of mental hospital admission found in Scottish migrants.     

Prostacyclin release in the coronary circulation during sustained stimulation in in vitro and in in vivo experimental systems

Prostacyclin release from rat isolated perfused hearts and from dog coronary circulation was studied by measuring immunoreactive 6-keto-PGF1 alpha (6-keto-PGF1a) in heart perfusate and in plasma obtained from the great cardiac vein respectively. Continuous infusion of arachidonic acid at constant concentration in isolated perfused hearts induced an increased prostacyclin release. This release showed a rapid peak within 10 min and a subsequent decrease. Low-flow ischemia induced an increased perfusate concentration of 6-keto-PGF1a but, considering the decreased flow, prostacyclin release was actually reduced. During the whole period of ischemia (60 min) prostacyclin release was constant. In open-chest anesthetized dogs 6-keto-PGF1a concentration in the great cardiac vein was increased after ligation of the left anterior descending coronary artery. A prolonged period of coronary occlusion (4.5 hours) resulted in a progressive rise of prostacyclin release. 6-keto-PGF1a determinations in the femoral vein and in the aorta did not show relevant variations during the observation period.     

癫痫与抑郁关系的研究进展

抑郁是癫痫患者中常见的精神障碍,严重地影响了患者的生活质量。传统的观点认为癫痫患者因为存在着诸多社会学问题易出现抑郁倾向,癫痫和抑郁是单向的联系,但大量的研究已经证明癫痫和抑郁之间存在双向的联系,一种异常状态的存在可能易转化为另一种异常状态的发展。癫痫和抑郁存在着共同的发病机制。本文主要就癫痫和抑郁的双向联系以及抗抑郁药物在癫痫患者中的应用进行阐述。     

Neuroimaging in epilepsy in tropics

Epilepsy is a major public health problem in many tropical countries. Also, some of the tropical diseases are major contributors to the higher prevalence of epilepsy in these countries. The etiologic factors responsible for epilepsy in these countries are quite different from those in the developed world. This article discusses the etiologic factors and neuroimaging of epilepsy in light of the conditions in these tropical countries.