低剂量激素诱导股骨头缺血性坏死模型的建立

背景：激素性股骨头缺血性坏死的发病机制尚未明确。 目的：单纯应用低剂量激素作用于新西兰大白兔，建立激素性股骨头缺血性坏死模型并观察造模效果。 方法：将30只新西兰大白兔随机分为2组。实验组每周经臀肌注射4 mg/kg甲泼尼龙琥珀酸钠，对照组于相同时间点注射等量生理盐水。同时迫使动物直立进食、饮水，以增加股骨头的负重。 结果与结论：肌注甲泼尼龙琥珀酸钠后，白兔出现不同程度的精神萎靡、活动减少、体质量减轻等。给药4周后，兔血清总三酰甘油及低密度脂蛋白增高、高密度脂蛋白降低(P < 0.05)；血清碱性磷酸酶及总胆固醇分别在给药6，8周后明显增高 (P < 0.05)。苏木精-伊红染色显示；给药4周后，兔股骨头骨髓腔内脂肪细胞体积增大，数量增多；给药6周后，空骨陷窝率增大；给药8周后，骨小梁稀疏变细、结构紊乱，软骨区可见死骨形成及部分性坏死和软骨面塌陷。说明单纯注射低剂量激素可以复制出典型的激素性股骨头缺血性坏死模型。     

普伐他汀修复激素性股骨头坏死兔模型的超微结构评价

背景：研究表明普伐他汀可通过上调内源性骨形成蛋白2、核心结合因子α1和血管内皮生长因子等基因的表达从而产生促进激素性股骨头坏死兔模型坏死股骨头修复的作用。 目的：验证性观察普伐他汀干预激素性股骨头坏死兔模型的超微结构改变。 方法：将80只新西兰白兔按随机数字表法分为对照组18只,实验组62只。实验组制备兔激素性股骨头缺血坏死模型。造模第5周,以随机数字表法分配36只模型兔至模型组和他汀组,每组18只。他汀组以普伐他汀(1.2 mg/kg)1次/d灌胃,模型组和对照组以等体积的蒸馏水灌胃。造模后8,12,16周,截取股骨头行透射电镜观察。 结果与结论：透射电镜观察显示模型组骨细胞变性坏死严重,大部分骨陷窝内骨细胞消失,残存的骨细胞内脂肪沉积增多;与模型组比较,他汀组骨细胞受损程度较轻,形态基本正常,胞浆内脂肪沉积少。说明普伐他汀可有效促进早期激素性股骨头坏死兔模型坏死股骨头的修复。     

激素性股骨头坏死早期细胞凋亡相关基因表达及阿仑磷酸钠的干预

背景：近年研究发现激素性股骨头坏死病例中凋亡的骨细胞增多，因此认为激素性股骨头坏死是骨细胞凋亡所致，而并非缺血性坏死。 目的：观察大鼠激素性股骨头坏死早期bcl-2、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cysteinyl aspartate specific protease 3，caspase-3)的表达，以及阿仑磷酸钠的干预效果。 设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2006-03/2007-02在吉林大学基础医学院病理实验室完成。 材料：健康Wister大鼠100只，随机分为正常对照组、激素模型组、藻酸双酯钠组、阿仑磷酸钠组、联合用药组，20只/组。藻酸双酯钠片为吉林东丰制药厂产品，阿仑磷酸钠为杭州默沙东制药有限公司产品。 方法：除正常对照组外，其余4组大鼠均给予醋酸泼尼松龙臀肌注射建立激素性股骨头坏死模型。藻酸双酯钠组、阿仑磷酸钠组分别灌服对应药物，联合用药组灌服藻酸双酯钠+阿仑磷酸钠。各组肌注用药1次/周，灌服药1次/d，实验持续6周。所有大鼠均强迫间断站立，4 h/d。 主要观察指标：光镜观察股骨头病理变化。S-P免疫组织化学染色法检测股骨头组织bcl-2、caspase-3的表达。 结果：给药第4周与正常对照组比较，激素模型组股骨头坏死现象明显，骨小梁变细甚至断裂，空骨陷窝数量明显增多(t=2.629，P < 0.01)；藻酸双酯钠组骨小梁和空骨陷窝数量介于前2组之间(t=1.713，P < 0.01)；阿仑磷酸钠组、联合用药组骨小梁和空骨陷窝数量接近正常对照组(t=1.462，t=1.657，P > 0.05)。与激素模型组比较，藻酸双酯钠组、阿仑磷酸钠组、联合用药组股骨头组织bcl-2阳性细胞率均明显升高(t=2.146，P < 0.05；t=2.815，P < 0.01；t=2.947，P < 0.01)，caspase-3阳性细胞率均明显降低(t=2.97，P < 0.01；t=2.462，P < 0.01；t=1.854，P < 0.05)，其中阿仑磷酸钠组及联合用药组升高尤为明显(t=2.503，t=1.959，P < 0.05)。 结论：大剂量激素可能通过抑制bcl-2表达和促进caspase-3表达引起股骨头坏死。阿仑磷酸钠可能通过与其相反的途径来防止骨细胞凋亡，从而预防早期激素性股骨头坏死。     

力学载荷下大鼠激素性股骨头坏死的改变

背景：力学载荷下大鼠激素性股骨头坏死表现更为典型。 目的：建立大鼠激素性股骨头坏死正常负重和超负重模型，对使用激素后不同时段大鼠股骨头进行观察，探究在力学载荷下大鼠激素性股骨头的相关改变。 方法：4月龄健康Wistar大鼠随机分成实验组和对照组。两组大鼠均臀肌注射地塞米松磷酸钠(20 mg/kg)，1次/周，共计8周。实验组，置于1 km/h跑步机中，强迫其跑动，形成股骨头坏死超负重模型；对照组，生理状态下正常负重。分别于2，4，6，8周处死大鼠，取右侧股骨头标本，于EnduraTEC ELF3200生物力学材料动态力学性能测试系统行压力测定，计算样本纵向最大位移、刚度吸收等生物力学参数，计算空骨陷窝数，并行免疫组织化学法Bcl-2染色，比较不同组之间的累计吸光度值。 结果与结论：实验组8周时病理学呈股骨头坏死表现，各个时期股骨头骨小梁宽度、刚度均低于同期对照组；最大形变均高于同期对照组(P < 0.05)。实验组Bcl-2累计吸光度与对照组比较，第4周起差异有显著性意义(P < 0.05)，实验组Bcl-2表达随激素注射时间增加有显著性意义(P < 0.05)。结果提示，在激素性股骨头坏死中力学载荷使骨细胞凋亡明显，软骨细胞坏死修复增加，并增多骨小梁断裂，不利于保护骨小梁的完整性，成为引起激素性股骨头坏死塌陷的直接外部因素，并出现更显著的股骨头坏死表现。     

激素性股骨头缺血性坏死局部微循环变化与桃红四物汤的干预作用*☆

目的：研究证实桃红四物汤可对抗激素的作用，对早期激素性股骨头缺血性坏死有防治作用。制备兔典型激素性股骨头缺血性坏死模型，拟进一步验证桃红四物汤对激素性股骨头缺血性坏死血液流变学和局部微血管密度的影响。 方法：实验于2005-04/2006-10在福建中医学院中心实验室完成，动物实验方法符合动物伦理学要求。①实验材料及分组：选用健康成年新西兰大白兔60只，其中54只采用贺氏造模法制作激素性股骨头缺血性坏死模型，其余6只为正常组。造模6周后麻醉处死6只模型兔，与正常组对比确定造模成功。将42只造模成功兔按随机数字表法分为激素对照组和中药治疗组(n =21)。②实验方法及评估：激素对照组以生理盐水7 mL/kg治疗，1次/d；中药治疗组以桃红四物汤7 mL/kg治疗，1次/d。于治疗后第1，2，4周各组分别处死7只动物，检测血液流变学指标及股骨头局部微血管密度。 结果：42只兔全部进入结果分析。①治疗后第1，2，4周激素对照组兔全血高切和低切黏度、血浆黏度、红细胞压积、纤维蛋白原含量均高于中药治疗组(P < 0.05~0.01)，并且随着中药治疗时间的延长，中药治疗组血液流变学趋于正常，与激素对照组的差异更明显。②治疗后第1，2，4周中药治疗组兔股骨头局部微血管密度均高于激素对照组(P < 0.05~0.01)。 结论：桃红四物汤能降低激素性股骨头缺血性坏死兔血液黏度，促进股骨头局部微血管的再生，改善股骨头局部血运，促进坏死股骨头的修复。     

激素性股骨头缺血性坏死兔模型的构建☆

背景：成人股骨头缺血性坏死可导致股骨头塌陷和髋关节破坏，但其真正的病因和发病机制尚未完全明了。因此建立实验性动物模型是目前研究激素性股骨头缺血性坏死的重要手段之一。 目的：建立兔激素性股骨头缺血性坏死模型，探讨其可能的发病机制。 方法：将健康成年新西兰白兔以抽签法随机分成4组。对照组，注射生理盐水；激素组，注射甲基泼尼松龙3次；单次内毒素组，静脉注射大肠杆菌内毒素24 h后，立即注射甲基泼尼松龙3次；双次内毒素组，大肠杆菌内毒素注射24 h后重复给药1 次，随后注射甲基泼尼松龙3次。造模前及造模后行X射线片、MRI 检查及组织学检查、透射电镜观察，并计算空骨陷窝率。 结果与结论：造模第8周时激素组、单次内毒素组、双次内毒素组空骨陷窝率较对照组明显增高(P < 0.01)，并且双次内毒素组空骨陷窝率明显高于激素组和单次内毒素组(P < 0.01)。双次内毒素组较激素组及单次内毒素组股骨头出现坏死的时间更早、坏死的效果更显著，并且随着时间的推移股骨头坏死的效果越来越明显。说明在相同的实验条件下，实施双次内毒素与激素联合诱发股骨头坏死出现最早、坏死效果最明显，且骨陷窝空虚率随时间的延长而增加。 关键词：股骨头缺血性坏死；甲基泼尼松龙；激素；内毒素；动物模型；骨陷窝     

普伐他汀干预激素性股骨头坏死兔模型的组织学变化：大体和光镜下比较和印证

背景：研究表明普伐他汀可通过上调内源性骨形成蛋白2、核心结合因子α1和血管内皮生长因子等基因的表达从而产生促进激素性股骨头坏死兔模型坏死股骨头修复的作用。 目的：验证性观察普伐他汀干预激素性股骨头坏死兔模型大体和光镜下的组织学改变,并进行相互比较和印证。 方法：将80只新西兰白兔按随机数字表法分为对照组18只,实验组62只。向实验组耳缘静脉注射大肠杆菌内毒素(10 μg/kg) 2次,注射间隔24 h。并于第2次注射大肠杆菌内毒素后,臀肌注射甲强龙(20 mg/kg)3次,注射间隔24 h,制备兔激素性股骨头缺血坏死模型。造模第5周,将造模成功的39只新西兰白兔以随机数字表法分配其中的36只至模型组和他汀组,每组18只。他汀组以普伐他汀(1.2 mg/kg)灌胃,1次/d;模型组和对照组以等体积的蒸馏水灌胃。造模后8,12,16周,取股骨头,分别进行大体和光镜观察。 结果与结论：大体观察及光镜观察显示模型组出现明显的骨坏死灶,骨髓腔内可见大量脂肪细胞增生;与模型组比较,他汀组骨细胞受损程度较轻,骨小梁密度较高,空骨陷窝比率较少,骨坏死面积和髓腔内脂肪细胞数量明显减少,骨坏死修复迹象明显。说明普伐他汀可有效促进早期激素性股骨头坏死兔模型坏死股骨头的修复。     

改良激素性股骨头坏死动物模型的建立与评价

背景：在股骨头坏死发病机制的研究中,目前仍缺乏有效的动物模型,各种股骨头坏死治疗新方法的发展需要能够模拟人股骨头坏死自然病程动物模型的基础实验。 目的：通过联合应用马血清和低剂量甲基强的松龙建立激素性兔股骨头缺血性坏死动物模型。 方法：20只健康日本大耳白兔随机分成2组。实验组动物注入马血清,间隔2周后,再次注入马血清,第1次注射马血清后24 h肌肉注射甲基强的松龙,每隔1周注射1次,共8周。对照组动物单纯注射同等量的生理盐水。于第1次注射马血清前、注射甲基强的松龙后2,4,8周行血液学检查。并分别于注射甲基强的松龙后4,8周行MRI检查、苏木精-伊红染色和电镜观察股骨头缺血坏死情况。 结果与结论：与对照组比较,2,4,8周实验组三酰甘油、胆固醇均明显上升(P < 0.05);激活部分凝血活酶时间则明显下降(P < 0.05)。4周实验组MRI显示部分动物可见局部信号改变,8周时可见皮质下出血;对照组比较,4,8周实验组骨髓周围有坏死的骨髓细胞碎片存在,空骨陷窝率逐渐增加(P < 0.01);4周时实验组个别骨细胞结构模糊不清,或有大空泡;8周时部分骨细胞核破裂、核溶解,凋亡细胞大量出现,骨胶原结构排列紊乱。结果证实联合运用激素和马血清明显提高股骨头缺血性坏死的发生率,能够较好地建立激素性兔股骨头缺血性坏死动物模型。     

激素性兔股骨头坏死模型的建立

背景：激素的应用已经成为激素性股骨头缺血坏死发病的首要原因。 目的：拟应用马血清与皮质醇激素联合制备兔股骨头缺血性坏死早期模型,探讨激素性股骨头坏死的发病机制。 方法：新西兰大白兔随机分成3组。激素联合马血清组静脉注射马血清10 mL/kg,3周后再次注射马血清6 mL/kg,再2周后注射甲强龙45 mg/kg,1次/d,连续5 d。激素组注射甲强龙45 mg/kg,1次/d,连续5 d。正常对照组不做任何处理。于激素给予前及激素注射后1,3,7和14 d检测定血胆固醇、三酰甘油水平;于激素注射后第2、4、8周行股骨头MRI和组织病理学检测。 结果与结论：与对照组比较,激素联合马血清组和激素组大白兔血清三酰甘油和总胆固醇分别于激素注射后1 d 和3 d明显高于对照组(P < 0.01)。MRI检测结果显示,激素联合马血清组大白兔股骨头于激素注射后第4周出现坏死信号;激素组第8周出现坏死信号。组织学检测结果显示,激素联合马血清组大白兔于激素注射第4周时股骨头出现骨小梁部分变细、断裂,空骨陷窝增加;第8周骨小梁稀疏、破碎,脂肪细胞增大,空骨陷窝明显增大。激素组病理坏死程度各时段均较激素联合马血清组轻。结果表明,激素联合马血清方法可成功制备股骨头坏死早期模型。     

激素性股骨头坏死模型兔坏死股骨头内核心结合因子α1蛋白表达与普伐他汀的干预*****

背景：洛伐他汀、辛伐他汀等他汀类降脂药可上调核心结合因子α1的蛋白表达,促进骨坏死修复。 目的：观察普伐他汀对激素性股骨头坏死兔模型核心结合因子α1的蛋白表达的影响。 方法：将80只新西兰白兔分为对照组18只,实验组62只。实验组制备兔激素性股骨头缺血坏死模型。造模第5周,将造模成功兔36只分为模型组和他汀组,每组18只。他汀组以普伐他汀(1.2 mg/kg)1次/d灌胃,模型组和对照组以等体积的蒸馏水灌胃。造模后8,12,16周分批处死动物,截取股骨头行免疫组化检测核心结合因子α1的蛋白表达。 结果与结论：对照组不同时相点股骨头核心结合因子α1的蛋白表达均为阳性;模型组造模后8周及12周表达均为阴性,造模后16周表达呈弱阳性;他汀组造模后8,12,16周表达均为阳性,且随着用药时间的延长表达逐渐增强。结果说明普伐他汀可有效促进早期激素性股骨头坏死兔模型坏死股骨头核心结合因子α1的蛋白表达。     

构建股骨头缺血坏死模型兔总胆固醇和三酰甘油的变化

背景：引起股骨头坏死最常见的非创伤性致病因素是激素的大量使用,尽管激素与非创伤性股骨头坏死的关系密切,但其发病机制至今尚未阐明。 目的：通过建立股骨头缺血坏死动物模型并检测脂质代谢指标,以探讨脂质代谢与股骨头坏死的关系。 方法：20只健康日本大白兔随机分成2组。实验组通过联合应用马血清和甲泼尼龙建立股骨头坏死的动物模型。对照组腹腔注射生理盐水。于开始注射甲泼尼龙针后第2,4,6,8周检测血清中总胆固醇和三酰甘油;于第2,4,6周分别处死实验组及对照组各2只动物行苏木精-伊红染色组织学检查;于第8周,剩余动物行DR、CT检查后处死行组织学检查。 结果与结论：实验组DR检查显示双侧骨密度降低,骨骺线不清,骨质网状结构模糊;CT显示骨质网状结构密度降低,呈点状分布,骨皮质变薄,骨质疏松,骨骺线不清;苏木精-伊红染色显示骨小梁结构不清,排列紊乱,骨髓内脂肪细胞增多,骨细胞缺失,血栓形成,肥大细胞增生,而对照组的DR、CT和苏木精-伊红染色未见明显异常。实验组造模后总胆固醇、三酰甘油升高(P < 0.05),且明显高于对照组(P < 0.01)。结果证实,联合应用马血清和激素可成功建立股骨头坏死动物模型。脂质代谢紊乱是激素性股骨头坏死重要发病机制之一。     

淫羊藿提取液对激素性股骨头坏死的作用

背景：研究表明中药淫羊藿可以改善激素性股骨头坏死的症状,但具体的作用机制尚未阐明。 目的：探讨淫羊藿提取液治疗激素性股骨头坏死的初步效果。 方法：清洁级SD成年雄性大鼠建立激素性股骨头坏死大鼠模型后,分别给予0.4,0.2 g/mL淫羊藿提取液或生理盐水干预,并设立未造模的空白对照组。干预8周后,检测各组大鼠血液三酰甘油、总胆固醇的变化情况,解剖出股骨头并切片光镜下观察骨密度变化情况,计算空骨陷窝比率,进行组间比较。 结果与结论：与空白对照组相比,模型组股骨头疏松,易于凿切,血脂升高,骨小梁变细、稀疏,空骨陷窝率增高,髓腔脂肪细胞增多;而淫羊藿高、低剂量组的上述病变情况有不同程度减低,以淫羊藿高剂量组病变程度最低。结果表明,淫羊藿提取液能够改善激素性股骨头坏死血流变因素,改善脂肪代谢紊乱,促进堆积脂肪代谢的作用;还能够促进体外成骨细胞增殖及分化成熟,抑制破骨细胞活性、促进股骨头骨再生,改变股骨头内环境向好的方向转变,防治激素引起的骨质疏松,为淫羊藿治疗激素性股骨头坏死提供了初步理论依据。     

创伤性股骨头缺血坏死过程中凋亡调控基因bcl-2、bax的表达及意义

背景：由于骨细胞是股骨头的主要功能细胞,因此股骨头中骨细胞的凋亡及影响凋亡的因子已经成为目前探讨缺血性股骨头坏死发病机制的研究热点。 目的：观察兔股骨头缺血坏死过程中凋亡调控基因bcl-2、bax 的表达变化,探讨股骨头缺血坏死的发病机制。 设计、时间及地点：动物观察试验,于2007-12/2008-09在遵义医学院珠海校区中心实验室完成。 材料：35只新西兰白兔随机分为对照组和实验组(缺血后3,6,12,24,48,96 h)共7组,每组5只。 方法：实验组采用开放手术中断兔股骨头血供致股骨头缺血坏死;对照组动物仅进行皮肤切开和肌肉分离至关节囊的手术。在缺血的不同时间段对股骨头内骨细胞以及Bcl-2、Bax两种蛋白进行测试及比较。 主要观察指标：应用苏木精-伊红染色,免疫组织化学(ABC法)来观测股骨头缺血后3,6,12,24,48,96 h股骨头内骨细胞陷窝变化及Bcl-2、Bax蛋白表达的变化情况。 结果：缺血12 h内苏木精-伊红染色见骨细胞变化较少,48 h出现部分骨细胞和成骨细胞消失,96 h空骨陷窝出现百分比明显高于48 h和对照组的 (P < 0.01)。Bcl-2在缺血后3 h开始出现阳性表达,缺血后12 h出现高峰,然后缓慢下降;Bax在缺血后3 h开始出现阳性表达,高峰出现在缺血后24 h;bcl-2/bax在24 h最小,然后逐渐升高。 结论：创伤性股骨头缺血坏死过程中凋亡基因bcl-2、bax表达变化说明其参与了股骨头细胞凋亡及股骨头缺血坏死过程,结合bcl-2/bax比率变化显示bcl-2、bax在缺血性股骨头坏死中通过调控骨细胞凋亡起作用。     

丹参骨髓腔内注射预防激素性股骨头坏死的可能性

背景：由于股骨头缺血性坏死的确切发病机制尚不清楚，其治疗方法尚不理想。 目的：观察丹参注射液骨髓腔内注射预防激素性股骨头缺血性坏死的可行性和机制。 设计、时间及地点：随机对照动物实验，细胞病理学观察，于2005-04/2007-05在遵义医学院完成。 材料：健康家兔30只，雌雄各半，6月龄,体质量（2.5±0.25）kg, 随机分为对照组、模型组、预防组，每组10只。丹参注射液。 方法：对照组臀肌注射生理盐水。模型组臀肌注射醋酸泼尼松龙,每次7.5 mg/kg，每周2次，共8周。预防组臀肌注射醋酸泼尼松龙制作糖皮质激素诱导激素性股骨头坏死动物模型，同时采用髂骨穿刺针在股骨第三转子尖下方0.3~0.5 cm处由外向内上方穿入后注入丹参注射液，每侧0.4 mL/kg，每周2次，共8周。 主要观察指标：观察3组家兔血脂、血钙磷、X射线、发射型计算机断层扫描及组织病理学指标的变化。 结果：模型组血清钙和钙磷乘积明显降低，X射线示股骨头密度不均，可见大小不一的囊状透亮区，部分骨小梁模糊不清，但股骨头保持完整，关节间隙正常；发射型计算机断层扫描显示股骨头在血流、血池相放射性分布稀疏，延迟相放射性异常浓聚；组织病理学观察显示，股骨头骨皮质变薄，骨小梁变细，结构紊乱，骨髓明显坏死和脂肪化，空骨陷窝率明显增多。预防组血清钙、血清钙磷乘积升高；X射线示除骨小梁略微不清外,股骨头形态和骨密度均接近正常；发射型计算机断层扫描显示动态与静态图像已接近正常兔核素放射性骨显像结果；组织病理学观察显示，骨小梁变细不明显，排列较规则，陷窝内骨细胞数量稍有减少，细胞核固缩边聚现象不严重，空骨陷窝数量较模型组明显减少。 结论：复方丹参注射液可通过改善血液流变学、降低空骨陷窝率而产生对股骨头缺血性坏死的预防作用。