构建股骨头缺血坏死模型兔总胆固醇和三酰甘油的变化

背景：引起股骨头坏死最常见的非创伤性致病因素是激素的大量使用,尽管激素与非创伤性股骨头坏死的关系密切,但其发病机制至今尚未阐明。 目的：通过建立股骨头缺血坏死动物模型并检测脂质代谢指标,以探讨脂质代谢与股骨头坏死的关系。 方法：20只健康日本大白兔随机分成2组。实验组通过联合应用马血清和甲泼尼龙建立股骨头坏死的动物模型。对照组腹腔注射生理盐水。于开始注射甲泼尼龙针后第2,4,6,8周检测血清中总胆固醇和三酰甘油;于第2,4,6周分别处死实验组及对照组各2只动物行苏木精-伊红染色组织学检查;于第8周,剩余动物行DR、CT检查后处死行组织学检查。 结果与结论：实验组DR检查显示双侧骨密度降低,骨骺线不清,骨质网状结构模糊;CT显示骨质网状结构密度降低,呈点状分布,骨皮质变薄,骨质疏松,骨骺线不清;苏木精-伊红染色显示骨小梁结构不清,排列紊乱,骨髓内脂肪细胞增多,骨细胞缺失,血栓形成,肥大细胞增生,而对照组的DR、CT和苏木精-伊红染色未见明显异常。实验组造模后总胆固醇、三酰甘油升高(P < 0.05),且明显高于对照组(P < 0.01)。结果证实,联合应用马血清和激素可成功建立股骨头坏死动物模型。脂质代谢紊乱是激素性股骨头坏死重要发病机制之一。     

改良激素性股骨头坏死动物模型的建立与评价

背景：在股骨头坏死发病机制的研究中,目前仍缺乏有效的动物模型,各种股骨头坏死治疗新方法的发展需要能够模拟人股骨头坏死自然病程动物模型的基础实验。 目的：通过联合应用马血清和低剂量甲基强的松龙建立激素性兔股骨头缺血性坏死动物模型。 方法：20只健康日本大耳白兔随机分成2组。实验组动物注入马血清,间隔2周后,再次注入马血清,第1次注射马血清后24 h肌肉注射甲基强的松龙,每隔1周注射1次,共8周。对照组动物单纯注射同等量的生理盐水。于第1次注射马血清前、注射甲基强的松龙后2,4,8周行血液学检查。并分别于注射甲基强的松龙后4,8周行MRI检查、苏木精-伊红染色和电镜观察股骨头缺血坏死情况。 结果与结论：与对照组比较,2,4,8周实验组三酰甘油、胆固醇均明显上升(P < 0.05);激活部分凝血活酶时间则明显下降(P < 0.05)。4周实验组MRI显示部分动物可见局部信号改变,8周时可见皮质下出血;对照组比较,4,8周实验组骨髓周围有坏死的骨髓细胞碎片存在,空骨陷窝率逐渐增加(P < 0.01);4周时实验组个别骨细胞结构模糊不清,或有大空泡;8周时部分骨细胞核破裂、核溶解,凋亡细胞大量出现,骨胶原结构排列紊乱。结果证实联合运用激素和马血清明显提高股骨头缺血性坏死的发生率,能够较好地建立激素性兔股骨头缺血性坏死动物模型。     

低剂量激素诱导股骨头缺血性坏死模型的建立

背景：激素性股骨头缺血性坏死的发病机制尚未明确。 目的：单纯应用低剂量激素作用于新西兰大白兔，建立激素性股骨头缺血性坏死模型并观察造模效果。 方法：将30只新西兰大白兔随机分为2组。实验组每周经臀肌注射4 mg/kg甲泼尼龙琥珀酸钠，对照组于相同时间点注射等量生理盐水。同时迫使动物直立进食、饮水，以增加股骨头的负重。 结果与结论：肌注甲泼尼龙琥珀酸钠后，白兔出现不同程度的精神萎靡、活动减少、体质量减轻等。给药4周后，兔血清总三酰甘油及低密度脂蛋白增高、高密度脂蛋白降低(P < 0.05)；血清碱性磷酸酶及总胆固醇分别在给药6，8周后明显增高 (P < 0.05)。苏木精-伊红染色显示；给药4周后，兔股骨头骨髓腔内脂肪细胞体积增大，数量增多；给药6周后，空骨陷窝率增大；给药8周后，骨小梁稀疏变细、结构紊乱，软骨区可见死骨形成及部分性坏死和软骨面塌陷。说明单纯注射低剂量激素可以复制出典型的激素性股骨头缺血性坏死模型。     

普伐他汀干预激素性股骨头坏死兔模型的组织学变化：大体和光镜下比较和印证

背景：研究表明普伐他汀可通过上调内源性骨形成蛋白2、核心结合因子α1和血管内皮生长因子等基因的表达从而产生促进激素性股骨头坏死兔模型坏死股骨头修复的作用。 目的：验证性观察普伐他汀干预激素性股骨头坏死兔模型大体和光镜下的组织学改变,并进行相互比较和印证。 方法：将80只新西兰白兔按随机数字表法分为对照组18只,实验组62只。向实验组耳缘静脉注射大肠杆菌内毒素(10 μg/kg) 2次,注射间隔24 h。并于第2次注射大肠杆菌内毒素后,臀肌注射甲强龙(20 mg/kg)3次,注射间隔24 h,制备兔激素性股骨头缺血坏死模型。造模第5周,将造模成功的39只新西兰白兔以随机数字表法分配其中的36只至模型组和他汀组,每组18只。他汀组以普伐他汀(1.2 mg/kg)灌胃,1次/d;模型组和对照组以等体积的蒸馏水灌胃。造模后8,12,16周,取股骨头,分别进行大体和光镜观察。 结果与结论：大体观察及光镜观察显示模型组出现明显的骨坏死灶,骨髓腔内可见大量脂肪细胞增生;与模型组比较,他汀组骨细胞受损程度较轻,骨小梁密度较高,空骨陷窝比率较少,骨坏死面积和髓腔内脂肪细胞数量明显减少,骨坏死修复迹象明显。说明普伐他汀可有效促进早期激素性股骨头坏死兔模型坏死股骨头的修复。     

丹参骨髓腔内注射预防激素性股骨头坏死的可能性

背景：由于股骨头缺血性坏死的确切发病机制尚不清楚，其治疗方法尚不理想。 目的：观察丹参注射液骨髓腔内注射预防激素性股骨头缺血性坏死的可行性和机制。 设计、时间及地点：随机对照动物实验，细胞病理学观察，于2005-04/2007-05在遵义医学院完成。 材料：健康家兔30只，雌雄各半，6月龄,体质量（2.5±0.25）kg, 随机分为对照组、模型组、预防组，每组10只。丹参注射液。 方法：对照组臀肌注射生理盐水。模型组臀肌注射醋酸泼尼松龙,每次7.5 mg/kg，每周2次，共8周。预防组臀肌注射醋酸泼尼松龙制作糖皮质激素诱导激素性股骨头坏死动物模型，同时采用髂骨穿刺针在股骨第三转子尖下方0.3~0.5 cm处由外向内上方穿入后注入丹参注射液，每侧0.4 mL/kg，每周2次，共8周。 主要观察指标：观察3组家兔血脂、血钙磷、X射线、发射型计算机断层扫描及组织病理学指标的变化。 结果：模型组血清钙和钙磷乘积明显降低，X射线示股骨头密度不均，可见大小不一的囊状透亮区，部分骨小梁模糊不清，但股骨头保持完整，关节间隙正常；发射型计算机断层扫描显示股骨头在血流、血池相放射性分布稀疏，延迟相放射性异常浓聚；组织病理学观察显示，股骨头骨皮质变薄，骨小梁变细，结构紊乱，骨髓明显坏死和脂肪化，空骨陷窝率明显增多。预防组血清钙、血清钙磷乘积升高；X射线示除骨小梁略微不清外,股骨头形态和骨密度均接近正常；发射型计算机断层扫描显示动态与静态图像已接近正常兔核素放射性骨显像结果；组织病理学观察显示，骨小梁变细不明显，排列较规则，陷窝内骨细胞数量稍有减少，细胞核固缩边聚现象不严重，空骨陷窝数量较模型组明显减少。 结论：复方丹参注射液可通过改善血液流变学、降低空骨陷窝率而产生对股骨头缺血性坏死的预防作用。     

激素性股骨头缺血性坏死兔模型的构建☆

背景：成人股骨头缺血性坏死可导致股骨头塌陷和髋关节破坏，但其真正的病因和发病机制尚未完全明了。因此建立实验性动物模型是目前研究激素性股骨头缺血性坏死的重要手段之一。 目的：建立兔激素性股骨头缺血性坏死模型，探讨其可能的发病机制。 方法：将健康成年新西兰白兔以抽签法随机分成4组。对照组，注射生理盐水；激素组，注射甲基泼尼松龙3次；单次内毒素组，静脉注射大肠杆菌内毒素24 h后，立即注射甲基泼尼松龙3次；双次内毒素组，大肠杆菌内毒素注射24 h后重复给药1 次，随后注射甲基泼尼松龙3次。造模前及造模后行X射线片、MRI 检查及组织学检查、透射电镜观察，并计算空骨陷窝率。 结果与结论：造模第8周时激素组、单次内毒素组、双次内毒素组空骨陷窝率较对照组明显增高(P < 0.01)，并且双次内毒素组空骨陷窝率明显高于激素组和单次内毒素组(P < 0.01)。双次内毒素组较激素组及单次内毒素组股骨头出现坏死的时间更早、坏死的效果更显著，并且随着时间的推移股骨头坏死的效果越来越明显。说明在相同的实验条件下，实施双次内毒素与激素联合诱发股骨头坏死出现最早、坏死效果最明显，且骨陷窝空虚率随时间的延长而增加。 关键词：股骨头缺血性坏死；甲基泼尼松龙；激素；内毒素；动物模型；骨陷窝     

淫羊藿提取液对激素性股骨头坏死的作用

背景：研究表明中药淫羊藿可以改善激素性股骨头坏死的症状,但具体的作用机制尚未阐明。 目的：探讨淫羊藿提取液治疗激素性股骨头坏死的初步效果。 方法：清洁级SD成年雄性大鼠建立激素性股骨头坏死大鼠模型后,分别给予0.4,0.2 g/mL淫羊藿提取液或生理盐水干预,并设立未造模的空白对照组。干预8周后,检测各组大鼠血液三酰甘油、总胆固醇的变化情况,解剖出股骨头并切片光镜下观察骨密度变化情况,计算空骨陷窝比率,进行组间比较。 结果与结论：与空白对照组相比,模型组股骨头疏松,易于凿切,血脂升高,骨小梁变细、稀疏,空骨陷窝率增高,髓腔脂肪细胞增多;而淫羊藿高、低剂量组的上述病变情况有不同程度减低,以淫羊藿高剂量组病变程度最低。结果表明,淫羊藿提取液能够改善激素性股骨头坏死血流变因素,改善脂肪代谢紊乱,促进堆积脂肪代谢的作用;还能够促进体外成骨细胞增殖及分化成熟,抑制破骨细胞活性、促进股骨头骨再生,改变股骨头内环境向好的方向转变,防治激素引起的骨质疏松,为淫羊藿治疗激素性股骨头坏死提供了初步理论依据。     

力学载荷下大鼠激素性股骨头坏死的改变

背景：力学载荷下大鼠激素性股骨头坏死表现更为典型。 目的：建立大鼠激素性股骨头坏死正常负重和超负重模型，对使用激素后不同时段大鼠股骨头进行观察，探究在力学载荷下大鼠激素性股骨头的相关改变。 方法：4月龄健康Wistar大鼠随机分成实验组和对照组。两组大鼠均臀肌注射地塞米松磷酸钠(20 mg/kg)，1次/周，共计8周。实验组，置于1 km/h跑步机中，强迫其跑动，形成股骨头坏死超负重模型；对照组，生理状态下正常负重。分别于2，4，6，8周处死大鼠，取右侧股骨头标本，于EnduraTEC ELF3200生物力学材料动态力学性能测试系统行压力测定，计算样本纵向最大位移、刚度吸收等生物力学参数，计算空骨陷窝数，并行免疫组织化学法Bcl-2染色，比较不同组之间的累计吸光度值。 结果与结论：实验组8周时病理学呈股骨头坏死表现，各个时期股骨头骨小梁宽度、刚度均低于同期对照组；最大形变均高于同期对照组(P < 0.05)。实验组Bcl-2累计吸光度与对照组比较，第4周起差异有显著性意义(P < 0.05)，实验组Bcl-2表达随激素注射时间增加有显著性意义(P < 0.05)。结果提示，在激素性股骨头坏死中力学载荷使骨细胞凋亡明显，软骨细胞坏死修复增加，并增多骨小梁断裂，不利于保护骨小梁的完整性，成为引起激素性股骨头坏死塌陷的直接外部因素，并出现更显著的股骨头坏死表现。     

激素性股骨头坏死早期细胞凋亡相关基因表达及阿仑磷酸钠的干预

背景：近年研究发现激素性股骨头坏死病例中凋亡的骨细胞增多，因此认为激素性股骨头坏死是骨细胞凋亡所致，而并非缺血性坏死。 目的：观察大鼠激素性股骨头坏死早期bcl-2、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cysteinyl aspartate specific protease 3，caspase-3)的表达，以及阿仑磷酸钠的干预效果。 设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2006-03/2007-02在吉林大学基础医学院病理实验室完成。 材料：健康Wister大鼠100只，随机分为正常对照组、激素模型组、藻酸双酯钠组、阿仑磷酸钠组、联合用药组，20只/组。藻酸双酯钠片为吉林东丰制药厂产品，阿仑磷酸钠为杭州默沙东制药有限公司产品。 方法：除正常对照组外，其余4组大鼠均给予醋酸泼尼松龙臀肌注射建立激素性股骨头坏死模型。藻酸双酯钠组、阿仑磷酸钠组分别灌服对应药物，联合用药组灌服藻酸双酯钠+阿仑磷酸钠。各组肌注用药1次/周，灌服药1次/d，实验持续6周。所有大鼠均强迫间断站立，4 h/d。 主要观察指标：光镜观察股骨头病理变化。S-P免疫组织化学染色法检测股骨头组织bcl-2、caspase-3的表达。 结果：给药第4周与正常对照组比较，激素模型组股骨头坏死现象明显，骨小梁变细甚至断裂，空骨陷窝数量明显增多(t=2.629，P < 0.01)；藻酸双酯钠组骨小梁和空骨陷窝数量介于前2组之间(t=1.713，P < 0.01)；阿仑磷酸钠组、联合用药组骨小梁和空骨陷窝数量接近正常对照组(t=1.462，t=1.657，P > 0.05)。与激素模型组比较，藻酸双酯钠组、阿仑磷酸钠组、联合用药组股骨头组织bcl-2阳性细胞率均明显升高(t=2.146，P < 0.05；t=2.815，P < 0.01；t=2.947，P < 0.01)，caspase-3阳性细胞率均明显降低(t=2.97，P < 0.01；t=2.462，P < 0.01；t=1.854，P < 0.05)，其中阿仑磷酸钠组及联合用药组升高尤为明显(t=2.503，t=1.959，P < 0.05)。 结论：大剂量激素可能通过抑制bcl-2表达和促进caspase-3表达引起股骨头坏死。阿仑磷酸钠可能通过与其相反的途径来防止骨细胞凋亡，从而预防早期激素性股骨头坏死。     

地塞米松联合脂多糖诱导股骨头坏死模型的构建

背景：对于研究股骨头坏死的发病机制及治疗方法,建立与股骨头坏死病程相似的动物模型是非常重要的。 目的：观察地塞米松联合脂多糖诱导兔股骨头坏死的实验效果。 方法：健康雄性新西兰大白兔30只,随机分为模型组(n=20)和对照组(n=10)。模型组经耳缘静脉注射2次10 μg/kg的脂多糖,再肌肉注射3次地塞米松25 mg/kg,对照组注射同等剂量的生理盐水。 结果与结论：4周后,CT扫描显示模型组兔股骨头不同程度的骨密度不均匀。显微CT观察发现,模型组骨体积分数、骨矿物质密度、骨矿物质含量和骨小梁厚度均显著低于对照组,而骨小梁间隙高于对照组(P < 0.05)。组织学切片见模型组骨细胞陷窝空疏,脂肪细胞增多,部分血管栓塞,其中存活动物的骨坏死率和骨陷窝空虚率均明显低于对照组。说明地塞米松联合脂多糖可有效建立骨坏死模型。     

鹿茸粉对股骨头缺血性坏死模型大鼠的治疗作用

背景：长期使用类固醇激素容易引起股骨头缺血性坏死,中药鹿茸具有骨生长因子,能促进伤口愈合、组织修复,可能对股骨头缺血性坏死具有治疗作用。 目的：观察鹿茸粉对大鼠激素诱导性股骨头缺血性坏死的治疗作用。 方法：将42只雄性wistar大鼠分成空白对照组、模型组和高、中、低剂量治疗组。1周2次臀部肌肉注射给予地塞米松 (30 mg/kg),连续6周。高、中、低剂量治疗组按200,400,800 mg/kg剂量灌胃鹿茸粉,每天1次,空白对照组、模型组给予同量生理盐水。治疗2个月后,测量大鼠血脂水平,取两侧股骨头测量骨密度、病理变化及血管内皮细胞生长因子表达。 结果与结论：类固醇激素干预后,大鼠造成明显股骨头缺血性坏死损伤,经过治疗后高、中、低剂量治疗组大鼠损伤骨组织明显恢复,与模型组相比,骨密度增高,总胆固醇、三酰甘油和低密度脂蛋白水平下降,股骨血管内皮细胞生长因子表达上升。提示鹿茸粉能通过增加骨形成,改善脂肪代谢和增加血管形成来治疗激素诱导性股骨头坏死。     

桃红四物汤干预激素性股骨头缺血坏死组织局部微血管密度的变化

背景：临床和实验研究多方面证明,以活血化瘀中药治疗股骨头缺血坏死有较好的效果。 目的：验证桃红四物汤对激素性股骨头缺血性坏死股骨头局部微血管密度的影响。 设计、时间及地点：随机对照实验、重复测量设计,于2006-04/2007-10在福建中医学院中心实验室完成。 材料：清洁级SD大鼠40只,雌雄各半,体质量(200±20) g。采用抽签法随机分为空白组4只和模型组36只。桃红四物汤由桃仁、红花、当归、川芎、白芍和熟地组成。 方法：模型组每周2次腹腔注射醋酸泼尼松龙24.5 mg/kg,经6周诱导出早期激素性股骨头缺血坏死的模型,空白组每周2次腹腔注射同等剂量的生理盐水。6周后处死空白组4只和模型组4只,进行光、电镜观察,确定造模成功。随后将其余32只模型组大鼠再随机分为治疗组16只和对照组16只,分别灌服桃红四物汤12.3 mL/(kg•d)[相当于生药9.2 g/(kg•d)]和等量生理盐水,于灌胃后第6,8周检测股骨头局部微血管密度的变化。 主要观察指标：①股骨头组织超微结构。②苏木精-伊红染色股骨头组织形态学观察。③股骨头局部微血管密度检测结果。 结果：光镜观察：激素可使模型组空缺骨陷窝数明显增多,骨小梁细疏,髓腔脂肪细胞增大、增多,与空白组有明显差异(P < 0.01)。电镜观察：模型组骨细胞数量减少,退变固缩或出现出现脂滴,成骨细胞减少,髓内脂肪细胞增大、增多,空白组骨细胞富含粗面内质网,多聚核糖体多,线粒体发达,嵴结构清晰,核异染色质丰富,核仁可见。股骨头局部微血管密度：治疗组股骨头局部微血管密度逐渐增高,对照组股骨头局部微血管密度较治疗组明显减低,两组相比有明显差异(P < 0.01)。 结论：桃红四物汤可促进激素性股骨头缺血坏死股骨头局部微血管的生长,改善股骨头局部血运,促进坏死股骨头的修复。     

大剂量激素诱导建立兔股骨头缺血性坏死模型

背景：目前尚无能较好地反映激素诱导性股骨头缺血性坏死病理变化过程的疾病模型，从而影响了对其发病机制的进一步观察。 目的：通过给予兔大剂量地塞米松诱导出股骨头缺血性坏死模型，为临床机制研究提供实验动物模型。 设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2004-06/2005-08在安徽医科大学及附属医院动物实验室完成。 材料：健康成年新西兰大白兔16只，雌雄各半，体质量3.0~3.2 kg。地塞米松由江苏涟水制药有限公司提供，规格5 g/L。 方法：将新西兰大白兔随机分为2组，模型组给予臀肌注射地塞米松2.5 mg/(kg?d)，对照组臀肌注射生理盐水2 mL/只，共6周。 主要观察指标：于应用激素前后作血脂、凝血酶原时间检测，于2，4，6周行X射线片、光镜和透射电镜观察股骨头病理变化过程。 结果：与对照组相比，模型组自第2周开始胆固醇水平明显升高(P < 0.05)，三酰甘油水平从第1周起明显升高(P < 0.01)，凝血酶原时间从第2周起明显缩短(P < 0.05)，于第4周开始出现骨密度不均匀，6周时变化为股骨头软骨下区可见不规则的囊性透亮区，有局限性骨密度增高、硬化，关节间隙正常，骨小梁毛糙、变形，股骨干周围骨皮质变薄，2周时光镜下见骨髓腔内脂肪细胞明显增多、肥大，4周以后出现典型骨坏死；电镜观察坏死骨细胞经历了变性、坏死、溶解的病理过程。 结论：采用大剂量糖皮质激素成功诱导建立了兔股骨头坏死模型。     

血管内皮生长因子在激素性骨坏死过程中的变化特点

背景：动物实验显示,激素可导致股骨头内毛细血管明显充盈不良,单位面积内毛细血管密度明显下降,软骨下松质骨内微血管数明显减少,但具体机制尚不清楚。 目的：观察激素诱导骨坏死过程中血管内皮生长因子的表达变化。 方法：将中国大耳白兔以抽签法随机分马血清加甲基强的松龙组与单纯甲基强的松龙组。参考Matsui的方法制备典型的兔骨坏死动物模型,马血清加甲基强的松龙组经耳缘静脉注射马血清10 mL/kg,间隔2周后,再次相同剂量及方法注射马血清,间隔2周后腹腔注射甲基强的松龙45 mg/(kg•d),连续5 d。对照组腹腔注射甲基强的松龙45 mg/(kg•d),连续5 d。采用RT-RCR技术检测两组用药前、用药后7,14 d,第1次用激素后1,3,7,21,35,49 d骨组织中血管内皮生长因子基因表达,并进行微血管计数。 结果与结论：使用马血清后7 d血管内皮生长因子明显增高,此后呈缓慢回落状态,在应用激素后1 d回落到正常用药前水平,随着应用激素时间的延长,血管内皮生长因子mRNA的表达量逐渐减低,以第7,21天为显著(P < 0.05),以后逐渐回升,但不能达到正常水平;微血管计数数量逐渐减少,在21 d时减少最明显,与血管内皮生长因子表达量呈正相关。结果提示糖皮质激素抑制了骨组织中血管内皮生长因子的表达,从而抑制了骨内新生血管的形成,使骨组织局部缺血、缺氧状态难以修复重建;血管内皮生长因子的表达与骨组织微血管数量及骨坏死程度密切相关。