细胞间黏附分子5对Aβ诱发的PAJU细胞损伤的保护作用

目的探讨细胞间黏附分子5(ICAM-5)对β淀粉样蛋白(Aβ)诱导的PAJU细胞损伤的保护作用。方法采用较低浓度(0.5nM、0.8nM)Aβ42和Aβ35对转染人ICAM-5基因的PAJU-ICAM-5和转染空载体的PAJU-NEO细胞进行24h、48h和96h处理,使用相差显微镜观察和显微测量PAJU-ICAM-5和PAJU-NEO细胞突起长度,用免疫荧光显微镜观察突起末端改变。结果在细胞形态上,PAJU-ICAM-5细胞和PAJU-NEO细胞在经过Aβ处理后均出现了部分损伤表现,PAJU-ICAM-5细胞的损害较轻,形态较正常。显微测量结果显示,在分别经过0.5nM、0.8nM的Aβ35和Aβ42作用24h、48h时和96h时后,PAJU-ICAM-5细胞的突起长度均比PAJU-NEO细胞的突起长度长,两组细胞的突起长度比较均具有显著性差异(P0.05,P0.01)。免疫荧光结果显示,经过Aβ处理后,PAJU-NEO细胞的突起变钝、变短,末端成球状,而PAJU-ICAM-5细胞却很少见球状突起。结论ICAM-5可以促进PAJU细胞突起生长、能够减轻Aβ对PAJU细胞的形态损害,对PAJU细胞的突起具有保护作用。     

外源性Bax基因过表达对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞株Smac蛋白表达的影响

目的观察Bcl-2相关X蛋白（Bax）基因过表达对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞第二个线粒体来源的半胱氨酸酶的激活剂（Smac）蛋白表达的影响。方法采用脂质体Lipofectamine 2000将携带人Bax基因的过表达质粒转入SH-SY5Y细胞（转染组）,同时设空载体组和未转染组。通过G-418筛选后获得转入目的基因的细胞克隆。Hoechst33258染色观察凋亡细胞,免疫印迹法法检测细胞中Bax、Smac蛋白表达,免疫荧光染色检测Bax、Smac蛋白在细胞中的分布。结果转染后用G-418持续筛选2周可获得G418抗性的细胞克隆。Smac主要分布于胞质,Bax主要位于细胞核。转染组SH-SY5Y细胞Bax蛋白表达水平（1.067±0.036）较空载体组（0.436±0.035）和未转染组（0.444±0.046）显著增高（P〈0.05）;转染组Smac蛋白表达水平（1.408±0.044）相比空载体组（0.708±0.021）和未转染组（0.748±0.041）显著增高（P〈0.05）;空载体和未转染组细胞Bax和Snac蛋白表达均无显著差异（P〉0.05）。转染组较未转染组细胞凋亡率显著增加（P〈0.05）。结论外源性Bax基因转入人神经母细胞瘤细胞中并稳定过表达,能够上调Smac蛋白表达,促进细胞凋亡。     

奥氮平对无血清诱导PC12细胞凋亡的影响

目的:探讨奥氮平对无血清诱导PC12细胞凋亡的保护作用及其机制。方法:以神经生长因子(NGF)诱导后的PC12细胞作为细胞模型,采用无血清培养诱导细胞凋亡。给予奥氮平后,采用MTT法检测细胞活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率、细胞周期以及Hoechst33342染色观察细胞形态学的改变。结果:奥氮平(100μM)组培养72h的细胞活性与对照组相比差异显著(P<0·05),奥氮平(12·5、25、50、200μM)组与对照组无明显差异;而各浓度氟哌啶醇组的细胞活性均低于对照组;流式细胞仪结果显示血清组、奥氮平组、氟哌啶醇组、对照组的调亡率依次是17·9%、36·6%、59·8%、51·9%,其中对照组、氟哌啶醇组大部分细胞滞留于G1期;奥氮平组Hoechst33342染色偶见凋亡细胞,以核浓缩为主,而对照组、氟哌啶醇组多见核碎裂。结论:奥氮平能保护PC12细胞免于无血清培养诱导的凋亡,可能是其神经保护作用机制之一。     

依达拉奉后处理对氧糖剥夺SK-N-SH细胞的抗凋亡作用及对Bcl-2与Bax表达的影响

目的观察依达拉奉后处理(EPC)对氧糖剥夺损伤SK-N-SH细胞的抗凋亡作用及对Bcl-2与Bax表达的影响,探讨其可能的机制。方法细胞分为正常对照组、氧糖剥夺组(OGD组)、依达拉奉后处理组(EPC组)。正常对照组DMEM高糖培养液中正常培养;OGD组的SK-N-SH细胞换用无糖DMEM培养液并置入自制缺氧罐处理4 h,再换成DMEM高糖培养液继续培养20 h;EPC组的SK-N-SH细胞先氧糖剥夺4 h,然后用含终浓度1μmol/L依达拉奉的DMEM高糖培养液作为后处理4 h后,再换成DMEM高糖培养基继续培养16 h。四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,Hoechst33258染色检测细胞凋亡,Western blot检测Bcl-2与Bax蛋白的表达。结果 OGD组存活率比正常组明显下降(P<0.01),EPC组细胞存活率比OGD组显著增加(P<0.05);OGD组细胞凋亡率较正常组显著增高(P<0.01),而EPC组细胞凋亡率显著低于OGD组(P<0.05);与OGD组比较,EPC组Bcl-2表达显著增高(P<0.05),而Bax的表达明显降低(P<0.05)。结论依达拉奉后处理对氧糖剥夺SK-N-SH细胞有抗凋亡作用,可能与其使Bcl-2过表达和抑制Bax表达有关。     

重组腺病毒Vpr诱导脑胶质瘤细胞凋亡的体外研究

目的 探讨重组腺病毒介导的人类免疫缺陷病毒1型病毒蛋白R(HIV1-Vpr)体外对胶质瘤细胞U251凋亡的影响.方法 将U251细胞分为正常对照组、空载体组和实验组进行细胞培养,24 h后空载体组和实验组按MOI=50分别进行空载体腺病毒(rAd5-null)和含有HIV1-Vpr基因的重组腺病毒(rAd5-Vpr)转染,转染后用MTT比色法测定细胞增殖活性,用Hoechst染色和流式细胞仪分别检测细胞的凋亡和细胞周期改变,用Western blot方法 检测相关蛋白的表达.结果 rAd5-Vpr能够抑制U251细胞增殖,其作用从转染后48 h开始,随着时间的延长,抑制作用逐渐增强(P＜0.05);实验组Hoechst染色观察到明显的细胞凋亡现象;流式细胞周期检测显示实验组细胞G2期比例升高(P＜0.05);Western blot结果 显示,实验组U251细胞经转染rAd5-Vpr72 h后,可见Vpr蛋白表达,同时Bcl-2蛋白表达降低,Bax、Caspase3和Fas-L蛋白表达增强.结论 rAd5-Vpr在体外能够抑制U251细胞增殖,诱导细胞周期G2期阻滞和细胞凋亡.     

星形胶质细胞释放细胞因子功能初探

目的：观察含血清和无血清培养的星形胶质细胞（Ast）经不同时程糖氧剥夺（OGD）孵育后其释放细胞因子功能的变化。方法：体外培养Ast,分为对照组和OGD组,各组再分为含血清和无血清培养不同时程亚组（0、3、6、9、12、16和24h组）。用MTT法测定不同培养条件和时程的Ast相对活性,ELISA法检测Ast释放到培养液中的促炎因子（TNF-α、IL-1β、IL-6）和粒细胞集落刺激因子（G-CSF）的水平。结果：①OGD处理9h：含血清培养的Ast仍然保持高效的增殖能力,而无血清培养的Ast增殖能力明显受抑。②OGD处理24h：含血清培养的Ast存活率高于50％,无血清培养的Ast存活率约30％。③OGD处理24h：含血清培养的Ast最早释放增加的细胞因子为G—CSF,次之为IL-6;TNF-α和IL-1β无释放增加的趋势;无血清培养的Ast基本无G—CSF释放增加,其他3种因子均于OGD处理3h开始释放增加,仅持续时间长短不同。结论：OGD处理9h内,含血清培养的Ast仍然可以保持高效的增殖,而无血清培养的Ast增殖明显受抑;Ast释放G-CSF和促炎因子的时段与它们所处的培养环境密切相关。     

嘌呤霉素敏感的氨肽酶对β-淀粉样蛋白诱导的细胞凋亡的影响

目的 探讨嘌呤霉素敏感的氨肽酶(PSA)对β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)诱导的SH-SY5Y细胞、PC12细胞凋亡的影响. 方法 采用MTT法检测Aβ25-35对SH-SY5Y、PC12细胞生长的影响;Hoechst染色检测Aβ25-35对SH-SY5Y、PC12细胞核形态的影响;进一步采用脂质体转染法在SH-SY5Y细胞中瞬时转染PSA-siRNA,在PC12细胞中瞬时转染PSA重组质粒,加入Aβ25-35作用24h后收集细胞,进行流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blotting检测PSA、caspase-3蛋白的表达变化;酶标仪检测caspase-3活性. 结果 Aβ25-35抑制SH-SY5Y、PC12细胞增殖,细胞核发生凋亡的形态学改变,流式检测细胞凋亡率增加;在SH-SY5Y细胞中,沉默PSA表达能使Aβ25-35诱导的细胞凋亡率升高,促进caspase-3酶原激活,caspase-3活性升高.反之,PC12细胞中过表达的PSA能使Aβ25-35诱导的细胞凋亡率下降,抑制caspase-3酶原激活,caspase-3活性降低. 结论 Aβ25-35能抑制神经细胞生长,引起神经细胞凋亡;PSA能抑制Aβ25-35诱导的神经细胞凋亡,对神经元具有保护作用,其机制可能与抑制caspase-3通路的激活有关.     

依达拉奉对脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的 探讨依达拉奉对脑缺血神经细胞损伤的保护作用和对凋亡的影响.方法 实验目标为出生24 h内SD乳鼠的脑细胞,培养7 d后进行分组培养,分别检测各组的指标,包括神经细胞存活率、LDH的漏出率、细胞凋亡率等,进行统计学分析.结果 依达拉奉组与正常对照组相比存活率无显著下降（P＞0.05）,正常对照组与其他损伤组细胞存活率比较显著下降（P＜0.05）.细胞凋亡率观察依达拉奉组与正常对照组相比无显著下降（P＞0.05）,药物损伤组、低浓度异丙酚组、中浓度异丙酚组、高浓度异丙酚组与正常对照组比较均较高（P＜0.05）.结论 依达拉奉是一种自由基清除剂,抑制细胞膜过氧化,增强细胞总抗氧化能力,提高细胞稳定性,对脑缺血神经细胞损伤起到保护作用,减少细胞凋亡率,增加细胞存活率.     

SIRT1在脂多糖诱导的PC12细胞凋亡中的作用

目的 探讨沉默信息调控因子1(SIRTl)在脂多糖(LPS)诱导的PC12细胞凋亡过程中的作用. 方法 PC12细胞按不同培养方法分为6组:对照组、250 μg/mL组、500 μg/mL组、750μg/mL组、1000 μg/mL组、1250 μg/mL组;对照组常规培养,后5组添加相应浓度的LPS培养.24 h后MTT法测量细胞存活率,同时确定LPS诱导PC12细胞凋亡的适合浓度.再按选定的浓度培养细胞,并根据培养时间的不同分为6组:对照组、1/2 h组、2h组、18h组、24 h组、48 h组,Hoechst染色及流式细胞仪测量细胞凋亡率.Western blotting检测各组细胞中SIRT1的表达情况. 结果 Hoechst染色结果提示PCl2细胞经LPS培养1/2h后出现凋亡,表现为核固缩、核碎裂;18h开始凋亡小体增多,24h达到高峰,48 h后又有所下降.流式细胞仪检测结果显示各实验组细胞凋亡率与对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.05),凋亡率变化趋势与Hoechst染色法观察到的结果 一致.Western blotting结果显示对照组SIRTl表达量为1.84±0.04; 1/2 h时SIRT1蛋白表达减低至1.17±0.09;24 h时表达降至最低,为0.62±0.03;48 h组表达量有所回升,达到0.77±0.02;实验组各时间点组与对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 LPS可以诱导PC12细胞凋亡,SIRT1在此过程中的表达受到抑制;推测SIRT1在LPS诱导PC12细胞凋亡的过程中起到一定的保护作用.     

外源性TRAIL基因转染对胶质瘤C6细胞凋亡的实验研究

目的探讨外源性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）基因对大鼠C6胶质瘤细胞的凋亡作用。方法C6细胞在杜伯改良的Eagle培养基（DMEM）,37℃,5％CO2条件下培养;质粒提取与转染;用HoeChst试剂盒检测C6细胞凋亡。结果转染重组质粒PDC315-TRAIL的C6细胞组凋亡率明显高于未转染的C6细胞组及转染空载体PDC315的C6细胞组（P〈0．05）。结论外源性TRAIL基因可引起C6细胞凋亡。