稳定表达人野生型淀粉样前体蛋白细胞模型的建立与鉴定

目的 建立和鉴定稳定表达人野生型淀粉样前体蛋白(APP)的人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞模型.方法 脂质体转染法将含人野生型APP751 cDNA的真核表达质粒pcDNA3/APP APP751WT转染至SH-SY5Y细胞,G418对转染后细胞进行筛选,获得稳定表达人野生型APP751细胞模型.Western blotting法、MTT比色法和放射免疫法检测细胞APP表达水平、细胞生长情况和细胞内外β-淀粉样蛋白(Aβ)表达水平.结果 转染组细胞APP表达水平明显高于未转染组和空载体组.未转染组和空载体组细胞滞留期为12 h,对数生长期为12 h-4 d;转染组细胞滞留期为24h,对数生长期为1～4d;培养12 h后,转染组细胞活力低于未转染组和空载体组(t=4.363,P=0.0012;t=4.040,P=0.003),培养1 d后,转染组细胞活力降低,且低于未转染组和空载体组(t=4.736,P=0.001;t=4.317,P=0.005),其余各时间点差异均无统计学意义(P>0.05).转染组细胞细胞外Ap表达水平高于未转染组和空载体组(t=7.690,P=0.000;t=7.448,P=0.000),而3组细胞细胞内A8表达水平则差异无统计学意义(P>0.05).结论 成功建立稳定表达人野生型APP751的人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞模型,为进一步研究阿尔茨海默病的发病机制提供了良好的细胞模型.     

SH-SY5Y神经细胞中α7神经型尼古丁受体基因过表达对CaMK Ⅱ和CREB的影响

目的研究SH-SY5Y神经细胞中α7 nAChR基因过表达对CaMKⅡ和CREB的影响。方法复苏稳定转染α7 nAChR-pc DNA3.1质粒及空载质粒的SH-SY5Y神经细胞后,用含G418的培养液进行筛选培养;应用实时荧光定量PCR法和蛋白印迹法(Western blot)检测α7 nAChR基因过表达组、空载质粒组和正常对照组细胞中CaMKⅡ、CREB mRNA及蛋白表达水平的变化。结果与对照组相比,α7 nAChR基因过表达细胞组的CaMKⅡ、CREB mRNA表达水平分别增加了116.8%和114.7%(P0.01);及CaMKⅡ、CREB蛋白表达水平分别增加了8.7%(P0.05)和41.4%(P0.05)。结论α7 nAChR的神经保护作用可能与上调细胞CaMKⅡ、CREB水平有关。     

吉非替尼对表达PTEN的胶质瘤细胞株U87细胞增殖活性的影响

目的探讨表皮生长因子受体抑制剂吉非替尼对表达磷酸酶一张力蛋白同源物（FrEN）的胶质瘤细胞株U87细胞增殖活性的影响。方法将人脑恶性胶质瘤细胞株U87细胞（PTEN缺失）置人DMEM中培养,根据转染质粒不同分为空白组（不转染任何质粒）、空载体组（转染pCDNA3．1载体）和PTEN组（转染pCDNA3．1-PTEN质粒）,采用5-溴脱氧尿嘧啶核苷（Brdu）,碘化丙碇双掺入法分析细胞DNA合成水平,采用流式细胞仪分析细胞周期,采用蛋白免疫印迹法分析蛋白表达。结果与空白组和空载体组相比,PTEN组PTEN蛋白表达水平明显升高,而磷酸化Akt蛋白表达水平明显降低。PTEN组BrdU阳性细胞比例[（13．5±2．7）％]明显低于空白组[（39．5±4．2）％;P〈0．05]和空载体组为[（40．7±5．1）％;P〈0．05]。PTEN组GJG。期细胞比例[（80．2±6．6）％]明显高于空白组[（43．2±5．2）％;P〈0．05]和空载体组[（41．1＋4．7）％;P〈0．05],而s和G2,M期细胞比例[分别为（35．7±3．7）％和（21．1±2．1）％]明显低于空白组[分别为（36．5±4．1）％和（22．4±1．9）％;P〈0．05]和空载体组[分别为（12．7＋2．O）％和（7．1±1．1）％;P〈0．051。结论高表达PTEN蛋白能够增强胶质瘤细胞株U87细胞对吉非替尼的敏感性。     

siRNA沉默CD99基因表达对髓母细胞瘤DAOY细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨siRNA沉默CD99基因表达对髓母细胞瘤细胞系DAOY细胞增殖和凋亡的影响。方法 利用CD99 siRNA转染髓母细胞瘤DAOY细胞,细胞分为沉默1组（转染CD99 siRNA-1#）、沉默2组（转染CD99 siRNA-2#）、对照组（转染siRNA阴性对照）,采用实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测沉默效果。利用CCK-8细胞增殖实验、平板克隆形成实验检测细胞增殖能力,采用流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。结果 沉默1组和沉默2组CD99蛋白和mRNA表达水平均明显低于对照组（P<0.05）,而沉默2组又明显低于沉默1组（P<0.01）;因此,选用CD99 siRNA-2#进行后续实验。沉默CD99基因表达后3、4、5 d,沉默2组细胞增殖水平较对照组明显降低（P<0.05）;平板克隆形成实验结果显示,沉默2组细胞克隆集落数明显减少（P<0.05）。沉默2组G0/G1期细胞百分比较对照组明显增加（P<0.05）,S期细胞、G2/M期细胞百分比明显低于对照组（P<0.05）。沉默2组细胞早期凋亡率（8.75%±1.47%）显著高于对照组（3.42%±1.21%;P<0.05）。结论 CD99基因在髓母细胞瘤DAOY细胞的增殖和凋亡中发挥重要作用,推测CD99基因可能成为治疗髓母细胞瘤的一个新靶点。     

LRIG3基因过表达对人神经母细胞瘤细胞系SK-N-MC细胞生物学行为的影响

目的 探讨富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白3（LRIG3）基因过表达对人神经母细胞瘤细胞系SK-N-MC细胞生物学行为的影响。方法 体外培养人神经母细胞瘤细胞系SK-N-MC细胞，分成空白对照组（A组，不转染任何载体或质粒）、载体组（B组，转染载体）和LRIG3过表达组（C组，转染含LRIG3基因过表达质粒）。 荧光定量PCR和免疫印迹法检测LRIG3、Caspase-3和Caspase-9的mRNA和蛋白表达水平。Transwell试剂盒检测细胞侵袭能力，AV-PI试剂盒检测细胞凋亡水平，CCK-8试剂盒检测细胞增殖能力。结果 C组Caspase-3和Caspase-9的mRNA和蛋白表达水平以及细胞凋亡率明显高于A组和B组（P<0.05），细胞增殖率和细胞侵袭能力明显低于A组和B组（P<0.05），而A组和B组之间均无统计学差异（P>0.05）。结论 LRIG3过表达可以抑制人神经母细胞瘤细胞系SK-N-MC细胞增殖和侵袭，促进其凋亡，其机制可能与促进Caspase-3和Caspase-9表达有关     

SH-SY5Y神经细胞APP高表达对胆碱酯酶活性影响

目的研究类阿尔茨海默病(AD)神经细胞模型中APP异常代谢下胆碱酯酶活性变化,探讨AD的发病机制。方法采用脂质体转染法将含有瑞典家族性AD双突变的淀粉样蛋白前体蛋白APP670/671基因(APPSWE)转染至神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)中;利用实时荧光定量PCR方法和Western blotting的方法测定APPmRNA、可溶性APP(αAPPs)和总APP蛋白表达水平;采用改进的Ellman比色法测定细胞培养基中乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase,AChE)及丁酰胆碱酯酶(Butyrylcholinesterase,BuChE)活性。结果转染APPSWE质粒的SH-SY5Y细胞APP总mRNA和蛋白表达水平显著升高,αAPPs分泌量下降。转染组SH-SY5Y细胞与对照组相比,AChE和BuChE活性都升高。结论体外神经细胞实验证明APP蛋白过度表达能升高AChE和BuChE的活性,其机制可能与APP蛋白代谢紊乱使Aβ升高及下调αAPPs分泌有关。     

外源性TRAIL基因转染对胶质瘤C6细胞凋亡的实验研究

目的探讨外源性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）基因对大鼠C6胶质瘤细胞的凋亡作用。方法C6细胞在杜伯改良的Eagle培养基（DMEM）,37℃,5％CO2条件下培养;质粒提取与转染;用HoeChst试剂盒检测C6细胞凋亡。结果转染重组质粒PDC315-TRAIL的C6细胞组凋亡率明显高于未转染的C6细胞组及转染空载体PDC315的C6细胞组（P〈0．05）。结论外源性TRAIL基因可引起C6细胞凋亡。     

醒脑静对Aβ诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用及机制

目的探讨醒脑静对Aβ25~35诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用及其机制。方法建立Aβ25~35诱导的SH-SY5Y细胞凋亡模型;MTT法检测不同浓度醒脑静对Aβ25~35诱导的SH-SY5Y细胞增殖的影响;Annexin-V/PI流式细胞分析法检测不同浓度醒脑静对Aβ25~35诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的影响;Western blot法检测细胞中线粒体凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax表达水平变化情况。结果 SH-SY5Y细胞经过Aβ25~35造模处理后,细胞形态由梭形变为方形,细胞大小固缩,数量减少,凋亡小体形成,凋亡模型构建成功;醒脑静可以促进Aβ诱导的SH-SY5Y细胞增殖;醒脑静可以抑制Aβ25~35诱导的SH-SY5Y细胞凋亡、下调Bax蛋白表达及上调Bcl-2蛋白表达抑制Aβ25~35诱导的SH-SY5Y细胞凋亡。结论醒脑静对Aβ25~35诱导的SHSY5Y细胞凋亡具有一定的保护作用,其机制可能是通过调节Bcl-2及Bax水平抑制细胞凋亡的发生。     

α3神经型尼古丁受体基因上调对SH-SY5Y细胞突触素水平的影响

目的构建使α3nAChR基因上调的重组质粒α3nAChR-pcDNA3.1并转染至神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y),研究α3nAChR基因上调对细胞突触素(SYP)水平的影响。方法设计α3nAChR上下游引物,通过逆转录PCR的方法获取人α3nAChR特异核苷酸序列,并将其克隆到质粒载体pcDNA3.1上,构建重组质粒α3nAChR-pcDNA3.1;瞬时转染至SH-SY5Y细胞后,用Real-time法和蛋白免疫印迹法分别α3nAChR及蛋白水平,并检测上调细胞中SYPmRNA和蛋白水平的变化。结果成功构建了使α3nAChR基因上调的重组质粒α3nAChRpcDNA3.1;将α3nAChR-pcDNA3.1质粒转染到SH-SY5Y细胞后,与空载质粒组及正常对照组相比,α3nAChRmRNA及蛋白表达水平分别增加了422%和106%(P0.05);SYPmRNA及蛋白表达水平分别增加了115%和43%(P0.05)。结论α3nAChR表达的上调可使细胞SYP的表达增加,说明了α3nAChR与SYP密切相关,在AD的发生中可能起着重要作用。     

糖基化终末产物对人神经母细胞瘤细胞APP表达及Aβ生成的影响

目的通过研究糖基化终末产物（AGEs-BSA）以及阻断其与特异性受体RAGE的结合对培养的人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）淀粉样前体蛋白（amyloid precursor protein,APP）的表达以及β淀粉样蛋白（β-amyloid,Aβ）生成的影响。方法以培养的SH-SY5Y细胞为模型,将细胞随机分为4组,空白对照组、BSA组、AGEs-BSA组、AGEs-BSA＋抗RAGE中和抗体组。用MTT法观察细胞形态以及确定AGEs-BSA的最佳干预时间及浓度。用免疫细胞化学方法及免疫印迹方法来检测各组细胞内APP、RAGE表达和Aβ生成情况。结果不同蛋白浓度的BSA处理细胞24、48、72h,与空白对照组比较细胞MTT代谢率,APP、RAGE及Aβ的表达水平没有明显差异,（P〉0.05）;不同蛋白浓度的AGEs-BSA（〉50μg/ml）处理细胞与BSA组比较,细胞MTT代谢率明显降低,并随蛋白浓度升高差异越明显,APP、RAGE、Aβ的表达水平较BSA组明显增加（P〈0.05）,预先用抗RAGE中和抗体（1∶100）1h后再加入AGEs-BSA,APP、Aβ的表达水平较AGEs-BSA组明显减少（P〈0.05）,但仍高于BSA组（P〈0.05）。结论糖基化终末产物能够促使SH-SY5Y细胞中APP、RAGE、Aβ的表达和生成增加。通过阻断其与特异性受体RAGE的结合可以部分减少APP、Aβ的表达和生成。     

促红细胞生成素对颅脑损伤后大鼠脑组织中XIAP和Smae／DIABLO表达的影响

目的观察重组人促红细胞生成素（r—HuEPO）对颅脑损伤后大鼠脑组织中抗凋亡因子X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）和促凋亡因子第二个线粒体衍生的半胱氨酸蛋白酶激活剂（Smac／DIABLO）表达的影响,并探讨二者在r-HuEPO抗凋亡中的作用。方法采用自由落体法建立大鼠颅脑损伤模型,在伤后不同时间点用末端标记原位细胞凋亡检测法（TUNEL法）检测细胞凋亡,用免疫组织化学法检测XIAP和Smac／DIABLO表达的变化。结果与假手术组相比,颅脑损伤后打击周边区的细胞凋亡数显著增加沪〈0．01）,XIAP和Smac／DIABLO表达水平明显升高（P〈0．05）;与对照组相比,r—HuEPO治疗组XIAP的表达在2—72h时间点明显升高（P〈0．05）,Smac／DIABLO的表达和细胞凋亡数在6h至7d时间点显著下降（尸〈0．05）。结论r—HuEPO可能通过促进XIAP的表达和抑制Smac／DIABLO的表达减少颅脑损伤后的细胞凋亡,发挥脑保护作用。     

预热激对6-OHDA诱导SH-SY5Y细胞神经毒性损伤的保护作用

目的探讨预热激对6-羟多巴胺(6-OHDA)诱导人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)神经毒性损伤的保护作用及其机制。方法对实验组SH-SY5Y细胞进行预热激(42±0.5)℃处理,再通过6-OHDA对其进行神经毒性诱导,未行预热激处理细胞作为对照组。逆转录酶-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测不同热激时间(15 min、30 min、60 min)SH-SY5Y细胞内葡萄糖调节蛋白(GRP78、GRP94)的表达水平;显微镜下观察细胞形态学变化,并用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测SH-SY5Y细胞活性情况。结果 6-OHDA对SH-SY5Y细胞的神经毒性损伤呈剂量依赖性及时间依赖性关系,实验组SH-SY5Y细胞较对照组所受的神经毒性损伤轻(P<0.05),且实验组间差异也具有统计学意义(P<0.05);SH-SY5Y细胞中GRP78和GRP94 mRNA表达水平与热应激时间正相关(P<0.05)。结论预热激可降低6-OHDA诱导SH-SY5Y细胞的神经毒性损伤作用,且热激过程中SH-SY5Y细胞中GRP78和GRP94表达上调。     

胶质瘤U87细胞中AKT2基因表达对化疗药物替尼泊苷敏感性的影响

目的探讨脑胶质瘤U87细胞中AKT2基因表达对替尼泊苷（VM-26）敏感性的影响。方法体外将慢病毒介导的AKT2-shRNA表达载体转染胶质瘤U87细胞,作为实验组;转染GFP—shRNA的U87细胞作为阴性对照组,未转染的U87细胞作为空白对照组。应用RT—PCR、Westernblot检测3组U87细胞中AKT2mRNA和蛋白的表达变化。应用MTT法检测3组U87细胞对VM-26敏感性的变化。结果与阴性对照组和空白对照组比较,实验组转染后的U87细胞AKT2mRNA和蛋白的表达水平明显下降（P〈0．01）。实验组VM-26对U87细胞的半数抑制量（IC50）为（6．46±0．42）μg／ml,阴性对照组为（1．16±0．25）μg／ml,空白对照组为（1．15±0．22）μg／ml,实验组与两对照组间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论AKT2-shRNA抑制AKT2基因表达,能增加人脑胶质瘤U87细胞株对化疗药物VM-26的敏感性。     

丁基苯酞对帕金森病细胞模型保护作用的初步研究

目的探讨丁基苯酞(dl-3-n-Butylphthalide,NBP)对鱼藤酮诱导的帕金森病细胞模型的保护作用及其机制。方法分别使用终浓度为0.1、1、10、100μM NBP和溶剂二甲基亚砜(DMSO)预处理SH-SY5Y细胞24h后,加入终浓度为200nM的鱼藤酮处理24h建立多巴胺能细胞损伤模型,观察各组细胞形态,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡率(Annexin V-FITC/PI)、线粒体膜电位(JC-1)、细胞内活性氧水平(DCFH-DA)。结果200nmol/L鱼藤酮处理SH-SY5Y细胞24h能够诱导细胞活性下降和细胞凋亡,NBP预处理后SH-SY5Y细胞存活率明显升高,细胞凋亡率降低,线粒体膜电位显著升高(P0.05),细胞内活性氧水平显著降低(P0.05),且随NBP浓度的增加对SH-SY5Y细胞的保护作用增强。结论NBP对鱼藤酮诱导的SH-SY5Y细胞损伤具有良好的保护作用,线粒体保护可能是其作用机制之一。     

自由基清除剂联合钙离子拮抗剂对脑缺血神经元凋亡的影响

【摘要】 目的 观察自由基清除剂联合钙离子拮抗剂对大鼠脑缺血半暗带神经元凋亡及B细胞淋巴瘤/白血病-2（B cell lymphoma/leukemia-2,Bcl-2）和Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X protein,Bax）表达的影响。 方法 线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,随机分为假手术组、对照组和干预组,干预组又分为自由基组、钙离子组及联合干预组。对照组及各干预组根据缺血再灌注时间分为再灌注6 h、24 h、48 h、72 h及5 d组,每组各16只大鼠。对照组大鼠每日腹腔注射3 mg/kg生理盐水及灌胃给服12 mg/kg淀粉,自由基组大鼠每日腹腔注射3 mg/kg依达拉奉,钙离子组大鼠每日灌胃给服12 mg/kg尼莫地平,联合干预组大鼠每日腹腔注射3 mg/kg依达拉奉及灌胃给服12 mg/kg尼莫地平。观察各组大鼠缺血侧脑梗死面积、缺血半暗带Bcl-2、Bax蛋白表达及神经元凋亡的变化。 结果 缺血再灌注后6 h,各干预组与对照组比较,大鼠缺血侧脑梗死面积、脑缺血半暗带神经元凋亡及凋亡相关Bcl-2、Bax蛋白表达差异无显著性（P均>0.05）;缺血再灌注后48 h、72 h和5 d,与同时间段对照组比较,各干预组大鼠脑缺血半暗带区Bcl-2蛋白表达增强,Bax蛋白表达降低,凋亡神经元数减少,梗死区面积缩小,差异有显著性（P均＜0.05）;与自由基组及钙离子组比较,联合干预组大鼠上述指标改变更显著,差异有显著性（P均＜0.001）;自由基组与钙离子组组间比较,上述各指标差异无显著性（P均>0.05）。 结论 在脑缺血再灌注损伤中,联合应用自由基清除剂和钙离子拮抗剂对缺血半暗带神经元具有较好的协同保护作用。     

脑脉泰对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡和Akt，bcl-2，Bax和caspase3表达的影响

目的研究脑脉泰对大鼠脑缺血再灌注损伤神经细胞凋亡和Akt、bcl-2、Bax、caspase3表达的影响。方法采用大鼠大脑中动脉栓塞再灌注动物模型,将雄性SD大鼠随机分为假手术组（sham）、脑缺血再灌注模型组（MCAO）、脑脉泰大剂量组（MCAO＋脑脉泰2．24g／kg）、脑脉泰中剂量组（MCAO＋脑脉泰1．12g／kg）、脑脉泰小剂量组（MCAO＋脑脉泰0．56g／kg）,每组10只大鼠。脑脉泰组在MCAO前5天开始灌胃给药,连续5d。用TUNEL法和免疫组化染色法分别检测缺血半暗带凋亡细胞和Akt、bcl-2、Bax和caspase3表达。结果脑脉泰大剂量组和中剂量组大鼠脑缺血半暗带的凋亡细胞显著减少（P〈0．01）,Akt、bcl-2表达显著增加,caspase3和Bax表达减少,与MCAO模型组比较,有显著性差异（分别为P〈0．05和P〈0．01）。结论脑脉泰对脑缺血／再灌注损伤有保护作用,其保护作用与促进Akt和bcl-2的表达,抑制Bax和caspasse3的表达有关。     

大鼠脑缺血区皮层的Smac／Diablo变化

目的观察大鼠缺血区皮层Smac／Diablo的动态变化，并探讨其在缺血后神经元凋亡过程中的可能作用。方法采用RT-PCR，Westernblot方法分别测定大鼠脑缺血后不同时间点在缺血区皮层Smac／DiablomRNA和蛋白水平的表达水平。结果Smac／Diablo基因转录水平和蛋白表达的改变呈时间依赖性；RT-PCR显示模型组大鼠在脑缺血3h就有明显的Smac／DiablomRNA表达上调，6h达高峰，持续至24h后逐渐下降，48h时恢复至缺血前水平；western blot显示在脑缺血后3h有Smac／Diablo蛋白表达的增加，6h时Smac／Diablo蛋白表达至高峰（P〈0．01），48h基本恢复到缺血前水平。结论Smac／Diablo在脑缺血损伤后的病理生理过程中具有重要作用。     

靶向人NHE-1RNAi腺病毒表达载体的构建及细胞内酸化模型的建立

目的构建靶向人钠氢交换蛋白-1（NHE-1）RNA干扰（RNAi）腺病毒表达载体,感染SH．SY5Y细胞,建立细胞内酸化模型,为进-步研究细胞内pH值变化与散发性阿尔茨海默病间的关系奠定基础。方法利用基因重组技术构建4个含NHE-1前体微小RNA（miRNA）的重组干扰质粒pcDNATM6．2．GW／miR和阴性对照质粒pcDNATM6．2．GW／neg-miR,实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测NHE-1mRNA表达变化,筛选最佳干扰靶序列;BP和LR重组系统获得腺病毒干扰质粒pAd-miR—NHE-1,经包装、纯化后检测腺病毒滴度;感染复数（MOI）值梯度试验确定靶向人NHE-1RNAi腺病毒感染SH—SY5Y细胞最佳MOI值,以最佳条件感染SH．SY5Y细胞,荧光探针法检测不同处理组细胞内DH值。结果聚合酶链反应（PCR）提示最佳靶向人NHE-1RNAi病毒表达载体构建成功,且能有效抑制NHE-1mRNA表达;靶向人NHE．1RNAi腺病毒感染SH．SY5Y细胞最佳MOI值为160。当最佳MOI值为160时,NHE-1miRNA腺病毒感染24、48和72h后SH—SY5Y细胞内pH值分别为5．97±0．03、5．98±0．02和5．98±0．02;空载体对照组为6．05±0．04、6．0d±0．07和6．03±0．05;空白对照组为6．03±0．06、6．05±0．0d和6．034-0．04。不同测量时间点,SH—SY5Y细胞内DH值均显著低于空载体对照组和空白对照组,差异具有统计学意义（24h：P=0．002,0．015;48h：P=0．030,0．012;72h：P=0．018,0．010）;但感染RNAi腺病毒后不同测量时间点（24、48和72h）SH—SY5Y细胞内DH值差异无统计学意义（P=0．762）。结论最佳靶向人NHE-1RNAi腺病毒表达载体及细胞内酸化模型的成功建立,可为探索细胞内酸碱平衡与β-淀粉样蛋白产生之间的关系提供-种有效工具。     

实验性变态反应性脑脊髓炎大鼠穹窿下器凋亡细胞的观察

目的通过观察实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)大鼠不同时期下穹窿下器(SFO)凋亡细胞的变化,进一步探讨该室周器官在EAE发病过程中的意义。方法建立大鼠EAE模型,利用TUNEL技术来观察大鼠SFO在EAE不同时期细胞凋亡的改变。结果SFO的凋亡细胞在EAE 6小时、EAE 7天、EAE 14天、EAE 21天分别为(13.67±2.31)、(19.33±2.08)、(24.67±6.79)、(9.33±1.76),而对照组为(5.33±2.52)。与对照组比较,EAE 6小时、7天、14天组细胞凋亡数明显增加(P<0.05),EAE 21天组无显著差异(P>0.05)。结论SFO在EAE的不同时期凋亡细胞的变化与临床进展呈一致性,可能是血携免疫分子早期入脑的位点。     

异柠檬酸脱氢酶1基因突变增加胶质瘤细胞对替莫唑胺的敏感性

目的探讨胶质瘤细胞异柠檬酸脱氢酶1（IDHl）基因突变对替莫唑胺（TMZ）细胞毒性的影响。方法将培养的U87胶质瘤细胞分组转染含空载体（空载体组）、野生型IDHl基因（野生组）和R132H突变型IDHl基因（突变组;IDHl第132位的精氨酸被组氨酸所取代）质粒,利用液相色谱串联质谱法检测细胞上清液中2-羟基戊二酸（2-HG）水平、噻唑蓝法检测细胞增殖活性、实时荧光定量PCR法和免疫印迹法检测细胞caspase3mRNA和蛋白质表达;将含三种不同质粒的U87细胞接种大鼠建立荷瘤大鼠模型并观察大鼠经TMZ治疗后60d存活率。结果与空载体组和野生组比较,突变组细胞上清液中2-HG水平、细胞caspase3mRNA和蛋白质表达水平均显著升高（P〈0．05）,而细胞增殖活性显著下降（P〈0．05）;TMZ治疗后60d,突变组大鼠存活率显著升高（P〈O．05）;空载体组和野生组之间均无统计学差异（P〈0．05）。结论IDHlR132H基因能够增加TMZ对神经胶质瘤细胞的细胞毒性作用并提高其治疗荷瘤大鼠的存活率。