锂-匹罗卡品致痫大鼠脑组织中驱动蛋白家族成员17的表达情况

目的 观察驱动蛋白家族成员17 (KIF17)在锂-匹罗卡品致痫大鼠海马和颞叶皮质表达的变化,探讨其在癫痫发生、发展中的作用.方法 采用氯化锂-匹罗卡品诱导癫痫大鼠模型,将49只雄性正常Wistar大鼠采用随机数字表法分成实验组(n=42)和对照组(n=7),实验组又分为6个亚组(n=7):包括癫痫后24h、72 h、7d、14 d、1个月、2个月组.运用蛋白质印迹法检测KIF17在致痫大鼠海马和颞叶皮质的表达变化,免疫荧光双标染色法确定KIF17的表达部位.结果 大鼠海马KIF17蛋白表达在癫痫持续状态(SE)后开始增高[积分吸光度(L4)比值:24 h 0.516±0.196、72 h0.742±0.313],在癫痫后7d时达到高峰(0.888±0.319),之后逐渐降低(14 d 0.770±0.271、1个月0.742±0.261、2个月0.714±0.271),但均显著高于对照组(0.495±0.203),差异均有统计学意义(t=7.051、4.974、7.419、8.795、8.264、6.676,均P＜0.05).大鼠颞叶皮质KIF17蛋白的表达在SE后24h时开始持续增高,并在30 d时达到高峰,且IA比值均明显高于对照组.免疫荧光双标染色法显示KIF17蛋白主要存在于神经元,包括兴奋性神经元和抑制性神经元,而在星形胶质细胞中不表达.结论 KIF17在锂-匹罗卡品致癫痫模型的发生发展过程中可能起着重要的作用.     

人参皂甙Rd对颞叶癫大鼠学习记忆能力及海马5-HT表达的影响

目的研究人参皂甙Rd对氯化锂-匹罗卡品点燃颞叶癫(temporal lobe epilepsy,TLE)大鼠学习记忆能力及海马5-HT表达的干预作用。方法建立氯化锂-匹罗卡品点燃颞叶癫大鼠模型,将30只造模成功的颞叶癫大鼠随机分为TLE组(生理盐水10ml/kg腹腔注射,15只)及GSRd干预组(人参皂甙Rd2mg/kg腹腔注射,15只),另选15只大鼠作为正常对照组;采用Morris水迷宫及免疫组化染色分别检测各组大鼠学习记忆能力及海马5-HT表达水平。结果与正常对照组比较,TLE组大鼠学习记忆能力下降,海马5-HT表达明显减少(P0.05);与TLE组比较,GSRd干预组可显著提高大鼠学习记忆能力及海马5-HT的表达水平(P0.05)。结论人参皂甙Rd可能通过增加海马5-HT的表达来提高颞叶癫大鼠学习记忆能力。     

粒细胞集落刺激因子对癫痫模型小鼠神经元及神经炎症的影响

目的探讨粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony-stimulating factor,G-CSF)在癫痫小鼠海马中的表达及其对神经元和神经炎症的影响。方法匹罗卡品诱导小鼠TLE模型。小鼠分成对照组(n=8),匹罗卡品组(P组,n=8),经粒细胞集落刺激因子干预的匹罗卡品组(P+G组, n=9)。采用免疫荧光法观察G-CSF在脑组织中的表达;Western Blot检测GFAP、IL-1β、IL-6、G-CSF的表达;尼氏染色观察神经元的变化。结果 G-CSF在星形胶质细胞中表达;Western Blot检测发现P组G-CSF的表达高于对照组,低于P+G组;P+G组GFAP、IL-1β、IL-6较P组明显减少;尼氏染色示:P组与对照组比较神经元明显减少;P+G组神经元较P组增多,且形态较P组规则。结论小鼠癫痫后海马中G-CSF表达升高,注射G-CSF可能能够抑制癫痫小鼠海马中星形胶质细胞的异常增生,改善神经元形态和数量,减少神经炎症反应,刺激海马区分泌G-CSF。     

颞叶癫痫大鼠海马TrkB mRNA及其蛋白表达的动态变化

目的 探讨颞叶癫痫发作大鼠海马TrkB mRNA及其蛋白表达的动态变化特征。方法 建立匹罗卡品(PILO)颞叶癫痢大鼠模型,应用原位杂交及免疫组织化学方法分别检测致(?)大鼠海马齿状回、CA3区及CA1区TrkB nRNA及其蛋白质表达的变化。结果 PILO致(?)后3～6 h,海马齿状回颗粒细胞层、CA1、CA3区锥体细胞层TrkB mRNA表达显著增高(P<0.01),稍后TrkB蛋白表达也随之增高。第7-30 d,TrkB mRNA及其蛋白在齿状回、CA3区呈现第二次表达增强。结论在癫(?)发作早期,TrkB表达增强,提示其可能参与急性癫痫状态的发生;后期表达增强则可能参与了海马的可塑性反应而与慢性自发性发作形成有关。     

AG490对氯化锂-匹罗卡品致癫癎大鼠星形胶质细胞活化及癫癎的影响

目的 探讨匹罗卡品致癫癎大鼠海马肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达、星形胶质细胞活化及JAK/STAT信号转导通路在颞叶癫癎发作中的作用.方法 应用腹腔注射氯化锂-匹罗卡品(PILO)的方法建立颞叶癫痫 间模型,应用JAK/STAT信号转导通路特异性抑制剂AG490进行腹腔注射建立干预模型组;用Western blotting方法测定大鼠海马匀浆后TNF-α表达水平的变化,用免疫荧光观察AG-490阻滞JAK/STAT通路后对大鼠海马TNF-α表达水平与星形胶质细胞活化及癫痫 间发作的影响.结果 (1)PILO致癫痫 间模型组有80.00%(32/40)的大鼠达Racine分级Ⅳ级以上发作;10.00%(4/40)的雄性大鼠死亡;10.00%(4/40)的雄性大鼠未达Racine分级Ⅳ级发作,模型成功率为80.00%;1月后有自发发作者8只(25.00% 8/32).AG490干预组雄性大鼠Ⅳ级以上发作的发生率为75.00%(30/40);病死率为7.50%(3/40);17.50%(7/40)的雄性大鼠未达Ⅳ 级发作,模型成功率为75%;1月后有自发发作者1只(3.3% 1/30),AG490组Ⅳ级及以上发作及自发发作数与PILO致癫痫 间模型组比较,有显著性差异(P<0.05);(2)PILO致癫癎模型组TNF-α表达水平较对照组开始增高,AG490干预组TNF-α表达水平均较 PILO致癫癎模型组明显降低(P<0.05);(3)PILO癫痫 间模型组可见阳性颗粒在星形胶质细胞内的空间分布,AG490腹腔注射建立干预后阳性颗粒的星形胶质细胞明显减少(P<0.05).结论 癫痫 间发作后TNF-α表达水平明显增高,提示星形胶质细胞增生.AG490可阻断JAK/STAT信号转导通路进而抑制星形胶质细胞活化,同时也可以影响癫痫 间大鼠的行为学变化,提示AG490对癫癎的发作可能有一定的抑制作用,其机制可能与其抑制星形胶质细胞增生有关.     

TLR9、MyD88在颞叶癫痫大鼠海马组织中表达的动态变化

目的观察氯化锂-匹罗卡品致痫大鼠各期海马中Toll-样受体9(TLR9)、髓样分化因子(MyD88)表达的变化,探讨其是否与颞叶癫痫发生有关。方法 SD雄性大鼠120只,随机分为对照组(30只)和模型组(90只),腹腔注射氯化锂。18 h~20 h后模型组腹腔注射匹罗卡品诱导癫痫持续状态(SE);对照组予等量生理盐水取代匹罗卡品腹腔注射。对照组和造模成功的模型组依据腹腔注射后时间随机分为10个亚组:急性模型组(SE后3 h、6 h、9 h、12 h、1 d、3 d、7 d);潜伏模型组(SE后14 d、28 d);慢自发发作组(SE后56 d)。每亚组动物模型组9只,对照组3只。免疫组化、蛋白印迹、RT-PCR技术测定各亚组癫痫大鼠海马内TLR9、MyD88的表达。结果TLR9、MyD88在模型组海马内表达明显增多,与对照组相比,差异有显著性(P0.05)。模型亚组内,TLR9、MyD88在急性期和慢性期表达明显增高,而潜伏期无明显表达变化。其中急性期内的增高多集中在癫痫发作后6 h;3组比较差异有显著性(P0.05)。结论大鼠海马内TLR9、MyD88表达增多可能与颞叶癫痫发病有关,探讨其机制可能为颞叶癫痫的治疗提供新的靶点。     

Nectin-1在锂-匹罗卡品癫痫大鼠海马中的表达

目的为探讨Nectin-1在癫痫形成中的作用,我们采用经典的氯化锂-匹罗卡品大鼠癫痫模型,在点燃持续状态后不同时间点观察Nectin-1蛋白在大鼠脑海马的表达变化规律。方法①选用正常成年雄性SD大鼠,随机分为正常对照组(n=10)与模型组(n=50),模型组采用氯化锂-匹罗卡品腹腔注射法,对照组用等量生理盐水腹腔注射。成功点燃后存活的大鼠以(3 d、1周、2周、4周、6周)为研究时间点随机分为5个亚组,每组10只。②用Western-blot、免疫组化等经典方法观察Nectin-1蛋白在癫痫大鼠模型中的表达变化及规律。结果实验组大鼠腹腔注射匹罗卡品后,经过急性发作期及潜伏期、慢性期,出现癫痫反复的自发性发作,对照组未见急性及慢性发作。免疫组化染色对照组Nectin-1蛋白主要在胞膜及胞浆表达,在海马CA3区深染区域集中于透明层(SL)。癫痫组2周、4周时Nectin-1在齿状回有较多的阳性细胞,主要表现为胞浆和核膜棕色,并向内分子层分布。Western-blot与对照组相比,在匹罗卡品诱导的SE之后2周表达升高,一直持续到慢性期4周、6周。结论Nectin-1蛋白在癫痫大鼠模型SE后慢性期海马组织中表达较正常增高,可能与癫痫的形成机制有关。     

TRPC6在匹罗卡品致痫大鼠海马苔藓纤维出芽中的作用

目的 观察传统型瞬时受体电位通道6(TRPC6)蛋白在匹罗卡品致痫大鼠海马中的表达变化,探讨其在海马苔藓纤维出芽中的作用.方法 72只SD大鼠随机分为实验组(n=60)和对照组(n=12).实验组采用氯化锂-匹罗卡品腹腔注射法建立颞叶癫痫模型;对照组腹腔注射等量无菌生理盐水.实验组按癫痫持续状态(SE)后1d、7d、15d、30 d和60 d分为5个亚组,每亚组12只大鼠.以上各亚组及对照组再分为2个小组,分别进行Western blot检测TRPC6及突触重建标志蛋白Synaptophysin在海马中的表达和Timm染色观察海马苔藓纤维出芽并评分.结果 实验组TRPC6蛋白表达量在SE后1d达高峰(P＜0.01),其他时间点均显著高于对照组(P＜0.01).Synaptophysin蛋白表达量在SE后7d、15d、30 d和60 d显著增加(7 d:P＜0.05;15 d、30 d、60 d:P＜0.01),30 d达峰值(P＜0.01).实验组大鼠齿状回内分子层在SE后7d出现Timm颗粒,并呈进行性增加.结论 TRPC6可能参与了苔藓纤维出芽这一过程.     

大鼠颞叶癫痫点燃后海马zif268mRNA及其蛋白的时空表达变化

目的 探讨海马zif268mRNA及其蛋白的时空表达变化与颞叶癫痫脑损伤的关系. 方法 将雄性Wistar大鼠随机分为3组:其中正常组6只,假手术对照组(Sham组)和海人酸(KA)颞叶癫痫点燃组(TLE组)各36只,后两组按点燃后6h、24h、3d、7d、14d、21d时间点各分为6小组,每小组6只.采用KA杏仁核点燃建立经典颞叶癫痫模型,应用原位杂交和免疫组织化学方法分别检测海马神经元zif268mRNA及其蛋白的表达.结果 TLE组zif268mRNA表达在总体上和点燃后远期21d海马CA1、CA3区和齿状同(DG)均高于Sham组(P＜0.05).TLE组Zif268蛋白表达在总体上和远期21d海马DG表达低于Sham组(P＜0.05).回归分析提示颞叶癫痫与海马zif268mRNA表达呈正相关(β=0.286,P＜0.001),与Zif268蛋白表达呈负相关(β=-0.153,P＜0.001).结论 颞叶癫痫大鼠海马zif268mRNA及其蛋白的时空表达变化可能参与颞叶癫痫发病及其脑损伤过程.     

颞叶癫痫大鼠海马XIAP相关因子-1蛋白表达变化研究

目的动态观察颞叶癫痫大鼠海马神经元XIAP相关因子-1(XAF1)的表达变化,探讨其在癫痫发生发展中的作用。方法清洁级SD雄性成年大鼠36只,随机分为正常对照组、致痫(SE)后3h、6h、12h、24h、72h组。用氯化锂(LiCl)和匹罗卡品(PILO)制备癫痫动物模型,应用免疫组化染色技术检测致痫后各时间点XAF1蛋白表达情况。结果对照组海马CA1、CA3区神经元XAF1蛋白表达极少,SE组CA1、CA3区XAF1蛋白表达在3～24h表达逐渐增高,72h表达有所下降,但仍高于对照组,各时间点两组间差异均有统计学意义(P0.01)。结论SE大鼠海马神经元XAF1表达增高,它可能参与了SE后脑神经元凋亡的调控。     

经皮三叉神经慢性电刺激对癫痫大鼠的癫痫行为和海马炎性反应抑制作用

目的观察经皮三叉神经电刺激(TNS)处理对匹罗卡品诱发的癫痫大鼠的行为、海马区细胞因子IL-1β和TNF-α及小胶质细胞活化的影响,探讨经皮三叉神经电刺激对实验性癫痫的治疗作用及其可能炎性机制。方法选择健康雄性大鼠,设正常对照组和实验组,实验组建立匹罗卡品癫痫持续状态模型6 h后,再分成单纯匹罗卡品模型组(pilo组)和经皮三叉神经电刺激组(TNS组),分别给予假刺激和电刺激4 w后,再次进行匹罗卡品致痫,观察大鼠癫痫行为,用酶联免疫吸附(Elisa)的方法检测大鼠海马组织IL-1β、TNF-α的蛋白含量,免疫组化的方法观察小胶质细胞活化情况。结果 (1)经皮三叉神经电刺激后再次匹罗卡品致痫TNS组大鼠较pilo组发作严重程度减轻,持续时间较短,死亡率降低(P<0.05,P<0.01);(2)TNS组大鼠海马IL-1β和TNF-α含量较pilo组显著降低(P<0.05);(3)TNS组活性小胶质细胞的数量较pilo组在各时间点均明显减少(P<0.05)。结论在实验性癫痫中,经皮三叉神经电刺激有显著的抗癫痫作用,提高了癫痫发作的阈值,其机制可能与其下调炎性因子IL-1β和TNF-α及减轻小胶质细胞的活化有关。     

免疫组化、Western blot蛋白印迹和免疫荧光染色观察磷酸鞘氨醇受体2大鼠海马中的表达变化

目的观察磷酸鞘氨醇受体2(S1PR2)基因在颞叶癫痫大鼠海马中的表达变化。方法将72只健康雄性Wistar大鼠随机均分为实验组(36例)和对照组(36例)。实验组使用氯化锂—匹罗卡品进行颞叶癫痫诱导制模,成功后持续大发作1h终止待检,对照组以相同剂量生理盐水注射,然后以进行免疫组化、Western blot印迹和免疫荧光染色检测并进行统计学分析。结果免疫组化检测结果显示,两组1d、3d、7d、28d、56d海马S1PR2阳性细胞计数相比有统计学意义(P<0.05);Western blot检测结果显示,两组3d、7d、28d、56d海马S1PR2蛋白表达水平相比有统计学意义(P<0.05);免疫荧光染色检测显示,S1PR2蛋白表达阳性为红色,星形胶质细胞为绿色,细胞核为蓝色。结论颞叶癫痫大鼠海马中S1PR2表达水平显著下降,说明颞叶癫痫发病机制可能与神经元功能、星形胶质细胞增生受到S1PR2影响有关。     

褪黑素对癫痫大鼠海马GABA、GABAARα5表达的影响

目的 探讨褪黑素(Mel)抗癫痫作用的机制.方法 采用匹罗卡品(PILO)诱导大鼠癫痫持续状态(SE)模型,用免疫组化技术检测大鼠SE后4个时相点即6 h、48 h、72 h和7 d海马γ-氨基丁酸(GABA)和GABAA受体α5(GABAARα5)亚单位表达的动态变化,以及Mel对其变化的影响.结果 PILO组大鼠SE后6h,海马内GABA能神经元和GABAARα5亚单位表达均开始减少,尤其以SE后72 h～7 d改变最为明显,与对照组比较差异有极显著意义(P＜0.01);而Mel组大鼠在SE后72 h～7 d,海马各区的GABA能神经元和GABAARα5亚单位表达均显著高于PILO组大鼠(P＜0.05).结论 Mel可能通过上调GABA和GABAARα5亚单位的表达来发挥抗癫痫作用.     

PTPRT在难治性癫痫患者及匹罗卡品致痫大鼠脑组织中的表达

目的 研究难治性癫痫患者及皮罗卡品致痫大鼠脑组织中PTPRT的表达,以探讨难治性癫痫可能的发病机制.方法 用免疫组织化学、免疫荧光、Western blot法检测PTPRT在难治性癫痫患者及癫痫发作后6h及1、7、14、30、60 d的匹罗卡品致痫大鼠脑组织中的表达,并分别与无癫痫发作的人以及大鼠的脑组织比较.结果 在人颞叶皮质中,PTPRT主要在对照组和病例组的神经元有表达,PTPRT在难治性癫痫患者(0.277 ±0.048)脑组织中比对照组(0.171±0.025)显著升高(t=9.586,P＜0.05).在大鼠颞叶脑组织中,对照组和实验组的PTPRT主要在神经元中表达.PTPRT在实验组颞叶中的表达与对照组相比,在癫痫发作后24 h内不断升高,7d和14 d后表达水平则下降,30 d和60 d后表达又升高(A比值:对照组0.443±0.039,6 h 0.840±0.032,24 h 1.113 ±0.064,7d 0.564±0.039,14 d 0.570±0.029,30 d 0.899±0.034,60 d 1.011±0.074,F=256.427,P＜0.05).结论 通过对PTPRT在癫痫动物模型和癫痫患者颞叶脑组织表达规律的研究,结合PTPRT的功能我们推测PTPRT可能通过突触重构以及苔藓纤维出芽参与了神经网络的重构,从而导致了难治性癫痫的发生.     

不同化学致癇剂对大鼠癫癇发作和神经元凋亡的影响

目的观察几种不同癫癇持续状态模型发作的特点和海马区的组织病理学改变.方法采用匹罗卡品、锂-匹罗卡品和戊四氮腹腔注射制成大鼠癫持续状态模型,以TUNEL方法标记DNA片段,原位检测海马CA1和CA3区的凋亡神经细胞.结果海马CA1和CA3区神经细胞凋亡数,PILO组多于Li-PILO组和PTZ组,差异有显著性(P《0.05).结论匹罗卡品、锂-匹罗卡品和戊四氮均可诱发大鼠癫持续状态,并导致海马神经元损伤.     

普瑞巴林对慢性颞叶癫癎大鼠海马凋亡调控基因的影响

目的通过观察普瑞巴林对匹罗卡品慢性癫癎大鼠海马区Bcl-2和Bax表达的影响,探讨普瑞巴林治疗癫癎的药理学机制及对大鼠海马神经元的抗凋亡作用。方法采用氯化锂-匹罗卡品化学诱导方法建立慢性颞叶癫癎模型。经腹腔注射普瑞巴林40mg(/kg·d)连续治疗3周,免疫组织化学染色和Western blotting法检测不同处理组大鼠海马区Bcl-2和Bax表达变化。结果与生理盐水对照组比较,模型组大鼠海马区Bcl-2和Bax表达水平显著升高(均P=0.000);与模型组比较,普瑞巴林治疗组大鼠海马区Bcl-2表达水平升高、Bax表达水平降低,组间差异具有统计学意义(均P=0.000)。结论新型抗癫癎药物普瑞巴林可通过降低慢性颞叶癫癎大鼠海马区Bax表达、上调Bcl-2表达而抑制细胞凋亡,发挥神经元保护作用。     

匹罗卡品癫痫大鼠海马TrkB受体表达与苔藓纤维突触重建的关系

目的 探讨匹罗卡品诱导慢性癫痫大鼠海马齿状颗粒细胞苔藓纤维突触重建与神经营养素受体TrkB表达的关系。方法 取匹罗卡品诱导大鼠急性癫痫持续状态及慢性自发性颞叶癫痫发作期大鼠脑片，用免疫组织化学方法检测TrkB及突触体素(P38，一种突触形成标志物)在大鼠海马的表达。结果 急性癫痫持续状态诱导颗粒细胞表达TrkB一过性增高，第2次表达高峰呈现在7～30d；P38免疫反应性在齿状回内分子层则呈进行性增加，与neo-Timm显示的异常苔藓纤维出芽相一致。结论 TrkB受体激活有助于海马齿状回苔藓纤维轴突生长及突触形成从而有利于颞叶癫痫的发生。     

癫痫大鼠海马中神经肽Y表达的动态观察及其作用探讨

目的　探讨癫痫大鼠海马中神经肽 Y( NPY)表达的动态变化及其作用 ,以及外源性 NPY对癫痫的影响。方法　将 SD大鼠随机分为 4组 ,采用匹鲁卡品 ( PILO)癫痫动物模型及外源性 NPY侧脑室注入干预法 ,并以免疫组织化学染色观察 NPY的表达。结果　癫痫模型组 PILO注射后 ,门区、CA3区、CA1 区的 NPY阳性细胞数表达增多 ,1 2 h达高峰 ,以后逐渐下降 ,60 d又达一高峰 ;海马颗粒细胞层有 NPY异位表达 ,3 d时最明显 ;NPY干预组门区 NPY阳性细胞数较其对照组表达少。结论　 ( 1 )癫痫发作后急性期海马 NPY表达增多及颗粒细胞层出现异位表达 ,与癫痫发作有关 ;( 2 )外源性 NPY有抗癫痫作用。     

颞叶癫痫大鼠海马区NR2B／PSD-95的动态表达变化

目的:观察N-甲基-D-天冬氨酸受体2亚基B(NR2B)和突触后致密物95(PSD-95)蛋白在锂-匹罗卡品致大鼠海马表达的动态变化,探讨其在颞叶癫癎发生、发展中的作用。方法:采用锂-匹罗卡品颞叶癫癎大鼠模型,用免疫组织化学法观察不同时间点大鼠海马CA1、CA3、DG区NR2B和PSD-95蛋白表达。结果:NR2B和PSD-95蛋白在大鼠海马分布广泛,表达丰富;大鼠腹腔注射锂-匹罗卡品后,NR2B和PSD-95蛋白在海马各区表达逐渐减少,24h降至低谷,与对照组比较差异有显著意义(P<0.01);此后逐渐回升,但仍低于对照组;30d在海马CA1、CA3区表达再次降低,与对照组比较有显著意义(P<0.05)。结论:NR2B和PSD-95蛋白表达下调可能分别参与颞叶癫癎急性期和慢性自发发作期的保护性机制。     

IL-1β通过NF-κB促进大鼠内侧颞叶癫痫慢性进展

目的探讨白介素1-beta(IL-1β)在大鼠内侧颞叶癫痫(MTLE)模型病情进展中的作用,并探讨其与核因子-κB(NF-κB)的作用关系。方法利用匹罗卡品诱导SD鼠发作癫痫制成MTLE模型,并于制模成功后0.5h侧脑室注射IL-1β,于慢性期(8w),利用行为学观察、脑电图检测观察模型鼠自发癫痫的情况,利用Nissl染色和Timm染色观察模型鼠海马神经元脱失和苔藓纤维增生情况;利用凝胶迁移电泳(EMSA)和免疫组化(IHC)观察海马内NF-κB和NF-κB p65的表达。结果 IL-1β可以提高匹罗卡品诱导的MTLE模型鼠慢性期自发癫痫的发生率,且加重海马内神经元脱失和苔藓样纤维增生,并且NF-κB表达增加,与对照组和单纯匹罗卡品诱导组比较均有统计学差异(P<0.05)。结论 IL-1β通过NF-κB促进匹罗卡品诱导的MTLE模型鼠癫痫慢性自发发作,是导致MTLE进展的机制之一。