大鼠急性脊髓损伤HCY的表达及临床意义

目的:探讨大鼠急性脊髓损伤(SCI)血清和脊髓组织中同型半胱氨酸(HCY)含量的动态变化及临床意义.方法:健康Wistar大鼠84只,雌雄不限随机分成7组,其中6组制作成急性脊髓损伤模型,另1组作为对照组.分别于伤后0h、6h、12h、24h、48h、72h采集大鼠的心脏血和以撞击点为中心的脊髓组织.采用酶联免疫法测定...     

a-突触核蛋白在急性脊髓损伤大鼠早期的表达

目的:于不同时间点对a-突触核蛋白在急性脊髓损伤大鼠早期表达情况进行检测,探讨其对脊髓组织损伤和再生的影响.方法:Wistar大鼠48只,按随机分组法分为6组,取5组制作急性脊髓损伤模型,另一组为对照组.于伤后0h、6h、1d、3d、7d,采用蛋白印迹法检测损伤脊髓组织中a-突触核蛋白表达量的变化.结果:蛋白印迹法法显示a-突触核蛋白在脊髓损伤后6h表达量达到峰值,之后有所下降,1d表达量降到低谷,后再次升高,于损伤后3d到达第二次表达高峰,7d后逐渐恢复.结论:a-突触核蛋白在脊髓损伤后6h表达最明显,之后随着时间的延长表达逐渐降低,1d后再次升高,3d到达第二次表达高峰,表明脊髓损伤早期a-突触核蛋白表达随时间的变化,与脊髓损伤动物神经组织的损伤和修复有密切关系.     

大鼠急性脊髓损伤早期半胱天冬酶8的表达及意义

目的:观察大鼠急性脊髓损伤后半胱天冬酶8在组织与血浆中的表达和含量的变化关系及意义。方法:W istar大鼠共84只,随机分成7组,每组12只。其中,6组制作成急性脊髓损伤模型,分为损伤后0h、6h、12h、24h、48h、72h组。另1组作为对照组。应用免疫组化法和酶联免疫法测定损伤后,各个时段脊髓组织和血浆中的caspase-8值。结果:急性脊髓损伤后,组织与血浆内即刻出现caspase-8的阳性表达,伤后24-48h,组织及血浆中caspase-8表达达到峰值,至伤后72h开始降低但仍高于正常对照组。结论:脊髓损伤早期,组织与血浆中的caspase-8表达明显增加,且在时间上具有相应的变化关系,有望为脊髓损伤的临床干预时机的选择,带来一定的帮助。     

大鼠急性脊髓损伤早期Rab3a的表达

目的:对脊髓损伤大鼠组织中不同时间段的Rab3a表达情况进行观察,研究Rab3a在损伤的脊髓组织中对神经再生的影响。方法:SD大鼠56只,随机分成7组,6组制作成急性脊髓损伤模型,另一组作为对照组。分别于伤后0h、6h、12h、24h、48h、72h,采用免疫组化法检测损伤脊髓组织中Rab3a的表达。结果:免疫组化法显示Rab3a在脊髓损伤后6h表达下降到最低,之后有所升高,1d表达最高,后再次降低。结论:Rab3a在脊髓损伤后6h表达不明显,之后随着时间的延长表达逐渐增加,1d后再次降低,表明脊髓损伤后Rab3a表达随时间先降低而后升高,之后再次降低的变化,对脊髓损伤动物神经功能的恢复有重要作用。     

大鼠急性脊髓损伤后Bak基因的表达及其意义

目的探讨Bak基因在大鼠急性脊髓损伤(ASCI)中的表达及其意义。方法选取64只SD大鼠随机分为模型及对照两组,每组32只,模型组以改良Allen's法制作SD大鼠急性脊髓损伤动物模型,对照组只行椎板切开不损伤脊髓。分别于伤后3h、1、3、7d时(每个时间点8只)应用改良Tarlov评分法评价其神经功能;然后处死动物,取受损节段脊髓行HE染色及免疫组化染色,观察形态学改变和Bak基因表达的特点;并应用TUNEL方法检测神经细胞凋亡情况。其量的评定借助于麦克奥迪数码医学图像分析系统A(Motic.med6.0)软件,结果分别用累积光密度及细胞凋亡指数来表示。结果对照组大鼠下肢功能均无明显瘫痪,模型组大鼠下肢均出现不同程度功能障碍,对照组各时间点的Tarlov评分均高于实验组(P0.05)。对照组各时间点脊髓组织未见明显出血、水肿和细胞凋亡坏死,模型组各时间点脊髓组织均有不同程度出血、水肿、细胞凋亡及坏死。对照组未见明显Bak基因表达,模型组各时间点Bak基因表达均明显高于对照组(P0.05),模型组内Bak基因表达3h点出现,1d增加,3d达高峰,7d明显减少。模型组内细胞凋亡3h点少量出现,1d增加,3d达高峰,7d明显减少。结论脊髓损伤激活Bak基因表达,从而诱导神经细胞凋亡,可能为其病情进展的重要机制之一。     

GDNF在大鼠急性脊髓损伤中的表达及变化规律

目的:探讨GDNF在大鼠急性脊髓损伤(SCI)中不同时间点表达的变化规律来辅助诊断脊髓损伤。方法:健康成年Wistar大鼠56只,雌雄不限,随机分为7组,其中6组大鼠用改良Allen法在胸段制作成急性脊髓损伤模型,另外1组作为对照组。分别于损伤0h、2h、12h、24h、48h、72h后采集脊髓,进行免疫组化检测不同时间点GDNF的变化用显微摄影图像分析系统分析各个时间阳性灰度值,进行统计学分析。结果:免疫组化法显示GDNF在脊髓损伤后2h表达达到最高,12h数量略减少,48仍有阳性表达依次降低72h表达恢复到正常水平。结论:GDNF在脊髓损伤后的时序性变化规律可能成为判断脊髓顺损伤的一种客观指标。     

依达拉奉对大鼠急性脊髓损伤后bcl-2/bax表达及细胞凋亡的实验研究

目的观察依达拉奉对大鼠急性脊髓损伤后bcl-2/bax表达及细胞凋亡率的影响,探讨其对急性脊髓损伤后脊髓组织的保护作用。方法成年SD雄性大鼠60只,随机分成对照组和依达拉奉组,均采用改良Allen’s撞击法,致伤力为50gcf(10g×5cm)损伤T9～10制作动物模型,术后实验组给予依达拉奉3mg/kg,对照组给予等量生理盐水。每组分别于6h、12h、24h、72h、7d5个时间点处死动物取材,每个时间点6只大鼠,对受损脊髓部位进行免疫组织化学检测神经细胞凋亡因子bcl-2和bax基因的表达及用原位末端标记法(TUNEL法)标记神经元凋亡细胞。结果与对照组相比,依达拉奉组bcl-2蛋白表达水平显著提高,bax蛋白表达水平明显下降。对照组检测到较高的细胞凋亡率。依达拉奉组细胞凋亡率较对照组明显下降。结论依达拉奉可能通过清除氧自由基、上调bcl-2和下调bax蛋白表达来抑制大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡,从而保护大鼠神经组织。     

大鼠脊髓损伤早期Survivivn表达规律与细胞凋亡的关系

目的:探讨大鼠脊髓损伤早期不同时间段内脊髓组织中生存素(Survivin)表达变化规律和细胞凋亡的关系。方法:56只Wistar大鼠随机分两组:①假损伤组(对照组,n=8)与②损伤组(实验组,48只);假损伤组仅打开T10及部分T9、T11椎板,实验组均采用改良Allens法建立大鼠T10脊髓损伤模型,分别于伤后不同时间点(12h、24h、3d、5d、7d、10d)随机处死8只取材;分别用HE染色观察组织病理变化、免疫组织化学法观察脊髓组织中Survivin表达并对其进行定性定量分析和脱氧核糖末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL法)测定细胞凋亡指数,并进行相关性分析。结果:对照组大鼠在损伤及周边脊髓灰、白质中偶有Survivin蛋白表达、实验组12h有极少表达、3d时可见较多Survivin蛋白表达,然后开始下降;10d时与对照组比较仍有统计意义(P<0.05)。在脊髓损伤后对照组有少量细胞凋亡;而试验组12h就出现大量凋亡细胞,3d达高峰,5d和7d明显减少,10d仍有少量表达;实验组24h、3d、5d、7d、10d细胞凋亡和对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:脊髓损伤后Survivin表达呈上升趋势并有一定的规律性,与细胞凋亡成正相关,脊髓损伤后Survivin的表达升高参与了抑制神经细胞的凋亡,从而起到减轻脊髓损伤的作用。     

辛伐他汀对创伤性脑损伤大鼠血清及海马NSE表达的影响

【摘要】目的通过观察辛伐他汀对创伤性脑损伤（TBI）大鼠神经元特异性烯醇化酶（NSE）在脑组织和血清中表达的影响,探讨辛伐他汀对大鼠TBI的治疗作用。方法8周龄的SD大鼠90只,随机分为假致伤组、对照组、治疗组,每组30只。对照组、治疗组参照改良的Feeney氏自由落体法制造TBI模型。治疗组大鼠于造模前晚及伤后每晚给予辛伐他汀10mg/kg灌胃;对照组及假致伤组同时给予等量淀粉灌胃。3组大鼠分别于伤后3h、12h、24h、3d、7d、14d取5只大鼠的颈总动脉血3mL,ELISA法测定NSE浓度;断头取脑,免疫组化法检测伤侧海马CA3区NSE表达。结果（1）ELISA法测定：对照组,伤后3h血清NSE即开始升高,24h至3d达高峰,14d仍高于假致伤和治疗组;治疗组,伤后3h血清NSE水平升高,24h达高峰,3d至7d下降,明显低于对照组,伤后14d接近假致伤组。（2）免疫组化检测：对照组伤后3h伤侧海马CA3区NSE光密度值下降,3d至7d达低谷,14d时仍显著低于假致伤组;治疗组的大鼠伤后3h伤侧海马CA3区NSE光密度值下降,12h至24h达低谷,但明显高于对照组,7d开始回升,14d时接近假致伤组水平。结论辛伐他汀可促进TBI后血清NSE水平的下降,提高损伤侧海马神经元的NSE表达,对TBI后大鼠损伤的神经元有保护作用。     

促红细胞生成素对大鼠急性脊髓损伤后核因子κB及炎症因子表达的影响

目的观察促红细胞生成素(EPO)对大鼠急性脊髓损伤后脊髓组织核因子κB(NF-κB)表达及肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6水平的影响,探讨其减轻急性脊髓损伤后继发性脊髓损伤的机制。方法 18只SD大鼠随机均分为对照组、损伤组和治疗组,用动脉瘤夹从两侧夹闭脊髓30 s造成脊髓损伤模型。治疗组分别予术后1 h和1、2、3 d腹腔注射EPO 5000U/kg。术后3 d处死大鼠取材,用EMSA法检测脊髓组织中NF-κB活性,ELISA法检测TNF-α、IL-1β、IL-6表达。结果治疗组脊髓组织中NF-κB、TNF-α、IL-1β、IL-6的水平均比损伤组显著降低(P<0.05)。结论 EPO能下调急性脊髓损伤后脊髓组织中炎症因子的表达,从而抑制炎症反应,对继发性脊髓损伤有一定的保护作用。     

重组人促红细胞生成素对大鼠急性脊髓损伤后炎症因子表达及运动功能的影响

目的研究重组人促红细胞生成素(rhEPO)对大鼠急性脊髓损伤(SCI)后肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)等炎症因子的表达及运动功能的影响,探讨其减轻脊髓损伤、保护神经功能的可能机制以及对运动功能恢复的影响。方法36只SD大鼠,采用随机数字表法分为假手术组(Sham组)、脊髓损伤组(SCI组)、治疗组(EPO组),每组12只。Sham组:不损伤脊髓,仅行椎板切除术;SCI组和EPO组:行椎板切除术后,均采用改良的Allen's撞击法造成脊髓损伤。EPO组于术后1 h、1 d、3 d、7 d、14 d腹腔注射rhEPO;Sham组及SCI组,于术后1 h、1 d、3 d、7 d、14 d腹腔内注射等量的0.9%氯化钠溶液。术后第3天,各组分别处死6只大鼠并取材,用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测TNF-α、IL-1β、IL-6的表达水平;并用脊髓损伤Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)评分法评价大鼠术后第1、3、7、14天的运动功能情况。比较三组脊髓组织中各炎症因子表达情况及不同时间点BBB评分。结果术后第3天,Sham组的TNF-α、IL-1β、IL-6水平均低于SCI组及EPO组,EPO组的TNF-α、IL-1β、IL-6水平均低于SCI组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。BBB评分最高分21分,Sham组无脊髓损伤,术后大鼠运动功能正常,BBB评分接近正常值。术后第1、3、7、14天,EPO组和SCI组大鼠的BBB评分随着时间的延长而升高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。术后第1、3、7、14天,EPO组和SCI组大鼠的BBB评分均低于Sham组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。术后第7、14天,EPO组大鼠的BBB评分分别为(10.04±1.01)、(12.50±1.17)分,均高于SCI组(7.92±1.04)、(9.92±1.12)分,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论rhEPO可减少急性脊髓损伤后炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6的表达,减轻炎症反应,从而发挥保护神经的作用;且rhEPO可明显改善脊髓损伤后大鼠的运动功能,有利于神经功能的恢复。     

Effects of rapamycin on apoptosis with enhancing neuronal autophagy after spinal cord injury in rats

目的 探讨雷帕霉素(Rapamycin)对急性脊髓损伤后神经元的保护作用及其可能机制.方法 150只SD大鼠按随机分成假手术组、损伤组和治疗组,Allen法[1]建立大鼠脊髓损伤模型,于损伤后8 h、24 h、3 d、7 d、14 d取损伤脊髓组织,免疫荧光双标观察神经元LC3表达及凋亡情况,Western blot检测LC3及Caspase-3表达,电镜观察神经元显微结构变化.结果 与损伤组相比,治疗组相同时相点LC3阳性神经元增多,凋亡细胞减少(P<0.05);Western blot示LC3Ⅱ损伤后第3天达高峰,治疗组表达较明显,Caspase-3损伤第7天后开始下降,治疗组表达较少(P<0.05);电子显微镜下损伤组及治疗组神经元内均可见自噬小体及自噬溶酶体.结论 雷帕霉素增强大鼠脊髓损伤后神经元自噬,减少神经元细胞凋亡,对神经元具有保护作用.     

β-干扰素对大鼠急性脊髓损伤后神经功能恢复的影响

目的 初步探讨β-干扰素对大鼠急性脊髓损伤后神经功能恢复的影响.方法 SD成年大鼠40只随机分成A组(脊髓损伤组)、B组(甲基强的松龙干预组)、C组(β-干扰素干预组)、D组(假手术组)各10只,用改良的Allen装置撞击大鼠脊髓胸9~10节段建立脊髓损伤模型,术后各组予相应干预处理.采用BBB评分、改良Tarlov评分和斜板实验方法观察大鼠行为学改变情况,于术后第1、3、7、14和21天对大鼠急性脊髓损伤后不同时段的脊髓神经功能进行评分.结果 大鼠急性脊髓损伤后BBB评分、改良Tarlov评分和斜板实验分值均近0,随着时间进展评分逐渐升高,B、C组升高明显,干预治疗的B、C组与A组相比7 d内无显著变化(P>0.05),14 d时有显著变化(P<0.05);但B组与C组比较无显著变化(P>0.05).结论 β-干扰素应用有利于大鼠急性脊髓损伤后神经功能恢复,其作用机制需要进一步研究.     

脊髓损伤早期细胞凋亡的表达及意义

目的:观察大鼠急性脊髓损伤后不同时间细胞凋亡调控基因Bcl-2和Bax的表达。方法:Wistar大鼠56只随机分成7组,将6组制成急性脊髓损伤模型,另一组于伤后0h、4h、8h、24h、48h、72h对其运动功能进行评分,随后采集脊髓标本,分别进行HE染色、TENEL标记和免疫组化检测其凋亡调控基因Bcl-2和Bax的表达。结果:大鼠脊髓损伤后表现运动能力下降。TUNEL染色显示脊髓伤后4h出现凋亡阳性颗粒,伤后8h到达高峰。Bcl-2和Bax都在伤后4h可见阳性表达,Bcl-2表达在24h到达高峰,Bax的表达高峰出现在伤后8h。结论:大鼠脊髓损伤后,除存在细胞坏死外还存在神经细胞凋亡。细胞内Bcl-2与Bax的比例可能调节着凋亡的发生。     

超前镇痛对大鼠脊髓损伤后炎性介质的影响

目的 研究凯芬和加罗宁超前镇痛对大鼠脊髓损伤后炎性介质的影响.方法 48只大鼠随机分成凯芬和加罗宁组,超前镇痛前和脊髓损伤模型建立后6 h采血测定血清IL-8、IL-6、NO 和NOS值.结果 加罗宁组和凯芬组相比,NO、NOS 均明显降低(P<0.01),而IL-8、IL-6 值均显著升高 (P<0.01).结论脊髓急性损伤早期,超前镇痛常用剂量凯芬比加罗宁能显著抑制脊髓损伤后炎性介质水平.     

乌司他丁对急性脊髓损伤大鼠神经功能恢复及IL-10表达的影响

目的探讨乌司他丁对急性脊髓损伤大鼠神经功能恢复及IL-10表达的影响。方法将雌性SD大鼠72只随机分成4组各18只（假手术组、损伤对照组、溶剂对照组和乌司他丁组）,采用改良Allen法建立大鼠急性脊髓损伤模型。乌司他丁组于造模成功30min后自大鼠尾静脉注射乌司他丁5万U/kg,q12h;溶剂对照组则注射同等剂量生理盐水。术后3、7d和14d采用BBB神经功能评分法评估其神经功能恢复状况。采用ELISA法检测大鼠脊髓损伤组织IL-10表达。结果乌司他丁组术后7d和14d神经功能评分优于损伤对照组和溶剂对照组;乌司他丁组术后3、7d和14dIL-10表达较损伤对照组和溶剂对照组明显增加,分别P〈0.05和P〈0.01。结论乌司他丁可能通过上调脊髓组织中IL-10的生成来促进脊髓损伤大鼠神经功能的恢复。     

N-乙酰半胱氨酸对大鼠急性脊髓损伤后继发性脊髓损伤的保护作用

目的 探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对大鼠脊髓急性损伤后继发性脊髓损伤的保护机制.方法 成年SD大鼠18只随机均分成单纯椎板切除(对照组)、急性脊髓损伤(损伤组)和急性脊髓损伤后NAC治疗(治疗组)三组.用30 g力量动脉瘤夹从两侧夹闭脊髓30 s建立脊髓损伤模型.治疗组术后15 min、1、2和3d分别予NAC 150 mg/kg腹腔注射;对照组和损伤组腹腔注射等量生理盐水.所有动物于术后3d处死取材,用凝胶电泳迁移率分析和免疫组化检测脊髓组织中核因子κB(NF-κB),ELISA法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和IL-6表达.结果 损伤组脊髓组织中NF-κB、TNF-α、IL-1β和IL-6水平均比对照组升高(P＜0.05),治疗组脊髓组织中各因子水平均比损伤组显著降低(P＜0.05).结论 NAC可以通过抑制大鼠急性脊髓损伤后NF-κB的活性,进一步下调TNF-α、IL-1β和IL-6的表达,从而减轻继发性炎症反应所导致的脊髓损伤.     

急性脊髓损伤时NSE和ET的表达及临床意义

目的：探讨急性脊髓损伤（Spinal CordInjury SCI）患者血清神经元特异性烯醇化酶（Neuron-speeificenolase NSE）和内皮素（Edinthlin ET）含量的动态变化及临床意义。方法：临床确定的SCI患者10例,采集损伤后24h、72h、7d、14d的静脉血,采用酶联免疫法测定血浆NSE和ET水平,与10例健康成人对照,观察其动态变化。结果：SCI患者早期血浆NSE和ET含量较对照组明显升高（P〈0．01）,且随时间延长,二者含量均逐渐降低,NSE和ET水平72h时达高峰,14d时明显下降,但仍高于正常对照组。结论：NSE、ET可以作为监测脊髓损伤严重程度的客观指标。     

簇集蛋白在大鼠急性脊髓损伤组织中的表达及其意义

目的　探讨簇集蛋白 (clusterin)在急性脊髓损伤组织中的表达及其在继发性脊髓损伤中可能发挥的重要作用。方法　采用改良Allen重物打击法制成SD大鼠脊髓急性损伤模型 ,通过苏木素 伊红 (HE)染色及免疫组织化学染色观察损伤组和假手术组伤后 0. 5、1、3、7、14、2 1d脊髓损伤组织变性坏死及簇集蛋白的表达情况。结果　损伤组在伤后 1d簇集蛋白阳性表达开始增加 ,约在伤后 7d达到高峰 ,之后表达逐渐减少 ,伤后2 1d趋于稳定 ,随时间延长存在动态变化过程 ,并与脊髓损伤程度相一致。损伤组在伤后 1、3、7、14、2 1d簇集蛋白表达与假手术组及正常对照组差异有统计学意义 (P <0 . 0 1) ;假手术组及正常对照组伤后各时间点均有簇集蛋白阳性表达 ,但表达随时间延长无动态变化过程。结论　簇集蛋白在急性脊髓损伤组织中表达明显增加 ,并可能通过补体调节、抗凋亡及热休克蛋白活性等机制减轻继发性脊髓损伤。     

依达拉奉对实验性急性脊髓损伤后细胞凋亡的影响

目的观察依达拉奉（MCI-186）对脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响。方法选择SD雄性大鼠40只,随机分成对照组和MCI-186组,均采用改良的Allen打击（WD）法制成150gcf（克厘米势能）中度急性脊髓损伤模型,术后实验组给予MCI-186,3mg/kg对照组给予等量生理盐水。分别于术后6h、12h、24h、72h、7d处死动物取材,采用流式细胞仪检测损伤段脊髓细胞凋亡的情况。结果对照组和MCI-186组均发现凋亡细胞,均在1d达到高峰,但MCI-186组凋亡细胞比率显著低于对照组（P〈0．05）。结论MCI-186通过有效地清除氧自由基,可明显抑制急性脊髓损伤后的脂质过氧化反应及降低神经细胞的凋亡,从而达到保护其神经组织的作用。