磷脂酰肌醇蛋白多糖3对胆道闭锁患儿的诊断价值及与肝纤维化的关系

摘要：目的　探讨磷脂酰肌醇蛋白多糖3（GPC3）在胆道闭锁（BA）患儿中表达水平及其与肝纤维化的关系。方法　收集BA患儿41例（BA组）、胆总管囊肿（CC）患儿9例（CC组）、肝功能正常无其他肝胆疾病的体检健康婴儿12例（NC组）。用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测3组血清GPC3水平,使用受试者工作特征（ROC）曲线评估GPC3对BA的辅助诊断价值。留取BA组和CC组肝组织样本,通过免疫组织化学染色和实时荧光定量PCR检测GPC3在患儿肝组织中表达水平,分析BA患儿GPC3与肝纤维化分级的关系。结果　（1）BA组GPC3水平高于CC组和NC组（χ2=24.170,P＜0.01）。BA组内日龄≤30 d（21例）及＞30 d的患儿（20例）血清GPC3水平差异无统计学意义,但均高于CC组和NC组（χ2=24.210,P＜0.01）。BA组内Ⅰ~Ⅱ级与Ⅲ~Ⅳ级患儿GPC3水平差异无统计学意义,但均高于CC组和NC组（χ2=24.390,P＜0.01）。GPC3诊断BA的ROC曲线下面积为0.878（95%CI：0.792~0.965,P＜0.01）,敏感度为82.93%,特异度为80.95%,最佳临界值为0.639 μg/L。（2）肝组织免疫组织化学检测结果显示,BA组肝组织中GPC3表达较CC组明显升高（Z=3.565,P＜0.01）;肝组织中GPC3的含量与肝纤维化分级呈正相关（rs=0.619,P＜0.01）。BA组GPC3 mRNA表达较CC组上调（Z=7.361,P＜0.05）。结论　血清GPC3对BA的诊断及鉴别诊断有一定临床价值;BA肝组织中GPC3表达上调,其表达量与胆道闭锁的肝纤维化分级呈正相关。     

胆道闭锁患儿肝纤维化及炎症细胞浸润与 Kasai术后胆管炎的关系

目的 分析胆道闭锁（BA）患儿肝纤维化程度、炎症细胞浸润程度与Kasai术后胆管炎的关系。方法 选 取2015年1月—2016年12月在我院确诊为BA患儿92例,依照日本Ohkuma’s肝纤维化分级标准进行分组,分为肝 纤维化Ⅰ级（8例）、Ⅱ级（31例）、Ⅲ级（35例）、Ⅳ级（18例）组。结合Kasai手术时日龄,分析肝纤维化与手术时日龄 的关系。术中获取的肝组织标本采用苏木素/伊红（HE）、马松（Masson）染色评价其纤维化程度,免疫组化（IHC）染色 检测白细胞共同抗原（LCA）、T淋巴细胞表面抗原（CD4、CD8）、巨噬细胞特异性抗体（CD68）等炎症细胞特异性标志 抗体表达情况。结合Kasai术后随访资料,分析BA患儿肝组织炎症细胞浸润程度、肝纤维化程度与Kasai术后胆管 炎的关系。结果 BA患儿手术时日龄越大,肝纤维化程度越重;常规病理染色结果显示肝组织以淋巴细胞浸润为 主,Ⅰ级、Ⅳ级组LCA、CD4表达水平高于Ⅱ、Ⅲ级组,各组间CD68表达差异无统计学意义。92例BA患儿均获得随 访,50例曾发生胆管炎,38例发生早期胆管炎,23例频发胆管炎;不同肝纤维化分级BA患儿Kasai术后胆管炎、早期 胆管炎和频发胆管炎的发生率差异有统计学意义（P＜0.05）,Ⅰ级、Ⅳ级组胆管炎发生率高于Ⅱ级、Ⅲ级组。结论 BA患儿Kasai术后胆管炎的发生与肝纤维化程度和肝组织炎症细胞,尤其T淋巴细胞亚群的浸润有关。     

BMP-9在胆道闭锁肝纤维化中的作用机制研究

目的 探讨骨形态发生蛋白9（BMP-9）在胆道闭锁（BA）肝纤维化中的作用机制。方法 选取14例BA患 儿肝组织标本为BA组,5例胆总管囊肿（CBD）患儿肝组织标本为CBD组,HE染色对肝组织进行肝纤维化评估,免疫 组化染色检测BMP-9、p-SMAD1/5表达情况,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（qPCR）检测肝组织BMP-9及DNA 结合抑制因子 1（ID1）mRNA 表达水平。培养人肝星状细胞 LX-2,用重组转化生长因子（rTGF）-β1 与重组 BMP （rBMP）-9处理,蛋白质印迹法检测细胞中SMAD1/5、p-SMAD1/5、ID1蛋白及α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达情况, qPCR检测细胞中α-SMA及ID1 mRNA表达情况。结果 BA组肝组织中BMP-9及p-SMAD1/5蛋白、BMP-9及ID1 mRNA表达水平均高于CBD组;在BA组中重度肝纤维化患儿BMP-9蛋白、BMP-9及ID1 mRNA的表达高于轻度肝 纤维化患儿（P＜0.05）。LX-2细胞经rTGF-β1、rBMP-9处理后,α-SMA蛋白及α-SMA mRNA表达水平均升高（P＜ 0.05）。LX-2细胞加入不同剂量rBMP-9之后,其下游通路中p-SMAD1/5、SMAD1/5、ID1、α-SMA蛋白,及ID1、α-SMA mRNA表达均较0 μg/L组升高（P＜0.05）。结论 在BA患儿肝组织中BMP-9、p-SMAD1/5、ID1表达水平较CBD患 儿增高,与肝纤维化严重程度有关。BMP-9可通过SMAD/ID1信号通路激活人肝星状细胞LX-2,促进纤维化进程。     

1,25（OH）2D3对人肾小球系膜细胞增殖及PCNA表达的影响

目的探讨1,25-二羟基维生素D3[1,25（OH）₂D₃]对人肾小球系膜细胞中增殖细胞核抗原（PCNA）表达及细胞增殖的影响。方法体外培养人肾小球系膜细胞,取传代培养至3⁸代细胞随机分为4组:正常对照组（加含5%胎牛血清DMEM培养基）,增殖对照组（EGF组,加10μg/L的EGF）,一般干预组[VD组,加10^-8mol/L 1,25（OH）₂D₃],增殖干预组[EGF+VD组,加10μg/L EGF及10^-8mol/L1,25（OH）₂D₃],均作用48 h。流式细胞术检测各组细胞周期;Western blot检测各组PCNA表达的情况。结果 （1）细胞周期。与正常对照组相比,EGF组G₁期细胞明显减少,S、G2/M期细胞增多,增殖指数（PI）较高;VD组G₁期细胞明显增多,S、G₂/M期细胞减少,PI较低;与EGF组相比,VD组和EGF+VD组G₁期细胞增多,S、G₂/M期细胞减少,PI较低,差异均有统计学意义。（2）系膜细胞中PCNA蛋白的表达。与正常对照组相比,EGF组PCNA的表达较高,VD组PCNA的表达较低;与EGF组相比,VD组和EGF+VD组PCNA的表达较低。结论 1,25（OH）₂D₃通过阻滞细胞周期、抑制PCNA的表达,从而抑制人肾小球系膜细胞的增殖。     

白藜芦醇抑制人牙龈成纤维细胞炎症和氧化应激的机制研究

目的 探讨白藜芦醇（RSV）对牙龈卟啉单胞菌脂多糖（LPS）诱导的人牙龈成纤维细胞（HGF）的炎症和氧 化应激的调节作用。方法 原代培养HGF,将细胞分为实验1和实验2：实验1细胞分为对照组、LPS组、RSV 20 μmol/L 组、RSV 40 μmol/L组、RSV 80 μmol/L组、LPS+RSV 20 μmol/L组、LPS+RSV 40 μmol/L组和LPS+RSV 80 μmol/L组;实 验2细胞分为对照组、LPS组、LPS+RSV 40 μmol/L 组、LPS+RSV 40 μmol/L+E5564组和LPS+E5564组。通过CCK-8 法评估细胞活力。利用酶联免疫吸附试验测定白细胞介素（IL）-1β、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子（TNF）-α、超氧化物歧 化酶（SOD）、丙二醛（MDA）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平。通过Western blot分析测量蛋白的表达水平。结 果 20、40和80 μmol/L RSV对HGF均没有明显的细胞毒性作用。在LPS诱导的HGF细胞中,40和80 μmol/L RSV 通过下调IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α的表达减弱炎症反应,降低了MDA的含量,并显著提高了SOD的水平,80 μmol/L RSV显著提高了GSH-Px水平（P＜0.05）。此外,20、40和80 μmol/L RSV可诱导Toll样受体4（TLR4）/MyD88/NF-κB 信号通路的失活,其均可降低TLR4、MyD88和p-p65蛋白的表达水平（P＜0.05）。TLR4抑制剂（E5564）通过下调IL- 1β、IL-6、IL-8和TNF-α的产生以及上调GSH-Px水平进一步增强了RSV对炎症和氧化应激损伤的缓解作用（P＜ 0.05）。结论 RSV可通过诱导TLR4/MyD88/NF-κB信号通路失活,减轻LPS导致的HGF炎症和氧化应激损伤。     

白介素(IL)-32在胆道闭锁患儿肝组织中的表达水平及临床意义

目的:研究白介素-32(interleukin-32,IL-32)在胆道闭锁(biliary atresia,BA)及胆总管扩张(choledochal cyst,CC)患儿肝脏组织中的表达水平变化,从而探讨白介素(IL)-32在胆道闭锁患儿肝脏组织中的临床意义。方法:选取我院2012年2月~2015年10月期间收治的胆道闭锁患儿35例及未发生胆管炎的胆管扩张症患儿14例为研究对象,划分胆道闭锁患儿为观察组(BA)及胆管扩张患儿为对照组(CC)。采用荧光实时定量(Real-time quantitative PCR,q PCR)和蛋白质印迹(western blot,WB)方法分别检测胆道闭锁组(BA)和胆总管扩张组(CC)两组中肝脏组织内白介素(IL)-32的表达水平,并对两组间IL-32的表达水平进行比较分析,同时对BA组中白介素(IL)-32表达情况与肝功能相关的血清指标进行相关性分析。结果:BA组中IL-32 mRNA及蛋白表达水平明显高于CC组(P<0.05);BA组IL-32与γ-谷氨酰转肽酶(γ-glutamyl transpeptidase,γ-GT)、谷丙转氨酶(Alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(Aspartate transaminase,AST)肝功能相关指标表达水平进行相关性研究表明:IL-32与γ-GT、ALT、AST之间呈正性相关的关系(P<0.05)。结论:肝功能相关指标如γ-GT、ALT、AST的检测值随着IL-32表达水平的增高而增高,说明了胆道闭锁患儿肝组织IL-32与其肝功呈正相关的特点,对预测胆道闭锁患儿肝功能具有临床参考意义。     

CD163在胆道闭锁肝纤维化中的表达及临床意义

目的 探讨CD163在胆道闭锁（BA）患儿中的表达及其与肝纤维化的关系。方法 收集30例BA患儿（BA组，肝纤维化Ⅰ～Ⅱ级14例，Ⅲ～Ⅳ级16例）、10例胆总管囊肿患儿（CC组），获取2组肝组织样本和血液标本。通过免疫组化染色、流式细胞术检测2组肝组织和血液中CD163表达水平。酶联免疫吸附试验检测可溶性CD163(sCD163)表达，受试者工作特征（ROC）曲线分析sCD163评估BA肝纤维化中的价值。结果 免疫组化染色和流式细胞术提示，BA组肝组织和血液中CD163表达水平高于CC组（P<0.01），且随着肝纤维化程度增加而升高（P<0.01）,sCD163表达亦呈相同变化。sCD163预测BA的ROC曲线下面积为0.927，最佳临界值为8.323μg/L，敏感度为86.67%，特异度为100%。结论 BA患儿CD163表达上调，加速肝纤维化进程；sCD163能够较准确反映BA患儿肝纤维化严重程度。     

肝细胞肝癌患者血清白细胞介素8水平与临床病理参数的关系

目的探讨肝细胞肝癌（HCC）患者血清中自细胞介素8（IL-8）的表达水平与临床病理参数的关系。方法应用酶联免疫分析方法检测60例HCC患者（HCC组）、50例慢性乙型病毒性肝炎（简称“乙肝”）患者（乙肝组）和50例健康者（对照组）血清中IL-8水平,并对3组结果进行对比分析。结果HCC组、乙肝组和健康对照组血清中IL-8水平分别是1．066μg／L,0．736μg／L,0．356μg／L。HCC组血清中IL-8表达水平显著高于乙肝组和健康对照组。结论HCC患者血清IL-8水平与肿瘤分期、大小、是否转移和组织分化程度有关。IL-8可能促进肿瘤的生长和转移。     

木犀草素对K562细胞增殖与凋亡的影响及其机制

目的　探讨木犀草素对K562细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法　取对数生长期K562细胞分别加入0、10、25、50、100 μmol/L木犀草素培养24 h、48 h、72 h,采用CCK-8法检测细胞增殖抑制率;K562细胞分别加入0、25、50 μmol/L木犀草素培养48 h,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况;K562细胞分别加入0、10、50、100 μmol/L木犀草素培养48 h,采用Westem blot检测B细胞淋巴瘤2蛋白（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、多聚ADP核糖聚合酶（PARP）、Cleaved-PARP、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3（Caspase3）、Cleaved-Caspase3、蛋白激酶B（AKT）、磷酸化AKT（p-AKT）、断裂点簇集区蛋白（BCR）、c-abl癌基因1（c-ABL）BCR-ABL蛋白表达。结果　CCK-8检测结果显示,随木犀草素浓度增加及作用时间的延长,K562细胞增殖抑制率均呈增长趋势（P＜0.05）。流式细胞仪检测结果显示,木犀草素0、25、50 μmol/L组K562细胞的凋亡率依次升高（分别为8.21%±0.55%、23.43%±1.50%和40.47%±2.97%）。Western blot结果显示,Bax、Cleaved-PARP、Cleaved-Caspase3表达水平随木犀草素浓度的增加而升高（P＜0.05）。木犀草素0、10、50 μmol/L组PARP蛋白表达水平依次升高（P＜0.05）,100 μmol/L组与50 μmol/L组差异无统计学意义。100 μmol/L组Caspase3、Bcl-2蛋白表达水平均低于其余组（P＜0.05）。50、100 μmol/L组p-AKT蛋白表达水平低于0、10 μmol/L组,100 μmol/L组低于50 μmol/L组。50 μmol/L组BCR-ABL融合蛋白表达水平高于0 μmol/L组,100 μmol/L组低于0、50 μmol/L组（P＜0.05）。结论　木犀草素可抑制K562细胞增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与调控BCR-ABL蛋白表达及PI3K/AKT信号通路有关。     

哮喘急性发作期患者血清白细胞介素水平变化的临床意义

目的探讨支气管哮喘（BA）急性发作期患者血清白细胞介素13（IL-13）、IL-23、IL-33水平变化的临床意义。方法应用酶联免疫吸附试验方法检测80例哮喘急性发作期患者（BA组）和60例健康体检者（健康对照组）的血清IL水平。结果BA组血清IL-13、IL-23、IL-33含量均明显高于健康对照组[分别为（2．8±1．6）ng/L比（1．6±0．5）ng／L,（15．9±13．6）ng／L比（5．9±2．2）ng／L,（61．4±28．6）ng/L比（5．3±4．9）ng／L],差异均有统计学意义（均P＜0．01）。结论BA急性发作期患者血清IL-13、IL-23、IL-33水平升高,提示这3种IL在哮喘急性发作中起到促炎作用,可能参与了哮喘的发病。     

整合素αvβ8、p38及ERK1/2在胆道闭锁患儿肝脏中的表达及意义

目的 研究转化生长因子（TGF） -β1 通路相关调节蛋白整合素αvβ8、p38 及细胞外调节蛋白激酶 1/2（ERK1/2）蛋白在胆道闭锁（BA）患儿肝脏中的表达情况及在肝纤维化进程中的作用。 方法 选取天津市儿童医院普外科收治的 BA 患儿 15 例为 Kasai 组, 胆管扩张症患儿 10 例为胆扩组; 天津市第一中心医院小儿器官移植科行Kasai 手术后因肝功能衰竭行肝移植的 BA 患儿 10 例为肝移植组。 取患儿肝右叶前缘标本, 行 HE 染色观察肝纤维化程度, 行免疫组化染色检测αvβ8、p38 及 ERK1/2 在肝组织中的表达情况。 结果 HE 染色示, 胆扩组偶见纤维细胞增生; Kasai 组汇管区增宽, 纤维组织增生、桥接纤维化现象普遍, 可见假小叶形成; 移植组汇管区明显增宽, 纤维组织增生较重, 广泛桥接纤维组织形成, 假小叶明显。 免疫组化染色示, 胆扩组αvβ8 和ERK1/2 表达为弱阳性, p38为阴性表达; Kasai 组αvβ8、p38 及 ERK1/2 蛋白均在肝细胞胞质、汇管区胆管上皮细胞胞质及血管内皮细胞胞质中强阳性表达; 肝移植组αvβ8、p38 及 ERK1/2 蛋白皆为强阳性表达。 Kasai 组和肝移植组αvβ8、p38 及 ERK1/2 表达水平明显高于胆扩组（均 P＜ 0.05）, Kasai 组与肝移植组比较差异无统计学意义。 结论 αvβ8、p38 及 ERK1/2 表达在BA 肝纤维化过程中明显增高, αvβ8、p38 及 ERK1/2 可能参与并促进 BA 肝纤维进程。     

胆道闭锁Kasai术后早期行肝移植手术的危险因素分析

目的 探讨胆道闭锁（BA）Kasai术后自体肝生存时间的影响因素,从而得出早期行肝移植手术的危险因 素,为 BA治疗提供循证医学证据。方法 回顾性分析 167例胆道闭锁 Kasai术后因肝功能衰竭行肝移植手术的患儿 资料,根据 Kasai手术与肝移植手术的间隔时间将其分为 G1组（≤6个月）、G2组（＞6个月~2年）和 G3组（>2年）,比较 3组患儿性别、Kasai手术年龄、Kasai术后黄疸消除、Kasai术后胆管炎发生及肝移植时肝功能指标情况,采用c2检验、 方差分析、Kruskal-Wallis H检验和多分类 Logistic回归分析查找自体肝生存时间的影响因素,即早期行肝移植手术 的影响因素。结果 3组间性别、Kasai手术年龄差异无统计学意义。3组间 Kasai术后黄疸消除率差异有统计学意 义（P＜0.01）,G1组至 G3组逐渐升高;术后早期胆管炎发生率差异有统计学意义（P＜0.05）,G3组低于 G1组;术后晚 期胆管炎发生率差异有统计学意义（P＜0.01）,G2 组高于 G1 组;术后频发胆管炎发生率差异有统计学意义（P＜ 0.05）,G3组低于 G2组。多分类 Logistic回归分析示黄疸未消除是胆道闭锁 Kasai术后自体肝生存的危险因素。结 论 胆道闭锁 Kasai术后黄疸未消除及早期胆管炎影响 Kasai术后自体肝生存时间,与早期行肝移植手术存在相关 性,其中黄疸未消除是早期行肝移植手术的危险因素。     

肝脏CD4、CD8及CD68表达与Kasai术后胆管炎的关系研究

目的　探讨T淋巴细胞表面抗原CD4、CD8、巨噬细胞特异性抗原CD68表达与胆道闭锁肝门-空肠吻合术（Kasai术）后胆管炎的关系。方法　选取Kasai术后行肝移植手术的27例胆道闭锁患儿,根据既往胆管炎发作情况将其分为频发胆管炎组（10例）、早期胆管炎组（7例）和无胆管炎组（10例）,比较各组患儿的一般临床资料。取患儿肝移植时病肝的肝门部肝组织,行HE染色观察肝纤维化、胆管增生、肝组织炎性细胞浸润程度及胆栓情况,免疫组织化学染色检测CD4、CD8及CD68蛋白表达情况。结果　3组患儿性别、年龄、Kasai手术年龄、自体肝生存时间、肝移植时白细胞计数、C反应蛋白及肝功能指标差异均无统计学意义;HE染色示3组患儿肝纤维化、胆管增生及胆栓分级差异均无统计学意义,而频发胆管炎组汇管区炎性细胞浸润程度较无胆管炎组和早期胆管炎组严重;免疫组化染色显示3组患儿CD4蛋白表达差异无统计学意义;频发胆管炎组CD8、CD68蛋白表达水平均高于无胆管炎组和早期胆管炎组（P＜0.05）。结论　Kasai术后胆管炎肝脏病理改变主要为CD8＋T细胞及CD68＋巨噬细胞参与的炎症反应,CD8及CD68表达增高可能是胆管炎反复发作的危险因素。     

维生素B2在胃癌中的作用及机制研究

摘要：目的　探讨维生素B2（Vit B2）在胃癌中的表达及其生物学意义。方法　选择39例胃癌患者（胃癌组）和40例健康体检者（对照组）,检测2组血清Vit B2水平,分析其与胃癌患者临床病理特征的关系。培养人胃癌MGC-803细胞,并取对数生长期细胞分别给予0、10、25、50、100 μmol/L Vit B2处理,检测细胞氧化磷酸化（葡萄糖、乳酸和琥珀酸脱氢酶）水平。实时荧光定量PCR（qPCR）检测己糖激酶Ⅱ（HKⅡ）、丙酮酸激酶M2（PKM2）和葡萄糖转运体1（GLUT1）mRNA水平。CCK-8法检测胃癌MGC-803细胞的增殖活性。流式细胞术检测胃癌细胞的凋亡情况。结果　胃癌患者血清Vit B2水平低于对照组［（207.85±39.71）μg/L vs. （246.07±45.43）μg/L］,且血清Vit B2水平与胃癌患者的TNM分期和分化程度有关;与0 μmol/L Vit B2组相比,25、50、100 μmol/L Vit B2组细胞葡萄糖消耗量和乳酸生成量均降低,琥珀酸脱氢酶含量均升高,HKⅡ、PKM2和GLUT1 mRNA水平均降低（均P＜0.05）;且50 μmol/L Vit B2组变化最明显。对照组、Vit B2组、阿帕替尼组和联合用药组胃癌细胞增殖活性依次降低,细胞凋亡率依次升高,组间多重比较差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论　胃癌患者血清Vit B2水平降低,Vit B2和阿帕替尼联合用药可提高其对胃癌的抗肿瘤效果。     

IL-6、GATA6在大鼠肺动脉平滑肌细胞中的表达及对 细胞增殖的影响

目的　探讨白细胞介素（IL）-6、转录因子GATA6在血小板源性生长因子-BB（PDGF-BB）诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）增殖中的表达及作用。方法　从8周龄SD大鼠中分离肺动脉,采用Ⅰ型胶原酶消化法原代培养PASMCs;采用倒置显微镜观察和免疫荧光染色鉴定细胞;采用CCK-8检测不同剂量（0、15、30、45、60、75 μg/L）PDGF-BB分别作用12、24、48 h对PASMCs增殖能力的影响;采用流式细胞术检测30 μg/L PDGF-BB诱导细胞增殖48 h的细胞周期;应用qPCR和Western blot技术检测30 μg/L PDGF-BB诱导细胞增殖12、24、48 h后IL-6和GATA6 mRNA及蛋白的表达水平。结果　15~60 μg/L的PDGF-BB诱导24 h、48 h后PASMCs增殖显著,其中以30 μg/L诱导48 h效果最佳（P＜0.05）;流式周期结果表明,PDGF-BB组G1期的百分比较对照组降低,而S期和G2期百分比增高（P＜0.01）。PDGF-BB能够诱导细胞增加IL-6 mRNA和蛋白的分泌并降低GATA6 mRNA和蛋白表达水平。相关性分析提示PASMCs的增殖与IL-6 mRNA表达呈正相关,与GATA6 mRNA表达呈负相关（r分别为0.538和-0.647,均P＜0.05）;IL-6与GATA6的表达呈负相关（r=-0.705,P＜0.01）。结论　PDGF-BB诱导体外培养的PASMCs增殖;IL-6、GATA6参与了PDGF-BB诱导PASMCs增殖的发生和发展;PASMC增殖与IL-6 mRNA表达上调和GATA6 mRNA表达下调有关。     

活性氧激活的ERK1/2通路在化学性缺氧损伤PC12细胞中的作用

目的探讨胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)在化学性缺氧损伤PC12细胞中的作用。方法应用化学性低氧模拟剂氯化钴(CoCl2)处理PC12细胞建立化学性缺氧损伤模型。应用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)比色法检测细胞存活率;罗丹明123(Rh123)染色荧光显微镜照像检测线粒体膜电位(MMP);流式细胞术检测凋亡细胞百分比;Western blot法测定caspase-3、ERK1/2和p38MAPK蛋白的表达水平。结果应用600μmol.L-1处理PC12细胞60 min可使磷酸化(p)ERK1/2的表达明显升高;在600μmol.L-1CoCl2处理PC12细胞前,应用500μmol.L-1N-乙酰半胱氨酸(NAC,为活性氧的清除剂)预处理1 h可抑制CoCl2对p-ERK1/2表达的上调作用;在600μmol.L-1CoCl2处理PC12细胞前,应用10μmol.L-1U0126(ERK1/2抑制剂)预处理2 h可保护PC12细胞对抗CoCl2引起的损伤,使细胞存活率升高,凋亡细胞数目和cleaved caspase-3表达及线粒体膜电位(MMP)丢失均减少;10μmol.L-1U0126预处理还能抑制CoCl2对p-p38MAPK表达的上调作用。此外,应用20μmol.L-1SB203580(p38MAPK抑制剂)预处理能抑制CoCl2对p-ERK1/2表达的上调作用。结论活性氧激活的ERK1/2通路介导CoCl2对PC12细胞的损伤作用,并与p38MAPK通路存在相互的的激活作用。