流式细胞仪检测X射线诱导小鼠骨髓红细胞微核率的初步研究

目的观察经X射线照射后不同时相点小鼠骨髓红细胞微核率的变化,探讨嗜多染红细胞微核率(fMNPCE)流式细胞仪(FCM)检测法能否作为快速检测辐射后早期遗传损害的生物计量仪.方法辐照组采用直线加速器激发X射线,对小鼠进行一次性全身照射,每组4只,剂量分别为0.5、3.0、6.0 Gy,于照后6、12、24 h取材;阴性对照组施以假照射,阳性对照组注射环磷酰胺.结果 0.5 Gy X射线组受照后24 h,骨髓fMNPCE显著升高(P<0.05);而3.0 Gy及6.0 Gy组受照后6 h,fMNPCE显著升高(P<0.01).结论红细胞微核流式细胞仪自动化检测法有作为辐射生物计量仪的应用前景.     

基于流式细胞术的大鼠骨髓网织红细胞微核实验方法的建立

  目的  建立并验证大鼠骨髓网织红细胞（reticulocytes,RETs）微核的流式细胞术检测方法。  方法  选用CD71-异硫氰酸荧光素（fluorescein isothiocyanate,FITC）标记骨髓网织红细胞,CD45-藻红蛋白（phycoerythrin,PE）标记白细胞,核酸染料DRAQ5标记DNA,建立骨髓微核的流式细胞术检测方法。SD大鼠随机分为甲基磺酸乙酯（ethyl methanesulfonate,EMS）、环磷酰胺（cyclophosphamide,CP）、N-乙基-N-亚硝基脲（ethyl nitrosourea,ENU）和秋水仙素（colchicine,COL）染毒组,各组大鼠按染毒剂量不同再分为4亚组,每亚组5只。以染毒剂量为0,作为各组溶剂对照。染毒方案为间隔24 h两次经口给药。末次给药后24 h采集双侧股骨骨髓,采用本研究建立的基于流式细胞术的骨髓微核检测方法测定骨髓中的RETs微核率和RETs比例,并同时使用人工显微镜下计数方法进行检测。  结果  成功建立基于流式细胞术的骨髓微核检测方法。采用该方法检测20只溶剂对照大鼠骨髓微核率（背景微核率）为0.83‰±0.12‰,采用人工显微镜下计数微核的方法检测的溶剂对照大鼠背景微核率为1.43‰±0.44‰,基于流式细胞术计数骨髓微核的方法背景微核率更低,且更为稳定。两种方法均可检测到EMS、CP、ENU、COL染毒后RETs微核率呈染毒剂量依赖性上升趋势,RETs比例呈染毒剂量依赖性下降。两种方法检测4种受试物诱导的RETs微核率相关性良好（相关系数为0.834 3～0.913 7）。  结论  本实验建立的基于流式细胞术的骨髓微核检测方法具有操作简便、灵敏快捷、背景微核率较低等优势,是人工微核计数方法的良好替代,可应用于化学物的遗传毒性评价。     

酸奶疙瘩的骨髓PCE微核试验

以NIH小鼠为实验动物,用食管癌高发区哈萨克族居民常用食品酸奶疙瘩,诱发其骨髓PCE的微核增高率。按浓度3.3g/ml,以10ml/kg BW腹腔或经口投药,于投药后24小时处死动物取材计数。结果提示,酸奶疙瘩的甲醇-氯仿提取物能促进NIH小鼠骨髓PCE微核率增高,与阴性对照组比较,统计上有显著意义的占测试样品的15.3％。     

HPE抑制环磷酰胺致小鼠骨髓嗜多染红细胞微核形成的研究

为观察人胎盘提取物（HPE）的抑突变作用，以环磷酰胺（CP）为阳性染色体损伤物，用1g／ml与0．5g／mlHPE分别与CP同时和间隔3h给药，观察HPE抑制CP致小鼠骨髓嗜多染红细胞微核的形成率。结果表明，CP与HPE同时给药时微核率1g／ml组为7．0‰，0．5g／ml组为11．2‰；注射CP后3h给HPE，两剂量组的微核率分别为10．6‰与11．4‰。各组与CP阳性对照组微核率16．8‰比较，差异均有显著性（P＜0．05），提示HPE降低CP致染色体损伤和抑制突变的作用非常显著，HPE与CP同时应用，其抑突变效果较CP作用后3h给予HPE为佳。     

蝙蝠葛酚性碱抗突变作用的研究

目的应用昆明小鼠股骨骨髓嗜多染红细胞微核实验,研究蝙蝠葛酚性碱(phenolic alkaloids from menispermum dauricum,PAMD)的致突变作用和抗突变作用.方法均在10～40 mg/kg剂量下,连续腹腔注射给药11d,在致突变实验,末次给药6 h后处死小鼠,检测骨髓嗜多染红细胞微核率.在抗突变实验,小鼠在于处死前的24 h,腹腔注射40 mg/kg环磷酰胺(cyclophosphamide,CP)或2 mg/kg丝裂霉素C(mitomycinc,MC),末次给药6 h后取样.结果蝙蝠葛酚性碱与对照组相比未诱发骨髓嗜多染红细胞微核率的增高(微核细胞率＜3‰).蝙蝠葛酚性碱可使环磷酰胺和丝裂霉素C诱发的骨髓细胞微核率增高数值出现明显的降低.PAMD CP组微核细胞抑制率分别为61.83%、43.51%和22.52%.PAMD MC组微核细胞抑制率分别为31.09%、21.50%和8.29%.结论蝙蝠葛酚性碱具有一定的抗突变作用,而无致突变作用.     

迷迭香酸对γ射线致小鼠骨髓嗜多染红细胞微核的保护作用

目的 研究迷迭香酸对γ射线致小鼠骨髓嗜多染红细胞微核的保护作用。方法 以骨髓嗜多染红细胞微核形成率为观测指标,C57BL／6J小鼠经⁶⁰Co γ射线1~3 Gy照射24 h后观察骨髓嗜多染红细胞微核发生率的变化以选择合适的照射剂量;C57BL／6J小鼠经⁶⁰Co γ射线2Gy照射后不同时间观察骨髓嗜多染红细胞微核发生率的变化以选择照射后取骨髓的时间;2 Gy照射前经迷迭香酸处理的C57BL／6J小鼠照后24 h观察骨髓嗜多染红细胞微核发生率的变化,以确定迷迭香酸对小鼠微核保护作用的剂量效应与时间效应。结果 2 Gy照射24 h后小鼠骨髓嗜多染红细胞微核发生率增加比较明显,适合作为小剂量照射条件;照射后24 h或48 h骨髓嗜多染红细胞微核发生率增加比其他时间明显;经迷迭香酸100 mg/kg连续7次处理后的受照射小鼠骨髓细胞中,微核发生率（6.50‰）明显低于单纯照射组（23.65‰）。结论 迷迭香酸对γ射线致骨髓嗜多染红细胞微核具有保护作用。     

脱氢乙酸小鼠骨髓细胞微核试验

目的：采用小鼠骨髓细胞微核试验,对脱氢乙酸进行体内致突变安全性评价。方法按照1/10 LD50、1/5 LD50和1/2 LD50设置三个剂量组,另设置阴性对照组和环磷酰胺（ CP）阳性对照组（100 mg·kg-1）。每组10只小鼠,雌雄各半,灌胃给药,两次攻毒时间间隔24 h。在第二次灌胃后6 h,处死小鼠,制片,观察并计数嗜多染红细胞的微核率,并与阳性对照组和隐形对照组进行比较分析。结果1/5 LD50、1/10 LD50剂量时,与正常对照组无显著差异;1/2 LD50剂量组与正常对照组有显著差异（ P﹤0.05）,但无剂量-效应关系。结论脱氢乙酸小鼠骨髓细胞微核试验结果为阴性。     

苯诱导小鼠骨髓嗜多染红细胞微核的研究

目的 探讨苯对小鼠体细胞遗传物质的影响.方法 采用静式吸入法染毒,将50只动物随机分成阴性对照组、阳性对照组及0.3、0.6、1.2g/m3 3个剂量组,剂量组每隔24h染毒1次,每次2h,共15d,取胸骨骨髓作微核计数,分析受试小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率.结果 苯染毒低、中、高3个剂量组的微核率与阴性对照组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）,并呈现剂量-反应关系.结论 苯能诱导小鼠体细胞微核增加.     

1,3-二苯-1,3-丙二酮对环磷酰胺诱导骨髓微核的预防保护作用

目的研究1,3-二苯-1,3-丙二酮（1,3-diphenyl-1,3-proanedione,DPPD）对环磷酰胺诱导小鼠骨髓细胞微核的保护作用和对小鼠骨髓细胞微核的影响。方法 40只小鼠随机分为8组,分别为阴性对照组,环磷酰胺阳性对照组,环磷酰胺＋DPPD低、中、高剂量组（62.5,250,1000 mg/kg）,DPPD低、中、高剂量组（62.5,250,1000mg/kg）,每组各5只。DPPD各剂量组小鼠经口给药30 d,每天1次。环磷酰胺采用30 h经口灌胃染毒。第2次染毒6 h后,小鼠麻醉脱臼处死,检测小鼠骨髓细胞微核率（千分率）。结果与阴性对照组比较,环磷酰胺阳性组小鼠骨髓细胞微核率明显升高（P〈0.01）,DPPD剂量组小鼠骨髓细胞微核率变化不明显（P〉0.05）;与环磷酰胺阳性组比较,环磷酰胺＋DPPD低剂量组（62.5 mg/kg）小鼠骨髓细胞微核率变化不明显（P〉0.05）,环磷酰胺＋DPPD中、高剂量组（250、1000 mg/kg）小鼠骨髓细胞微核率明显降低（P〈0.01）,微核抑制率分别为35.58%和61.54%。结论 30 d经口给予DPPD对小鼠骨髓细胞微核率没有影响,DPPD对环磷酰胺诱导小鼠骨髓细胞微核具有一定的预防保护作用。     

螺旋藻对辐射小鼠损伤的保护作用研究

目的 研究螺旋藻对^60Co-γ射线对辐射小鼠损伤的保护作用。方法对各组小鼠经口给予小鼠不同剂量螺旋藻14d，以^60Co-γ射线一次性照射后，测定小鼠的白细胞数、骨髓有核细胞数、骨髓细胞微核率、小鼠血中超氧化物歧化酶活性、小鼠血清溶血素。结果与辐射对照组比较，螺旋藻在中剂量组能提高辐照后第3天的小鼠外周血白细胞数（P〈0．05）、提高小鼠骨髓有核细胞数（P〈0．05）、提高照射后第7天辐射损伤模型小鼠血中超氧化物歧化酶活性（P〈0．05）、提高照射后第14天辐射损伤模型小鼠血清溶血素（P〈0．05），在高剂量组能提高辐照后第3天和第14天的小鼠外周血白细胞数（P〈0．05）、提高小鼠骨髓有核细胞数（P〈0．01）、降低小鼠骨髓细胞微核率（P〈0．05）、提高照射后第7天辐射损伤模型小鼠血中超氧化物歧化酶活性（P〈0．01）、提高照射后第14天辐射损伤模型小鼠血清溶血素（P〈0．05）。结论螺旋藻可增强小鼠机体抗氧化酶活性，对其血液系统、造血系统、免疫系统具有一定的辐射防护作用。     

3种微核检测方法的比较

目的探讨微核检测的最佳方法。方法20只小鼠随机分为实验组和阴性对照组,每组10只。实验组小鼠腹腔注射环磷酰胺60 mg.kg-1,阴性对照组小鼠腹腔注射生理盐水0.5 mL,2组均为每日1次,连续注射3 d。取小鼠的外周血、骨髓液和睾丸组织细胞,分别采用外周血微核检测方法、骨髓微核检测方法及睾丸微核检测方法观察微核结果。结果外周血微核检测方法未观察到微核;骨髓微核检测法微核很易观察到,细胞中出现1个、2个或3个微核的结果都清晰可见;睾丸微核检测方法观察到出现微核的细胞较少。骨髓微核检测法,实验组和阴性对照组的微核发生率分别为(7.5±1.34)‰和(2.9±0.38)‰,2组间有极显著差异(P<0.01);睾丸微核检测法实验组和阴性对照组的微核发生率分别为(5.5±0.84)‰和(1.5±0.41)‰,2组间有显著差异(P<0.05),且实验组微核发生率骨髓微核检测方法高于睾丸微核检测方法(P<0.05)。结论3种方法中骨髓细胞微核检测方法最佳。     

阿霉素对小鼠骨髓微核和染色体的影响

目的探讨阿霉素对小鼠骨髓微核和染色体的影响。方法将60只小鼠随机分为3组,每组20只,A组腹腔注射阿霉素溶液3mg·kg-1,B组腹腔注射阿霉素溶液5mg·kg-1,C组为对照组,腹腔注射生理盐水,均连续注射5d。染毒5d后,取小鼠骨髓进行微核实验和染色体制片,统计小鼠骨髓微核发生率和染色体畸变率。结果经阿霉素处理后的小鼠骨髓细胞,在主核附近出现1个或几个小的亮点,即为微核;骨髓细胞的染色体畸变主要表现为染色体的断裂和部分缺失。A组和B组的骨髓微核发生率和染色体畸变率与C组相比显著升高(P<0.05,P<0.01),且B组小鼠骨髓细胞微核发生率和染色体畸变率高于A组(P<0.05),呈一定的剂量依赖关系。结论阿霉素可致小鼠微核发生率增高、染色体损伤,对小鼠有遗传毒性作用。     

麦绿素遗传毒性实验研究

目的研究麦绿素的遗传毒性。方法污染物臻突变性检测(Ames实验)菌株鼠伤寒沙门菌组氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102,受试物设5个剂量组,分别为0.008、0.04、0.2、1.0、5.0 mg/皿,同时设自发回变和阳性对照;小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实验设2.5、5.0、10 g/kg体质量3个剂量组、溶剂对照组和阳性对照组;小鼠精子畸形实验设2.5、5.0、10 g/kg体质量3个剂量组、溶剂对照组和阳性对照组。结果 Ames实验表明受试物对TA97、TA98、TA100、TA102的4株实验菌株无论直接作用[不加大鼠肝微粒体酶(S-9)]或经代谢活化作用(加S-9)均不引起自发回变数增加;小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验表明受试物未使小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率发生改变;小鼠精子畸形实验表明受试物未引起小鼠精子畸形率增高。结论在实验条件下,Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形实验结果均为阴性,认为麦绿素无致突变性。     

参仙合剂对环磷酰胺小鼠骨髓抑制和血小板生成素影响的实验研究

目的研究中药参仙合剂对环磷酰胺模型小鼠骨髓抑制和血小板生成素的影响。方法将昆明种小鼠随机分为六组,每组8只,即空白组、模型组、阳性对照组、参仙合剂低剂量、中剂量、高剂量组。参仙合剂各组先予灌胃给药5 d,第6天开始除空白组外各组均予环磷酰胺100 mg.kg-1腹腔注射,连续3 d造模,阳性对照组皮下注射重组白细胞介素-11（rh LI-11）200μg.kg-1,连续6 d,参仙合剂各组继续灌胃给药6 d。定期检测各组小鼠白细胞（WBC）和血小板计数（PLT）,并于实验第12天检测小鼠骨髓巨核细胞数和血清及骨髓上清液中血小板生成素（TPO）。结果参仙合剂各组WBC、PLT和巨核细胞数显著高于模型组（P〈0.05或P〈0.01）;阳性对照组巨核细胞数显著高于模型组（P〈0.01）。参仙合剂各组与阳性对照组血清及骨髓上清中TPO浓度显著高于模型组（P〈0.01）,TPO与参仙合剂剂量正相关,具有显著的量效关系。结论参仙合剂可提高骨髓与血液中TPO水平,从而促进巨核细胞和血小板等生成,防治骨髓抑制。     

轮叶党参总皂甙对环磷酰胺诱发的小鼠骨髓细胞微核的拮抗作用

[目的 ]探讨轮叶党参总皂甙对环磷酰胺诱发的小鼠骨髓细胞微核的拮抗作用 .[方法 ]进行小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实验 .[结果 ]腹腔注射环磷酰胺可诱发的小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率明显增加 ,经口灌胃轮叶党参总皂甙的同时腹腔注射环磷酰胺 ,可使微核率显著下降 .[结论 ]轮叶党参总皂甙对环磷酰胺诱发的小鼠骨髓嗜多染红细胞微核有拮抗作用     

灵芝孢子粉提取物对甲醛所致小鼠遗传毒性干预研究

目的:探讨灵芝孢子粉提取液对甲醛所致小鼠遗传毒性的干预作用。方法:将昆明种小鼠随机分成4组,每组10只,分别为阳性对照组,高剂量、中剂量和低剂量灵芝液组,各组小鼠每天以10 mg/m3甲醛溶液静态染毒2h后,实验组分别以150、30和15 mg/(kg·d)剂量灵芝孢子粉提取液灌胃,阳性对照组以同等体积蒸馏水灌胃,染毒和灌胃过程持续14 d。14 d后,处死小鼠,检测各组小鼠的睾丸系数、精子畸形率和骨髓细胞微核率。结果:与阳性对照组比较,高、中、低剂量实验组小鼠的睾丸脏器系数均升高(P<0.01),以高、中剂量组显著;小鼠精子畸形率与骨髓微核率不同程度降低(P<0.01),而且存在明显的剂量效应关系。结论:灵芝孢子粉提取液对甲醛所致小鼠遗传毒性具有一定的保护作用。     

甲醛灌胃染毒对小鼠骨髓细胞微核率的影响

目的：研究甲醛灌胃染毒对小鼠骨髓细胞微核率的影响。方法：ICR小鼠30只,雌雄各半,随机分为4个组,即空白对照组、阳性对照组、低剂量组和高剂量组,每组10只,雌雄各半,用灌胃的方法给予实验组小鼠甲醛,1次／d,连续5d,阳性对照组给予环磷酰胺。染毒结束后,处死小鼠,取小鼠骨髓进行涂片,在显微镜下观察并计数含微核的嗜多染红细胞,并计算微核率。结果：高剂量组的微核率为（8．41±2．45）‰,低剂量组的微核率为（1．82±1．30）‰,空白对照组的微核率为（0．50±0．85）‰,与空白对照组相比,高剂量组的微核率明显增加,差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论：甲醛灌胃染毒对小鼠骨髓细胞微核率有一定的影响,可使小鼠骨髓细胞微核率上升。     

咪唑安定治疗小儿全身性癫痫持续状态的临床观察

目的探讨咪唑安定治疗小儿全身性惊厥性癫痫持续状态的临床疗效。方法将72例小儿全身性惊厥性癫痫持续状态患者随机分为两组,治疗组38例给予静脉注射负荷量咪唑安定0．3mg·kg^-1后,用注射泵持续泵人咪唑安定,从2μg·kg^-1·min^-1起,每15min增加1μg·kg^-1·min^-1,最大剂量10μg·kg^-1·min^-1,至惊厥停止后,维持给药24h。对照组给地西泮0．3mg·kg^-1静脉注射,最大剂量不超过10mg,惊厥未停止或又出现另一次惊厥发作者,15min后再次注射同等剂量地西泮,同时使用苯巴比妥20mg·kg^-1静脉注射,12h后按5mg·kg^-1肌注维持。结果（1）治疗组惊厥完全控制35例,无效3例;对照组惊厥完全控制25例,无效9例,两者之间差异有统计学显著意义（P〈0．05）;（2）治疗组停药后患儿完全恢复清醒状态时间平均（8．2±4．1）h,对照组平均（14．3±6．7）h,两者比较差异有统计学极显著意义（P〈0．01）;（3）治疗组惊厥控制时间平均为（38±23）min,对照组平均为（48±29）min,两者比较差异有统计学显著意义（P〈0．05）;（4）静注负荷量咪唑安定仅出现一过性心率和血压下降。结论咪唑安定治疗小儿全身性惊厥性癫痫持续状态疗效肯定。