大鼠肝氨甲酰磷酸合成酶I cDNA片段在肝癌及非肝细胞中表达体系的构建

观察０．５８７和０．７１２ｋｂＣＰＳＩｃＤＮＡ片段分别与ｐＳＶ＿２载体的重组质粒ｐＳＶ＿２－ＣＰＳ＿（５０５）和ｐＳＶ＿２－ＣＰＳ＿（５０７）在人肝癌和非肝细胞中的表达情况。结果证实，两种重组的表达质粒转染的７４０２人肝癌细胞和ＮＩＨ／３Ｔ３细胞均能有效地表达ＣＰＳＩ，ＣＰＳＩ基因的非翻译区顺序与其高度组织特异性无关。这些体系的建立为体外生产ＣＰＳＩ抗原和天然ＣＰＳＩ蛋白提供了细胞模型和实验依据，对深入了解ＣＰＳＩ的表达过程及其癌变和分化的关系具有重要的意义。     

大鼠肝氨甲酰酸合成酶IcDNA片段在肝癌及非肝细胞中表达体…

观察０．５８７和０．７１２ｋｂＣＰＳＩｃＤＮＡ片段分别与ＰＳＶ２载体的重组质粒ｐＳＶ２－ＣＰＳ５０５和ｐＳＶ２－ＣＰＳ５０７在人肝癌和非肝细胞中的表达情况。结果证实，两种重组的表达质粒转染的７４０２人癌细胞和ＮＩＨ／３Ｔ３细胞能有效地表达ＣＰＳＩ，ＣＰＳＩ基因的非翻译区顺序与其高度组织特异性无关。这些体系的建立为体外生产ＣＰＳＩ抗原和天然ＣＰＳＩ蛋白提供了细胞模型和实验依据，对深入了解ＣＰＳＩ的表     

重组丙型肝炎病毒基因载体的构建与表达

应用基因重组技术。从载体ＣＤＺ２酶切获得１．７３ｋｂＤＮＡ片段（含１６ｄ９３ｂｐ的ＨＣＶ结构区ｃＤＮＡ，其特异性已为ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ证实）。将ＨＣＶｃＵＮＡ片段插入载体ｐｃＤＮＡ３，构建ＨＣＶ重组体。经在大肠杆菌中表达，筛选、酶切分析，获得重组ＨＣＶ（ＰｃＤＮＡ３－ＨＣＶ）。以重组质粒转染Ｈ９细胞（ＣＤ淋巴细胞系），用Ｇ４１８筛选出抗性细胞。经ＲＴ－ＰＣＲ、ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ验证表明，ｐｃＤＮＡ３－ＨＣＶ能在Ｈ９细胞中进行复制、转录和表达。这为丙型肝炎发病机理的研究提供了一个有用模型。     

细胞因子对HCV基因疫苗诱生免疫反应的增强作用

目的 探讨细胞因子对丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）核心（Ｃ）基因疫苗诱生免疫应答强度的增强作用。方法 将包含ＨＣＶ－Ｃ蛋白的基因片段插入真核表达载体ｐｃＤＮＡ３中,构建重组质料ｐｃＤＮＡＨＣＶ－Ｃ,将此重组质粒单独或与包含鼠ＩＬ－２或ＩＬ－１２基因的表达质粒共免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,ＥＬＩＳＡ法检测ＨＣＶ Ｃ特异性抗体产生情况,以ｐｃＤＮＡＨＣＶ－Ｃ转梁小鼠ＳＰ２／０细胞,表达ＨＣＶ Ｃ抗原为靶细胞,进行     

重组人促红细胞生成素在COS-7细胞内表达的研究

目的：研究不同真核载体对人促红细胞生成素ｃＤＮＡ的表达效率。方法：人促红细胞生成素ｃＤＮＡ分别用真核表达载体ｐｃＤＮＡ３、ｐｃＤＩ、ｐＡｄＣＩ进行重组，脂质体法转化ＣＯＳ ７细胞，以ＴＦ １细胞检测ＥＰＯ的表达活性。结果：感染ｐｃＤＮＡ３ ＥＰＯ，ｐｃＤＩ ＥＰＯ，和ｐＡｄＣＩ ＥＰＯ的ＣＯＳ ７细胞培养上清中人促红细胞生成素活性分别为０５×１０２，１５×１０３和２２×１０２。结论：已构建成可表达具生物活性的重组人促红细胞生成素的真核表达克隆，嵌合内含子序列可增强人促红细胞生成素ＣＤＮＡ的表达效率     

重组人白细胞介素—12在昆虫细胞中的表达

采用含ｈＩＬ－１２ｐ３５和Ｐ４０两个亚基基因的重组质粒Ｐ２Ｂａｃ－ｈＩＬ－１２ｐ３５ｐ４０与野生型杆状病毒通过Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ膜融合法进行同源重组，产生的重组籽状病毒感染培养的昆虫细胞Ｓｆ９和Ｓｆ２１，进行重组蛋白的表达。用ｒｈＩＬ－１２酶标试剂盒检测，证实ｒｈＩＬ－１２的表达峰值约为５ｍｇ／Ｌ，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示２条重组蛋白条带，分子量为８７ｋｕ和４０ｋｕ。ＰＨＡ淋巴细胞增殖试验显示，重组     

HCV定量RT—PCR竞争性参比标准的构建

将克隆的ＨＣＶ５‘ＮＣＲ序列反向插入ｐＳＰ７２的Ｅｃｏ ＲＶ切点，构建一种能转录ＨＣＶ－ＲＮＡ的质粒ｐＳｎｃ－２。以ＲＴ－ＰＣＲ从抗ＨＥＶ ＩｇＭ阳性病人血浆中扩增一段２３８ｂｐ的ＨＣＶ－ｃＤＮＡ反向插入ｐＳｎｃ－２中克隆的５’ＮＣＲ序列的ＮｃｏＩ切点，构建插入突变型ＨＣＶ－ｃＤＮＡ重组体ｐＳｎｃ－ｅ。     

HCV 定量 RT-PCR 竞争性参比标准的构建

将克隆的ＨＣＶ５’ＮＣＲ序列反向插入ｐＳＰ７２的ＥｃｏＲＶ切点，构建一种能转录ＨＣＶ－ＲＮＡ的质粒ｐＳｎｃ－２。以ＲＴ－ＰＣＲ从抗ＨＥＶＩｇＭ阳性病人血浆中扩增一段２３８ｂｐ的ＨＣＶ－ｃＤＮＡ，反向插入ｐＳｎｃ－２中克隆的５’ＮＣＲ序列的ＮｃｏⅠ切点，构建插入突变型ＨＣＶ－ｃＤＮＡ重组体ｐＳｎｃ－ｅ。应用限制性酶切和ＰＣＲ对这两种重组质粒进行了鉴定，为ＨＣＶ－ＲＮＡ的定量ＰＣＲ提供有用的内参照模板。     

弓形虫P30基因在真核系统中的表达

采用聚乙二醇沉淀法纯化克隆刚地弓形虫Ｐ３０基因的转移载体质粒ｐＳＸＩＶＶＩ＾＋Ｘ３－Ｐ３０ ＤＮＡ；将ｐＳＸ－ＩＶＶＩ＾＋Ｘ３－Ｐ３０ＤＮＡ与粉纹夜蛾核型多角体缺陷型病毒ＴｎＮＰＶ－ＳＶＩ－ＧＤＮＡ共转染草地夜蛾细胞，构建出既能形成多角体又能表达外源基因的重组病毒ＴｎＮＰＶ－Ｐ３０。     

重组人单链白细胞介素12融合基因（rhscIL—12）的构建和真？…

目的 克隆人ＩＬ－１２（ｈＩＬ－１２）ｐ４０和ｐ３５亚单位ｃＤＮＡ，构建人单链ＩＬ－２（ｒｈｓｃＩＬ－２）融合基因，并在哺乳动物细胞中进行表达。方法从经ＰＤＢｕ刺激的ＥＢＶ转化的人Ｂ淋巴细胞株ＮＣ３７中提取ｍＲＮＡ，经ＲＴ－ＰＣＲ分别获得ｈＩＬ－１２ｐ４０和ｐ３５亚单位编码序列的ｃＤＮＡ，运用重组ＰＣＲ技术将两段基因通过一疏水性多肽接头（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３ＤＮＡ序列进行体外基因重组，构建ｒｈｓｃＩ