中国人血浆DNA定量多中心合作研究进展

血浆DNA(plasma DNA)又被称为循环DNA(circulating DNA),是存在于循环血液中的细胞外DNA(cell-free DNA),它可以以DNA-蛋白质复合物的形式存在,也可以游离DNA片断形式存在.     

用原子力显微镜表征DNA纯化效果的实验研究

目的:运用原子力显微镜(AFM)表征3种DNA纯化试剂盒对DNA的纯化效果。方法:PCR扩增K562/A02细胞mdr1基因DNA,分别以3种不同的DNA纯化试剂盒对PCR产物进行纯化后,按终浓度为10 ng.μl-1固定在用1 ng.μl-1L型多聚赖氨酸预先处理过的新剥离的云母片上,用AFM获取DNA扫描图像,分析评价3种DNA试剂盒对DNA的纯化效果。结果:用AFM成功表征3种纯化试剂盒纯化后DNA片段,获得了清晰的DNA图像。对3种DNA纯化试剂盒的纯化效果作出评价,建议其中的两种DNA纯化试剂盒的DNA纯化产物可用于AFM的DNA分析。结论:用AFM表征DNA时对DNA的纯度要求较高。通过对3种DNA纯化试剂盒纯化效果的比较,为AFM观测DNA样本的纯化方法提供了较好的方案。     

DNA适体筛选中双链DNA拆分方法研究

目的研究能够用于DNA适体筛选的双链DNA拆分方法。方法采用琼脂糖凝胶电泳,观察和比较λ核酸外切酶法、不对称PCR法、磁珠法以及琼脂糖凝胶法的拆分效果。结果琼脂糖凝胶电泳显示,λ核酸外切酶法不能充分拆分双链DNA形成单链DNA;不对称PCR法产生的非特异性单链DNA较多;磁珠法拆分双链DNA获得单链DNA的量较低,且成本较高;琼脂糖凝胶法拆分双链DNA较为充分,单链DNA纯度较高。结论琼脂糖凝胶法可用于DNA适体筛选中双链DNA的拆分。     

改良盐析法提取全血基因组DNA的影响因素研究

目的 观察红细胞裂解时间、DNA纯化方式以及DNA干燥时间对改良盐析法提取全血基因组DNA的影响.方法 改良盐析法提取全血基因组DNA时,分别采用不同的红细胞裂解时间、DNA纯化方式以及DNA干燥时间.使用流式细胞术检测红细胞裂解后的细胞总数及死细胞比例,紫外分光光度计检测DNA的浓度和纯度,琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物.结果 红细胞裂解时间从10 min延长至120 min,死细胞比例随时间延长而增加,但细胞总数、DNA产量与纯度无明显变化;采用异丙醇沉淀法纯化DNA得到的DNA产量与纯度均显著高于使用DNA分离柱纯化的DNA; DNA干燥时间从120 min缩短至30 min,既不影响DNA的产量与纯度,也不影响后续PCR扩增实验.结论 改良盐析法提取全血基因组DNA时,红细胞裂解时间可延长至120 min,DNA干燥时间可缩短至30 min,异丙醇沉淀法优于DNA分离柱纯化的DNA.     

DNA分子标记在中药鉴定中的应用进展

DNA分子标记包括以分子杂交(southern杂交)为基础的DNA分子标记技术、以PCR为基础的DNA分子标记技术和以DNA序列为基础的分子标记技术和DNA序列测定技术.本文概述了常用DNA分子标记技术的特点,对近年来DNA分子标记在中药鉴定中的应用进行了综述.     

线粒体DNA突变及其与衰老的关系

真核生物基因组可以分为核 DNA ( n DNA,nuclear DNA)和线粒体 DNA ( mt DNA,mitochondrial DNA)二部分。哺乳类动物的mt DNA大小相近 ,基因的组织和定位也相似。人mt DNA由 1 65 69bp组成 ,是一个双链闭环分子 ,存在于线粒体基质中。它含有 37个基因 :2个r RNA( 1 2 s、1 6sr     

模版合成DNA纳米管:用于基因和药物输送纳米新技术

利用氧化铝多孔膜作为模板合成了DNA纳米管,DNA纳米管由单链DNA片段杂交在氧化铝多孔膜内以DNA双链杂交组成;药物分子和DNA片段相连后,可把药物分子包覆于DNA纳米管中。加热时,双链DNA纳米管分解,释放出单链DNA分子,以此可实现基因和药物分子的可控输送和释放。     

高载量血清乙肝病毒DNA的乙肝携带者精浆和精子感染乙肝病毒的特征

目的探讨高载量血清乙肝病毒核酸(HBV DNA)的乙肝携带者精浆和精子感染HBV的特征.方法选择男性乙肝大三阳携带者61例,根据血清HBV DNA数量级分为108组和107组,采用荧光定量PCR (FQ-PCR)法测定其精浆中的HBV DNA,用PCR法制备地高辛(Dig)标记的HBV DNA探针通过荧光原位杂交(FISH)技术检测精子中的HBV DNA.结果108组和107组精浆HBV DNA的阳性率分别为90.3%和40.0%,差异有统计学意义(P<0.01);与HBV DNA探针杂交后精子细胞可见清晰的绿色荧光信号,108组和107组精子标本HBV DNA的阳性率分别为25.8%和16.7%,差异无统计学意义(P>0.05);两组精浆HBV DNA的阳性率均明显高于精子标本HBV DNA的阳性率(均P<0.05).结论高载量血清HBV DNA的乙肝大三阳携带者的精浆HBV DNA阳性率与其血清HBV DNA载量密切相关,其精子HBV DNA的阳性率不受血清HBV DNA载量影响,但明显低于精浆HBV DNA的阳性率.     

Template synthesis of DNA nanotube:-New gene and drug delivery vehicle

利用氧化铝多孔膜作为模板合成了DNA纳米管,DNA纳米管由单链DNA片段杂交在氧化铝多孔膜内以DNA双链杂交组成；药物分子和DNA片段相连后,可把药物分子包覆于DNA纳米管中.加热时,双链DNA纳米管分解,释放出单链DNA分子,以此可实现基因和药物分子的可控输送和释放.     

一种高效扩增小片段DNA方法的建立

目的建立一种高效扩增小片段DNA的方法。方法 本方法利用单链DNA连接酶(single strand DNA ligase,ssDNA ligase)可以连接单链DNA的性质将小片段DNA自连成环,随后利用phi29DNA聚合酶进行恒温的滚环复制,将扩增产物进行酶切,得到了扩增后的小片段DNA。结果 单链DNA连接酶可以有效的将30bp的小片段DNA自连成环,phi29DNA聚合酶可以扩增出大于10kb的DNA片段,扩增产物经酶切后又可进行第二轮扩增,并且证明了其成环方式为自成环。结论 通过单链成环后滚环复制的这种方法可以有效的将小片段DNA进行扩增,解决了PCR无法扩增小片段DNA的问题,并有着广阔的应用前景。     

DNA甲基化与肿瘤

DNA甲基化是最早发现的基因修饰途径之一,可引起染色质结构、DNA构象、DNA稳定性及DNA与蛋白质相互作用方式的改变,控制基因表达。肿瘤中普遍存在DNA甲基化状态的改变,DNA甲基化在肿瘤的发生发展中的作用是当前的研究热点。     

产妇血清HBV DNA含量对乳汁和新生儿血清HBV DNA浓度的影响

 【目的】 探讨乙型肝炎病毒携带产妇血清HBV DNA含量对乳汁和新生儿血清中HBV DNA含量的影响,以指导孕期处理和母乳喂养。【方法】 选择乙型肝炎病毒携带产妇145例,采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术对产妇血清,母乳和新生儿血清HBV DNA进行检测,并将产妇血清HBV DNA浓度分3级,分析产妇血清不同HBV DNA浓度级对乳汁及新生儿血清HBV DNA浓度的影响。【结果】 血清HBV DNA < 500 copies/mL的产妇74例,乳汁中检出HBV DNA阳性为零,新生儿血清HBV DNA阳性1例;血清HBV DNA浓度为500 ~ 1.0 × 106 copies/mL产妇30例,乳汁中检出HBV DNA阳性为3例,新生儿血清HBV DNA阳性1例;血清HBV DNA浓度为≥1.0 × 106 copies /mL产妇41例,乳汁中检出HBV DNA阳性为36例,阳性率为87.8%,新生儿血清HBV DNA阳性仅3例。【结论】 产妇血清中HBV DNA≥1.0 × 106 copies/mL时, 乳汁中HBV DNA阳性率大幅度增加, 而当产妇血清HBV DNA浓度小于1.0 × 106 copies/mL, 乳汁中HBV DNA检出率极低?产妇血清HBV DNA浓度对宫内感染影响不大。     

应用特异双引物法标记DNA探针

作者应用位于探针DNA两端的两个DNA片段作引物,以探针DNA为模板,在大肠杆菌DNA聚合酶I的介导下,经过1—3次变性、退火和延伸过程,使探针DNA得到标记.3次实验结果表明,应用此法标记的DNA探针的比活性可以达到2×10~(14)cpm/g DNA,标记效率大于60％;而用缺刻翻译法标记的DNA探针,其标记效率只有22.7％.表明这是一种较好的DNA探针标记方法.     

石蜡包埋宫颈组织中三种DNA提取方法的比较

目的:通过比较了三种不同的DNA提取方法对DNA质量的影响,旨在寻找一种高效、简便、实用的石蜡组织中DNA提取方法.方法:取10%甲醛固定石蜡包埋的宫颈组织标本(宫颈癌及宫颈上皮内瘤变标本),分别以二甲苯脱蜡及酚氯仿法提纯DNA(方法1)、,IES水浴脱蜡及酚氯仿提纯DNA(方法2)、IES水浴脱蜡及试剂盒提纯DNA(方法3),然后进行电泳和聚合酶链反应扩增分析.结果:TES;水浴脱蜡及酚氯仿法提纯DNA所得样本·DNA的0D260/0D280比值为1.85±0.22,TES水浴脱蜡及试剂盒提纯DNA法为1.81±0.12,两者比较无显著差异(P>0.05);桓分别和二甲苯脱蜡及酚氯仿提纯DNA法相比较有显著差异(P>0.01).DNA电泳和PGR扩增结果示IES水浴脱蜡及酚氯仿提纯DNA、TES水浴脱蜡及试剂盒提纯DNA所得DNA质量均高于二甲苯脱蜡酚氯仿提纯DNA法.结论:TES水浴脱蜡及试剂盒提纯DNA法简便快捷,是理想的石蜡包埋组织DNA提纯方法.     

一种从石蜡包埋组织中获取高质量基因组DNA的改良方法

目的:比较现有的DNA制备方法,建立一种从甲醛固定石蜡包埋组织(formalin-fixed paraffin-embedded tissues,FFPET)提取高质量基因组DNA的方法。方法:将传统基因组DNA提取方法与市场供应的DNA亲和层析柱结合在一起,以水浴脱腊法替代二甲苯脱腊法,设计一种改良的基因组DNA快速提取方法,从石蜡包埋宫颈癌组织标本提取基因组DNA,并用琼脂糖凝胶电泳法和聚合酶链式反应法进行鉴定。结果:改良的基因组DNA提取法整合了水浴脱蜡与DNA亲和层析柱的优点,从石蜡包埋宫颈癌组织中获得了高质量的基因组DNA,特别是能以很高的效率回收大于20 kb的基因组DNA大片段。结论:改良的基因组DNA提取方法简单快捷,是一种从石蜡包埋组织中回收高质量基因组DNA的有效途径。     

高双链含量DNA的选择及其临床应用

目的:用32P-DNA探针优化选择高双链含量DNA,用于检测抗双链DNA抗体。方法:分子杂交技术比较四种DNA双链含量;ELISA法检测系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者血清抗双链DNA含量。结果:大肠埃希菌W1485DNA与SigmaDNA的双链含量相接近,可以用作抗原,成功检测SLE患者血清抗双链DNA抗体。结论:大肠埃希菌W1485DNA为临床应用提供了高质量低成本的双链DNA试剂。     

合成DNA片段的分离及连接

研究设计了一段带终止信号的DNA序列,通过DNA合成仪分为四个片段合成。本文介绍经DNA合成仪合成DNA片段后的处理,纯化及连接过程.经测定DNA的连接效率在65％左右。     

几种水稻田土壤微生物总DNA提取方法的比较

目的：使人们在提取土壤总DNA时,可以根据不同的要求选用不同的方法。方法：选用了5种现在较常用的土壤微生物总DNA提取方法从水稻田土壤中提取总DNA,并对5种方法提取的DNA的质量和数量进行比较评价。结果：5种方法都可以从土壤中提取到长度大于48kb的DNA片段,但不同方法提取的DNA的产量存在明显差异。土壤总DNA都不需要纯化就可以用于PCR扩增,使用细菌16SrDNA基因的引物可以扩增得到相应的片段。结论：Bourrain法和Martin-Laurent法可以较快地提取出DNA,Martin-Laurent法提取的DNA的量最多,Tiedje法和Janssen法提取的DNA片段最大,Janssen法提取的DNA纯度最高,Reddy法提取的DNA的完整性和PCR扩增效果最好。     

基于DNA折纸的DNA复制的单分子检测和表征

目的探索DNA复制的单分子检测和表征途径。方法单链DNA模板链的两端通过碱基互补配对固定在DNA折纸纳米
结构上,利用原子力显微镜（AFM）在单个DNA分子水平上对复制过程中的DNA分子的不同阶段进行检测和表征,其中包括：
复制前后的形貌,复制过程中大肠杆菌DNA聚合酶ⅠKlenow Fragment片段（KF）的分布,以及复制后Biotin-Streptavidin（BA）
分子识别反应在单个DNA链上所引起的进一步形貌变化。同时,采用常规的琼脂糖凝胶电泳方法分析DNA复制前后的变化
情况。结果（1）DNA模板链成功连结在三角折纸的特定位点,连接效率达到50%以上;（2）DNA复制过程中,KF结合在DNA
模板链上,复制后KF从DNA链脱离;（3）复制前后DNA链高度变化明显,DNA链高度增加了约0.7 nm;（4）复制后,当加入
Streptavidin时,其结合于含有Biotin标记的新合成DNA链位置处,形成BA复合物,平均高度达到约4.9 nm;（5）琼脂糖凝胶电
泳结果也显示单链DNA变为双链,以及双链DNA分子上结合的BA复合物。结论通过将AFM与DNA折纸技术相结合,可实
现单分子水平上的DNA复制的检测和表征,此方法将有助于研究DNA聚合酶的作用机制以及不同因素对DNA复制的影响。
     

DNA损伤修复基因与辐射损伤及肿瘤的相关性

DNA分子是生命体的遗传物质基础，也是辐射损伤的重要靶分子。细胞受到照射，DNA分子将产生多种类型的损伤，包括碱基错配、修饰、脱嘌呤或脱嘧啶位点形成、DNA单链、双链断裂以及DNA蛋白质交联等。如得不到及时有效修复，或发生错误修复。使损伤积累至一定程度就可导致疾病。然而，生物体内存在着DNA损伤修复系统，其中DNA损伤修复基因起着重要的作用。DNA损伤修复基因泛指那些编码产物在功能上参与DNA损伤识别和修复的基因；它们的编码产物包括DNA修复酶和参与DNA损伤识别及修复调节的一些元件。在它们的共同作用下，细胞主要通过碱基切除修复（BER）、核酸切除修复（NER）、错配修复（MMR）和重组修复（RR）等方式来修复DNA损伤。当然，一种DNA损伤可以通过多种修复途径来修复。一种修复途径也可以参与多种DNA损伤的处理。