宫颈癌组织中DACT2启动子甲基化与宫颈癌细胞侵袭和转移的关联

目的：探究宫颈癌组织中β-环连蛋白抑制基因2 (DACT2)启动子甲基化与宫颈癌细胞侵袭和转移的相关性。方法：选择2020年1月—2022年3月在南阳市第一人民医院就诊的60例宫颈癌患者作为观察组,再选择同期60例健康体检者作为对照组,采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和实时荧光定量RT-PCR检测DACT2 mRNA的表达,并对DACT2进行免疫组化观察;通过甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)和亚硫酸氢盐基因组测序(BGS)分析DACT甲基化水平。采用Pearson检验法,分析DACT2启动子甲基化与宫颈癌细胞侵袭和转移的关联性。结果：对比宫颈癌患者的病理特征中分期、有无细胞转移以及宫颈浸润深度患者所占百分比,差异有统计学意义(t=4.747、5.368、0.834,P<0.05),而年龄和肿瘤大小比较,差异无统计学意义(t=1.004、0.895,P>0.05);宫颈癌组织、癌旁组织和正常组织中DACT2去甲基化发生率分别为45.00%、6.67%和5.00%,差异有统计学意义(χ²=26.454,P<0.05);宫颈癌甲基化组DA...     

卵巢上皮性癌组织中SFRP5基因启动子区甲基化与β-catenin蛋白表达检测

目的:检测卵巢上皮性癌组织中SFRP5基因启动子区甲基化与β-catenin蛋白的表达。方法:应用甲基化特异性PCR法和免疫组织化学SP法分别检测20例正常卵巢上皮组织、20例卵巢交界性上皮性肿瘤组织以及40例卵巢上皮性癌组织中SFRP5基因启动子区甲基化状态以及β-catenin蛋白的表达。结果:在正常卵巢上皮、卵巢交界性上皮性肿瘤以及卵巢上皮性癌组织中,SFRP5基因启动子区甲基化率分别为0.0%、10.0%、67.5%,差异有统计学意义(P<0.001);β-catenin蛋白的异常表达率分别为5.0%、40.0%、72.5%,差异有统计学意义(χ2=24.962,P<0.001)。卵巢上皮性癌组织中β-catenin蛋白的异常表达与SFRP5基因启动子区甲基化有关联(rP=0.468,P<0.001)。结论:SFRP5基因启动子区甲基化可能导致β-catenin蛋白异常表达,并可能通过激活Wnt/β-catenin信号传导通路促进卵巢上皮性癌的发生发展。     

膀胱移行细胞癌WWOX基因启动子区甲基化及mRNA表达及其临床意义

目的探讨膀胱移行细胞癌组织中WWOX基因启动子区CpG岛的甲基化状态以及WWOX基因表达缺陷的意义及其与CpG岛甲基化的关系。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)和实时荧光定量反转录聚合酶链反应(real-time RT-PCR)分析WWOX基因启动子区甲基化状态和WWOX mRNA表达量及其二者的相关性。结果 54例膀胱癌组织中,WWOX基因启动子区的甲基化率达35.2%,而对应的癌旁正常组织中甲基化率仅为7.4%,二者差异有统计学意义(χ2=12.43,P<0.05)。WWOX基因启动子区甲基化率随着癌组织分级的增加逐渐升高(P<0.05)。WWOX mRNA在膀胱癌组织中的表达量明显低于对应的癌旁正常组织中的表达量,二者差异有统计学意义(t=9.73,P<0.05)。WWOX mRNA的表达水平与WWOX基因启动子区的甲基化状态密切相关(r=0.377,P<0.05)。结论 WWOX基因表达的缺失与膀胱癌的发生有密切的关联,WWOX启动子区的异常甲基化是导致膀胱癌组织WWOX mRNA转录受阻的重要原因之一。WWOX启动子区甲基化改变在膀胱移行细胞癌的早期发生发展中有重要作用。     

PTEN甲基化及其异常表达与膀胱移行细胞癌的关系

目的探讨PTEN基因启动子甲基化及其mRNA异常表达与膀胱移行细胞癌临床及病理特征的关系。方法应用甲基化特异性PCR(MSP)法检测膀胱移行细胞癌组织(48例)和正常膀胱组织(15例)PTEN基因启动子甲基化状态,应用RT-PCR技术检测其mRNA的表达水平。结果膀胱癌组织中PTEN启动子甲基化率为47.9%(23/48),而在15例正常膀胱组织中其启动子未发生甲基化,两组间差异具有统计学意义(P<0.01);PTEN基因mRNA在膀胱癌组织和正常膀胱组织中的阳性表达率分别是56.2%(27/48)和100.0%(15/15),两组间差异有统计学意义(P<0.01);PTEN基因启动子甲基化率与其mRNA表达水平在不同病理分级、临床分期间差异有统计学意义(P<0.05),且PTEN启动子甲基化与其mRNA表达存在明显关联性(χ2=21.372,r=0.555,P<0.01)。结论 PTEN基因启动子甲基化可导致其mRNA表达的缺失,对膀胱移行细胞癌的发生及转移有着极其重要的影响。     

肾透明细胞癌中β-环连蛋白抑制基因1启动子CpG岛甲基化与其失表达相关

目的:探讨肾透明细胞癌中β-环连蛋白抑制基因1(dapper homolog 1,antagonist of beta-catenin,Dact1)表达与其启动子CpG岛甲基化状态的关系,并探究他们之间的关系及在肾透明细胞癌发生中的作用。方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)分别检测30例癌组织及相应的癌旁对照组织中Dact1基因mRNA的表达和其启动子甲基化状态。结果:癌组织组中,19例Dact1基因mRNA失表达(63%),7例表达低于癌旁对照组(23%);癌旁对照组织组中,2例Dact1基因mRNA低表达(6%)。Dactl基因在癌组织、癌旁对照组织中的甲基化阳性率分别为70%、6%,2组比较差异有统计学意义(P < O.001),Dactl基因mRNA的失表达或低表达与其启动子甲基化状态的相关性分析有统计学意义(P < 0.05)。结论:Dact1基因mRNA的失表达或低表达可能参与了肾透明细胞癌的发生发展,其失表达可能与Dactl启动子区异常甲基化相关。     

Jade-1及β-catenin在肾癌组织中的表达及临床意义

目的研究Jade-1基因及蛋白在肾癌组织中的表达及与肾癌临床病理学特征的关系,并分析其与β-catenin的相关性。方法应用免疫组化和荧光定量RT-PCR检测60例肾癌和11例正常组织中Jade-1和β-catenin的蛋白和mRNA表达情况,并结合临床病理资料进行分析。结果 (1)肾癌组织Jade-1蛋白mean density(MD)值0.1655(0.1191,0.2830)和正常组织0.7438(0.7190,0.8059),mRNA的表达是正常的0.202倍,蛋白和mRNA表达均显著低于正常(P<0.05);β-catenin蛋白肾癌组织MD值0.2756(0.2178,0.3738)和正常组织0.0855(0.0366,0.1029)相比显著升高(P<0.05),mRNA表达水平是正常的1.014倍比较无明显差异(P>0.05)。(2)在肾透明细胞中,高级别肾癌组织中Jade-1蛋白表达量显著低于低级别肾癌组织(P<0.05),β-catenin蛋白表达显著高于低级别肾癌组织(P<0.05)。(3)Jade-1和β-catenin的蛋白在肾癌组织中的表达呈负相关(r=-0.695,P<0.01)。结论在肾癌中,Jade-1在肾癌组织中蛋白和mRNA表达均减少,且表达减少与β-catenin表达增加高度负相关;Jade-1的表达降低可能是β-catenin在肾癌发生过程中发挥作用的重要机制之一。     

DAPK基因启动子区过甲基化与颈段食管癌的关系

目的 探讨死亡相关蛋白激酶基因启动子区过甲基化与颈段食管癌的关系.方法 采用甲基化特异性PCR(MSP)法和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法分析颈段食管部正常黏膜、颈段食管癌及相应癌旁组织中DAPK基因启动子区过甲基化及其mRNA表达状况.结果 42例颈段食管癌组织中,有27例(64.3%)DAPK基因启动子区过甲基化,其在各病理分级和T分级之间差异无统计学意义(P>0.05),而在N分级之间差异有统计学意义(P<0.05).25例癌旁组织中,有6例过甲基化,且均为颈段食管癌组织中有过甲基化的病例.颈段食管部正常组织、非甲基化的颈段食管癌组织和癌旁组织中均有DAPK mRNA表达.结论 颈段食管癌中DAPK基因启动子区过甲基化与mRNA失表达有关,可能是颈段食管癌发生、发展的原因之一.     

食管鳞状细胞癌中WIF-1基因启动子区甲基化状态及mRNA表达的研究

目的探讨食管鳞状细胞癌(ESCC)中WIF-1基因启动子甲基化状态及mRNA表达水平及其与病理指标之间的关系。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)技术和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测62例ESCC组织及30例癌旁组织中WIF-1基因启动子区甲基化状态和mRNA的表达水平,应用SPSS13.0探讨其与临床病理资料的关系。结果 WIF-1基因在癌组织中的甲基化率59.7%(37/62)明显高于癌旁组织13.3%(4/30),差异有显著性(P<0.05);其甲基化状态与年龄、分化程度及淋巴结转移情况相关(P<0.05);而与其他临床资料(性别、部位、浸润深度、临床分期)无明显相关性(P>0.05)。WIF-1基因mRNA在ESCC组的表达量(0.565±0.112)显著低于癌旁正常组(0.666±0.107),差异有显著性(P<0.05)。结论 WIF-1基因启动子甲基化在食管鳞癌的进展过程中起着重要的作用;WIF-1基因mRNA表达异常可能与ESCC的发生有关,此基因甲基化与mRNA表达两者之间的关系有待进一步研究。     

胃癌及癌旁组织中Runx3基因甲基化研究及临床意义

目的:探讨Runx3基因启动子区域甲基化及表达在胃癌发生和发展过程中的意义。方法:采用DNA甲基化特异性PCR(MSP)技术对35例胃癌患者手术切除肿瘤组织及其癌旁组织Runx3基因启动子区域甲基化进行检测,同时采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Runx3 mRNA的表达情况。结果:Runx3基因在35例胃癌及其癌旁组织中甲基化率分别为40.0%(14/35)和8.5%(3/35);胃癌组织标本中Runx3基因表达(0.593 8±0.100 7)较癌旁正常组织表达(0.831 1±0.287 2)明显下调,差异有统计学意义(P﹤0.05)。Runx3 mRNA在胃癌标本的表达与其病理临床特征密切相关,在伴有淋巴结转移和低分化的胃癌组织标本中Runx3 mRNA的表达显著下调(P﹤0.05)。结论:Runx3基因启动子区域甲基化是导致Runx3基因失活的主要原因之一,与胃癌的发生发展密切相关,可作为胃癌早期诊断的分子标记物及分子治疗的靶点。     

贲门腺癌Wif-1基因启动子区甲基化状态的检测及临床意义

目的 研究贲门腺癌(gastric cardiac adenocarcinoma,GCA)中Wnt抑制因子-1(Wnt inhibitory factor-1,Wif-1)基因启动子区甲基化状态及表达情况,探讨其与贲门癌发生的关系及可能机制.方法 分别用巢式甲基化特异性PCR(MSP)和RT-PCR方法检测贲门腺癌及相应正常黏膜组织中Wif-1基凶的甲基化状态和mRNA表达水平;应用免疫组化S-P法检测β-catenin蛋白的表达情况.结果 Wif-1基凶在贲门腺癌及正常黏膜组织中的甲基化率分别61.7%(58/94)和34.0%(32/94),癌组织中Wif-1基因的甲基化率明显高于正常黏膜组织(χ~2=14.409,P=0.000);癌及正常黏膜组织中Wif-1基因mRNA的阳性表达率分别为10.6%(10/94)和86.2%(81/94),β-catenin蛋白的异质表达率分别为90.4%(85/94)和38.3%(36/94),癌组织中Wif-1 mRNA表达及β-catenin蛋白的表达均与Wif-1基因的甲基化明显相关(P<0.01);Wif-1基因的甲基化与肿瘤的浸润深度及淋巴结转移相关(P<0.05),而与肿瘤的病理分级及临床分期无关.结论 Wif-1基因启动子区甲基化在贲门腺癌中频繁发生,可能通过引起经典Writ/β-catenin通路的异常激活与贲门腺癌的发生密切相关.     

β-环连蛋白及其mRNA在肾癌中的表达

目的　探讨β -环连蛋白在肾癌发生发展过程中的作用及其变化机制。方法　我们采用免疫组织化学、Westernblot、RT -PCR等方法对本院收治的 2 6例肾癌患者手术标本进行了研究。结果　 2 6例患者中有 2 5例癌组织中细胞胞浆内β 环连蛋白表达明显高于正常组织内 ,而且肿瘤分期越高 ,癌细胞内β 环连蛋白的表达也越强 ,pT3和pT4期的肿瘤内的表达明显高于pT1和pT2期的肿瘤 ,P <0 .0 1,而其β -环连蛋白mRNA的表达水平并无明显变化。结论　细胞内 β -环连蛋白表达的增加与肾癌的发生发展有关 ,而且可能是肾癌形成和发展的重要机制之一。     

急性白血病患者WIF-1基因启动子甲基化及β连环蛋白表达的研究

目的 探讨急性白血病(AL)患者Wnt抑制因子1(WIF-1)基因启动子甲基化及β连环蛋白(β-catenin)的表达在白血病中的意义.方法 采用甲基化特异性PCR检测山东大学附属千佛山医院2009年1月至2010年6月55例AL患者及对照组骨髓单个核细胞WIF-1基因启动子甲基化情况,流式细胞术检测AL患者及对照组骨髓单个核细胞β-catenin表达.结果 32.7％(18/55)的AL患者WIF-1基因启动子区域有异常甲基化,对照组末检测到WIF-1基因甲基化,两组差异有统计学意义(P＜0.05).甲基化组首次诱导治疗完全缓解率(38.9％,7/18)低于非甲基化组(81.1％,30/37),差异有统计学意义(P＜0.05).甲基化组与非甲基化组β-catenin的表达(17.5％±3.3％、15.4％±3.6％)均高于对照组(10.5％±1.5％,均P＜0.05);甲基化组β-catenin的表达高于非甲基化组(P＜0.05).结论 WIF-1基因启动子甲基化及β-catenin过表达可能参与了AL患者Wnt/β-catenin途径的异常激活.     

卵巢浆液性囊腺癌组织中β-连环蛋白的表达及其意义

目的：研究卵巢浆液性囊腺癌组织中β-连环蛋白（β-catenin）的表达,阐明β-连环蛋白在卵巢浆液性囊腺癌诊断中的临床意义。方法：采用RT-PCR法检测36例卵巢浆液性囊腺癌、10例卵巢浆液性囊腺瘤及10例正常卵巢组织β-连环蛋白mRNA的表达量。应用免疫组织化学方法检测β-连环蛋白在60例卵巢浆液性囊腺癌、24例卵巢浆液性囊腺瘤及24例正常卵巢组织中的表达率。结果：β-连环蛋白mRNA在卵巢浆液性囊腺癌组表达量为1.001±0.192,在正常卵巢组为0.588±0.128,在卵巢浆液性囊腺瘤组为0.600±0.262,卵巢浆液性囊腺癌组β-连环蛋白mRNA的表达量显著高于正常卵巢组和卵巢浆液性囊腺瘤组,差异有显著性（P<0.05)。β-连环蛋白主要在细胞质中表达,在卵巢浆液性囊腺癌组的β-连环蛋白阳性表达率为88.33%,明显高于正常卵巢组的20.83%和卵巢浆液性囊腺瘤组的33.33%（P<0.05);在卵巢癌组临床分期Ⅰ的卵巢癌β-连环蛋白阳性表达率为77.77%,临床分期Ⅳ期的卵巢癌β-连环蛋白阳性表达率为93.87%,两者比较差异有显著性（P< 0.05）;在卵巢癌病理分级G1、G2及G3组的β-连环蛋白阳性表达率分别为85.00%、89.28%和91.63%,组间比较差异无显著性（P>0.05）。结论：卵巢癌组织中β-连环蛋白mRNA和蛋白表达均增高,β-连环蛋白表达程度与卵巢癌临床分期相关,与病理分级无关,β-连环蛋白在卵巢癌诊断中起重要作用。     

Expression of β-catenin protein in hepatocellular carcinoma and its relationship with alpha-fetoprotein

This study aimed to investigate the expression of β-catenin in hepatocellular carcinoma (HCC) tissues and its relationship with α-fetoprotein (AFP) in HCC. Immunohistochemistry was used to determine the expression of β-catenin in normal liver tissues (n=10), liver cirrhosis tissues (n=20), and primary HCC tissues (n=60). The relationship between β-catenin expression and clinical parameters of HCC was investigated. Real-time PCR and Western blotting were used to detect the mRNA and protein expression levels of β-catenin in the liver cancer cell line SMMC-7721 transfected with a plasmid encoding AFP, and also the mRNA and protein expression levels of β-catenin were measured in the liver cancer cell line Huh7 before and after the transfection with AFP shRNA plasmids. The results showed that β-catenin was only expressed on the cell membrane in normal liver tissues. Its localization to the cytoplasm and nucleus of cells was observed in a small proportion of cirrhotic tissues or adjacent HCC tissues, and such ectopic expression of β-catenin was predominant in HCC tissues. The abnormal expression of β-catenin was correlated with serum AFP levels, cancer cell differentiation and vascular invasion (P<0.05). Additionally, the increased expression of AFP resulted in the upregulation of β-catenin mRNA and protein levels, while knockdown of AFP with AFP shRNA led to significantly decreased β-catenin mRNA and protein levels (P<0.05). It was suggested that the abnormal expression of β-catenin is implicated in hepatic carcinogenesis and development. AFP can lead to increased expression of β-catenin, which may account for the poor prognosis of AFP-associated HCC patients.     

应用BSP联合TA克隆测序检测胰腺癌中RASSF1A基因启动子区异常甲基化

目的:检测Ras相关区域家族1A(Ras association domain family 1A,RASSF1A)在胰腺癌细胞株中的甲基化和表达状态,探讨其启动子异常甲基化在胰腺癌发病过程中的作用?方法:采用重亚硫酸盐测序PCR(bisulfite genomic sequencing PCR,BSP)联合TA克隆测序检测胰腺癌细胞株PANC-1及胰腺癌组织?癌旁组织及正常胰腺组织中RASSF1A启动子区CpG岛的甲基化状态,以甲基化酶抑制剂5-aza-2-deoxycitydine(5-aza-dC)处理PANC-1,观察处理前后甲基化率变化情况,逆转录PCR观察RASSF1A 的mRNA表达情况?结果:在PANC-1细胞中RASSF1A启动子的甲基化率平均为100.00%,在正常胰腺?癌旁及癌组织中平均分别为1.79%?93.75%和100.00%,与正常胰腺组织相比,胰腺癌旁及癌组织的RASSF1A启动子甲基化率明显增高(P < 0.01),而癌旁及癌组织之间无明显差异(P > 0.05)?在PANC-1细胞?胰腺癌组织及癌旁组织中RASSF1A基因无表达,在正常胰腺组织中RASSF1A基因呈阳性表达;PANC-1细胞经5-aza-dC处理后,RASSF1A的甲基化率下降(88.89%,P < 0.05),mRNA表达无变化?结论:胰腺癌细胞株PANC-1及癌组织?癌旁组织RASSF1A基因表达与启动子区甲基化状态有关,启动子区的高甲基化导致PANC-1中RASSF1A基因的表达沉默?该基因异常甲基化有望成为胰腺癌的早期诊断指标和治疗靶点?     

浸润性乳腺癌SFRP1基因的表达及其启动子甲基化的意义

目的探讨浸润性乳腺癌及相应癌旁乳腺组织中分泌型卷曲相关蛋白1(the secreted frizzled-relat-ed protein 1,SFRP1)基因的表达及其启动子CpG岛的异常甲基化状态,并分析其临床意义。方法采用实时荧光定量PCR技术及甲基化聚合酶链反应(MSP)技术检测58例浸润性乳腺癌组织和相应癌旁乳腺组织中SFRP1基因的mRNA表达及其启动子CpG岛的异常甲基化情况,并分析其与临床病理参数之间的关系。结果浸润性乳腺癌组SFRP1基因的甲基化显著高于癌旁乳腺组织组(P<0.05);腋窝淋巴结有转移的浸润性乳腺癌组SFRP1基因的甲基化显著高于腋窝淋巴结无转移组(P<0.05),而与其他临床病理参数无关。SFRP1在浸润性乳腺癌组的mRNA表达量与乳腺癌旁组比较,差异有统计学意义(P<0.05);在23例SFRP1基因启动子CpG岛发生异常甲基化的浸润性乳腺癌组,均未检测到SFRP1的mRNA表达。结论 SFRP1基因异常甲基化可能影响其mRNA的转录水平;SFRP1基因启动子的甲基化与浸润性乳腺癌的发生发展有关,对其进行检测有可能为浸润性乳腺癌的早期诊断和判断预后提供帮助。     

肺癌患者14-3-3σ基因启动子甲基化与其mRNA表达水平的关系

目的:探讨肺癌患者14-3-3σ基因启动子CpG岛甲基化状况与其mRNA表达水平的关系。方法:用实时定量PCR检测14-3-3σ基因mRNA在肺癌组织、正常肺组织及肺癌细胞株A549中的表达;用甲基化特异性PCR检测这些组织、细胞中14-3-3σ启动子区CpG岛甲基化状态。结果:14-3-3σ基因启动子在肺癌组织和正常肺组织中发生甲基化的频率分别为51.11%(23/45)和17.39%(4/23)(2χ=7.229,P=0.007)。14-3-3σmRNA在正常组织中全部表达,在肺癌组织中表达缺失率为15.56%(7/45),且表达量低于正常肺组织(t=10.309,P<0.001),不同肿瘤病理分型(SCLC、NSCLC)之间14-3-3σmRNA有显著差异(t=5.256,P<0.023),不同年龄、性别、肿瘤大小之间无显著差异(P>0.05)。14-3-3σ启动子甲基化与其表达量下降密切相关(r=0.48,P=0.04).结论:在肺癌中14-3-3σ启动子甲基化与其mRNA表达下调或缺失有密切关系,在肺癌发生中14-3-3σ异常甲基化起一定作用。     

β-catenin在原发性肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的探讨肝细胞癌肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC）B—catenin的表达与HCC临床病理特征的关系。方法应用Envsion法检测333例HCC,168例癌旁肝组织及89例正常肝组织的β-catenin表达;RT—PCR检测37例HCC及癌旁组织,肝癌细胞株HepG2和正常肝细胞株L02的β-cateninmRNA表达。结果β-catenin在HCC胞质、胞核的阳性表达率为79％／37％;在癌旁和正常肝组织中的表达率为72％／0％、70％／0％。差异均有统计学意义（P均〈0．05）。且分化好的癌细胞表达低,分化差的细胞表达高。同时,HCC和HepG2的β-cateninmRNA表达高于癌旁组织及LO2的表达。结论肝细胞癌的β-catenin过表达提示其在癌的发生过程中可能起着促癌的作用。