The significance of mRNA expression and methylation of SFRP1 promoter in invasive breast cancer

目的 探讨浸润性乳腺癌及相应癌旁乳腺组织中分泌型卷曲相关蛋白1(the secreted frizzled-related protein 1,SFRP1)基因的表达及其启动子CpG岛的异常甲基化状态,并分析其临床意义.方法 采用实时荧光定量PCR技术及甲基化聚合酶链反应(MSP)技术检测58例浸润性乳腺癌组织和相应癌旁乳腺组织中SFRP1基因的mRNA表达及其启动子CpG岛的异常甲基化情况,并分析其与临床病理参数之间的关系.结果 浸润性乳腺癌组SFRP1基因的甲基化显著高于癌旁乳腺组织组(P<0.05);腋窝淋巴结有转移的浸润性乳腺癌组SFRP1基因的甲基化显著高于腋窝淋巴结无转移组(P<0.05),而与其他临床病理参数无关.SFRP1在浸润性乳腺癌组的mRNA表达量与乳腺癌旁组比较,差异有统计学意义(P<0.05);在23例SFRP1基因启动子CpG岛发生异常甲基化的浸润性乳腺癌组,均未检测到SFRP1的mRNA表达.结论 SFRP1基因异常甲基化可能影响其 mRNA的转录水平;SFRP1基因启动子的甲基化与浸润性乳腺癌的发生发展有关,对其进行检测有可能为浸润性乳腺癌的早期诊断和判断预后提供帮助.     

乳腺癌及癌旁组织中PTEN基因5’CpG岛甲基化状态研究

目的：检测乳腺癌及癌旁组织中PTEN基因5’端CpG岛启动子区域的甲基化状况。方法：采用甲基化特异性聚合酶链反应（Methylation-specific PCR,MSP）方法对乳腺癌及癌旁组织中PTEN基因5’端CpG岛启动子区域甲基化状况进行研究。结果：乳腺肿瘤组织中PTEN基因甲基化率为31.5%（29/92）,显著高于癌旁组织和正常组织（P〈0.05）,而癌旁组织和正常乳腺组织中甲基化率均比较低,分别为8.3%（2/24）、6.2%（1/16）,两者差异无统计学意义（P〉0.05）;PTEN基因甲基化与肿瘤组织学类型、年龄及肿瘤大小均无相关性,但与淋巴结转移相关（P〈0.05）,淋巴结转移组PTEN基因甲基化率显著高于无淋巴结转移组。结论：PTEN基因5’端CpG岛启动子区域甲基化可能是散发性乳腺癌PTEN基因失活的主要机制,参与了乳腺癌的发生发展过程;PTEN基因甲基化可能是乳腺癌发生发展过程中的晚期事件,提示可以考虑将PTEN基因甲基化作为评价乳腺癌肿瘤细胞转移潜能的分子标记。     

乳腺癌组织与血清BRCA1基因异常甲基化的临床意义

目的:探讨乳腺癌BRCA1基因启动子异常甲基化状况及其在乳腺癌早期诊断中的价值。方法:用甲基化特异PCR方法对乳腺癌患者癌组织、癌旁组织及对应血浆进行BRCA1异常甲基化检测。结果:乳腺癌组织中BRCA1启动子异常甲基化检出频率为35/102(34%),血浆的检出率为32/102(32%),而癌旁组织中没有检出BRCA1异常甲基化。根据不同病理特征将35例散发性乳腺癌按组织类型、不同分级、有无淋巴结转移和年龄进行分类分析。结果显示,MSP法检测肿瘤组织与对应血浆BRCA1异常甲基化有很好的一致性(P>0.05)。102例患者的组织与血清中甲基化检出率的一致性良好(Kappa=0.765)。BRCA1基因甲基化结合病理特征表明,BRCA1基因在原位癌中甲基化检出率明显低于浸润性癌(P<0.05),有淋巴结转移相应标本BRCA1基因甲基化检出率也明显高于无淋巴结转移的标本(P<0.05),而BRCA1基因甲基化与否与肿瘤分级及年龄(绝经前后)无明显关联(P>0.05)。结论:BRCA1基因异常甲基化在乳腺癌组织与血清有相似的甲基化模式,且在乳腺癌的组织分型与转移方面有一定的鉴别诊断价值。     

浸润性乳癌组织中miRNA-34a甲基化状态分析

目的了解浸润性乳癌组织中miRNA-34a启动子区CpG岛甲基化状态,并分析其临床意义。方法采用甲基化特异性PCR(MSP)技术,检测56例浸润性乳癌病人癌组织及相应癌旁正常乳房组织(距病灶边缘>5cm)中miRNA-34a上游启动子区CpG岛甲基化情况,并分析其与各临床病理参数之间的关系。结果浸润性乳癌组织中miRNA-34a启动子区甲基化率显著高于癌旁正常乳房组织,差异有显著性(χ~2=5.630,P<0.05)。浸润性乳癌组织中miRNA-34a启动子区甲基化水平与乳癌组织学分级及腋窝淋巴结转移有相关性,差异有显著性(χ~2=10.920、8.737,P<0.05),而与其他临床病理参数无关。结论浸润性乳癌组织中miRNA-34a启动子区呈现髙甲基化水平,可能促进了浸润性乳癌的发生发展。对其进行检测有助于乳癌的早期诊断及预后判断。     

子宫内膜癌中SFRP1基因启动子甲基化及其mRNA表达

目的研究子宫内膜癌中SFRP1基因启动子甲基化及其对SFRP1 mRNA表达的影响。方法应用甲基化特异性PCR技术检测36例子宫内膜癌组织和对应癌旁组织中SFRP1基因启动子甲基化状态,RT-PCR方法检测上述样本的mRNA表达水平,并对结果进行统计学分析。结果子宫内膜癌组织中SFRP1基因启动子甲基化的阳性率为47.2%,癌旁组织中为11.1%,两者比较差异有统计学意义(P=0.001)。14例存在启动子甲基化和5例无启动子甲基化的子宫内膜癌组织中缺乏SFRP1 mRNA表达或表达较癌旁组织明显下降。结论SFRP1基因启动子甲基化在子宫内膜癌中常见,部分成为其表达下降的原因。     

BRCA1基因在散发性乳腺癌中的表达及异常甲基化

目的：通过检测乳腺癌易感基因1（BRCA1）基因在散发性乳腺癌中的表达情况及其启动子甲基化状态,探讨BRCA1基因与散发性乳腺癌的关系。方法应用实时荧光定量PCR的方法和免疫组织化学方法分别检测BRCA1 mRNA和蛋白在60例散发性乳腺癌组织、癌旁正常乳腺组织及30例乳腺良性病变组织中的表达情况;应用重亚硫酸盐测序PCR（BPS）联合TA克隆测序方法检测上述组织中BRCA1启动子CpG岛的甲基化状态,分析BRCA1基因表达和启动子甲基化相关性。结果BRCA1 mRNA和蛋白在散发性乳腺癌组织中的相对表达水平分别低于癌旁正常组织及乳腺良性病变组织,差异有统计学意义（P＜0．001）。乳腺癌组织中BRCA1蛋白的表达率为51．7％（31／60）,明显低于癌旁正常乳腺组织的71．7％（43／60）及乳腺良性病变组织的66．7％（20／30）,差异有统计学意义（P＜0．001）;散发性乳腺癌组织中BRCA1启动子甲基化率为31．7％（19／60）,癌旁正常乳腺组织及乳腺良性病变组织均未检测出甲基化,差异有统计学意义（P＝0．000）;BRCA1蛋白表达与其启动子甲基化呈负相关（r＝－0．345,P＝0．007）。结论乳腺癌易感基因BRCA1启动子区CpG岛甲基化导致BRCA1基因表达显著下调,可能参与散发性乳腺癌的发生、发展。     

胰腺癌中人RUNT相关转录因子3基因启动子区甲基化及其临床意义

目的检测胰腺癌人RUNT相关转录因子3(RUNX3)基因启动子的甲基化情况并探讨其临床意义。方法采用甲基化特异性聚合酶链式反应(MSP)检测56例胰腺癌组织及癌旁组织、14例正常胰腺组织、3株人胰腺癌细胞株(PANC1、CFPAC-1、SW1990)、1株正常肝细胞株(HL-7702)中RUNX3基因启动子区CpG岛甲基化状态。检测用甲基化抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-cdR)处理前后胰腺癌细胞株RUNX3 mRNA的表达。分析RUNX3异常甲基化与胰腺癌临床特征的关系。结果56例胰腺癌组织中,51.79%(29/56)存在RUNX3基因启动子区CpG岛的异常甲基化,癌旁胰腺组织有10.7%(6/56)存在异常甲基化,而正常胰腺组织中未检测到RUNX3基因异常甲基化。RUNX3基因异常甲基化与患者病理分化程度(r=0.314,P=0.018)、淋巴结转移(r=0.370,P=0.005)显著相关。在5-Aza-cdR处理前,胰腺癌细胞株PANC1、CFPAC-1、SW1990的RUNX3 mRNA无表达或低表达,经5-Aza-cdR处理后各胰腺癌细胞株RUNX3 mRNA恢复表达。结论胰腺癌组织及胰腺癌细胞株均存在RUNX3基因CpG岛异常甲基化;RUNX3启动子的高甲基化与其基因表达降低有关,与胰腺癌组织分化程度、淋巴结转移相关。     

乳腺癌p16基因甲基化及与蛋白表达的关系

目的:探讨散发性乳腺癌中p16基因异常甲基化状况及其与蛋白表达的关系,进而研究散发性乳腺癌中p16基因异常的表遗传学作用。方法:用甲基化特异PCR(MSP)和SP法研究68例乳腺癌组织及相应癌旁正常组织中p16基因启动子甲基化状况及蛋白表达情况。结果:p16基因在68例散发性乳腺癌组织中的甲基化率为29%,且其甲基化与肿瘤组织分型、患者居住地及淋巴结转移相关(P<0.05),而与肿瘤患者绝经与否及组织分级无关(P>0.05);P16蛋白在所有肿瘤标本中的表达下降率为51%,在相应癌旁组织中均呈阳性表达,二者有显著性差异(P<0.05),P16蛋白表达下降与肿瘤患者淋巴结转移及患者居住地明显相关(P<0.05),与患者绝经、组织分级和分型无关(P>0.05);在20例p16甲基化的癌组织标本中,P16蛋白表达下降率(95%),显著高于48例未发生甲基化的乳腺癌标本下降率(33%),两者有显著性差异(P<0.05),乳腺癌患者组织p16基因甲基化检出率与P16蛋白表达下降率具有良好的一致性(Kappa=0.506),而p16未发生甲基化的正常乳腺组织和乳腺良性病变组织其蛋白均呈阳性表达。结论:在散发性乳腺癌中p16启动子甲基化改变会明显降低P16蛋白表达,p16基因启动子甲基化是其蛋白表达下降的重要原因,这种机制更倾向于农村乳腺癌患者。     

乳腺浸润性导管癌中CDH1基因甲基化状态及其临床意义

目的 探讨CDH1启动子基因甲基化在乳腺浸润性导管癌中的意义.方法 采用甲基特异性PCR和免疫组织化学染色方法分别检测乳腺癌组织、癌旁组织和乳腺正常组织中CDH1基因启动子甲基化状况及上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)表达情况.收集相关临床病理资料(遗传背景、年龄、肿瘤大小、腋窝淋巴结转移情况、肿瘤细胞分级、临床分期和分子亚型),分析CDH1基因甲基化在乳腺癌中的意义.结果 250例乳腺癌患者共发现113例CDH1基因启动子甲基化,甲基化率为45.20％,CDH1基因启动子甲基化组和非甲基化组相比E-cadherin蛋白表达水平明显减低,差异有统计学意义(x2 =21.360,P＜0.01).单因素分析结果显示,CDH1基因甲基化组和非甲基化组在腋窝淋巴结转移(x2=19.086,P＜0.01)、肿瘤组织学分级(x2=8.487,P=0.014)、人表皮生长因子受体2(CerbB-2)表达(x2=9.475,P=0.002)和分子分型(x2 =25.482,P＜0.01)比较,差异有统计学意义.COX回归分析显示,CDH1基因启动子甲基化和非甲基化组5年生存率比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 CDH1基因启动子甲基化引起基因mRNA表达下降,CDH1基因甲基化与乳腺癌的腋窝淋巴结转移相关,提示CDH1基因启动子甲基化在乳腺癌疾病进程中发挥了一定作用.     

环状RNA CDR1as在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的：探讨环状RNA（circRNA）CDR1as在乳腺癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法：收集2018 年6月至2019 年9月在温州医科大学附属第三医院甲乳外科行手术切除的97 例乳腺癌患者,采用实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测乳腺癌组织及其癌旁正常乳腺组织中circRNA CDR1as的表达情况。结果：与正常乳腺组织相比,在乳腺癌组织中circRNA CDR1as表达升高（P ＜0.05）;与乳腺导管原位癌相比,乳腺浸润性导管癌中circRNA CDR1as表达升高（P ＜0.05）;circRNA CDR1as在不同乳腺癌的大小、淋巴结转移情况及临床分期表达差异有统计学意义（P ＜0.05）。结论：circRNA CDR1as可能与乳腺癌的大小、淋巴结转移情况及临床分期有关。     

候选抑癌基因syk启动子甲基化与乳腺癌发生和转移的关系

目的　探讨脾酪氨酸激酶 (spleentyrosinekinase ,syk)基因启动子甲基化与乳腺癌发生、发展过程的关系。方法　采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测了 4 0例乳腺癌组织、癌旁组织及15例乳腺纤维瘤组织中sykmRNA的表达 ,同时用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测syk基因启动子甲基化情况。结果　 4 0例癌旁组织、乳腺纤维瘤组织均检测到syk基因的表达 ,乳腺癌组织有 9例检测到syk基因的表达 ,syk基因在乳腺癌组织中表达率显著降低 (P <0 .0 5 )。癌旁组织及乳腺纤维瘤组织未发现有syk基因启动子的甲基化 ,4 0例乳腺癌组织中有 17例检测到syk基因启动子的甲基化 ,癌组织syk基因启动子甲基化率显著增高 (P <0 .0 5 )。有淋巴结转移的 18例乳腺癌组织中 ,有 14例syk基因启动子甲基化 ,有淋巴结转移的syk基因启动子甲基化显著高于无淋巴结转移组 (P <0 .0 5 )。结论　syk基因启动子甲基化是导致syk基因失活的原因之一 ,syk基因启动子的甲基化可能与乳腺癌的发生、转移相关。     

STAT3、MMP-2蛋白和mRNA在维吾尔族乳腺癌患者中的表达及意义

目的 探讨STAT3和MMP-2在维吾尔族乳腺癌患者中的表达及其临床意义。方法运用RT-PCR和免疫组化方法检测STAT3、MMP-2蛋白和mRNA在80例维吾尔族乳腺癌和30例正常乳腺组织中的表达。比较两者在不同临床病理学特征乳腺癌组织中表达的差异,分析两者的关系;COX回归分析影响维吾尔族乳腺癌的预后因素。结果乳腺癌组织中STAT3和MMP-2蛋白和mRNA的表达水平明显高于正常乳腺组织（P<0.05）;STAT3和MMP-2蛋白在维吾尔族乳腺癌中的表达呈正相关（P<0.05）;乳腺癌组织中STAT3、MMP-2蛋白的表达与肿瘤大小、组织学分级、淋巴结转移及临床分期有显著相关性（P<0.05）;乳腺癌组织中STAT3、MMP-2 mRNA的相对表达量与淋巴结转移及临床分期有显著相关性（P<0.05）。绘制乳腺癌患者术后60个月生存曲线,STAT3和MMP-2 mRNA低表达组患者生存率明显高于高表达组患者（P<0.05）。结论STAT3和MMP-2蛋白和mRNA表达高的维吾尔族乳腺癌可能更具有侵袭性,预后更差。STAT3和MMP2在维吾尔族乳腺癌发生、发展过程中可能发挥着重要作用,是乳腺癌患者独立的预后因子。     

乳腺癌组织中GSTP1和BRCA1及MGMT基因甲基化状态及其与临床病理特征的关系研究

目的　分析乳腺癌组织中胱甘肽S转移酶P1（GSTP1）、乳腺癌易感基因1（BRCA1）、O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶（MGMT）基因甲基化状态及其与临床病理特征的关系。方法　选取2015年1月—2016年6月海南医学院第二附属医院收治的符合纳入标准的乳腺癌患者100例为研究对象,采用甲基化特异性PCR法检测乳腺癌及癌旁组织中GSTP1、BRCA1、MGMT基因甲基化情况,并分析其与临床病理特征的关系,采用Cox回归分析分析GSTP1、BRCA1、MGMT基因甲基化状态与乳腺癌患者预后的关系。结果　乳腺癌组织中GSTP1、BRCA1、MGMT基因甲基化的发生率均高于癌旁组织（P<0.05）。每例患者乳腺癌组织甲基化基因数高于癌旁组织（P<0.05）。不同肿瘤分期、淋巴结转移情况的乳腺癌组织中甲基化基因数比较,差异有统计学意义（P<0.05）;癌组织直径≥20 mm、有淋巴结转移乳腺癌组织的GSTP1基因甲基化阳性率高于癌组织直径<20 mm、无淋巴结转移乳腺癌组织（P<0.05）;年龄<50岁、雌激素受体阴性乳腺癌组织BRCA1基因甲基化性阳率高于年龄≥50岁、雌激素受体阳性乳腺癌组织（P<0.05）;组织学Ⅲ级、乳腺癌Ⅱ~Ⅳ期、有淋巴结转移乳腺癌组织MGMT基因甲基化阳性率高于组织学Ⅰ~Ⅱ级、乳腺癌Ⅰ期、无淋巴结转移乳腺癌组织（P<0.05）。Cox回归分析结果显示,GSTP1、BRCA1、MGMT基因甲基化阳性是乳腺癌患者预后的影响因素（P<0.05）。结论　乳腺癌组织中GSTP1、BRCA1、MGMT基因甲基化基因数目高于高于癌旁组织,而且其异常甲基化与乳腺癌临床病理特征有关,能影响乳腺癌病情进展。     

酪氨酸激酶Syk在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的 :探索脾酪氨酸激酶Syk基因表达与乳腺癌生成及转移的关系 ,以及与雌激素受体 (estrogenrecep tor,ER)、孕激素受体 (progestogenreceptor,PR)、p5 3、HER2 neu的关系。方法 :用半定量RT PCR检测 4 0例乳腺癌标本、正常乳腺组织及其 15例良性乳房纤维瘤组织中SykmRNA的表达 ,并用免疫组化方法检测 4 0例乳腺癌组织中ER、PR、p5 3、HER2 neu的表达的情况。结果 :所有正常乳腺组织都有Syk基因的表达 ,而 4 0例乳腺癌组织中只有 9例表达 ,正常乳腺与乳腺癌组织中Syk基因表达率有显著差异 (χ2 =4 7 4 ,P <0 0 5 ) ,且乳腺癌组织中SykmRNA含量比正常乳腺组织显著降低 (t=3 4 1,P <0 0 5 )。有淋巴结转移的 18例乳腺癌组织中 ,1例有Syk基因表达 ,有淋巴结转移的乳腺癌SykmRNA的表达率和表达水平显著降低 (χ2 =3 77,P <0 0 5 ,t=2 74 ,P <0 0 5 )。结论 :Syk基因的表达在抑制乳腺癌的生长及转移过程中可能起着重要的作用。     

食管鳞癌组织中基质金属蛋白酶-10和Raf激酶抑制蛋白mRNA的表达及临床意义

目的 探讨食管鳞癌组织中基质金属蛋白酶-10(MMP-10)和Raf激酶抑制蛋白(RKIP)mRNA的表达及临床意义.方法 采用实时荧光定量PCR方法检测42例食管鳞癌患者的癌组织(食管鳞癌组)及其癌旁正常组织(癌旁组织组)中MMP-10 mRNA、RKIP mRNA的表达,分析其表达与患者临床病理学特征的关系.结果 食管鳞癌组织中MMP-10 mRNA相对表达量高于癌旁正常组织,RKIP mRNA相对表达量低于癌旁正常组织(P<0.05);不同性别、年龄、肿瘤分化程度的患者的MMP-10 mRNA、RKIP mRNA表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);Ⅲ期+Ⅳ期及有淋巴转移的患者MMP-10 mRNA相对表达量分别高于Ⅰ 期+Ⅱ 期及无淋巴结转移患者,且RKIP mRNA相对表达量分别低于 Ⅰ期+Ⅱ 期及淋巴结转移患者(P<0.05).MMP-10 mRNA与RKIP mRNA的表达呈负相关(P<0.05).结论 MMP-10 mRNA高表达以及RKIP mRNA低表达可能与食管鳞癌的发生发展有关,并对患者预后判断有一定的价值.     

BRMS1 mRNA在直肠癌中的表达及其临床意义

目的探讨乳腺癌转移抑制基因1(BRMS1)mRNA在直肠癌组织中的表达及其临床意义。方法应用RT-PCR法检测80例直肠癌组织及其40例癌旁正常黏膜组织中BRMS1 mRNA的表达。结果 BRMS1 mRNA在直肠癌中低表达(0.467±0.045),在癌旁组织中呈高表达(0.991±0.054),两者相比较差异均具有统计学意义(P<0.01)。直肠癌组织中BRMS1 mRNA的表达水平与直肠癌患者年龄、性别无关(P>0.05),与直肠癌患者的组织分化、淋巴结转移和临床分期有关(P<0.05)。结论BRMS1 mRNA在直肠癌中低表达,且其低表达可能与直肠癌的临床分期、病理分化以及淋巴结转移有关。     

MSP法检测胰腺癌Syk基因甲基化改变的研究

目的 :探讨胰腺癌Syk基因启动子区 5’CpG岛甲基化改变的特点与临床病理特征的关系。方法 :采用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测Syk基因启动子甲基化情况。结果 :32例癌旁正常胰腺组织未发现有Syk基因启动子的甲基化 ,14 /32例胰腺癌组织检测到Syk基因启动子的甲基化 ,癌组织Syk基因启动子甲基化率显著增高 (P <0 .0 5 )。有淋巴结转移的 15例胰腺癌组织中 ,有 10例Syk基因启动子甲基化 ,有淋巴结转移的Syk基因启动子甲基化显著高于无淋巴结转移组 (P <0 .0 5 )。结论 :Syk基因启动子甲基化是导致Syk基因失活的原因之一 ,Syk基因启动子的甲基化与胰腺癌的发生、转移相关。     

FOXO1在乳腺癌中的表达及临床意义

目的 探讨FOXO1在乳腺癌发生发展过程中的作用及其临床意义.方法 选取2012年6月至2013年1月在广东医学院附属医院经病理证实的乳腺癌组织、癌旁正常乳腺组织、乳腺良性病变组织分别50例、37例、20例,采用免疫组织化学法及实时荧光定量PCR法(RT-PCR)检测各组标本的FOXO1蛋白及mRNA的表达.结果 FOXO1蛋白在癌性组的染色阳性率为46.0%,而在良性组和癌旁组中阳性率分别为75.0%、70.2%;RT-PCR检测结果显示,癌性组、癌旁组、良性组的FOXO1 mRNA表达量分别为(0.526±0.011)、(0.885±0.017)、(0.841±0.026),FOXO1蛋白及FOXO1 mRNA在癌性组标本中的表达均较癌旁组及良性组明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05).乳腺癌组织中FOXO1蛋白的表达及FOXO1 mRNA与肿瘤大小、腋窝淋巴结转移有关(P<0.05),而与患者绝经状态、年龄、人表皮生长因子受体2(Her-2)、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)及Ki-67无关(P>0.05).结论 FOXO1蛋白及mRNA的表达与乳腺癌肿瘤大小、腋淋巴结转移有关,可作为判断乳腺癌预后的生物学指标之一.