特异性阻断Kv1.5通道对心房颤动患者缝隙连接蛋白40表达的影响

目的 利用伊布利特特异性阻断超速延迟整流性钾通道 (Kv1.5)后对缝隙连接蛋白(Cx)40表达的影响,探讨Kv1.5通道可能是心房肌缝隙连接蛋白下游信号传导通路之一,揭示心房颤动(AF)的可能发生机制.方法 实验标本取自风湿性心脏病接受心脏瓣膜置换手术患者的右心耳组织,根据患者术前心律将标本分为2组:风湿性心脏病[窦性心律组(SR组)]和风湿性心脏病合并AF组(AF组).采用酶解法分离风湿性心脏病接受手术患者心房肌细胞、培养心房肌细胞和运用Western blot技术检测两组心房肌细胞运用伊布利特特异性阻断Kv1.5通道前后Cx40的表达情况.结果 利用伊布利特特异性阻断Kv1.5通道后,AF组患者心房心肌细胞Cx40的表达水平较阻断前明显增加(P<0.01);而在SR组中,阻断前后Cx40/GAPDH比值的变化不明显.结论 Kv1.5通道的开放状态可能会影响Cx40的表达,从而揭示AF的发生机制中电重构可能会引起结构重构.     

瓣膜病房颤患者右心耳组织中5-羟色胺转运体的表达及临床意义

目的:探讨瓣膜病房颤患者右心耳组织中5-羟色胺转运体(serotonin transporter,5-HTT)的表达及其临床意义?方法:将行瓣膜置换手术的患者28例,分为窦性心律(SR)组和房颤(AF)组?术中取右心耳组织,采用实时荧光定量PCR,Western blot及免疫组织化学法检测组织中5-HTT的表达?结果:AF组5-HTT mRNA表达水平是SR组的(2.20 ± 1.75)倍(P < 0.01);Western blot测定的AF组5-HTT蛋白水平是SR组的(2.13 ± 0.46)倍(P﹤0.05);免疫组织化学法测定AF组光密度明显高于SR组?结论:5-HTT可能在瓣膜病房颤的发生和发展中发挥一定的作用?     

风湿性心脏瓣膜病患者血清Ang(1-7)浓度与心房颤动的发生相关性分析

目的:分析风湿性心脏瓣膜病患者血浆血管紧张素1-7(Ang1-7)的浓度与心房颤动发生之间的相关性,探讨Ang(1-7)在风湿性心脏瓣膜病房颤发生与维持中的作用及房颤的预防及治疗新的靶点。方法:收取风湿性心脏瓣膜病患者(AF组24例,SR组22例)外周静脉血,用ELISA法检测血清中Ang(1-7)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的浓度,分析两组间的差别及相关性。结果:在AF组,1左心房直径明显大于SR组(P<0.05);2血清Ang(1-7)浓度显著低于SR组(P<0.05);3血清AngⅡ浓度明显高于SR组(P<0.05)。结论:在风湿性心脏瓣膜病患者中,Ang(1-7)可能通过减弱AngⅡ的作用,抑制心房的重构,对于房颤的发生具有保护作用。     

微纤维蛋白1在瓣膜性心房颤动患者心房组织中的表达及其与心房纤维化的关系

目的：观察微纤维蛋白1（FBN-1）在风湿性心脏瓣膜病并发心房颤动（AF）患者心房组织中的表达,探讨FBN-1与心房纤维化的关系。方法：选择因风湿性心脏瓣膜病住院并行瓣膜置换手术的患者84例,分为AF组39例和窦性心律（SR）组45例;收集整理患者的临床资料,并于手术中获取右心房组织（0.3~0.5 mm³）。Masson 染色观察2组患者右心房纤维化程度;Western blotting法测定各组患者心房组织中FBN-1蛋白的表达,相关分析探讨FBN-1与心房纤维化的关系。结果：2组患者在性别构成比、年龄、血压、血常规和生化指标等方面比较差异无统计学意义（P>0.05）。AF组患者左和右心房直径明显大于SR组（P<0.05）;Masson 染色,AF组患者心房组织存在明显纤维化,AF组患者胶原容积分数和胶原水平明显高于SR组（P<0.05）;AF组患者心房组织中FBN-1的蛋白表达水平明显高于SR组（P<0.05）;瓣膜性AF患者右心房组织FBN-1蛋白表达水平与胶原水平呈正相关关系（r=0.544,P=0.021）。结论：瓣膜性AF患者心房组织存在明显的心房纤维化,与FBN-1基因转录水平上调有关联。     

慢性心房颤动患者心房肌细胞Kir2.1、Kir3.4和Kv4.3钾通道重构的研究

目的:观察心房颤动(AF)患者心房组织钾通道 IK,ACh、IK1及 Ito1基因水平的改变。方法:将 59 例风湿性心瓣膜病接受心脏外科手术患者分为两组,其中窦性心律(SR)患者 29 例,慢性房颤(CAF)患者 30 例。手术时切取患者右心耳组织,应用RT PCR技术检测心房肌组织 Kir2.1、Kir3.4 和 Kv4.3 mRNA的表达。结果:与 SR组相比,Kir2.1 mRNA的表达在CAF患者中增加明显,达71%(P<0.01),并与 AF时程呈明显正相关(r=0.49,P=0.004)。与之相反的是Kir3.4 mRNA的表达在CAF患者中均显著减少(下降43%,P<0.01),与AF时程呈明显负相关(r=-0.54, P=0.003)。CAF组编码 Ito1的Kv4.3钾通道的mRNA表达较SR组明显下降(下降 60%,P<0.01)。Kv4.3 mRNA表达也与AF时程呈明显负相关(r=-0.67,P=0.003)。结论:慢性房颤患者 Kir2.1的mRNA表达水平增加及Kir3.4和Kv4.3 的mRNA表达水平减少可能分别是 IK1上调、IK,ACh和 Ito1下调的分子基础,而Kir3.4和Kv4.3 mRNA表达水平减少很可能是机体为拮抗AF电重构时有效不应期缩短的代偿机制之一。     

心房颤动患者心房组织SIRT1表达与心房纤维化的相关性

目的 观察心房颤动患者心房组织Ⅲ类组蛋白去乙酰化酶1(SIRT1)的表达及其与心房纤维化的关系。方法 选择38例行心脏手术的风湿性心脏病患者,按照是否合并房颤分为两组：持续性房颤组25例(AF组),窦性心律组13例(SR组),于心脏手术时切取小块右心耳组织,采用实时荧光定量PCR法检测SIRT1mRNA的表达量,采用免疫组化法检测SIRT1蛋白表达量,行心脏超声评价心房结构情况,采用masson染色评价心房纤维化程度,比较两组患者SIRT1表达及评价SIRT1表达与心房纤维化的关系。结果 AF组患者SIRT1mRNA表达量高于SR组(P<0.05),AF组SIRT1蛋白表达量高于SR组(P<0.05), AF组SIRT1mRNA及蛋白表达量与心房内径无相关性(左房：r=0.198, r=0.047;右房：r=0.027, r=0.096,P均>0.05), AF组SIRT1mRNA及蛋白表达量与心房胶原容积分数呈负相关 (r=-0.643,r=-0.721,P＜0.05)。结论 房颤患者心房组织SIRT1表达增加,与心房纤维化呈负相关,提示SIRT1可通过抑制心房纤维化在房颤中起作用。     

miRNA-140、MMP-3在OA关节滑液中的表达及相关性研究

目的 比较 miRNA-140 和 MMP-3 在骨性关节炎( OA)组与非OA组关节滑液中的表达,探究miRNA-140 和MMP-3与OA的相关性. 方法 采用实时定量PCR技术检测miRNA-140、MMP-3在OA组(n=65)与非OA组(n=65)关节滑液中的表达水平,并运用 Spearman 相关分析分析miRNA-140与MMP-3的相关性. 结果 组间比较显示OA 组miRNA-140的表达显著低于非OA组(P<0. 05),MMP-3的表达明显高于非OA组( P<0. 05 ). OA组内各因子之间相关分析显示,miRNA-140 和 MMP-3 呈显著负相关性( r=-0. 693、-0. 720,P<0. 05). 结论 相对于非OA病变,OA组关节滑液中miRNA-140 低表达,MMP-3高表达,两者之间呈负相关性.     

白芍总苷对糖尿病大鼠肾组织Txnip、Trx与ASK1表达的调节作用

目的：了解白芍总苷( TGP)对糖尿病大鼠肾组织硫氧还蛋白相互作用蛋白( Txnip)、硫氧还蛋白( Trx)与凋亡信号激酶1(ASK1)表达的影响,探讨TGP对糖尿病肾组织Trx系统调节作用。方法将链脲佐菌素( STZ)诱导的糖尿病大鼠随机分为模型组、TGP [50、100、200 mg/(kg·d)]给药组,另取正常大鼠为对照组,8周后测定大鼠尿白蛋白排泄率( UAER)。应用免疫组化、Western blot法及实时定量PCR法检测大鼠肾组织Txnip、Trx与ASK1表达。结果实验8周后TGP[50、100、200 mg/(kg·d)]给药组及对照组大鼠UAER水平均低于模型组(P<0．01);免疫组化和(或)West-ern blot法显示TGP [50、100、200 mg/(kg·d)]给药组及对照组大鼠肾组织Txnip、ASK1表达低于模型组( P<0．05,P<0．01),而Trx高于模型组(P<0．05,P<0．01);实时定量PCR显示TGP [50、100、200 mg/(kg·d)]给药组及对照组Txnip mRNA低于模型组(P<0．01,P<0．05),Trx mRNA高于模型组(P<0．01,P<0．05)。结论糖尿病肾病大鼠肾组织存在Trx系统异常,TGP对糖尿病大鼠肾组织保护作用可能与抑制Txnip表达、提高Trx表达有关。     

PPARγ在绒毛组织中的表达与早期自然流产的关系

目的：研究过氧化物酶体增殖物激活受体γ( PPARγ)蛋白在正常早孕及早期自然流产患者绒毛组织中的差异表达,探讨PPARγ与早期自然流产的关系。方法应用免疫组化PV两步法、Western blot法检测PPARγ蛋白在正常早孕妇女(对照组,n=40)和早期自然流产患者(实验组,n=40)绒毛组织中的表达。结果免疫组化显示PPARγ蛋白主要在两组绒毛组织中细胞滋养层细胞及绒毛外滋养层细胞中表达;Western blot法显示PPARγ蛋白在实验组绒毛组织中的表达较对照组高,差异有统计学意义(P<0．01)。结论 PPARγ对妊娠早期滋养细胞浸润起负性调节作用,PPARγ蛋白表达水平增高,可能与自然流产的发生有关。     

转化生长因子β1在风湿性心脏病心房颤动患者心房纤维化中的作用

目的 观察转化生长因子β1(TGF-β1)在风湿性心脏病(风心病)心房颤动(房颤)患者心房组织中的表达情况,探讨其在风心病房颤心房纤维化中的作用及意义.方法 38例风心病接受换瓣手术者于术中获取的右心耳分为3组,其中窦性心律组8例,阵发性房颤组10例,持续性房颤组20例.对各组心房组织,应用羟脯氨酸含量测定法及Masson染色检测胶原含量及分布;应用免疫组化技术检测TGF-β1蛋白表达及分布;应用RT-PCR检测TGF-β1 mRNA水平,应用Western blot检测TGF-β1的蛋白表达.结果 TGF-β1主要表达在心肌细胞的细胞质;与风心病窦性心律组相比,TGF-β1的mRNA和蛋白表达及胶原含量在阵发性房颤组(P<0 05)和持续性房颤组均显著增加(P<0 01);与阵发性房颤组相比,持续性房颤组中TGF-β1 mRNA和蛋白表达及胶原含量继续明显增加(P<0 05).相关分析发现TGF-β1的mRNA、蛋白表达程度与心房胶原含量均呈正相关(r=0.37, P<0 05; r=0.45, P<0 01).结论 风心病患者心房组织中TGF-β1的mRNA和蛋白表达上调可能是心房纤维化发生的分子机制之一,在风心病房颤的发生和维持中起一定的作用.     

Role of tumor necrosis factor-alpha in the pathogenesis of atrial fibrillation

Background  Tumor necrosis factor-alpha (TNF-α) is a pleiotropic proinflammatory cytokine and contributes to many kinds of cardiovascular diseases via its receptors (TNFR1/TNFR2). We hypothesize that TNF-α plays a role in the pathogenesis of chronic atrial fibrillation (AF).

Methods  Sixty-seven consecutive patients who were scheduled to have cardiac surgery were enrolled into the study. Thirty-one patients with rheumatic heart disease (RHD) and AF were enrolled as study group (AF group). The sinus rhythm (SR) control groups consisted of 20 patients with RHD and 16 patients with coronary artery disease (CAD). Peripheral blood sample was collected before the operation. About 5 mm3 left atrial tissue was disserted during the operation and was separated into three parts for Western blotting, real time polymerase chain reaction (RT-PCR) and immunohistochemistry (IHC) analysis.

Results  Compared with the controls (RHD SR and CAD SR), the levels of TNF-α ((14.40±5.45) pg/ml vs. (4.20±3.19) pg/ml vs. (2.68±2.20) pg/ml, P=0.000) and its soluble receptor 1 (sTNFR1) ((1623.9±558.6) pg/ml vs. (1222.3±175.6) pg/ml vs. (1387.5±362.2) pg/ml, P=0.001) in plasma were higher in patients with AF. TNF-α level had positive correlation with the left atrial diameter (LAD) (r=0.642, P=0.000). Western blotting analysis showed that the protein levels of TNF-α (0.618±0.236 vs. 0.234±0.178 vs. 0.180±0.103, P=0.000) were higher in patients with AF. The RT-PCR analysis results demonstrated that the mRNA expression of TNF-α (0.103±0.047 vs. 0.031±0.027 vs. 0.023±0.018, P=0.000) increased in patients with AF. IHC analysis displayed that, comparing to the SR, the expression of TNF-α (0.125±0.025 vs. 0.080±0.027 vs. 0.070±0.023, P=0.000) increased in the AF group. The protein level and mRNA expression of TNF-α also had positive correlation with left atrium diameter (LAD) (r=0.415, P=0.000 and r=0.499, P=0.000).

Conclusions  The results revealed that TNF-α elevated in the plasma and left atrial tissue and had positive correlation with LAD in patients of chronic AF. TNF-α might involve in the pathogenesis of chronic AF.

     

心房肌间隙连接重构与风湿性瓣膜病患者心房颤动的关系

目的　探讨风湿性瓣膜病慢性心房颤动 (房颤 )患者心房肌组织中连接蛋白 4 0 (Cx4 0 )和连接蛋白 4 3(Cx4 3)蛋白质表达和分布的变化与慢性房颤的关系。方法　 32例风湿性心脏病患者 ,其中慢性房颤患者 2 1例 ,窦性心律者 11例 ,瓣膜置换术时取右心耳组织。用免疫荧光双标共聚焦显微镜和Western印迹观察Cx4 0和Cx4 3蛋白质表达和分布的改变。结果　激光共聚焦显微镜计算的Cx4 0荧光斑面积反映了蛋白表达水平 ,慢性房颤组为 0 6 7μm2 / μm3 ± 0 0 9μm2 / μm3 ,显著低于窦性心律组的 1 4 5 μm2 / μm3 ± 0 16 μm2 / μm3 (P <0 0 1) ,且细胞端端连接减少较侧侧连接处严重 ,分布呈现不均一性。Cx4 3总体表达水平未变 ,慢性房颤组为 1 38μm2 / μm3 ± 0 14 μm2 / μm3 ,窦性心律组为 1 5 3μm2 / μm3 ± 0 2 7μm2 / μm3 ,但侧侧分布增加而横向分布减少。Western印迹反映的Cx4 0和Cx4 3蛋白质表达水平与激光共聚焦观察结果一致。结论　心房肌Cx4 0和Cx4 3蛋白质水平降低和再分布可能与风湿性瓣膜病慢性房颤的发生和维持有关。     

转录因子S p3在肝细胞癌中的表达意义

目的：研究转录因子Sp3（Sp3）在肝细胞癌（HCC）发生、发展及预后中的作用。方法采用Western blot法和RT‐PCR法检测该院49例HCC组织及其癌旁肝组织中Sp3和β‐Catenin的表达情况,分析二者在 HCC和癌旁肝组织中的表达差异、二者的表达与 HCC临床病理特征的关系,以及Sp3与预后的关系。结果 Western blot和RT‐PCR法的结果均显示：（1）Sp3在HCC中的表达高于癌旁肝组织,差异有统计学意义（P＜0．05）;（2）β‐Catenin在HCC中的表达高于癌旁肝组织,差异有统计学意义（P＜0．05）;（3）Sp3和β‐Catenin在HCC中的表达与肿瘤直径和分级相关;（4）Sp3和β‐Catenin在 HCC中的表达呈正相关（Western blot ：r＝0．681、P＝0．000;RT‐PCR：r＝0．641,P＝0．000）,均与肿瘤大小和分化程度有关;（5）Sp3高表达的病例预后较低表达的病例差（P＜0．05）。结论 Sp3在 HCC发生中起促进作用且与肿瘤恶性程度相关;Wnt通路可能是其参与 HCC发生、发展的途径。     

风湿性心脏病二尖瓣置换术患者右心室功能评价

目的应用实时三维超声心动图（real-time three-dimensional echocardiography,RT-3DE）评价风心病二尖瓣置换术前、后右心室功能的变化。方法通过RT-3DE对85例二尖瓣狭窄伴（或）二尖瓣反流行二尖瓣置换术患者,采集其手术前、后半年右心室全容积图像;将RT-3DE图像导入Tomtec 4D Cardio View工作站,手动调节图像并描记心内膜边界后,软件分析自动得到RVEDV、RVESV、RVEF;手动计算RVSV,分析其手术前后右心室功能相关指标变化情况。结果无论窦性心律（SR）组（39例）还是心房颤动（AF）组（46例）,RVEDV、RVESV手术后均较手术前有所减小;RVSV、RVEF有所增大;各测值手术前、后均有明显的统计学差异（P〈0.05）;手术前、后,SR组测值均较AF组大,但两组各测值间,仅RVEF有统计学意义（P〈0.05）,相关分析显示：RVEDV手术前后相关性高于RVESV（r=0.784,P＜0.05）,提示风心病患者右心功能不全主要与舒张末容积增大有关。结论风湿性心脏病二尖瓣膜置换术后半年时,SR组及AF组患者右心容积均较手术前明显减小,右心功能较前明显改善,SR组较AF组改善明显,这与临床观察一致;二尖辩病变的解除能有效改善患者右心功能。     

风湿性心脏瓣膜病患者钾离子通道特性变化的实验研究

目的:探讨风湿性心脏瓣膜病(简称风心病)患者心房组织细胞Kvl.5钾通道的变化。方法:将风心病患者分为窦性心律组(SR)、阵发性房颤组(PAF)和慢性房颤组(CAF)。应用全细胞膜片钳技术记录各组单个右心耳组织细胞超快速延迟整流钾电流(ultrarapid delayed rectifier current,IKur)的表达。结果:指令电压为+10~+50mV时,慢性房颤组(n=22)IKur密度较窦性心律组(n=25)明显降低。阵发性房颤组(n=23)IKur密度与窦性心律组差异无统计学意义(P>0.05);其中,在+50mV时,电流由窦性心律组(8.98+1.69)PA/pF降为房颤组的(4.17+1.82)PA/pF(P<0.01),降低幅度为(53.6+1.4)%。阵发性房颤组(8.21+1.54)PA/pF与窦性心律组差异无统计学意义(P>0.05),与慢性房颤组差异有统计学意义(P<0.01)。结论:Ikur密度在发生慢性房颤的风心患者心房肌细胞中密度明显下降,提示Kv1.5钾通道的变化与风心病房颤的发生有关。     

结缔组织生长因子、肝细胞生长因子与风湿性心脏病心房颤动患者心房纤维化的关系

目的:检测风湿性心脏病心房颤动患者心房组织中结缔组织生长因子(CTGF)、肝细胞生长因子(HGF)、MAPKs信号通路分子的磷酸化水平,探讨房颤心房纤维化的可能分子机制.方法:21例风湿性心脏病患者于术中获取约200 mg的右心房肌组织,分为窦律(SR)组11例和房颤(AF)组10例.Masson病理染色观察心房纤维化,免疫组化测定心房肌组织中CTGF、HGF的蛋白表达,western blot测定心房肌组织中MAPKs信号通路分子的磷酸化水平.结果:与SR组比较,CTGF、MAPKs信号通路分子的磷酸化水平及胶原容积分数在AF组显著增加,而HGF的蛋白表达量显著降低,差异具有统计学意义(P＜0.001).结论:风湿性心脏病房颤患者心肌组织中CTGF的表达增加及HGF的表达降低,可能激活了MAPKs信号通路分子的磷酸化表达,从而促进心房纤维化,参与房颤的发生与维持.     

风湿性心脏病合并慢性心房颤动右心耳1.5通道mRNA和蛋白表达的研究

目的观察超速延迟整流性钾通道(kv1.5通道)在风湿性心脏病合并慢性心房颤动(AF)患者右心耳组织中的基因表达变化,探讨其变化在AF的发病与维持机制中的作用。方法采用RT-PCR和Westernblot技术检测风湿性心脏病合并心房颤动患者的右心耳组织中1.5通道mRNA和蛋白的表达情况。结果右心耳心房肌细胞kv1.5通道mRNA表达水平心房颤动组比窦性心律组明显减低(P<0.05);kv1.5通道蛋白表达水平亦比窦性心律组明显减低(P<0.05),两者具有一致性。结论慢性心房颤动时1.5通道mRNA和蛋白的表达比窦性心律时表达明显减低,可能为心房细胞阻止电重构而进行自身适应的结果。     

二维斑点追踪显像及实时三维成像技术评价风湿性心脏病二尖瓣狭窄患者左心房功能

目的：探讨二维斑点追踪显像（STI）和实时三维超声心动图（RT-3DE）相结合评价风湿性心脏病二尖瓣狭窄患者左心房功能的临床价值。方法：42例风湿性心脏病二尖瓣狭窄患者根据是否伴发房颤分为窦性组17例和房颤组25,与24例健康志愿者（对照组）分别接受常规超声心动图检查,收集一般资料;采集二维图像,STI分别测量左房间隔和侧壁各节段左窒收缩期应变率（SR S）、左室舒张早期应变率（SR E）、左房收缩期应变率（SR A）;采集三维图像,RT-3DE测量左房最小容积（LAV min）、左房最大容积（LAV max）以及左房射血分数（LAEF）。结果：与对照组相比,窦性组和房颤组中左心房各节段的SR S、SR E、SR A测值均降低（P〈0.05）,左房前后径（LA）、LAV max、LAV min测值均明显增大（P〈0.01）,LAEF则明显减小（P〈0.01）。与窦性组相比,房颤组侧壁、房间隔的基底段及房间隔房顶段的SR S明显降低（P〈0.01）,侧壁中间段、房顶段,房间隔中间段的SR S值减低（P〈0.05）,SR E测值降低（P〈0.05）。与窦性组相比,房颤组LAV max、LAV min均明显增大（P〈0.01）,LA也增大（P〈0.05）,LAEF无差异。结论：STI和RT-3DE相结合的方法能更准确地评价风湿性心脏病二尖瓣狭窄患者左心房整体及局部的功能,为临床评价左心房功能提供又一有效方法。