miR-134通过下调叉头盒蛋白M1抑制肝细胞癌细胞增殖

目的 探讨miR-134下调叉头盒蛋白M1 (forkhead box M1,FOXM1)的机制及其影响肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞增殖的作用.方法 应用CCK-8法检测miR-134对HCC细胞增殖的作用;经Western blot和Real-time PCR检测人正常肝细胞L02和5种HCC细胞系中FOXM1和miR-134的表达;用miR-134模拟物(miR-134 mimic)或miR-134抑制剂(miR-134 inhibitor)转染HCC细胞后,经Western blot和Real-time PCR检测FOXM1及其下游靶基因CyclinD1的表达;应用生物信息学分析miR-134在人FOXM1 3'-UTR的可能结合位点,通过报告基因检测实验分析miR-134与FOXM1的3'-UTR的特异性结合;将miR-134 mimic和FOXM1表达质粒(无3'-UTR)共转染于HCC细胞后,经CCK-8法检测细胞的增殖情况.结果 miR-134可显著抑制HCC细胞增殖(P＜0.05);与人正常肝细胞L02相比,miR-134在HCC细胞中的表达明显降低(P＜0.05),而FOXM1蛋白表达明显增强,二者存在负相关(R2=0.705,P＜0.05);miR-134可显著下调FOXM1蛋白及其下游靶基因CyclinD1的表达(P＜0.05);报告基因检测实验证实miR-134可特异性结合于FOXM1 mRNA的3'-UTR(P ＜0.01);细胞增殖实验检测结果显示,过表达缺失3'-UTR的FOXM1可显著减弱miR-134对HCC细胞增殖的抑制效应(P＜0.05).结论 miR-134通过靶向结合于FOXM1的3'-UTR而下调FOXM1蛋白的表达,从而抑制HCC细胞的增殖.     

miR-33b-3p通过靶向CDKN1A调控软骨细胞增殖与凋亡及ECM降解

目的 探讨miR-33b-3p对软骨细胞增殖、凋亡及ECM降解的影响。方法 将miR-33b-3p mimics和miR-33b-3p inhibitors转染软骨细胞,通过CCK-8法检测软骨细胞的增殖情况,利用流式细胞术检测软骨细胞的凋亡百分数,RT PCR及Western blot实验检测周期相关蛋白CyclinD1、CyclinE1、p21和凋亡相关蛋白Bcl 2、caspase9、Bax以及ECM降解相关蛋白TIMPs、MMP-9、EMMPRIN的表达水平。荧光素酶活性分析实验检测CDKN1A是miR-33b-3p的作用靶点,最后将已构建的过表达pcDNA3.1 CDKN1A质粒转染软骨细胞,通过Western blot实验检测软骨细胞中CyclinD1、CyclinE1、p21、Bcl-2、caspase9、Bax以及TIMPs、MMP-9、EMMPRIN的表达水平。结果 与软骨细胞相比,miR 33b 3p mimic组细胞明显减少;细胞凋亡数显著升高;CyclinD1、CyclinE1表达下降,p21表达升高;Bcl-2表达下降,caspase9、Bax表达升高;TIMPs表达升高,MMP 9、EMMPRIN表达下降。miR-33b-3p靶向作用于CDKN1A基因的3′非翻译区（3′UTR）。与空白软骨细胞相比,过表达pcDNA3.1 CDKN1A质粒后,能够促进软骨细胞的增殖,抑制细胞的凋亡,促进ECM的降解。结论 miR-33b-3p通过靶向作用于CDKN1A基因的3′UTR,抑制软骨细胞的增殖,促进软骨细胞的凋亡,以及抑制软骨细胞ECM的降解。     

miR-483-5p在棕榈酸损伤的足细胞中的作用及机制

目的 探究miR-483-5p在棕榈酸损伤的足细胞中的作用及机制.方法 采用不同浓度棕榈酸、miR-483-5p in-hibitor、miR-483-5p mimic和KLF2质粒处理小鼠肾足细胞.Starbase和双荧光报告实验确定miR-483-5p与KLF2的靶向关系.CCK-8实验检测细胞活力,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-483-5p和KLF2水平,流式细胞仪检测细胞凋亡,比色法检测丙二醛(MDA),超氧化物歧化酶(SOD)水平,Western blot 检测 C caspase3、Nephrin 及 Podocin 蛋白表达水平.结果 棕榈酸呈浓度依赖性,抑制足细胞的细胞活力(P＜0.05),升高 miR-483-5p 表达水平(P＜0.05);0.5 mmol/L棕榈酸抑制细胞活力(P＜0.05)、促进细胞凋亡(P＜0.05)以及氧化应激(P＜0.05)的作用可以部分被miR-483-5p inhibitor 逆转.miR-483-5p 直接靶向 KLF2,miR-483-5p mimic能够进一步促进棕榈酸对细胞活力(P＜0.05)及Nephrin、Podocin表达水平(P＜0.05)的抑制作用,及其对氧化应激(P＜0.05)和C caspase3表达水平的促进作用,而KLF2可以部分逆转miR-483-5pmimic的作用.结论 miR-483-5p可以通过调节KLF2的表达进而影响棕榈酸诱导的足细胞损伤,这种调控机制结果有助于对糖尿病肾病患者预后问题的研究.     

miR-1721靶向CD44抑制前列腺癌PC-3细胞增殖、侵袭和肿瘤干细胞形成的研究

目的 探讨miR-1721靶向抑制CD44的表达及对前列腺癌细胞增殖、侵袭能力的影响。方法 构建CD44 mRNA 3′-非翻译区(3′-UTR)的荧光素酶报告载体系统,通过荧光素酶系统确定miR-1721对CD44 mRNA 3′-UTR的靶向关系;脂质体转染法将miR-1721模拟物转入前列腺癌PC-3细胞中,Western印迹法检测转染后CD44蛋白表达水平的改变;MTT法检测miR-1721mimics对PC-3细胞增殖能力的影响,Transwell小室法检测其对肿瘤细胞袭侵袭能力的影响;通过干细胞成球实验检测miR-1721mimics对前列腺癌干细胞样微球体形成的影响。结果 miR-1721能特异性地与CD44 mRNA 3′-UTR结合,抑制其荧光素酶的活性,干细胞标记基因CD44是miR-1721的靶基因。过表达miR-1721的PC-3细胞中CD44蛋白表达水平明显降低,可显著抑制PC-3细胞的侵袭能力,同时过表达CD44可负调控miR-1721对PC-3细胞增殖和侵袭能力的影响;干细胞成球实验证实,miR-1721能显著抑制前列腺癌细胞PC-3干细胞的微球体形成能力。结论 miR-1721通过靶向调控CD44的表达而抑制前列腺癌细胞增殖、侵袭能力及干细胞的形成能力。     

miR-26b-3p靶向CREB1调控神经胶质瘤细胞的增殖、迁移及侵袭

目的 探讨miR-26b-3p靶向调控环磷酸腺苷效应元件结合蛋白1(CREB1)表达水平影响胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的分子机制。方法 运用RT-qPCR和Western blotting检测不同级别胶质瘤中miR-26b-3p和CREB1的表达情况;生物信息学方法分析miR-26b-3p与CREB1结合的靶向序列。采用双荧光素酶报告基因检测miR-26b-3p对CREB1的靶向调控机制;将胶质瘤U251细胞分为对照组、miR-26b-3p mimic组及miR-26b-3p inhibitor组,采用Western blotting检测CREB1的表达变化,采用CCK-8法检测各组细胞增殖能力的影响,采用划痕实验检测各组细胞迁移能力的影响,采用Transwell检测各组细胞侵袭能力的影响,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡的影响。结果 miR-26b-3p的表达随着胶质瘤级别的增加而降低（P<0.05）,而CREB1的表达则逐渐增加,差异有统计学意义（P<0.05）;双荧光素酶报告基因结果显示miR-26b-3p可显著影响CREB1 3′UTR表达载体的荧光素酶活性,CR...     

miR-132在上皮性卵巢癌中的表达及作用机制研究

目的分析微小RNA-132(miR-132)在上皮性卵巢癌组织和细胞中的表达及其对上皮性卵巢癌细胞迁移与侵袭的作用机制。方法收集2018年10月—2020年2月蚌埠医学院第一附属医院妇瘤科手术切除的卵巢癌及癌旁非肿瘤组织标本36份,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测卵巢癌组织、癌旁组织中miR-132相对表达水平;体外培养人正常卵巢上皮细胞(IOSE80,正常对照组)和卵巢癌SKOV3细胞,对卵巢癌SKOV3细胞进行转染并分为空白对照组、LV-NC(阴性对照)组和LV-miR-132 mimic(模拟物)组,qRT-PCR检测各组细胞中miR-132、丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)mRNA相对表达水平,Transwell法检测各组细胞侵袭率,细胞划痕实验检测各组细胞迁移率,双荧光素酶报告基因检测miR-132与MAPK1靶向关系,蛋白免疫印迹法检测各组细胞MAPK1、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9蛋白相对表达水平。结果与癌旁组织比较,卵巢癌组织中miR-132相对表达水平显著降低(t/P=19.166/0.000)。与正常对照组比较,卵巢癌SKOV3细胞中miR-132相对表达水平显著降低(P<0.05),MAPK1 mRNA相对表达水平显著升高(P<0.05);与空白对照组、LV-NC组比较,LV-miR-132 mimic组细胞miR-132相对表达水平显著升高(P<0.05);与空白对照组、LV-NC组比较,LV-miR-132 mimic组细胞侵袭率、各时间点迁移率、MAPK1 mRNA和蛋白、MMP-2、MMP-9蛋白相对表达水平均显著降低(F/P=19.166/0.000,42.795/0.000,64.543/0.000,40.513/0.000,41.805/0.000,32.021/0.000,81.672/0.000,88.132/0.000)。miR-132 mimic+MAPK1-Wt 3′-UTR组的荧光素酶相对活性低于miR-132 NC+MAPK1-Wt 3′-UTR组,miR-132 mimic+MAPK1-Mut 3′-UTR组的荧光素酶相对活性高于miR-132 mimic+MAPK1-Wt 3′-UTR组(F/P=17.369/0.000)。结论miR-132在上皮性卵巢癌组织及细胞中均低表达,上调miR-132可能通过靶向下调MAPK1来抑制卵巢癌细胞迁移、侵袭。     

miR-924靶向TGM2抑制胃癌MGC803细胞增殖

探讨miR-924影响胃癌MGC803细胞增殖的分子机制。首先预测靶向结合组织型转谷氨酰胺酶(TGM2)的miRNAs,分析miR-924调控TGM2基因3′-UTR结合位点及两者的靶向结合。然后将miR-924导入MGC803细胞,检测其对TGM2表达及MGC803细胞增殖的影响,以及JAK3、STAT3及其磷酸化蛋白表达情况。发现miR-924与TGM2基因3′UTR的864-871位核苷酸靶向结合,并抑制MGC803细胞中TGM2 mRNA及蛋白质表达(P＜0.05)。miR-924高表达后MGC803细胞的生长速度减慢,克隆形成能力降低;JAK3与STAT3蛋白磷酸化水平下调(P＜0.05)。由此得出,miR-924通过靶向抑制TGM2表达,下调JAK3/STAT3通路活化,降低MGC803细胞增殖。     

靶向肝素酶基因的microRNAs在胃癌中的表达

目的 检测胃癌组织中肝素酶基因(heparanase, HPA)及可能靶向其表达的microRNAs(miRNAs)的表达水平。方法 运用实时定量PCR检测HPA在胃癌组织中的表达变化;根据miRNAs与HPA 3’非翻译区(3’-UTR)序列的结合情况,运用生物信息学方法筛选出可能靶向HPA的miRNAs,并利用实时定量PCR检测这些miRNAs在胃癌组织中的表达水平。结果 HPA在胃癌组织中表达水平较癌旁组织和正常组织高,生物信息学分析显示miR-18b、miR-137、miR-502和miR-299-3p可能结合于HPA的3’-UTR上,抑制其表达,实时定量PCR检测结果显示miR-18b、miR-137、miR-502和miR-299-3p在胃癌组织中的表达都较癌旁组织和正常组织低。结论 HPA在胃癌组织中的高表达,miR-18b、miR-137、miR-502和miR-299-3p在胃癌组织中的低表达说明这些miRNAs可能靶向HPA从而影响胃癌的发生发展。     

miR-34a靶向调控NOTCH1基因对SW480细胞增殖的影响

目的 探讨miR-34a靶向调控NOTCH1基因表达而对结肠癌SW480细胞增殖的影响.方法 通过生物信息学预测,NOTCH1为miR-34a特异性靶基因.构建含miR-34a结合位点的NOTCH1基因3 '-UTR域荧光素酶报告载体.通过荧光素酶报告载体系统检测miR-34a与NOTCH1的3’-UTR相互作用对荧光素酶活性的影响;免疫印迹技术检测miR-34a对NOTCH1蛋白表达的影响.采用MTT法及流式细胞检测转染miR-34a对SW480细胞增殖的影响.结果 经过酶切及基因测序鉴定,NOTCH1基因3'-UTR序列的双荧光素酶报告重组质粒构建成功;荧光素酶结果显示在SW480细胞中加入miR-34a的类似物和重组载体,荧光素酶的活性是只加入空载体的SW480组53.4％ (P=0.003 8);而在HEK293细胞中加入miR-34a的抑制物和重组载体,荧光素酶的活性是只加入空载体的HEK293组145％(P=0.002 1),说明miR-34a有与NOTCH1的3’-UTR位点相结合.免疫印迹结果显示在SW480细胞中加入miR-34a的类似物,NOTCH1蛋白的表达水平是未处理SW480组下降53.6％(P＜0.05);而在HEK293细胞中加入miR-34a的抑制物,NOTCH1蛋白的表达水平较未处理HEK293组升高78.9％ (P =0.03),说明miR-34a负性调控NOTCHl蛋白的表达.miR-34a过表达的SW480细胞较未处理的SW480的生长速度明显减慢(P＜0.05),且阻滞在G0～G1期,说明miR-34a过表达后能抑制SW480细胞增殖.结论 miR-34a负性靶向调控NOTCH1基因的表达而抑制SW480细胞的增殖.     

miR-483-5p靶向Timp2调控破骨细胞的生成

目的：miR-483-5p可促进破骨细胞分化和骨破坏，本研究探讨miR-483-5p是否通过靶向作用于Timp2调控破骨细胞的生成。方法：采用miRNAs靶基因预测软件Target Scan8.0对miR-483-5p的靶基因进行预测，并构建野生型和突变型3’UTR质粒，通过双荧光素酶报告基因验证靶基因是否与miR-483-5p存在靶向调控关系。用免疫印迹方法检测miR-483-5p的mimics或inhibitor转染细胞后靶蛋白表达水平的相应变化。用靶基因si RNA或靶蛋白慢病毒转染或感染细胞，RANKL诱导后分别进行TRAP染色和q-PCR检测。结果：运用生物信息学软件预测miR-483-5p的靶基因，发现具有调控破骨细胞作用的Timp2基因，且双荧光素酶报告基因检测系统发现miR-483-5p可以与预测的靶基因Timp2基因的3′-UTR位点互补，两者之间存在靶向调控关系。在RAW264.7细胞中上调miR-483-5p水平可减少Timp2的表达；敲低细胞中的Timp2，诱导后较正常组破骨细胞数量显著增多，且破骨细胞特异性基因表达升高。将靶基因和miR-483-5p共转染入细...     

MiR-101-3p通过靶向抑制斯钙素1减轻IL-1β诱导的软骨细胞损伤

目的：探究微小RNA-101-3p (microRNA-101-3p,miR-101-3p)对IL-1β诱导的骨关节软骨细胞损伤的影响及其 潜在的机制。方法：将骨关节软骨细胞随机分为对照组(NC组)、IL-1β组、阴性对照组(IL-1β+miR-NC组),miR-101- 3p组(IL-1β+miR-101-3p组),细胞转染后再用IL-1β(10 ng/mL)诱导软骨细胞。Real-time PCR和蛋白质印迹法检测不同 浓度的IL-1β(0,1,5,10 ng/mL)诱导的细胞中miR-101-3p和斯钙素1(stanniocalcin 1,STC1)的表达;采用MTT检测细 胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;caspases检测试剂盒检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3/9(caspase-3/9)的表 达;蛋白质印迹法检测炎性和细胞外基质(extracellular matrix,ECM)、金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP9) 和II型胶原的表达。另外,将野生型STC1 的3'-非编码区(untranslated regions,UTR)(STC1-3'-UTR-WT)或者突变型STC1 的3'-UTR(STC1-3'-UTR-MUT)分别与miR-101-3p模拟物(miR-101-3p mimic)和对照物(miR-NC)共转染细胞,采用荧光素 酶报告实验检测miR-101-3p对STC1的调控作用。在miR-NC(miR-NC组),miR-101-3p(miR-101-3p组),anti-NC(anti-NC 组)和anti-miR-101-3p(anti-miR-101-3p组)分别转染细胞后,采用蛋白质印迹法检测细胞中STC1蛋白的表达。为检测 STC1是否参与miR-101-3p对软骨细胞的作用,将细胞随机分为miR-101-3p组(IL-1β+miR-101-3p组)、过表达对照组(IL- 1β+miR-101-3p+ad-GFP组)、过表达STC1组(IL-1β+miR-101-3p+ad-STC1组)。同样分别用MTT 检测细胞增殖;流式细胞 仪检测细胞凋亡;caspases检测试剂盒检测caspase-3/9的表达;蛋白印迹法检测炎性和ECM相关蛋白的表达。结果： 与0 ng/mL IL-1β相比,不同浓度IL-1β诱导的软骨细胞中miR-101-3p水平显著下降(均P<0.05),STC1的水平则显著上 升(均P<0.05)。与NC组相比,IL-1β组软骨细胞增殖率下降(P<0.05),凋亡率增加(P<0.05),caspase-3/9,IL-6和TNF-α 的水平均显著上升(均P<0.05),MMP9的表达显著上调(P<0.05),II型胶原表达显著下调(P<0.05)。与IL-1β+miR-NC组 相比,IL-1β+miR-101-3p组软骨细胞增殖率上升(P<0.05),凋亡率降低(P<0.05);caspases,IL-6和TNF-α的水平均显著 下降(均P<0.05);MMP9的表达下降(P<0.05),II型胶原表达上调(P<0.05)。荧光素酶报告检测结果表明：与miR-NC 组相比,miR-101-3p组可靶向抑制STC1的水平(P<0.05)。蛋白质印迹法结果表明：与miR-NC组相比,miR-101-3p组 STC1水平下降(P<0.05);与anti-NC组相比,anti-miR-101-3p组STC1水平上升(P<0.05)。与miR-101-3p+ad-GFP组相比, miR-101-3p+ad-STC1组STC1反转了miR-101-3p对IL-1β诱导的软骨细胞增殖、凋亡、炎性反应及ECM相关蛋白的影响。 结论：调节miR-101-3p/STC1通路能够保护IL-1β诱导的骨关节软骨细胞损伤。     

靶向调控miR-21-5p上调TIMP3抑制膀胱癌SCSP-571细胞ECM和EMT的机制研究

目的 探讨靶向调控miR-21-5p上调金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP3)抑制膀胱癌细胞外基质降解(ECM)和上皮间质转化(EMT)的作用效果与机制。 方法 96孔板培养膀胱癌SCSP-571细胞，分对照组、空载质粒组、miR-21-5p沉默组、TIMP3沉默组、miR-21-5p+TIMP3沉默组。对照组常规培养，空载质粒组加空载质粒共培养，miR-21-5p沉默组加入miR-21-5p inhibitor；TIMP3沉默组加入TIMP3-shRNA慢病毒感染质粒；miR-21-5p+TIMP3沉默组同时加入miR-21-5p inhibitor和TIMP3-shRNA慢病毒感染质粒。培养72 h，采用荧光定量PCR实验测定各组miR-21-5p和TIMP3的mRNA表达，WB实验测定各组ECM和EMT标志物的表达，Transwell小室实验测定各组细胞迁移能力和侵袭能力。 结果 与对照组相比，miR-21-5p沉默组E钙粘蛋白和TIMP3蛋白表达水平升高，同时N钙粘蛋白、纤维蛋白、MMP-2、MMP-7、MMP-9蛋白表达水平，细胞迁移与侵袭能力降低；TIMP3沉默组E钙粘蛋白和TIMP3蛋白表达水平降低，同时N钙粘蛋白、纤维蛋白、MMP-2、MMP-7、MMP-9蛋白表达水平，细胞迁移与侵袭能力升高，差异有统计学意义(均P＜0.05)。miR-21-5p+TIMP3沉默组的各项指标介于miR-21-5p沉默组与TIMP3沉默组之间，差异有统计学意义(P＜0.05)。 结论 靶向调控miR-21-5p能够起到抑制膀胱癌细胞侵袭与转移的效果，作用机制可能与提高了TIMP3表达，从而抑制了MMPs介导的ECM与EMT有关。      

在肾脏高效导入miR-483-5p的方法

目的研究在肾脏高效导入目的基因miR-483-5p的方法。方法肾皮质注射miR-483-5p慢病毒：取35只C57BL/6J小鼠, 随机分为空白对照组、慢病毒低剂量组（每侧肾皮质注射5 μL慢病毒）和慢病毒高剂量组（每侧肾皮质注射20 μL慢病毒）,注射 后7 d和21 d处死取材;构建可诱导全身过表达miR-483-5p的转基因小鼠;利用cre-loxp系统构建肾小管特异过表达miR-483- 5p的转基因小鼠。3种模型小鼠利用全自动生化分析仪检测血清中尿素氮（BUN）水平判断肾功能,组织切片HE 染色观察肾脏 组织结构,TUNEL法检测肾脏细胞凋亡。Real-time qPCR 检测miR-483-5p在肾脏的表达。结果3种过表达miR-483-5p小鼠 肾功能均正常,肾脏组织结构无明显变化,肾脏细胞无凋亡。肾皮质注射20 μL LV3-miR-483-5p 后21 d表达最高（1.2±0.43 vs 8.6±1.09,P<0.001）。可诱导全身过表达miR-483-5p 的转基因动物在肾脏表达效率较低（0.9±0.09 vs 1.7±0.19,P<0.05）,Creloxp 转基因小鼠可实现在肾脏特异性表达,且效率较高（1.6±1.13 vs 12.36±3.89,P<0.05）。结论首次构建肾小管特异过表达 miR-483-5p的转基因小鼠模型,实现在肾小管特异高效表达,且不影响肾脏结构及功能,可以作为研究miR-483-5p在肾脏中的 作用及其机制的良好模型;C57BL/6J小鼠每侧肾皮质注射20 μL LV3-miR-483-5p 后21 d过表达miR-483-5p效率较高,不影响 肾功能,对肾组织无损伤,且模型构建时间较短,为miR-483-5p在肾脏中的作用及其机制研究提供良好的实验模型。     

miR-211对高糖诱导下晶状体上皮细胞氧化应激反应的调控作用

目的 探讨miR-211对高糖诱导下晶状体上皮细胞氧化应激反应的调控作用及其可能存在的作用机制。方法将HLEC-B3细胞在含不同浓度（0、10、20、40 mmol/L）葡萄糖的培养基中培养48 h,RT-PCR检测细胞miR-211表达,Western blot检测细胞SIRT1蛋白表达,试剂盒检测总抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)及丙二醛(MDA)浓度;将含miR-211抑制剂（miR-211 inhibitor）和miR-211阴性对照（miR-211 NC）的质粒转染至HLEC-B3细胞,在含40 mmol/L葡萄糖的培养基中培养48 h后,试剂盒检测T-AOC、SOD、GSH-PX及MDA浓度,Western blot检测细胞SIRT1、FoxO3a蛋白表达。结果HLEB-3细胞中miR-211的表达随着葡萄糖浓度的升高而增加（F=7.271, P<0.001）,SIRT1的表达随着葡萄糖浓度的升高而降低（F=10.571, P<0.001）;HLEB-3细胞中T-AOC、SOD和GSH-PX浓度随葡萄糖浓度的升高而降低（FT-AOC=10.577, P=0.000;FSOD=12.540, P=0.000;FGSH-PX=15.121, P=0.000）,MDA浓度随着葡萄糖浓度的升高而增加（FMDA=13.185, P=0.000）;miR-211 inhibitor组细胞内T-AOC、SOD、GSH-PX浓度显著高于miR-211 NC组（tT-AOC=5.421,P=0.000;tSOD=10.271,P=0.000;tGSH-PX=7.836,P=0.000）,MDA浓度显著低于miR-211 NC组（tMDA=8.757,P=0.000）;miR-211 inhibitor组细胞内SIRT1蛋白表达高于miR-211 NC组（t=15.641,P=0.000）,FoxO3a蛋白表达低于miR-211 NC组（t=9.823,P=0.000）。结论miR-211能降低高糖诱导下晶状体上皮细胞的抗氧化应激能力,这一过程可能是通过抑制SIRT1的表达而实现的。     

miR-490-3p调控SW1990胰腺癌细胞上皮间充质转化

  目的  研究miR-490-3p在分子水平上通过HMGA2蛋白对SW1990细胞上皮间充质转化的影响。  方法  通过实时荧光定量PCR法（RT-qPCR）检测正常胰腺导管上皮细胞HPDE和人胰腺癌细胞SW1990中miR-490-3p的表达。通过转染质粒[miR-490-3p阻遏物（inhibitor）和miR-490-3p模拟物（mimic）以及各自的阴性对照质粒]调控miR-490-3p在SW1990细胞中的表达并通过RT-qPCR法验证转染效率。转染48 h后，通过CCK8检测、划痕法、Transwell小室检测，流式细胞仪检测等分别检测细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭等恶性生物学特征的影响。通过Western blot检测细胞中上皮间充质转化相关蛋白E-cadherin和N-cadherin的蛋白表达水平。同时，用数据库预测miR-490-3p及其靶基因HMGA2的靶向关系，并通过双荧光素酶报告基因实验进行验证，通过Western blot检测细胞中HMGA2的蛋白表达水平。  结果  （1）与HPDE正常细胞相比，SW1990癌细胞中miR-490-3p表达水平明显降低（P = 0.215）；（2）miR-490-3p 上调后，SW1990细胞的凋亡率显著高于对照组（P < 0.0001），而细胞增殖、迁移和侵袭能力显著低于对照组（P < 0.0001）。miR-490-3p 下调后，SW1990细胞的凋亡率显著低于对照组（P < 0.0001），而细胞增殖、迁移和侵袭能力显著高于对照组（P < 0.0001）；（3）miR-490-3p 上调后，SW1990细胞中的N-cadherin表达量显著高于对照组（P < 0.0001），而E-cadherin的表达水平显著低于对照组（P < 0.0001）；miR-490-3p 下调后，SW1990细胞中的N-cadherin表达量显著低于对照组（P < 0.0001），而E-cadherin的表达水平显著高于对照组（P < 0.0001）；（4）HMGA2是miR-490-3p的靶向基因。  结论  miR-490-3p可通过靶向HMGA2抑制SW1990胰腺癌细胞EMT，从而影响胰腺癌的的发生发展进程，揭示HMGA2和miR-490-3p可能为胰腺癌诊断和治疗的靶点。     

miR-21对宫颈癌HeLa细胞辐射敏感性的影响

目的：探讨miR-21与宫颈癌HeLa细胞辐射敏感性之间的关系,阐明miR-21对细胞凋亡和自噬改变的可能作用机制。方法：人宫颈癌HeLa细胞分为假照组和4 Gy照射组,分别转染miR-21 NC（阴性对照）、miR-21 mimics、miR-21 inhibitor NC和miR-21 inhibitor。实时荧光定量PCR检测照射前和照射后miR-21的表达水平;集落形成实验观察miR-21对HeLa细胞辐射敏感性的影响;流式细胞术检测细胞凋亡和自噬细胞百分率;采用生物信息学方法预测miR-21的靶基因;荧光素酶报告基因分析验证miR-21与靶基因3′UTR的结合;Western blotting法检测相关蛋白beclin1表达水平。结果：与假照组比较,4 Gy照射组miR-21表达水平明显增加(P<0.05）;集落形成实验,与miR-21 NC组比较,miR-21 mimics组HeLa细胞辐射敏感性无明显变化(P>0.05）;与miR-21 inhihitor NC组比较,miR-21 inhibitor 组HeLa细胞辐射敏感性无明显变化(P>0.05）;与miR-21 NC+4 Gy组比较,miR-21 mimics+4 Gy组HeLa细胞凋亡率明显增加(P<0.05）;与miR-21 inhibitor NC组比较,miR-21 inhibitor组HeLa细胞凋亡率明显减少（P<0.05）。与miR-21 NC组比较,miR-21 mimics组自噬率升高（P<0.05）。与miR-21 NC+4 Gy组比较,miR-21 mimics+4 Gy组自噬率升高（P<0.05）;与miR-21 NC+4 Gy组比较,miR-21 mimics+4 Gy组beclin1蛋白表达水平增加（P<0.05）。
结论：发现了miR-21新的靶基因beclin1。过表达miR-21促进辐射诱导的凋亡和自噬,但对于宫颈癌HeLa细胞辐射敏感性无直接影响。
［关键词］ miR-21;宫颈肿瘤;HeLa细胞;辐射敏感性;细胞凋亡;自噬     

抑制miR-30a/HMGA2介导的骨肉瘤细胞自噬对化学药物治疗诱导的细胞凋亡的作用

目的：探讨微小RNA(microRNA,miR)-30a/高迁移率族蛋白A2(high mobility group protein A2,HMGA2)介导的骨肉瘤细胞自噬对化学药物治疗(以下简称化疗)药物诱导的细胞凋亡的影响。方法：随机选取30例经化疗药物治疗后表现为化疗敏感和化疗抵抗的骨肉瘤患者组织,分为化疗敏感组(n=15)和化疗抵抗组(n=15),采用real-time PCR检测两组中miR-30a和HMGA2的mRNA表达水平,以及骨肉瘤细胞U2-OS经不同浓度的化疗药物(顺铂、阿霉素、氨甲蝶呤)处理后miR-30a的mRNA表达水平;采用蛋白质印迹法检测细胞内自噬相关因子Beclin 1,自噬微管相关蛋白1轻链3B(microtubule associated protein 1 light chain 3B,LC3B)、自噬抑制因子P62的表达情况。在骨肉瘤细胞U2-OS中转染miR-30a模拟物和抑制剂,构建miR-30a高表达组、低表达组和对照组,采用蛋白质印迹法检测经过顺铂和阿霉素处理后上述3组细胞内Beclin 1,LC3B和P62的表达情况;采用单丹磺酰尸胺(monodansylcada,MDC)染色法检测细胞内自噬水平,ROS荧光探针-二氢乙啶(dihydroethidium,DHE)检测细胞内ROS水平,细胞计数试剂盒8(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡程度,线粒体膜电位荧光探针JC-1检测细胞线粒体氧化损伤程度;采用双荧光素酶法检测miR-30a与HMGA2的相互作用,同时通过转染HMGA2模拟物和HMGA2-shRNA干扰质粒载体,构建HMGA2高表达组、低表达组和对照组,采用蛋白质印迹法检测经过顺铂和阿霉素处理后上述3组细胞内Beclin 1,LC3B和P62的表达情况。结果：化疗抵抗组中miR-30a的mRNA水平显著低于化疗敏感组(P<0.05),HMGA2的表达与miR-30a相反(均P<0.05)。在相对低浓度(5 μml/L)的化疗药物刺激下,骨肉瘤细胞U2-OS内的miR-30a mRNA表达下调,Beclin 1和LC3B均显著上调(均P<0.01),P62显著下调(P<0.01)。在miR-30a高表达组中,与对照组相比,Beclin 1和LC3B的表达水平与miR-30a明显下降(P<0.05),P62的表达水平明显升高(P<0.05),在miR-30a低表达组中则相反;在经过化疗药物处理后的miR-30a高表达组中,细胞自噬水平更低,细胞存活率更低,ROS水平更高,线粒体氧化损伤程度更高,细胞凋亡水平更高(均P<0.05),miR-30a低表达组则相反(均P<0.05)。双荧光素酶报告基因检测验证了miR-30a与HMGA2的靶向互补配对关系;与对照组相比,HMGA2高表达组中Beclin 1和LC3B的表达水平与HMGA2明显升高(P<0.05),P62的表达水平明显下降(P<0.05),在HMGA2低表达组中则相反。结论：积极发挥miR-30a/HMGA2抑制骨肉瘤细胞自噬的功能,能够破坏细胞应对ROS介导的自噬与凋亡的平衡,增强化疗药物对细胞的杀伤作用。     

长链非编码RNA MALAT1靶向miR-485-3p调控乳腺癌细胞对紫杉醇的耐药性

目的 研究长链非编码RNAMALAT1对乳腺癌细胞紫杉醇耐药性的影响机制。方法 运用紫杉醇浓度梯度诱导法检测紫杉醇耐药乳腺癌细胞SK-BR-3;将si-NC组（转染si-NC）、si-MALAT1组（转染si-MALAT1）、pc DNA组（转染pc DNA）、pcDNAMALAT1组（转染pc DNA-MALAT1）、miR-NC组（转染miR-NC）、miR-485-3p组（转染miR-485-3p mimics）、si-MALAT1+antimiR-NC组（共转染si-MALAT1和anti-miR-NC）、si-MALAT1+anti-miR-485-3p组（共转染si-MALAT1和anti-miR-485-3p）,均用脂质体法转染SK-BR-3/PR细胞;MTT法检测细胞IC50;Western blot检测细胞中P-gp、Bax、Bcl-2的蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞中MALAT1与miR-485-3p的结合力。结果 与紫杉醇敏感SK-BR-3细胞相比, SK-BR-3/PR细胞的IC50、MALAT1均上调,miR-485-3p下调,差异具有统计学意义（P<0.05）。沉默MALAT1或过表达miR-485-3p均可下调SK-BR-3/PR细胞的IC50,下调P-gp和Bcl-2表达,上调Bax表达,差异具有统计学意义（P<0.05）。miR-485-3p是MALAT1的靶标。抑制miR-485-3p可逆转沉默MALAT1对SK-BR-3/PR细胞的IC50、P-gp、Bcl-2和Bax表达的影响,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 长 链非编码RNAMALAT1可调控乳腺癌细胞对紫杉醇的耐药性,其机制可能与靶向miR-485-3p下调P-gp、Bcl-2,上调Bax有关。     

miR-483-5p 通过靶基因 ERK1调控人类颗粒细胞增殖凋亡平衡

目的：证明 miR-483-5p 及其靶基因 ERK1参与调控人类颗粒细胞增殖凋亡平衡。方法①体外培养人正常颗粒细胞,调控其 miR-483-5p 超表达,聚合酶链反应（PCR）及Western blot 法检测 ERK1的 mRNA 及蛋白表达情况;将包含野生型或突变型的 ERK1 mRNA 3′UTR 的 DNA 片段克隆在荧光素酶标记的质粒,共转染 miR-483-5p mimics、control-miR mimics 和野生型、突变型重组质粒,检测其颗粒细胞相对荧光素酶活性;②将 miR-483-5p mimics 及 ERK1 siRNAs单独及共同转染颗粒细胞,MTT 法及 TUNEL 法分别检测三种情况下卵巢颗粒细胞的增殖、凋亡情况。结果① miR-483-5p 超表达后,ERK1基因及蛋白表达均下降;与 control-Wt（野生型）转染组相比,miR-483-Wt 组的荧光素酶活性显著降低;miR-483-Mut（突变型）与 control-Mut 转染组间荧光素酶活性的比较差异无统计学意义;② miR-483-5p mimics与 ERK1 siRNAs 单独及共同转染颗粒细胞,三种转染条件下颗粒细胞增殖均显著受抑制、凋亡率显著升高,且三种作用效果差异无统计学意义。结论 miR-483-5p 通过直接与靶基因 ERK1结合,参与调控人类颗粒细胞增殖凋亡平衡。     

miRNA-143对人鼻咽癌细胞CNE-2Z增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨miRNA-143对鼻咽癌细胞CNE-2Z增殖、迁移和侵袭的影响.方法 利用荧光定量PCR检测人永生化鼻咽上皮细胞(NP69)、高分化鼻咽癌细胞(CNE-1)、低分化鼻咽癌细胞(CNE-2Z)中miRNA-143的表达水平.利用感染慢病毒的方式建立稳定过表达miRNA-143的CNE-2Z细胞,并用荧光定量PCR法进行检测.通过CCK-8法检测过表达miRNA-143对CNE-2Z细胞增殖的影响,通过Transwell迁移和侵袭试验分析过表达miRNA-143对CNE-2Z细胞迁移和侵袭的影响.结果 低分化鼻咽癌细胞(CNE-2Z)中miRNA-143的表达水平显著低于CNE-1和NP69细胞(P<0.01).稳定过表达miRNA-143的CNE-2Z细胞(CNE-2Z/miR-143)中miRNA-143的表达水平显著高于CNE-2Z细胞(P<0.01)和慢病毒对照组细胞(CNE-2Z/miR-NC)(P<0.01).细胞增殖能力检测显示,与CNE-2Z组和CNE-2Z/miR-NC组相比,CNE-2Z/miR-143组在72 h和96 h时细胞活力显著降低(P<0.05,P<0.01).Transwell迁移和侵袭试验结果显示,CNE-2Z/miR-143组与CNE-2Z组和CNE-2Z/miR-NC组相比细胞迁移和侵袭能力显著下降(P<0.01).结论 miR-143能够抑制鼻咽癌细胞CNE-2Z的增殖、迁移和侵袭能力,提示其可能对鼻咽癌的诊断、治疗及预后评价有重要意义.