在离体工作心脏上对比观察人参二醇组与三醇组皂甙的钙通道阻滞作用

在Wister大鼠的离体心脏上进行观察,以主动脉流量、冠脉流量、心输出量、每搏输出量、脉压、左室最高压、左室舒末压、室内压最大上升与最大下降速率等9项参数为心肌收缩性能的指标。100μg/ml人参二醇组皂甙与人参三醇组皂甙均使心肌收缩性能立即减弱,后者的作用比前者强。洗脱后,各项指标迅速恢复Ca~(2+)8μ/ml或肾上腺素0.01μg/ml均可使两种人参皂甙的作用逆转。同法应用2.66μg/ml尼莫地平时,心肌收缩性能的表现相似。以上结果表明人参二醇组与人参三醇组皂甙均有钙通道阻滞作用,且后者比前者的作用强。     

Rb1对B型钙通道的阻滞作用及其机理的单通道分析

在Wistar大鼠单个心室肌细胞上记录了B型钙通道的单通道活动。人参二醇组皂甙单体Rb1 250μg/ml显著抑制型钼单通道活动。其机制在于使其开放概率减少与开放时间缩短，而对通过此通道的离子流幅度无影响。     

R_(b1)对B型钙通道的阻滞作用及其机理的单通道分析

在Wistar大鼠单个心室肌细胞上记录了B型钙通道的单通道活动。人参二醇组皂甙单体R_(b1)250μg/ml显著抑制B型钙单通道活动,其机制在于使其开放概率减少与开放时间缩短,而对通过此通道的离子流幅度无影响。     

人参皂甙R_（b1）对在负膜电位开放的Ba~（2 ）和Ca~（2 ）通透Ca~（2 ）通道的阻滞作用

人参皂甙R_(b1)有抗心律失常抑制心肌收缩力等Ca~(2 )通道阻滞样作用。我们应用PC技术在培养的Wistar大鼠单个心室肌细胞上,以细胞贴附式记录了人参皂甙R_(b1)对该型钙通道单通道活动的影响。同时以钙通道激动剂Bay K8644为对照,证实了人参皂甙R_(b1)250μg/ml显著抑制钙单通道活动,使钙通道的开放概率减少、平均开放时间缩短,平均关闭时间延长,而对通过钙通道的离子流幅度无影响。Bay K8644 5μmmol/L使开放概率增加、平均开放时间延长、平均关闭时间缩短。     

人参三醇组皂甙单体Re钙通道阻滞作用的单通道分析

分离和培养新生的Wistar大鼠心室肌细胞。人参三醇组皂甙单体Re,钙通道阻滞剂异搏定或钙通道激动剂Bay k 8644被分别加入浸浴液。用斑片钳连细胞法,记录加药前后的B型钙通道的单通道活动。分别记录加Re前后的T型和L型钙通道活动。本实验证明了Re对三型钙通道具有阻滞作用,其机理是减少开放概率,缩短开放时间。     

人参、西洋参皂甙溶血作用的研究

目的：通过对人参、西洋参茎叶和根中皂甙溶血作用的观察，为人参、西洋参各种皂甙制作静脉注射剂提供依据。方法：本实验根据《中药制剂的安全试验和毒性实验》中溶血试验方法操作。结果：最低溶血浓度分别为，人参茎叶总皂甙0．40g／L，人参根总皂甙0．10g／L、西洋参茎叶总皂甙0.60g／L、西洋参根总皂甙0．10g／L、西洋参茎对原人参二醇组皂甙1．0g／L、西洋参根原人参二醇组甙0．80g／L；单体人参皂甙中--F20．12g／L，--Rg10．20g／L、--Rg20．16g／L；单体人参皂甙--Rb1、--Rb2、--Rb3、--Rd及拟人参皂甙P--F11在0．20g／L浓度时均无溶血作用。结论：人参根、西洋参根总皂甙强于茎叶总皂甙。     

Rg_2与R_f对钙通道作用的单通道分析

在单个Ｗｉｓｔａｒ大鼠乳鼠心室肌细胞上，用连细胞电压钳法，观察人参三醇组皂甙单体Ｒｇ２、Ｒｆ６０μｍｏｌ·Ｌ－１对钙通道单通道活动的影响，并与钙通道阻滞剂异博定７９μｍｏｌ·Ｌ－１、钙通道激动剂ＢＡＫ８６４４５μｍｏｌ·Ｌ－１对照，证明Ｒｇ２对钙通道有阻滞作用，其机理在于使钙通道的开放时间缩短、开放概率减少、关闭时间延长，而对Ｂａａ＋流幅值无明显影响，Ｒｆ可缩短Ｌ型钙通道的开放时间、延长关闭时间、降低开放概率。     

银杏内酯、刺五加皂甙、人参皂甙对氯化钴诱导化学缺氧的PC12细胞的保护作用

目的：研究银杏内酯、刺五加皂甙、人参皂甙对氯化钴诱导化学缺氧的PC12细胞的保护作用。方法：采用四甲基偶氮唑(MTT)比色分析法观察银杏内酯(37．5μg／ml)、刺五加皂甙(50μg／ml)、人参皂甙(60μg／ml)对氯化钴诱导化学缺氧的PC12细胞活性的影响。结果：银杏内酯、刺五加皂甙、人参皂甙能显著提高氯化钴诱导缺氧的PC12细胞的活性。结论：银杏内酯、刺五加皂甙、人参皂甙对氯化钴诱导缺氧损伤的PC12细胞有明显的保护作用。     

大豆总皂甙对培养心肌细胞自发性搏动与动作电位的影响

培养Wistar大鼠乳鼠的心室肌细胞,向培养基中分别加入浓度为1.56μg/ml至50μg/ml的大豆皂甙,可使心肌细胞群落的自发性搏动呈剂量依赖性抑制。洗脱大豆皂甙或向培养基中再加入10μg/ml肾上腺素均能使自发性搏动恢复。向培养基中加入大豆皂甙5μg/ml使心肌细胞动作电位的波幅、波宽、超射、最大舒张电位、阈电位、最大除极速度等各电参数立即减小。Ca~(2+)80μg/ml能使动作电位的抑制逆转。上述结果表明大豆皂甙对培养的鼠心肌细胞具有钙通道阻滞用。     

人参皂甙Rb2对培养人视网膜色素上皮细胞增生的抑制作用

目的：研究人参皂甙Rb2(Ginsenoside-Rb2)对体外培养视网膜色素上皮细胞增生的直接抑制作用及可能机制。方法：通过活细胞计数法与MTT比色法分别检测不同浓度（250、200、120、100、50、10μg/ml）Rb2t Rb2 150μg/ml在不同作用时间（6－120h)对RPE细胞增生及代谢的影响。结果：Rb2组细胞增殖受到抑制并出现细胞脱落，Rb2 200μg/ml具有最强的抑制效应，其明显抑制效应在6h即出现，96h达高峰。Rb2组A值明显低于对照组，RPE细胞生存率下降。结论：Rb2可能通过阻滞钙通道降低细胞内钙浓度、干扰RPE细胞代谢对RPE细胞增殖具有剂量依赖和时间依赖方式的抑制作用。     

活性氧对神经母细胞株SH-SY5Y细胞L型钙通道电流的影响

①目的 探讨氧自由基导致神经元钙超载的发生机制。②方法 在神经母细胞SH—SY5Y细胞体外培养的基础上，采用全细胞膜片钳技术，观察H2O2对SH—SY5Y细胞L型钙通道电流(ICa,L)的影响。③结果 H2O2能够明显增加峰值ICa,L，且该作用具有浓度依赖性。H2O2使ICa,L的I-V相关曲线下移，但对其形状和最大激活电位无明显影响。④结论 H2O2对L型钙通道有明显增强作用，此可能是其导致神经元钙超载的机制之一。     

5一羟色胺对人胎盘滋养细胞L-型钙通道的影响

目的探讨5一羟色胺对胎盘滋养细胞钙通道的影响。方法将体外培养的胎盘滋养细胞分为对照组和低（1．01xmol／L）、高（10．0μmol／L）浓度5一羟色胺组。采用全细胞膜片钳实验方法,在待测胎盘滋养细胞外液中分别加入Nimodpine（10μmol／L）、Flunarizne（10μmol／L）和替曲朵辛（Trxl01．Lmol／L）,进行电流检测;同样的实验条件和方法,在待测胎盘滋养细胞外液中分别加入5-TH（1μmol／L和101xmol／L）,测试电流值;在细胞外液中分别加入5-TH（μmol／L）和Nimodpine（10μmol／L）、5-TH（10μmol／L）和Nimodpine（10μmol／L）后再检测电流。结果胎盘滋养细胞L-型钙通道开放在一60--50mV之间,最大峰值电流在一40～30mV为82．31±6．46（pA）。加入Nimodpine（10μmol／L）。可阻断此电流大部分成份。Flunarizne（10Ixmol／L）和’兀X（10肛m0ⅣL）不能抑制该电流成份。加入5-TH（1μmol/L和10μmol／L）峰值电流明分别为104．77±10．84（pA）和117．16±9．67（pA）,与对照组相比有显著差异（P〈0．05）;加入5-TH（1μmo]／L）和Nimodpine（101xmol／L）、5一TH（10μmol／L）和Nimodpine（10μmol／L）后;峰值电流分别为85．35±6．54（pA）、89．42±7．62（pA）,与对照组相比无显著差异（P〉0．05）。结论5-TH可激动胎盘滋养细胞L-型钙通道,促使钙电流值增加。     

西洋参茎叶皂甙湖养的大鼠心肌细胞动作电位的影响

西洋参茎叶皂甙(PQS250、500μg/ml)使培养的Wistar大鼠心肌细胞动作电位的波幅、波宽、阈电位、最大舒张电位、最大除极速度及复极50％水平的动作电位波宽一致减小。实验结果表明,ROS可能具有钙通道阻滞作用。     

大鼠体内黄芩苷分析方法的建立

目的：：建立黄芩苷在SD大鼠体内的分析方法。方法：采用高效液相色谱法,使用色谱柱为ODS C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm）,流动相为乙腈：2%冰醋酸=20：80,流速为1.0ml/min,检测波长为278nm,柱温35℃,对黄芩苷对照品及模拟生物样品进行测定。结果：黄芩苷的浓度在0.015μg/ml-37.5μg/ml范围线性关系良好(r=0.9996）,高(37.5μg/ml）、中(7.5μg/ml）、低(0.75μg/ml）三个模拟生物样品的平均提取回收率分别为90%、96.12%、99.91%。结论：本研究建立的黄芩苷在大鼠体内的分析方法简便快捷、专属性好,精密度、准确度、重复性、稳定性和提取回收率等各项分析指标能够达到生物样品中药物定量分析研究的方法学要求。     

TNF-α对3T3-L1脂肪细胞胰岛素敏感性的影响及罗格列酮的干预作用

目的观察肿瘤坏死因子-α（TNF-α）对3T3-L1脂肪细胞胰岛素敏感性的影响及罗格列酮的干预作用。方法采用不同浓度TNF-α（5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml）处理3T3-L1脂肪细胞48h、采用20μg/ml TNF-α处理不同时间（6h、12h、24h、48h）及罗格列酮（10μmol/ml）预处理6h的3T3-L1脂肪细胞与20μg/mlTNF-α作用48h;以2-DG摄入法检测细胞对葡萄糖的摄取率。结果与对照组比较,5μg/L、10μg/L和20μg/LTNF-α作用各组分别使葡萄糖摄取率减少了25%（P〈0.01）、43%（P〈0.01）、58%（P〈0.01）;20μg/L TNF-α处理3T3-L1脂肪细胞6h、12h、24h、48h使葡萄糖的摄取率分别减少10%（P〈0.05）、28%（P〈0.01）、40%（P〈0.01）、57%（P〈0.01）,罗格列酮预处理能使20μg/ml TNF-α组脂肪细胞对葡萄糖的摄取率增加37%（P〈0.01）。结论TNF-α以浓度和剂量依赖方式导致脂肪细胞胰岛素抵抗;罗格列酮能明显改善此作用。     

罗哌卡因对大鼠离体主动脉收缩作用的钙离子调节机制

目的〓〖HTK〗研究Ca2+在罗哌卡因（ropivacaine）所致血管收缩反应中的调节作用。〖HTW〗方法〓〖HTK〗用等张肌力测定仪和Ca2+ 荧光分光光度计分别测定Wistar大鼠去内膜主动脉血管环和血管段对累积剂量罗哌卡因的收缩反应和细胞内Ca2+浓度（［Ca2+］i）的变化；并观察Ca2+通道阻滞剂尼卡地平(nicardipine)、肌质网三磷酸肌醇受体阻滞剂2-APB和细胞外液低浓度Ca2+对累积剂量罗哌卡因诱发的收缩反应和［Ca2+］i的影响。〖HTW〗结果〓〖HTK〗罗哌卡因诱发剂量关联性双相收缩反应：低浓度（0.03～0.3mmol/L）时肌张力逐渐增强，高浓度（1～3 mmol/L）时收缩张力依次回落。罗哌卡因所产生的这一收缩效应可分别被尼卡地平(1, 5, 10nmol/L)、2-APB (5, 10, 50μmol/L)和营养液中低浓度Ca2+（2, 1和0mmol/L）相关性抑制。罗哌卡因诱发与肌张力变化规律相同的双相［Ca2+］i升高；尼卡地平(10nmol/L)和2-APB(50μmol/L)预处理及营养液中去除Ca2+，明显降低罗哌卡因所诱发的［Ca2+］i的升高幅度。〖HTW〗结论〓〖HTK〗细胞外Ca2+内流和肌质网Ca2+释放所致的［Ca2+］i升高参与了罗哌卡因诱发的血管平滑肌收缩反应。     

雷公藤多甙对HaCaT细胞NF-κB的影响

目的:探讨雷公藤多甙(TWP)对HaCaT细胞核转录因子-κB(NF-κB)表达的影响。方法:体外培养人角质形成细胞株HaCaT细胞,设0.1μg/ml、0.5μg/ml、2.5μg/mlTWP组、空白对照组、P物质组。用上述药物预处理24h后,加入10-5mol/L的P物质作用30min,采用免疫组化、蛋白印迹和逆转录-聚合酶链反应法分别检测HaCaT细胞NF-κB阳性细胞表达率、NF-κB蛋白和mRNA表达情况。P物质组和空白组分别加入10-5mol/LP物质和细胞培养液。结果:空白组可见少量阳性细胞和一定量蛋白和mRNA表达。P物质组NF-κB阳性细胞表达率、蛋白和mRNA表达水平与空白组相比均明显升高;与P物质组相比2.5μg/ml雷公藤多甙组阳性细胞表达率、蛋白和mRNA水平均下降。而0.1μg/ml和0.5μg/ml雷公藤多甙组细胞NF-κB阳性细胞表达率、蛋白和mRNA表达水平与P物质组间无明显差异,且高于空白对照组。结论:小剂量的雷公藤多甙对HaCaT细胞核转录因子的表达无明显影响,大剂量的雷公藤多甙可下调HaCaT细胞的NF-κB的表达。     

服镁后血镁钙及24小时尿钙和钙/肌酐比值变化

研究服镁后，血镁钙及24h尿钙和钙／肌酐比值变化及与妊高征发生的关系。方法：采用前瞻性随机双盲的方法，对治疗组52例（治疗1组24例和治疗2组28例）孕妇自孕28周起，连续服用葡萄糖酸镁，每日3g。结果：治疗组血钙明显高于对照组；治疗2组的尿钙和钙／肌酐明显高于对照2组，且妊高征发生率3．57％，明显低于对照2组（30．77％）；治疗组和对照组尿钙与钙／肌酐比值分别呈正相关关系。结论：服镁后，调节体内钙平衡，使妊高征发生率降低。