姬松茸多糖诱导Bel-7402细胞凋亡的实验研究

目的研究姬松茸多糖(PAB)对人肝癌细胞Bel-7402凋亡的影响及其机制。方法用不同浓度的PAB与小鼠脾淋巴细胞共同培养制备上清;应用流式细胞术分析各组Bel-7402细胞凋亡情况、细胞内p53蛋白的表达以及肿瘤细胞内Ca2 水平的变化;应用透射电子显微镜观察细胞超微结构变化;应用荧光显微镜观察细胞内p53蛋白表达的变化。结果与阴性对照组相比较,通过流式细胞仪检测,治疗组细胞凋亡率和细胞内Ca2 水平显著升高(P<0.01);通过流式细胞仪和荧光显微镜检测细胞内p53蛋白的表达无显著差异,透射电子显微镜观察显示出细胞凋亡的典型形态学变化。结论PAB具有诱导Bel-7402细胞凋亡的作用。     

羧基-D-氨基葡萄糖对人食管癌Eca-109细胞caspase-3活化及bcl-2蛋白表达的影响

目的 探讨D-氨基葡萄糖衍生物2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖(COPADG)对人食管癌Eca-109细胞凋亡的影响及其作用机制.方法 体外培养Eca-109细胞;倒置显微镜下观察细胞形态学变化;流式细胞术检测COPADG作用后Eca-109细胞内半胱氨酸酶3(caspase-3)活化程度及bcl-2蛋白表达的变化;Annexin V/PI染色结合流式细胞术检测COPADG作用后Eca-109细胞凋亡率.结果 COPADG作用显著增加Eca-109细胞凋亡率,且Eca-109细胞内caspase-3活性和bcl-2表达平均荧光强度明显增高.结论 COPADG能显著诱导Eca-109细胞凋亡发生,并使Eca-109细胞内caspase-3显著活化以及bcl-2蛋白表达下调,并可能通过该机制诱导细胞凋亡的发生.     

小剂量吉西他滨可促进放疗致人肝癌细胞株SMMC-7721的凋亡

目的观察小剂量吉西他滨(GEM)对放疗诱导的人肝癌细胞株SMMC-7721凋亡的促进作用。方法将体外培养的人肝癌细胞株SMMC-7721分为空白对照、单纯放疗、单纯化疗及放疗加化疗4组,应用MTT法检测不同条件下SMMCC-7721细胞的生长活性;经光学显微镜、透射电镜及荧光显微镜观察各组细胞经GEM作用后凋亡的形态学变化。结果单纯放、化疗都可诱导GEM细胞凋亡,GEM可明显增加放疗诱导的细胞凋亡。结论小剂量GEM可明显增加放疗诱导的SMMC-7721细胞的凋亡。     

卵巢癌细胞诱导的CD8+T细胞凋亡与Caspase-3活性及细胞内钙的关系

目的 探讨卵巢癌细胞诱导CD8^＋T细胞发生凋亡，及Caspase-3与细胞内游离钙离子在CD8^＋T细胞凋亡过程中的作用。方法分别采用透射电镜、流式细胞术观察3株卵巢癌细胞（OVCAR3、CAOV3和SKOV3）的培养上清液诱导的CD8^＋T细胞凋亡和细胞周期变化；逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法和比色法检测CD8^＋T细胞Caspase-3mRNA的表达和Caspase-3活性；Fura-2荧光负荷技术检测细胞内游离钙离子浓度（[Ca^2＋]i）。结果 经3株卵巢癌细胞的培养上清液分别作用后，CD8^＋T细胞被阻滞在G1／G0期，电镜下出现典型的凋亡改变，流式细胞仪检测见凋亡峰，细胞凋亡率增高；CD8^＋T细胞凋亡过程中Caspase-3mRNA的表达水平、Caspase-3的活性和[Ca^2＋]，均明显升高。结论 卵巢癌细胞能诱导CD8^＋T细胞凋亡，CasDase-3激活及细胞内钙超载在此过程中起雷要作用。     

鱼藤素对乳腺癌细胞MDA-MB-231线粒体通透性转换孔的作用

目的研究鱼藤素对乳腺癌细胞MDA-MB-231线粒体通透性转换孔的作用。方法MTT法检测鱼藤素对MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用;AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率;罗丹明123单染法观察线粒体膜电位变化;蛋白免疫印迹法检测细胞质中Cytc的表达;分光光度法检测caspase-3蛋白活性;Fluo-3/AM荧光指示剂检测细胞内钙离子浓度变化;RT-PCR和蛋白免疫印迹法检测Bcl-2和Bax mRNA及其蛋白表达。结果鱼藤素对MDA-MB-231细胞增殖具有明显的抑制作用,呈时效和量效依赖关系(P0.05);鱼藤素处理细胞后,细胞线粒体膜电位降低,细胞质内Cytc蛋白表达水平升高,caspase-3活性明显提高,与未处理组相比差异具有统计学意义(P0.01)。流式细胞术检测显示细胞凋亡率和细胞内钙离子浓度随鱼藤素浓度的增加而增多;RT-PCR和蛋白印迹检测结果发现鱼藤素能使Bcl-2 mRNA和蛋白表达减少,而Bax表达增加。结论鱼藤素对乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖抑制、诱导凋亡作用可能与细胞内钙超载,Bcl-2和Bax表达改变影响线粒体通透性转换孔开放,诱导线粒体膜电位降低及Cytc释放有关。     

小剂量吉西他滨可促进放疗致人肝癌细胞株SMMC-7721的凋亡

目的观察小剂量吉西他滨(GEM)对放疗诱导的人肝癌细胞株SMMC-7721凋亡的促进作用.方法将体外培养的人肝癌细胞株SMMC-7721分为空白对照、单纯放疗、单纯化疗及放疗加化疗4组,应用MTT法检测不同条件下SMMCC-7721细胞的生长活性;经光学显微镜、透射电镜及荧光显微镜观察各组细胞经GEM作用后凋亡的形态学变化.结果单纯放、化疗都可诱导GEM细胞凋亡,GEM可明显增加放疗诱导的细胞凋亡.结论小剂量GEM可明显增加放疗诱导的SMMC-7721细胞的凋亡.     

芒果甙诱导鼻咽癌CNE3细胞凋亡及其对细胞内钙含量的影响

目的 研究芒果甙在体外对人鼻咽癌细胞系CNE3细胞凋亡和细胞内钙离子（IECa^2＋）含量的影响。方法采用流式细胞术检测不同浓度芒果甙作用24、48和72h后诱导CNE3细胞凋亡和IECa^2＋的含量。结果（1）芒果甙作用24、48和72h后,不同浓度的芒果甙均可诱导CNE3细胞凋亡,呈现时问及剂量效应;（2）不同浓度芒果甙作用24、48和72h后。CNE3细胞内IECa^2＋含量显著上升,呈现时间及剂量效应。结论芒果甙能显著诱导CNE3细胞凋亡;CNE3细胞内IECa^2＋含量的升高在芒果甙诱导CNE3细胞凋亡中起到重要作用。     

VEGF的RNAi对卵巢癌细胞SKOV3生物学活性的影响作用

目的检测靶向血管内皮生长因子(VEGF)的短发夹RNA(shRNA)质粒载体对卵巢癌细胞株SKOV3生物学活性的影响作用。方法构建携带有GFP报告基因的VEGF-shRNA质粒载体,脂质体转染方法转入卵巢癌细胞株SKOV3,通过流式细胞术检测细胞的转染效率,RT-PCR及Western blot检测转染细胞内VEGF-mRNA及蛋白的表达变化,MTT法检测细胞增殖抑制率,人工基底膜侵袭实验检测细胞侵袭能力。结果VEGF-ShRNA稳定转染后,SKOV3细胞内VEGF-mRNA及蛋白表达水平显著下降;VEGF-ShRNA对SKOV3细胞具有明显的增殖抑制作用,其抑增殖效应呈时间依赖性;VEGF-shRNA组可有效抑制SKOV3细胞的人工基底膜体外侵袭能力。结论VEGF在卵巢癌增殖、侵袭转移中发挥重要作用,通过RNA干扰技术实现VEGF沉默在卵巢癌的生物治疗中具有较好的应用前景。     

流式细胞术分析阿霉素抑制白血病细胞的效应

目的 观察不同浓度阿霉素对小鼠T淋巴细胞白血病YAC-1细胞增殖及凋亡的影响,探讨给药后阿霉素在白血病细胞中相对含量变化.方法 培养YAC-1细胞,加入分别加入不同浓度(0.3125、0.625、1.25、2.5 h和5μmol∕L)的阿霉素,继续培养24 h,显微镜下观察细胞形态,采用流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡和阿霉素红色荧光,红色荧光强度可指示细胞内药物含量.不同浓度阿霉素处理细胞72 h,台盼蓝染色法计数细胞并计算细胞增殖抑制率.结果 高浓度阿霉素(2.5和5μmol∕L)导致细胞肿胀、胞浆内空泡增加;阿霉素以浓度依赖的方式抑制YAC-1细胞增殖;凋亡及坏死百分率以及细胞内阿霉素含量呈现剂量依赖性增加.结论 YAC-1细胞对阿霉素敏感,采用流式细胞术可实现对细胞内药物含量和抗肿瘤效应的定量分析.     

雷公藤红素对结肠癌细胞株HCT-116生长的影响及其作用机制

目的探讨雷公藤红素（CSL）对人结肠癌细胞株HCT-116生长的影响及可能的作用机制。方法采用不同浓度的CSL处理HCT-116细胞,MTT法检测细胞生长的抑制率;流式细胞术（FCM）检测细胞周期;透射电镜观察细胞凋亡形态变化;荧光底物法检测细胞蛋白酶体活性;Westernblot检测p27、Bax的表达变化。结果CSL明显抑制HCT-116细胞生长,呈现时间、剂量依赖性;流式细胞术显示CSL可阻止细胞周期于G0/G1期;电镜下观察部分细胞具有典型的凋亡细胞形态特征;CSL对HCT-116细胞糜蛋白酶活性具有明显的抑制作用,其效应呈现浓度依赖性;CSL干预后细胞内p27、Bax蛋白表达明显增加。结论CSL具有抑制结肠癌HCT-116细胞的生长、阻滞细胞周期、诱导凋亡的作用,其分子机制可能与其抑制细胞内蛋白酶体活性,导致p27、Bax蛋白降解受阻有关。     

氯化钐对大鼠离体颈上神经节烟碱传递的影响

目的：研究氯化钐（Samarium Chloride,SmCl3)对大鼠离体颈上神经节烟碱传递过程的影响。方法：细胞内生物电记录技术。结果：SmCl3在10^-4--10^-1mmol/L的浓度时,可逆地抑制快兴奋性突触后电位（f-EPSP）,但对乙酰胆碱（ACh)和氨甲酰胆碱（Carb)膜除极化反应无显著的影响。对细胞膜电位、膜电阻亦无明显影响。SmCl3(10^-1mmol/L)能拮抗高钙（10mmol/L),对f-EPSP的易化4作用（P＜0．01）。结论：SmCl3对烟碱的抑制作用是通过突触前机制,可能与抑制钙的内流有关。     

小剂量氯化钐与氯化铈对大鼠血清生长激素水平的影响

本研究向大鼠腹腔内隔日分别注射四次不同剂量的氯化钐(SmCl_3)或氯化铈(Ce-Cl_3),末次注射后次日取血清用放射免疫法测定生长激素(GH)、甲状腺激素 T_3与 T_4水平。结果显示,SmCl_3在120mg/kg、CeCl_3在40mg/kg均致GH水平显著增高,但前者伴有严重的机体中毒症状,后者则无。各组T_3、T_4水平均无明显变化。     

低剂量三氯化钐对糖尿病大鼠胰岛细胞分泌功能的调节作用

本研究工作以健康成年雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠为对象，分４组：（１）对照组；（２）糖尿病组；（３）预防加治疗组；（４）治疗组。第２、３、４组均应用ＳＴＺ制成糖尿病大鼠，其中３、４组应用低剂量三氯化钐（０．０５ｍｇ／ｋｇ）治疗６周后，采用放射免疫检测术测定了各组动物血浆中胰岛素、胰高血糖素、生长抑素及血糖的变化。实验结果表明：经使用低剂量三氯化钐治疗后的第（３）、（４）组动物均活泼、状态良好，体重增加，血浆中胰岛素水平增高及生长抑素水平下降，均与正常对照组近似；胰高血糖素及血糖水平均呈下降趋势。由此可见，低剂量三氯化钐对糖尿病大鼠胰岛细胞分泌功能具有调节作用，从而使糖尿病大鼠的健康状况得以明显改善。     

氯化钐、氯化镨对大鼠肝脏形态及LPO、SOD活性的影响

本实验采用不同途径给予断乳Ｗｉｓｔａｒ大鼠小剂量（０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．０２５ｍｇ／ｋｇ）氯化角钐（ＳｍＣｌ３）、氯化镨（ＰｒＣｌ３）后，测定了肝脏中过氧化脂质（ＬＰＯ）和超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）的含量，观察了肝脏的超微结构。结果表明：ＳｍＣｌ３和ＰｒＣｌ３均使肝脏中ＬＰＯ活性降低、ＳＯＤ活性升高，二者比较ＰｒＣｌ３的作用更为明显，肝脏未见明显形态学改变。     

抗衰延寿方对老年小鼠活体骨髓细胞SCE的影响

将昆明种小鼠随机分为青年对照组、老年对照组和老年药物组,观察到老年小鼠活体骨髓细胞姊妹染色单体互换(SCE)频率显著高于青年小鼠:服用抗衰延寿方的老年小鼠SCE显著低于对照老年小鼠.结果表明,小鼠骨髓细胞SCE随增龄而增加;抗衰延寿方可以阻抗小鼠骨髓细胞SCE的增龄性改变.     

DIAGNOSTIC VALUE OF DENSITY GRADIENT CENTRIFUGATION FOR EXFOLIATIVE TUMOR CELLS IN MALIGNANT PLEURAL EFFUSIONS

To find out a specific method for diagnosis of malignant pleural effusions ( MPEs )with higher sensitivity and practicality. Methods The diagnosis of MPEs were made using density gradient centrifugation( DGC ) , smear cytologic examination( SCE) and pleural needle biopsy(PNB). Comparisons between these results and those of benign pleural effusions were also made. Results The positive rates of DGC, SCE and PNB for diagnosing MPEs were 94. 3 %, 62. 9% and 44.6%, respectively, and the positive rate of SCE combined with PNB for diagnosing MPEs was 73.2%. The positive rate of the exfoliative tumor cells ( ETCs ) by DGC was much higher than that of SCE or~and PNB with no false-positive. Conclusion The ETCs isolated by DGC from the MPEs is quite specific for the diagnosis of malignant tumors with higher sensitivity and practicality in clinico-patho-logical practice.     

三氯化钐、三氯化镨对小鼠腹腔巨噬细胞的影响

目的：探讨小剂量三氯化钐（ Ｓｍ Ｃｌ３）,三氯化镨（ Ｐｒ Ｃｌ３）对小鼠腹腔巨噬细胞（ Ｐ Ｍ ）形态结构及功能的影响。方法：选用雄性昆明小鼠,分别腹腔注射给予 ００５ ｍ ｇ·ｋｇ－ １,０５ ｍ ｇ·ｋｇ－ １ Ｓｍ Ｃｌ３和 Ｐｒ Ｃｌ３,连续７ ｄ。采用定量酶细胞化学、凝集素亲合细胞化学、透射电镜、扫描电镜及吞噬实验观察 Ｐ Ｍ 的结构和功能变化。结果：两种剂量 Ｓｍ Ｃｌ３ 、 Ｐｒ Ｃｌ３ 均使 Ｐ Ｍ 的酸性磷酸酶（ Ａ Ｃ Ｐ）、α 醋酸萘酚酯酶（ Ａ Ｎ Ａ Ｅ）含量明显增加;刀豆蛋白 Ａ 受体（ Ｃｏｎ Ａ Ｒ）数目增多,吞噬中性红能力增强。电镜下 Ｐ Ｍ 胞质内溶酶体增多,表面皱褶及微绒毛增多。结论：小剂量 Ｓｍ Ｃｌ３、 Ｐｒ Ｃｌ３ 对小鼠 Ｐ Ｍ 的形态结构和功能有明显的促进作用。     

氯化钐、氯化镨对免疫功能低下小鼠腹腔巨噬细胞的影响

目的 :研究氯化钐 ( Sm Cl3 )、氯化镨 ( Pr Cl3 )对地塞米松 ( DX)所致免疫功能低下小鼠腹腔巨噬细胞 ( PM)的影响。方法 :选用昆明小鼠连续肌注 DX建立免疫功能低下模型后 ,腹腔注射0 .0 5mg/kg,0 .5mg/kg Sm Cl3 和 Pr Cl3 ,连续 7d,采用定量细胞化学、电子显微镜及吞噬实验方法观察 PM的形态结构及功能。结果 :两种剂量 Sm Cl3 和 Pr Cl3 对 DX所致免疫功能低下小鼠 PM,可使酸性磷酸酶 ( ACP)、α-醋酸萘酚酯酶 ( ANAE)含量和刀豆蛋白 A受体 ( Con AR)数目明显增多。电镜下 ,PM胞质内溶酶体增多 ,表面皱褶及微绒毛增多。吞噬中性红染料的能力增强。结论 :Sm Cl3和 Pr Cl3 对免疫功能低下小鼠 PM的形态结构及功能有明显的刺激作用     

氨基酸对人外周淋巴细胞和植物根尖细胞SCE影响的比较

目的 :研究和比较色氨酸 (Trp)、异亮氨酸 (Ile)、甘氨酸 (Gly)、脯氨酸 (Pro)、苏氨酸 (Thr)、组氨酸(His)、精氨酸 (Arg)、赖氨酸 (Lys) 8种氨基酸对人外周淋巴细胞和植物根尖细胞姐妹染色单体交换 (SCE)的影响 ,探讨氨基酸的诱变性在人和植物中的异同。方法 :人外周淋巴细胞和植物根尖细胞 SCE。结果 :8种氨基酸都能显著诱导人外周淋巴细胞和蚕豆根尖细胞 SCE增加 ,但并不随着氨基酸浓度的增加而增加 ,而是当增加到一定程度后再增加氨基酸浓度并不能再增加 SCE频率 ;它们都能显著降低大麦根尖细胞的自发 SCE发生频率。但其降低的 SCE并不随着氨基酸浓度的增加而持续降低 ,而是当降低到一定程度后再增加氨基酸浓度并不能再降低 SCE频率。结论 :氨基酸对人外周淋巴细胞和植物根尖细胞 SCE影响是不完全相同的 ,甚至在不同的植物中也表现不同。     

农药倍硫磷的毒性研究

对国产倍硫磷进行了急性、蓄积性和亚急性毒性实验,并进行了SCE和UDS实验。结果表明,倍硫磷属中等毒类农药,具有明显蓄积性,对全血ChE活性抑制明显,但无明显的皮肤粘膜刺激作用。在本实验条件下未发现倍硫磷对哺乳动物细胞有致突变作用。