蝮蛇类毒素及五步蛇类毒素免疫豚鼠交叉免疫力比较试验

本文进行蝮蛇类毒素及五步蛇类毒素免疫豚鼠的交叉免疫力比较试验,结果表明蝮属及烙铁头蛇属的蛇毒间存在共同抗原,可激发免疫动物产生交叉免疫力。实验资料提示蝮蛇类毒素的抗原谱比五步蛇类毒素为宽,因此在我国应用蝮蛇类毒素预防蛇伤比应用五步蛇类毒素更为优越。     

不同佐剂及免疫法对五步蛇毒类毒素产生免疫能力的影响

应用蚁醛含量渐增法使五步蛇毒脱毒为类毒素。将类毒素分别与等量的不同佐剂混合用以免疫豚鼠,均可使动物获得强固免疫力。不同佐剂类毒素的免疫力比较试验表明,美粘土及弗氏不完全佐剂类毒素免疫的豚鼠,其免疫力要比磷酸铝佐剂类毒素组为优越。美粘土组免疫动物的局部和全身反应均较轻微,但弗氏不完全佐剂组的注射局部易产生硬结。应用美粘土佐剂类毒素免疫豚鼠,皮下注射三次,每次间隔四周,总剂量为35mg 类毒素。免疫动物可抵御18—24mg 五步蛇毒,相当于对体重300—400克豚鼠的6—8MLD 毒量。免疫豚鼠每毫升血清所含蛇毒抗毒素,可中和700微克五步蛇毒,相当于对体重20克小鼠腹腔注射8.75LD50毒量。免疫血清的抗五步蛇毒沉淀素效价为1:20000—1:40000。     

蝮蛇类毒素免疫原性的研究

应用蚁醛脱毒蝮蛇类毒素与等量美粘士混合制剂免疫的豚鼠,可抵御14.786mg蝮蛇毒的攻击,相当于体重300～400g豚鼠肌内注射蝮蛇毒9.86MLD毒量。每毫升免疫豚鼠血清可中和蝮蛇毒200ug,相当于中和体重20g小鼠腹腔注射12.34LD_(50)蝮蛇毒量。免疫血清的蝮蛇毒沉淀素效价达1:10000。在第二次及第三次免疫注射类毒素前一小时给予抗组织胺药扑尔敏,可有效地防止过敏反应。     

精制抗五步蛇毒血清和抗蝮蛇毒血清对竹叶青蛇毒的中和作用

本文通过琼脂免疫扩散实验表明抗五步蛇毒血清和抗蝮蛇毒血清对竹叶青蛇毒有中和作用，对竹叶青蛇毒的出血毒素及促凝毒性作用两种抗血清均有中和及对抗作用；两种抗血清的混和液对竹叶青蛇毒有协同作用。     

精制抗蝮蛇和抗五步蛇毒血清对烙铁头蛇毒毒性成份的中和效应

本文通过交叉免疫反应与毒素中和实验，利用抗原抗体中和反应原理，进一步证明精制抗蝮蛇和抗五步蛇毒血清对烙铁头蛇毒具有交叉免疫活性，能够中和烙铁头蛇毒中的出血毒素、坏死毒素和抗凝组份，而对诱导血小板聚集的活性没有影响。     

浙江蝮科四种主要毒蛇的排毒量和毒力

蝮科中的五步蛇、蝮蛇、烙铁头和竹叶青,都是我省造成蛇伤的主要蛇种。毒蛇的排毒量和半数致死量(LD_(50)),这两个数据是判定蛇伤轻重的重要依据。它对于蛇毒制剂的制备和免疫学研究都很重要。烙铁头和竹叶青两种毒蛇的排毒量和毒力测定,虽见台湾、广东、广西的个别报道,但不很完整,而且是否和浙江产的相吻合,也有待验证。为此,我们在着重测定这     

五种抗蛇毒血清对眼镜王蛇毒的中和作用

本文通过琼脂免疫扩散及动物实验，对我国现有五种抗蛇毒血清对眼镜王蛇毒的交叉免疫反应、体外中和作用以及体内保护作用进行了研究，结果表明：（1）抗眼镜和抗银环蛇毒血清对眼镜王蛇毒均有中和作用，但作用较弱，其中和效价为60μg／ml；（2）抗眼镜蛇毒血清和抗银环蛇毒血清联合应用时，其中和效价是它们单独应用的11倍，约660μg／ml；（3）抗金环蛇毒血清、抗蝮蛇毒血清及抗五步蛇毒血清虽与眼镜王蛇毒有弱的沉淀线，但却无中和作用。     

中国眼镜蛇毒对血小板聚集的影响

中国常见八种蛇毒包括眼镜蛇毒;银环蛇毒;金环蛇毒;眼镜王蛇毒;蝰蛇毒;蝮蛇毒;竹叶青蛇毒;五步蛇毒。在体外前四种蛇毒通过ADP的诱导,抑制家兔血小板的聚集,后四个毒促进家兔血小板聚集。用CM-Sephaex C 50柱层析3.0×65cm。眼镜蛇毒分为9个组份。组份Ⅰ和组份Ⅱ有明显抑制血小板聚集作用。组份I和组份Ⅱ经聚丙烯酰胺凝胶园盘电泳,鉴定为一区带。     

国产抗蛇毒血清的介绍

国外利用蛇毒进行免疫研究早在1887年就已开始。于1894年 Galmette 用眼镜蛇毒对家兔和豚鼠进行免疫,制备了抗眼镜蛇毒血清。此后就有较多的科学工作者从事于抗蛇毒血清的研究工作。在这八十多年中,世界上已有20多个国家利用50多种蛇毒研制成70余种单价和多价抗蛇毒血清。长期临床实践证明:抗蛇毒血清系治疗毒蛇咬伤特异性强疗效显著的制品,应用愈早,效果越好。近十年来,上海生物制品研究所、浙江省中医研究所和浙江医科大学共同协作研制精制抗蝮蛇毒血清和精制抗五步蛇毒血清。继之,1976年广州医学院与上海生物制品研究所协     

精制抗眼镜蛇毒血清、胰蛋白酶、糜蛋白酶对眼镜蛇中毒动物保护作用的比较

我室与上海生物制品研究所、中国科学院昆明动物研究所协作制成精制抗眼镜蛇毒血清,目前正在临床试用,观将一些动物实验结果摘要报导如下: 现在临床试用的精制抗眼镜蛇毒血清14 ml/Amp(5,000μ),约能中和眼镜蛇粗毒(干毒)40 mg,小鼠肌肉注射这一血清0.49 μl/g,能保护1 LD_(50)(1.3μg/g);只能在肌肉注射蛇毒后立即注射抗眼镜蛇毒血清才有保护作用,若延迟注射血清,则无保护作用。将精制抗眼镜蛇毒血清改为静脉注射,用     

桂北五步蛇金属蛋白酶原基因800bp片段的克隆和序列分析

目的：扩增桂北五步蛇金属蛋白酶原基因,并对其进行序列分析,方法：从广西桂北山区五步蛇毒腺中抽提蛇毒总RNA,采用一步法（RT－PCR和PCR在同一试管内进行）扩增金属蛋白酶原基因,对其进行电泳检测,得到3条特异的DNA条带,大小分别为1．5kb,1.3kb,和800bp,利用平端连接方法将800bp克隆至pGEM-T载体,挑选白色菌落,用酶切和PCR法对其进行鉴定,提取阳性菌落进行测序并推导编码的氨基酸序列。结果：信号肽和前肽和已报道的皖南五步蛇金属蛋白酶很相似。同源性为97．9％,但仅含有部分金属蛋白酶成熟肽的氨基酸序列。结论：推测此800bp片段为广西五步蛇金属蛋白酶原基因的一部分。     

尖吻蝮蛇毒无出血活性纤维蛋白溶解酶的纯化及其理化性质研究

目的：从蝮亚科尖吻蝮蛇毒(Agkistrodon acutus venom)中分离纯化出无出血活性纤维蛋白溶解酶(Non—hemonrrhagic fibrinolytic enzyme,NHFLE)并对其理化性质进行研究。方法：应用凝胶过滤和离子交换柱层析法分离纯化尖吻蝮蛇毒NHFLE，用纤维蛋白平板法测定其纤溶活力，用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)测定其相对分子质量，用皮内出血实验测定其出血活性。结果：从短亚科尖吻蝮蛇毒中分离出一种单一组分的纤维蛋白溶解酶，它的相对分子质量为25000，没有出血活性，在普通纤维蛋白平板和加热平板上都能溶解纤维蛋白，相对活性为粗毒的3．2倍。结论：从尖吻蝮蛇毒中分离出相对分子质量为25000的纯化蛋白是具有直接溶解纤维蛋白活性，而无出血活性的单一的纤维蛋白溶解酶。     

蛇毒激肽原酶对大鼠脑缺血再灌注的作用及机制

目的：探讨蛇毒激肽原酶对脑缺血再灌注大鼠的缺血区脑组织的保护作用及机制．方法：将实验动物随机分为假手术组、生理盐水对照组和治疗组．治疗组在大鼠脑缺血再灌注后8h,腹腔注射蛇毒激肽原酶17．5U／（kg·d）,连续注射3d．于术后第3日行神经功能缺失评分（NSS）,然后处死大鼠行梗死体积（TTC染色）的计算、缺血区的病理改变（HE染色）的检查以及缺血区神经细胞情况（尼氏染色）的检查,同时检测缺血区NSE,GFAP及vWF的免疫组化情况．结果：在大鼠脑缺血再灌注后8h,给予蛇毒激肽原酶治疗能明显降低大鼠的神经功能缺损,使大鼠的梗死体积变小,病理改变明显减轻,缺血区的尼氏染色结果得到明显的改善．治疗组脑缺血区的NSE,GFAP及vWF免疫组化的阳性细胞增多,与生理盐水对照组比较有明显差异（P〈0．05）．结论：蛇毒激肽原酶对脑缺血再灌注大鼠的缺血区脑组织有保护作用;促进缺血区神经细胞的再生以及神经胶质细胞、血管内皮细胞增生为其重要机制之一．     

桂北五步蛇金属蛋白酶原基因1137bp片段的克隆和序列分析

目的：克隆桂北五步蛇金属蛋白酶原基因,并对其进行序列分析。方法：采用一步法抽提广西桂北山区五步蛇蛇毒总RNA,经RT-PCR扩增纤溶酶金属蛋白酶原基因,将扩增产物克隆至pGEM-T Easy载体,挑选白色菌落。用酶切和PCR法对其进行鉴定。直接利用纯化PCR产物或提取阳性菌落进行测序并推导其编码的氨基酸序列。结果：RTPCR和PCR扩增得到一约1137bp产物,并将其克隆及测序。结论：和已报道的皖南五步蛇纤溶酶金属蛋白酶氨基酸序列相比较,二者之间有91％的同源性。     

尖吻蝮蛇蛇毒纤溶酶的分离纯化及氨基酸序列测定

目的:从尖吻蝮蛇蛇毒中分离纯化出高纯度的纤溶酶并对其进行初步性质研究和氨基酸序列分析。方法:采用DEAE-Sepharose FF离子交换和两次Superdex75PG凝胶过滤,从尖吻蝮蛇蛇毒中纯化出可直接溶解纤维蛋白原的蛋白酶。结果:分离到的纤溶酶相对分子质量为25kD,HPLC分析纯度在97%以上,氨基酸序列分析其N末端为MSTEF QRYME IVVNHS MVKKY NGDSD KIKAW。结论:采用此工艺可从尖吻蛇毒中分离出高比活的纤溶酶,为进一步研究其药理作用奠定了基础。     

桂北五步蛇纤溶酶金属蛋白酶基因的克隆和序列分析

目的：克隆桂北五步蛇纤溶酶金属蛋白酶基因,并对其进行序列分析。方法：从桂北五步蛇毒腺中抽提总ＲＮＡ,采用一步法（ＲＴ－ＰＣＲ和ＰＣＲ在同一管内进行）扩增出纤溶酶金属蛋白基因,利用平端连接的方法将ＰＣＲ扩增产物克隆至ｐＧＥＭ－Ｔ Ｅａｓｙ载体,挑选白色菌落,用酶切和ＰＣＲ法对其进行鉴定,直接利用纯化ＰＣＲ产物进行测序或提取阳性菌落进行测序。结果：ＲＴ－ＰＣＲ和ＰＣＲ扩增得到一６００ｂｐ产物,并被克隆     

五步蛇毒对大鼠脑区海马组胺受体H2 mRNA和蛋白质表达的影响

目的 研究五步蛇毒对大鼠脑区海马组胺受体H2 mRNA及蛋白质表达的影响.方法 用RT-PCR和Western blot方法检测五步蛇毒对不同时相点大鼠海马组胺受体H2 mRNA及蛋白质表达的变化.结果 五步蛇毒处理后,大鼠海马组胺受体H2 mRNA及蛋白质的表达在各时相点均发生变化,且其mRNA和蛋白质表达均为先即时上调然后下调,最后又上调.结论 大鼠海马组胺H2受体 mRNA和蛋白质表达的变化对海马的生理功能有一定的影响.     

尖吻蝮蛇毒素组双向电泳和二维液相色谱研究

目的：初步研究尖吻蝮蛇蛇毒的蛋白质组分及其活性。方法：利用双向电泳和二维色谱（IEX＋HPLC）分析尖吻蝮蛇蛇毒蛋白质组，并制备分离样品研究蛇毒中酶和毒素活性。结果：双向电泳分离检测得到128种蛋白质，其中24种蛋白质丰度较高，73种为酸性蛋白质，加种为碱性蛋白质。二维色谱展现58种蛋白质，其中26种蛋白质丰度较高。初步活性研究表明，尖吻蝮蛇蛇毒蛋白质多数属于丝氨酸蛋白酶、金属蛋白酶和磷脂酶A2家族，部分蛋白质可能属于去整合素家族。结论：双向电泳和二维色谱相互结合．有效分析了尖吻蝮蛇毒的蛋白盾组成和生物活性．     

五步蛇和蝮蛇的抗蛇毒血清对烙铁头蛇毒的中和作用

针对我国院目前尚无烙铁头蛇毒血清，本研究旨在利用国内现有的精制抗五步蛇毒血清和精制抗蝮蛇毒血清，通过动物实验，证明这两种抗血清在体外和体内都能中和烙铁头蛇毒，对被烙铁头蛇毒中毒的小鼠有明显保护作用，且两种血清的保护率无显著差异。