应用E2基因缺失的检测评价宫颈病变中HPV16感染状态

目的:应用E2基因缺失的检测了解宫颈病变中HPV16病毒染色体的存在状态,探讨其与宫颈癌的关系.方法:应用多重聚合酶链反应(PCR)对HPV16感染标本将其E2基因的C端、N端、铰链区分别与E6基因同时进行扩增,应用Scion Image 4.0软件对E2基因、E6基因电泳条带面积灰度值进行半定量分析,判定HPV16是...     

大鼠脊髓前角运动细胞白质树突的电镜观察

在电镜下对未作标记及类霍乱原结合辣根过氧化物酶(CB-HRP)标记的大鼠脊髓运动细胞白质树突(WMD)进行观察,发现其全程上确有大量轴-树突触存在。突触小泡以清亮圆形和椭圆形为主,偶见有颗粒小泡与清亮小泡共存。此结果为脊髓运动细胞机能调节的旁侧回路假说提供了形态学依据。本文还就WMD传入联系的比较解剖学和可能的生理学特性,以及TMB电镜组织化学方法作了初步的讨论。     

胎儿血样的采集、纯化及其在产前诊断中的应用

80例妊娠15～28周中期妊娠引产和遗传咨询的孕妇,经胎盘抽吸胎血取样所获得的血样中,胎儿红细胞比例为0～99％。胎儿红细胞3％以上,能经成人红细胞选择性溶血法分离得到纯或较纯的胎儿红细胞标本的血样67例。胎血取样成功率为83.75％。纯化的胎儿红细胞G6PD活性测定和微量血红蛋白电泳检查表明:纯化的胎儿红细胞可用于血红蛋白病和红细胞酶缺陷等遗传性疾病的产前诊断。     

招远市5例异常血红蛋白的解链及纯化

①目的 对发现于招远市的异常血红蛋白(Hb)进行分子结构的研究。②方法 取异常Hb血样,以生理盐水洗去血浆蛋白质,再以蒸馏水处理压积红细胞以溶血,溶血液以-20℃的酸性丙酮处理提取珠蛋白,用尿素将珠蛋白解链,再经柱层析分离及纯化异常链。③结果 经羧甲基纤维素及交联葡聚糖层析分离及纯化得到异常α或β链,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)检查纯度,这些异常α或β链均为一条电泳带。④结论 纯化的异常α或β链均电泳纯净。     

国产类霍乱原(CB)与进口CB的辣根过氧化物酶结合物(国产CB-HRP及进口原料CB-HRP)的标记效果比较

将获自“A-B+突变型菌种”原液的国产CB,一半与HRP直接偶联成CB-HRPI,另一半经Sephadex胶柱分离、纯化后再与HRP偶联得到CB-HRP I,并将其与CB-HRPSigma进行比较.三种样品所含HRP均为3.6％.应用舌-舌下神经核及胫前肌-脊髓前角细胞标记模型。CB-HRP I接近CB-HRP Sigma的标记效果,CB-HRP I的效果较差.     

孕血清中早孕因子的分离纯化

目的:通过离子交换层析和亲和层析的分离方法从孕血清中得到纯化的早孕因子(EPF),为进一步制备单克隆抗体做准备。方法:采用依次经过DEAE52阴离子交换层析,SP Sepharose F.F阳离子交换层析,Con ASepharose4B亲和层析和Heparin Sepharose Cl6B亲和层析分离纯化方案,最终得到具有早孕因子活性的Hepa-rin-Ⅱ成分,早孕因子活性采用活性玫瑰花环抑制实验检测,采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定纯化物。结果:SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示两条带,相对分子量分别为46.30kDa和10.71kDa。结论:经过四步层析得到较纯的EPF样品,并认为EPF在血清中可以以单体和多聚体形式存在。     

激光捕获技术在心房细胞定位分离中的应用

目的探索激光捕获显微切割技术（laser capture microdissection，LCM）定位分离心房细胞，并对提取的微量RNA进行β-actin及GAPDH基因扩增。方法首先验证预做LCM样品的完整性，然后常规制备冰冻切片，采用改进的HE快速染色脱水法染色，提取刮片组织的RNA验证其质量，确保在切片染色过程中RNA的完整性．最后进行LCM分离纯化心房细胞，通过逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）扩增β-actin及GAPDH基因．结果经快速HE染色心房细胞形态学清晰；预做LCM的样品和染色后组织刮片可提取出高质量的RNA，紫外分光光度计测定吸光度值A260／A80为1．9～2．0之间。甲醛变性凝胶电泳显示清晰的28SrRNA和18SrRNA条带，捕获细胞提取的微量RNA经RT—PCR后进行凝胶电泳显示有300bp及357bp的扩增条带．结论LCM可以分离出纯度较高的心房细胞，提取的微量RNA可以扩增出管家基因β-actin和GAPDH．     

孕妇血清中早孕因子的分离与纯化

目的：建立一条从妊娠早期妇女血清中分离纯化早孕因子的技术路线，获得高纯度的早孕因子。方法：采用依次经过DEAE 52阴离子交换层析、SP Sepharose F．F阳离子交换层析、ConA Sepharose 4B亲和层析和Heparin Sepharose Cl-6B亲和层析分离纯化的方案，最终得到具有早孕因子活性的Heparin-Ⅱ成分，早孕因子活性采用活性玫瑰花环抑制实验检测。采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定纯化物。结果：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示有一条电泳区带，相对分子量为10．91kDa。结论：这条分离纯化早孕因子的技术路线是可行的，得到的相对分子量为10．91kDa的蛋白质为电泳纯的早孕因子。     

丝状真菌高分子量DNA的提取研究

为寻求一种简便高效的提取真菌基因组ＤＮＡ的方法，采用经改良的液氮研磨饱和酚抽提法及高盐沉淀法，从液体培养的鸡土从菌菌丝体中提取了高分子量的基因组ＤＮＡ。用紫外吸收光谱、限制酶切、ＲＡＰＤ—ＰＣＲ反应及琼脂糖凝胶电泳等方法进行了鉴定。结果显示，两种方法均可以获得分子量大、样品较纯的基因组ＤＮＡ，用限制酶均能有效地消化，并可有效地用于ＰＣＲ扩增。其中高盐沉淀法提取的ＤＮＡ产量高（每克菌丝体可获ＤＮＡ０．８３ｍｇ），方法简便，对人体无毒害，是较理想的提取真菌ＤＮＡ的方法     

彩虹明樱蛤酸性多糖的提取与纯化

目的:优化彩虹明樱蛤酸性多糖的制备工艺.方法:采用碱提醇沉法,运用正交试验对彩虹明樱蛤多糖的分离过程进行优化,包括时间、温度、pH值和乙醇浓度4个因素;所获多糖经去蛋白、去色素、去离子后,用DEAE-纤维素离子交换柱纯化,以Sephadex G-100和醋酸纤维薄膜电泳鉴定及红外光谱初步研究.结果:优化的多糖提取制备工艺为:时间6h、温度70℃、pH8.0、乙醇浓度70％,获得纯白略带暗褐色的颗粒状固体;DEAE-纤维素离子交换柱分离洗脱后得到靶多糖组分彩虹明樱蛤酸性多糖(Moerella iridescens acidic polysaccharide,MIAP),经Sephadex G-100和醋酸纤维薄膜电泳鉴定,MIAP为均一多糖组分,呈乳白色绵柔絮状;红外光谱扫描,MIAP含α-D型吡喃葡萄糖.结论:正交试验法优化了MIP的提取工艺,分离纯化了MIAP.     

快速大量分离血浆低密度脂蛋白亚组分的方法

目的 :研究快速大量分离低密度脂蛋白亚组分的方法。方法 :通过2步超速离心法分离LDL亚组分 ,并用电泳法及电镜观察鉴定2种亚组分。结果 :仅用10h就将LDL亚组分分开 ,并证实经分离的2种亚组分为纯品。结论 :本方法是1种分离LDL亚组分较好方法     

活性污泥中硝化细菌16S rDNA鉴定方法研究

目的 以活性污泥为材料，研究其中硝化细菌的分离及16Sr DNA鉴定方法。方法 采用氨氧化细菌与亚硝酸氧化细菌富集、分离技术从武汉某啤酒厂曝气池活性污泥中分离得到2株纯培养菌株N。和Nz。分别提取2株细菌的总DNA，利用氨氧化细菌与亚硝酸氧化细菌的16Sr DNA特异性引物进行多聚酶链反应(PCR)扩增；扩增产物经2％琼脂糖凝胶电泳和Sanger末端终止法测序分析，用NCBI-Blast软件将测序结果在GenbAnk等数据库中进行同源性检索。结果 N1和N2的DNA扩增产物片断大小分别为526 bp和391 bp，测序结果经检索证实N1、N2分别与标准菌株Nitrosomonas sp、DYS317和Nitrobacter sp.R6的保守性片段有99％、100％的同源性。结论 可以判定所分离得到的N1和N2菌株分别为亚硝化单胞菌属和硝化杆菌属。     

小鼠H—2抗原的提取与纯化

This study was designed to purify the mouse major histocompatibility complex antigen (H-2Ag). The detergent was used to extract the crude H-2Ag, and monoclonal antibodies affinity chromatography was applied to purify H-2 antigen. A 45 kd heavy chain and a 12 kd light chain from the purified proteins were shown by electrophoresis. Besides, the pure H-2 antigen was found to have immunological and biological activity. This method should be useful in purifying large quantities of H-2Ag for the researches in transplantation and functional analysis of H-2 antigen.     

小鼠组织相容性抗原的提取与纯化

用９９＾ｍＴＣ－ＦＤＸ淋巴管显像剂，对雄性Ｆ３４４大鼠睾丸进行显民病理分析，Ｆ３４４大鼠尾静脉注射０．１ｍｌ显像剂，放射强度为１８．５ＭＢｑ，用单光子发射计算机断层仪（ＳＰＥＣＴ）分别观察不同时相睾丸显像情况。然后手术摘除大鼠睾丸，巨检取材作铁－－苏木素染色和ＨＥ染色，与显像情况对比分析。结果有１例大鼠左侧睾丸呈阳性显像病理学观察证实此睾丸有肿瘤，肿瘤类型为间质细胞瘤。铁－苏木素染色显示肿瘤细胞     

人乳头瘤病毒11型的DNA分子克隆

以E coli C300为受体菌,利用人乳头瘤病毒11型DNA与pBR322的重组质粒(pBR322-HPV11DNA),成功地进行了HPV11DNA的转化,经筛选获得61株重组子,随机对15株转化子以碱变性法及清亮裂解法抽提了pBR322-HPV11DNA的重组质粒,纯化后经BamHI酶切及琼脂糖凝胶电泳,以λDNA/HindⅢ作参考分子量测定,初步结果证实存在有分子量为5.5×10~6(约8.1kb)的HPV11DNA。这为HPV11DNA的分子扩增,基因探针的制备及HPV11型量鳞癌的研究提供了方便。     

粉尘螨Der f2变应原的分离纯化及其特征

目的 用粉尘螨（Dermatophagoides farinae）代谢培养基浸液（Dff）分离纯化粉尘螨2类变应原（Der f2）。方法 Sephadex G-100层析、DEAE离子交换层析、PAGE等方法分离纯化Der f2,并对Der f2作SDS-PAGE测定和热稳定性测定。结果 从Dff分离纯化得到较纯Der f2,经SDS-PAGE测定其相对分子质量为14000,并经100℃加热15min后,仍保留50%～83.3%生物学活性。结论 从Dff中分离纯化的变应原,其物化性质符合Der f2特征。     

感觉神经元29KD蛋白的生化分析

感觉神经元29KD蛋白的结构与功能研究,是神经科学领域中的一个重要方面。本实验从兔神经组织中分离、提取脊神经节感觉神经元特异蛋白,采用高效液相色谱二级分离法,纯化了感觉特异蛋白,电泳结果显示该蛋白的分子量为29KD,p17.8,经Waters氨基酸自动分析仪分析和Beckman LF-3200蛋白/多肽测序仪测试,揭示该蛋白的氨基酸组份及N端的15个氨基酸序列。研究结果显示,29KD蛋白是脊神经节感觉神经元特有的物质。     

促甲状腺素受体膜外区（hTSHR-ECD）在大肠杆菌中的表达和纯化

目的用大肠杆菌表达重组人促甲状腺素受体膜外区（hTSHR-ECD）蛋白,为hTSHR膜外区的研究提供工具。方法从人甲状腺组织中提取总RNA,RT-PCR分离得到TSHR膜外区cDNA,双酶切后插入原核表达载体pRSETC中,进行序列分析;再转化到表达菌BL21中表达、纯化、Western blotting分析。结果经SDS-PAGE电泳有一条明显的蛋白带,与预期分子量相符,并用Western blot证实;纯化后,获得单一条带的靶蛋白。结论成功获得高纯度人TSHR膜外区蛋白。     

介绍一种简便、快速、大量制备人血清载脂蛋白AⅠ、AⅡ及其抗血清的方法

采用80ml的PC管一次性超速离心分离入血清极低密度脂蛋白、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白;用DEAE-52离子交换柱层析同时纯化载脂蛋白AI(ApoAl)、AII(ApoAII)。经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定ApoAI分子量27000u(原子质量单位)、ApoAII18000u(原子质量单位)。经SDS-PAGE,双向免疫扩散及免疫电泳证实其为纯品。采用上述抗原免疫新西兰白兔制备的抗ApoAI、抗ApoAII血清经双向免疫扩散,免疫电泳证实为单价抗备清。这种分离提纯ApoAI、ApoAII的方法具有简便、快速、价廉、适于大量制备等优点。