B7/CD28家族共刺激分子在川崎病发病机制中的作用

目的观察在川崎病(KD)患儿外周血单个核细胞(PBMC)B7/CD28家族分子:CTLA-4、BTLA、ICOS、CD80、CD86表达变化,旨在探讨B7/CD28家族分子在KD发病机制中的作用。方法应用荧光定量PCR检测48例KD患儿和其中30例用丙种球蛋白(IVIG)治疗后患儿的CTLA-4、BTLA、ICOS mRNA表达的变化,部分患儿应用流式细胞术测定CD80、CD86表达状况。本研究以25例同龄健康儿童作为对照组。结果(1)KD组与对照组相比:正性调节因子ICOS mRNA的表达显著升高(P<0.01);CD80、CD86表达升高(P<0.01);负性调节因子CT-LA-4、BTLA mRNA的表达则显著降低(P<0.05,P<0.01)。其中冠状动脉损害组较无冠状动脉损害组ICOS表达程度更高(P<0.01)。(2)KD组中IVIG治疗前后进行配对比较:IVIG治疗后CTLA-4、BTLA mRNA表达显著回升(P<0.05),ICOS mRNA的表达则显著下降(P<0.05)。IVIG治疗不敏感组与敏感组比较:ICOS表达前者显著升高(P<0.05),CTLA-4、BTLA表达显著降低(P<0...     

异位性皮炎患者外周血T淋巴细胞CD28和可诱导共刺激分子的表达

目的探讨CD28和可诱导共刺激分子（ICOS）在异位性皮炎（AD）患者外周血T淋巴细胞的表达。方法采用免疫荧光双标记流式细胞术检测25例AD患者外周血T淋巴细胞CD28和ICOS的表达,参照欧洲AD评分标准（SCORAD）对病情严重程度进行评分,分析CD28和ICOS的表达水平与病情严重程度的相关性。结果AD患者组外周血T淋巴细胞CD28和ICOS的表达水平高于正常对照组（P〈0.01）,ICOS的表达水平与SCORAD评分呈正相关（r=0．68,P〈0．01）。结论AD患者外周血T淋巴细胞CD28和ICOS表达增高,ICOS的表达水平可作为反映病情严重程度的一个指标。     

诱导性共刺激分子表达与原因不明复发性流产的相关性研究

目的 探讨诱导性共刺激分子(EOS)的表达与原因不明复发性流产(URSA)的关系.方法 采集10例诊断为难免流产的URSA患者(URSA组)和10例正常早孕妇女(正常对照组)的部分蜕膜组织和外周血,采用流式细胞术检测蜕膜组织和外周血CD3+和CD4+T细胞中ICOS的表达;Real-Time PCR检测蜕膜组织中ICOS mRNA的表达情况.结果 URSA组蜕膜组织中ICOS+ CD3+T淋巴细胞亚群所占百分比为(0.612±0.693)％,显著高于正常对照组的(0.056±0.103)％,差异有统计学意义(P＜0.001).URSA组外周血ICOS+ CD4+T淋巴细胞亚群所占百分比为(1.943±0.762)％,显著高于正常对照组的(0.221±0.127)％,差异有统计学意义(P＜0.001).URSA组蜕膜组织中ICOS mRNA的相对表达量较正常对照组显著升高[(9.875±1.464)vs(2.701±1.737)],差异有统计学意义(P＜0.05).结论 蜕膜组织中ICOS的表达异常与URSA的发病具有密切关系.     

小柴胡汤对免疫抑制小鼠淋巴细胞共刺激分子的免疫调节作用

目的探讨小柴胡汤对免疫抑制小鼠外周血淋巴细胞共刺激分子的调节作用。方法每日给予正常小鼠及肌肉注射环磷酰胺诱导的免疫抑制小鼠小柴胡汤25g/kg体重,连续10d。并设免疫抑制模型及正常对照小鼠。于实验第11天,收集所有小鼠血样,分离淋巴细胞,采用流式细胞术检测实验小鼠外周血淋巴细胞CD28、CTLA-4、CD80和CD86的表达,并与对照组比较。结果与正常对照小鼠比较,免疫抑制小鼠淋巴细胞亚群发生明显变化、CD4/CD8比例明显倒置(P0.01),淋巴细胞CD28、CTLA-4、CD80和CD86的表达明显降低(P0.01)。与正常对照小鼠相比较,给予小柴胡汤的正常小鼠的淋巴细胞亚群及淋巴细胞共刺激分子的表达差异无统计学意义(P0.05)。与免疫抑制小鼠相比较,给予小柴胡汤的免疫抑制小鼠CD3+细胞增加(P0.01),CD3+CD4+细胞增加(P0.01),CD3+CD8+细胞降低(P0.01),CD4/CD8比例升高(P0.01),CD28、CD86和CD80表达增加(P0.01),而CTLA-4的表达无明显差异(P0.05)。结论小柴胡汤可能通过调节淋巴细胞表面协同刺激分子的表达进而调节免疫抑制小鼠的免疫功能。     

CpG ODN对非小细胞肺癌患者化疗后免疫功能的影响

 目的 测定非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）患者化疗前后外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）经胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤寡脱氧核苷酸（cytosine-phosphorothioate guanine oligodeoxynucleotides,CpG ODN）刺激后,CD4+CD25^high Treg细胞及IFN-γ、IL-12的变化,评价不同时间点CpG ODN的干预效果。方法 选取NSCLC患者20例,分别抽取患者化疗前（d0）、化疗后第3天（d3）及第7天（d7）外周血3 mL,分离PBMC。每份PBMC均分为实验组及对照组,实验组给予CpG ODN 2006刺激,对照组不做干预。经培养48 h后收集细胞以流式细胞仪检测CD4⁺CD25^high Treg细胞百分比,并取上清液检测INF-γ和IL-12（pg/mL）。结果 实验组CD4⁺CD25^high Treg细胞百分比在d0、d3、d7分别为（2.22±0.66）%,（2.09±0.44）%和（2.08±0.48）%,较对照组均有明显下降（P<0.05）。实验组IFN-γ在d0、d3、d7分别为（40.64±5.90）、（40.57±5.80）和（45.30±4.78）pg/mL,d0和d7时较对照组显著增加（P<0.05）,d3时变化不明显（P>0.05）。实验组IL-12在d0、d3、d7分别为（41.02±6.65）、（39.41±7.41）和（45.75±12.46）pg/mL,d0和d3时较对照组明显增加（P<0.05）,而d7时变化不明显（P>0.05）。动态观察对照组,d3时CD4⁺CD25^high Treg细胞比例下降至最低点,而后逐渐回升;实验组在d7时CD4⁺CD25^high Treg细胞比例仍持续下降;实验组的IFN-γ值呈现升高趋势,d7和d0、d3相比明显升高（P<0.05）;而实验组IL-12值在化疗前后无明显变化,即化疗前d0与化疗后d3、d7比较,以及d3与d7比较,差异均不明显（P值均>0.05）。肺癌患者化疗次数及外周血淋巴细胞的数目与CpG ODN对CD4⁺CD25^high Treg细胞比例及IFN-γ、IL-12的分泌作用无显著相关性（P>0.05）。结论 CpG ODN能有效下调CD4⁺CD25^high Treg细胞,刺激INF-γ的分泌,优化肺癌患者抗肿瘤的免疫微环境,有利于机体的抗肿瘤免疫;肺癌患者即使化疗后外周血淋巴细胞的数目明显减少,CpG ODN仍能下调CD4⁺CD25^high Treg细胞和刺激INF-γ的分泌,发挥抗肿瘤作用。     

多次低剂量辐射对糖尿病大鼠脾脏淋巴细胞亚群的免疫调节作用

目的：观察多次低剂量辐射（LDR）照射后糖尿病（DM）大鼠脾脏淋巴细胞亚群的变化。方法：实验分为正常对照组、DM组和不同剂量LDR组（剂量分别为0.025、0.050和0.075 Gy）。链脲佐菌素（STZ）腹腔注射诱导DM大鼠模型,经15次照射后４周末采用流式细胞术检测脾细胞中CD4⁺、CD8⁺ T细胞百分数及CD4⁺/CD8⁺ T细胞比例。结果：造模1周后,DM组大鼠出现明显的多饮、多食、多尿及体重减轻现象。照射后4周末,与正常对照组比较,DM组大鼠脾脏CD4⁺ T细胞百分数明显增加（P<0.01）,CD8⁺ T细胞百分数明显降低（P<0.01）,CD4⁺/CD8⁺ T细胞比值明显增加（P<0.001）;不同剂量LDR组淋巴细胞亚群变化均不明显。与DM组比较,0.050和0.075 Gy LDR组CD4⁺ T细胞百分数显著降低（P<0.05,P<0.01）,不同剂量LDR各组CD8⁺ T细胞百分数均显著增加（P<0.01）,不同剂量LDR各组CD4⁺/CD8⁺ T细胞比值均显著降低（P<0.01）。结论：多次LDR能够调节DM大鼠的免疫功能,纠正其免疫失衡状态,从而达到保护机体的作用。     

LPS刺激对大鼠视网膜小胶质细胞CD80、CD86和CD40表达的影响

目的 研究脂多糖(LPS)刺激对CD80、CD86、CD40在大鼠视网膜小胶质细胞上表达的影响,探讨视网膜小胶质细胞在视网膜和视神经病变中与T细胞活化的关系.方法 分离培养大鼠视网膜小胶质细胞并进行OX42染色鉴定,当细胞培养达80%融合状态时分为正常培养组和LPS刺激组.采用RT-PCR法检测两组细胞CD80、CD86和CD40 mRNA的表达,硝酸还原法和ELISA法检测两组细胞一氧化氮(NO)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的分泌量.结果 RT-PCR检测显示,LPS刺激组的视网膜小胶质细胞CD80、CD86和CD40 mRNA的表达较正常培养组显著增加,两组比较差异有统计学意义(均P<0.01).正常培养组的视网膜小胶质细胞有少量NO和TNF-α分泌,LPS刺激组的小胶质细胞培养上清液中NO和TNF-α的分泌量较正常组显著增加[(18.10±1.57)μmol/L vs (1.55±0.15)μmol/L,(51.07±4.30)pg/mL vs (2.37±0.31)pg/mL],两组比较差异有统计学意义(均P<0.01).结论 培养的大鼠视网膜小胶质细胞有共刺激分子表达,LPS刺激后表达上调,提示视网膜小胶质细胞可能与T细胞活化有关.     

小鼠念珠菌性阴道炎模型中树突状细胞表面共刺激分子的表达

目的研究小鼠念珠菌性阴道炎模型中树突状细胞（DC）表面共刺激分子的表达及作用。方法取8～10周龄ICR系雌性小鼠，设激素依赖型小鼠念珠菌性阴道炎模型组25只，生理盐水对照组25只及健康对照组5只，于感染后2、4、7、14、21d取材，进行阴道灌洗液真菌载量分析及阴道黏膜组织病理观察，流式细胞仪（FACS）分析念珠菌性阴道炎模型小鼠引流淋巴结及脾脏DC表面CD80、CD86表达的变化。结果模型组小鼠阴道灌洗液真菌载量分析显示自接种后第2天起即有高水平的菌落形成单位（CFU）计数，且持续到观察期末；阴道组织病理学检查可见大量菌丝附着黏膜表面和黏膜组织内，并有炎性细胞浸润。与健康对照组比较，模型组小鼠引流淋巴结DC表面CD86表达迅速上调，CD80表达则缓慢上调，脾脏DC表面CD80、CD86无明显变化。将各组阴道灌洗液中真菌载量与局部引流淋巴结中DC表面CD80、CD86表达百分比作相关性分析，结果显示与CD86表达呈明显正相关（r=0．946，P=0．004）；而与CD80表达无相关性（r=0．807，P=0．052）。结论DC可能通过上调CD86在阴道局部抗念珠菌感染免疫中发挥重要作用。     

可诱导共刺激分子在系统性红斑狼疮病人外周血T细胞亚群的表达及与临床的关系

目的　检测可诱导共刺激分子(inducibleco stimulator,ICOS)及相关免疫分子在SLE病人外周血T细胞亚群的表达,探索其与SLE疾病活动程度、病程及血清抗dsDNA抗体和免疫球蛋白含量间的关系,为进一步研究ICOS在SLE免疫病理中的作用奠定基础。方法　采用流式细胞术检测第二军医大学附属长海医院住院和门诊SLE患者 (n=51)以及健康体检者 (n=30)外周血T细胞亚群表面ICOS及其他免疫分子CD45RO、CD45RA、HLA DR的表达水平,观察ICOS在不同细胞亚群表达水平与SLE活动程度、病程、血清抗dsDNA抗体和血清免疫球蛋白含量间的关系。结果　与正常人相比,活动期及稳定期SLE患者外周血CD4+T细胞、CD8+T细胞表达ICOS的水平显著升高,但活动期患者与稳定期患者之间无统计学差异(P≥0 05);同一SLE患者在疾病活动期,外周血CD4+、CD8+、CD45RO+、CD4+CD45RO+和CD8+CD45RO+细胞表面ICOS的表达水平明显高于该患者经过治疗疾病缓解阶段(P<0 05);初发SLE患者CD45RO+细胞表达ICOS水平明显高于复发患者 (P<0 05);血清抗dsDNA抗体( +)及免疫球蛋白(IgG、IgM和IgA中任何一种 )异常升高的患者外周血CD45RO+及CD4+CD45RO+细胞表达ICOS的水平分别明显高于血清抗dsDNA抗体 ( -)和免疫球蛋白含量正常的患者(P<0 05)。结论　SLE患者外周血某些T     

无性生活勃起功能障碍的临床特点

目的：收集无性生活勃起功能障碍（erectile dysfunction no sexual life,ED NS）患者临床资料,通过简单问卷研究其临床特点。方法：根据现有ED概念,将无性生活勃起功能障碍研究范围限定于6个月内无性生活且主诉勃起功能减退的患者,共收集患者61例,同时选择6个月内无性生活的正常健康男性57例作为对照。ED NS患者平均年龄（26.2±4.3）岁,正常对照组平均年龄（24.9±4.1）岁,2组年龄差异无统计学意义（P>0.05）。设定了1组调查问题,嘱患者根据6个月内的情况填写调查问卷,简要回答“是/否”,问题涉及性欲、平时勃起情况、夜间勃起情况、视听觉性刺激下勃起情况、异性相处条件下勃起及自信心情况、手淫时勃起情况等多个方面,共16个问题。根据各个问题组间频数分布情况,行四格表卡方检验,比较两组间差异。结果：ED-NS患者与正常对照组比较,共有13项问题差异具有统计学意义,涉及平时性欲（χ²=35.891,P<0.05）、勃起信心（χ²=75.608,P<0.05）、阴茎硬度（χ²=54.433,P<0.05）,夜间勃起（χ²=29.815,P<0.05）、异性相处时勃起硬度（χ²=21.211,P<0.05）、勃起信心（χ²=70.445,P<0.05）,视听觉性刺激下勃起硬度（χ²=34.422,P<0.05）等。ED-NS与正常对照组间在涉及手淫问题时,均有调查者否认手淫习惯。结论：通过此项研究,我们提出了1种新概念——无性生活ED,其定义为：6个月以上无性生活且阴茎勃起硬度下降、时间缩短,缺乏勃起信心而无法尝试性生活。可通过问卷法评价ED-NS患者的勃起功能,但尚待大规模、多中心的临床研究。     

CD28、CD80、CD86在银屑病皮损中的表达

目的研究共同刺激分子CD28、CD80、CD86在银屑病患者皮损中的表达及其在银屑病发生、发展中的作用.方法采用免疫组织化学ABC法检测22例银屑病患者皮损和15例正常对照皮肤中CD28、CD80、CD86的表达水平.结果银屑病皮损中CD28在真皮乳头、表皮基底层及棘层有较强的表达,与正常皮肤相比有显著性差异(P＜0.01);CD80、CD86在表皮颗粒层、棘层的表达相对正常皮肤均有明显的增强(P＜0.01).结论CD28、CD80、CD86在银屑病发病中起重要作用.     

生殖器疱疹患者外周血淋巴细胞B7-CD28/CTLA-4的检测分析

目的研究外周血B7-CD28/CTLA-4（CD152）T淋巴细胞活化协同刺激分子在生殖器疱疹（Genital herpes,GH）患者发病机制中的作用。方法用流式细胞仪检测51例GH患者和15例健康体检者外周血淋巴细胞CD80/86及CD4＋/CD8＋T淋巴细胞中B7-CD28/CTLA-4的表达。结果GH患者恢复组与对照组比较,CD80、CD86的阳性表达较对照组明显升高,差异有统计学意义（P〈0.05）。其余各组间CD80、CD86比较差异无统计学意义。恢复组CD8＋/CD28阳性表达显著高于非复发组（P〈0.05）;非复发组显著高于对照组（P〈0.05）;复发组的CD4＋/CD152、CD8＋/CD152的阳性表达显著高于非复发组（P〈0.05）。其余各组间CD4＋/CD152、CD8＋/CD152及CD4＋/CD28、CD8＋/CD28表达差异无统计学意义。结论单纯疱疹病毒感染可诱导CD80、CD86、CD28和CD152活化增殖,高表达负性共刺激分子和分泌抑制性细胞因子,通过多种机制抑制机体的抗病毒免疫应答。     

骨髓增生异常综合征患者骨髓CD34+细胞亚群及其表面造血因子受体的表达

目的 探讨骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓CD34+细胞亚群及其表面干细胞因子受体(SCF-R)、红细胞生成素受体(EpoR)、粒细胞集落刺激因子受体(G-CSFR)及血小板生成素受体(TpoR)的表达情况及其意义.方法 采用流式细胞术检测2008年7月至2010年3月天津医科大学总医院新诊断的45例MDS患者(17例低危患者、28例高危患者)及30名对照组原代骨髓CD34+CD38+及CD34+CD38-细胞亚群及其表面SCF-R、EpoR、G-CSFR及TpoR的表达率.结果 高危组CD34+细胞比例[0.53%(0.10%～1.68%)]明显高于对照组[0.13%(0.08%～0.32%),P＜0.01],其他2组间比较差异无统计学意义.低危组和高危组CD34+CD38+细胞比例(86.3%±8.5%、82.6%±11.1%)显著低于对照组(92.3%±3.4%,均P＜0.05),而CD34+CD38-细胞比例(13.7%±8.5%、17.4%±11.0%)显著高于对照组(7.7%±3.4%,均P＜0.05).对照组骨髓CD34+CD38+细胞亚群EpoR表达率(18.7%±18.3%)显著低于CD34+CD38-细胞亚群(63.6%±20.0%,P＜0.01),两亚群之间SCF-R、G-CSFR及TpoR表达率差异无统计学意义.在CD34+CD38+细胞亚群中,3组间SCF-R和TpoR表达率差异无统计学意义,而低危组和高危组EpoR的表达率[9.0%(1.4%～12.7%)、5.2%(1.1%～14.1%)]明显低于对照组[9.6%(5.1%～30.1%),均P＜0.05],G-CSFR的表达率(29.8%±19.1%、28.7%±21.1%)明显低于对照组(44.4%±23.4%,均P＜0.05);在CD34+CD38-细胞亚群中,3组间SCF-R和G-CSFR表达率差异无统计学意义,低危组和高危组EpoR的表达率(42.2%±21.9%、25.7%±15.6%)明显低于对照组(63.6%±20.0%,均P＜0.01),TpoR的表达率(5.4%±4.7%、4.1%±4.0%)明显低于对照组(10.1%±8.3%,均P＜0.05).MDS患者骨髓CD34+CD38+和CD34+CD38-细胞亚群表面受体表达率低的患者其外周血血红蛋白水平、中性粒细胞及血小板计数减低的发生率明显高于受体表达率不低的患者(均P＜0.05).结论 MDS患者的原代骨髓CD34+细胞亚群分化异常,膜表面部分造血细胞因子受体表达减低,这可能与MDS患者血细胞减少有关,有望用于辅助诊断MDS.

Abstract：

Objective To detect the abnormalities of differentiation and expression of membrane hemopoietic cytokine receptors on CD34 + bone marrow cells in patients with myelodysplastic syndromes (MDS). Methods Forty-five newly diagnosed MDS cases from July 2008 to March 2010 in our hospitaland 30 normal controls were enrolled. There were 17 low-risk and 28 high-risk patients. The CD34 + CD38 +and CD34 + CD38- bone marrow cells and the expressions of stem cell factor receptor (SCF-R),erythropoietin receptor (EpoR), granulocyte colony-stimulating factor receptors (G-CSFR) and thrombopoietin receptor (TpoR) on those cells were measured by flow cytometry. Results The mean percentage of CD34+ in karyocyte of MDS cases in high-risk patients [0. 53% (0. 10% - 1.68% )] was significantly higher than that of control group [0. 13% ( 0. 08% - 0. 32% ), P ＜ 0. 01] . The mean percentages of CD34 + CD38 + cells were significantly lower in low and high-risk groups (86. 3% ± 8.5% and 82. 6% ± 11.1% ) than those in control group (92. 3% ± 3.4% ). And the percentage of CD34+ CD38-cells was significantly higher in either low-risk or high-risk group ( 13.7% ±8. 5% and 17.4% ± 11.0% )than that in control group (7.7% ± 3.4%, both P ＜ 0. 05 ). In control group, the mean percentage of antigen expression of EpoR was significantly lower in CD34 + CD38 + cells than that in CD34 + CD38 - cells ( 18.7% ± 18. 3% vs 63. 6% ±20. 0%, P ＜0. 01 ). The expressions of SCF-R, G-CSFR and TpoR were not significantly different between two cell populations. The expressions of EpoR on CD34 + CD38 + cells of low and high-risk MDS groups [9.0% ( 1.4% - 12. 7% ), 5. 2% ( 1.1% - 14. 1% )] were significantly lower than those of control group [9. 6% (5.1% - 30. 1% ), both P ＜ 0. 05]. The expressions of G-CSFR on CD34+CD38+ cells of low and high-risk MDS groups (29.8% ± 19. 1%, 28.7% ± 21.1%) were significantly lower than those of control group (44.4% ± 23.4%, both P ＜ 0. 05 ). The quantities of EpoR on CD34 + CD38 - cells of low and high-risk MDS groups ( 42. 2% ± 21.9%, 25.7% ± 15. 6% ) were significantly lower than those of control group ( 63. 6% ± 20. 0%, both P ＜ 0. 01 ). The expressions of TpoR on CD34+ CD38- cells of low and high-risk MDS groups (5.4% ± 4.7%, 4.1% ± 4.0%) were significantly lower than those of control group ( 10. 1% ± 8. 3%, both P ＜ 0. 05 ). The incidence of cytopenia with low expression rates of hemopoietic cytokine receptors on CD34 + cells was higher than that of MDS with high expression rates. Conclusion The abnormalities of differentiation and membrane hemopoietic cytokine receptors expression of CD34 + bone marrow cells in MDS are associated with MDS cytopenia and may be useful for the diagnosis of MDS.     

Expression of CD80／CD86 and CTLA-4 mRNA in Peripheral Blood Mononuclear Cells of the Patients with Systemic Lupus Erythematosus

The role of CD80/CD86 and CTLA-4 in the pathogenesis of systemic lupus erythematosus and their clinical significance was investigated. By using RT-PCR technique, the expression of CDS0/CD86 and CTLA-4 mRNA in peripheral blood mononuclear cells (PBMC) were semiquantitatively detected in 32 patients with active SLE. The results showed that the percentage of positive CD86 expression in active SLE was increased significantly as compared with normal controls (90.63% vs 60.00 %, P＜0.01). The mean level of CD86 mRNA expression in active SLE group was markedly higher than in the normal controls (0. 6410 0. 0174 vs 0. 4510 0. 0402, P＜0. 001).Compared with normal controls, the percentage of positive CTLA-4 expression and the mean level of CTLA-4 mRNA expression in active SLE group were both increased significantly (both P＜0.01). There was no statistical differences in positive rate of CDS0 and the average level of CDS0 mRNA between the two groups (both P~0.05). It was concluded that the aberrant expression of CD86 and CTLA-4 might play an important role in the activity and development of SLE.     

转化生长因子β1在萎缩性胃炎发生中的作用

目的：探讨转化生长因子β1（transforming growth factor β1,TGFβ1）蛋白表达在幽门螺杆菌（Helicobacter pylori, H.pylori）感染相关非化生性萎缩性胃炎形成中的作用。方法：采用免疫组织化学方法,检测TGFβ1、CD68及平滑肌肌动蛋白（smooth muscle actin,SMA)在H.pylori感染阳性的10例轻度非萎缩性胃炎,30例轻度非化生性萎缩性胃炎及32例重度非化生性萎缩性胃炎中的表达情况,且对3例轻度非萎缩性胃炎、4例轻度非化生性萎缩性胃炎进行电镜观察。 结果：重度非化生性萎缩性胃炎组,每高倍视野（high-power field, HPF）TGFβ1阳性细胞数（53±22个）显著高于轻度非化生性萎缩性胃炎组（22±9个/HPF）及轻度非萎缩性胃炎组（0~3个/HPF, P<0.01）;CD68阳性细胞数（23±7个/HPF）显著高于轻度非化生性萎缩性胃炎组（13±6个/HPF）及轻度非萎缩性胃炎组（0~3个/HPF, P<0.01）。TGFβ1与CD68表达的相关分析表明,在轻度及重度非化生性萎缩性胃炎组,两者均有中等程度的相关性（r=0.634, P<0. 01; r=0.699, P<0. 01）。与轻度非萎缩性胃炎比较,轻度及重度非化生性萎缩性胃炎组黏膜固有层中SMA阳性的肌纤维母细胞及平滑肌细胞均增多。电镜观察轻度非萎缩性胃炎可见纤维母细胞增生,而轻度非化生性萎缩性胃炎可见大量纤维母细胞增生及肌纤维母细胞出现,并可见到纤维母细胞与肌纤维母细胞、肌纤维母细胞与平滑肌细胞并行现象。结论：TGFβ1蛋白的表达随非化生性萎缩性胃炎萎缩程度的增加而呈上升趋势,提示TGFβ1可能在非化生性萎缩性胃炎病变的发展过程中起重要作用。     

N末端B型利钠肽原对主动脉瓣狭窄患者诊断价值

目的 评价N末端B型利钠肽原(NT-proBNP)对主动脉瓣狭窄(AS)患者的诊断价值,分析NT-proBNP与美国纽约心脏协会(NYHA)心功能分级和超声心动图所测指标的相关性.方法 2005年5月至2006年7月因AS住院患者,使用酶联免疫的方法对40例AS患者(AS组)和76名健康对照者(正常组)行NT-proBNP测定.评价NT-proBNP对AS的诊断价值,及其与临床心功能分级、超声心动图指标的相关性.结果 AS组的NT-proBNP水平比正常组显著高(P＜0.01);在NYHA心功能Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ级者呈逐级显著高(均P＜0.01),轻中度狭窄组高3.5倍[(2.95±0.48)ng/L比(2.63±0.10)ng/L,P＜0.05],重度狭窄组高6倍[(3.16±0.50)ng/L,P＜0.01);伴随左室质量指数(LVMI)也显著高于正常组,且在轻、中度狭窄组高1.7倍[(169±51)比(100±22),P＜0.01],重度狭窄组高2.1倍[(212±86)ng/L比(100±22)ng/L,P＜0.01].当NT-proBNP阈值在1150 ng/L和1356 ng/L时,分别是诊断轻、中度(AUC=0.657,P＜0.05)及重度AS(AUC=0.848,P＜0.01)的最佳阈值;诊断的敏感性、特异性和准确性分别为61.11%和77.30%,69.74%和96.10%以及68.09%和91.80%.单因素分析,Log(NT-proBNP)与左室舒张期末内径(LVEDD)、LVMI和平均主动脉瓣跨瓣压差(MTPG)均呈显著正相关(r=0.325,均P＜0.05),而与左室射血分数(LVEF)呈负相关(r=-0.487,P=0.01);多元逐步回归分析不仅与NYHA分级和LVEF,而且Log(MTPG)与NT-proBNP独立相关(P＜0.05).结论 NT-proBNP对AS患者有诊断价值,不仅与心功能相关,还与AS的严重程度相关.     

钾通道阻滞剂对多发性硬化患者CD4+T细胞CCR7及CD45RA表达的影响

目的 研究Kv1.3钾通道阻滞剂海葵毒素(SHK)阻滞多发性硬化(Ms)患者急性期髓鞘反应性CIM+T淋巴细胞上的Kv1.3钾通道后,细胞表型CCR7、CD45RA表达的变化与疾病的关系.方法 对15例急性期MS患者、15例INF-B-1b治疗缓解期MS患者和15名健康对照的不同状态下的CD4+T淋巴细胞进行CD3、CIM、CCR7、CD45RA的荧光抗体及同型对照标记,用四标流式细胞仪检测3组不同状态下细胞表型CCR7、CD45RA表达的变化.结果 MS急性期组CIM+T细胞以CCR7-CIM5RA-(TEM)表型为主,其变化与病情有明显相关性,髓鞘抗原刺激后此型所占比例明显增高(P＜0.05),初始细胞表型CCR7+CD45RA+减少(P＜0.05),钾通道阻滞剂SHK对Ms急件期患者髓鞘反应性CD4+TEM表型有明显抑制作用(P＜0.05).结论 检测CI4+TEM细胞表型可能对判断病情有一定临床意义,Kv1.3钾通道可能成为治疗MS的新靶点.     

类风湿关节炎患者外周血滤泡辅助性T细胞水平检测

目的：检测外周血滤泡辅助性T细胞(follicular T helper cells , Tfh cells)的比例及其表面标志,分析与类风湿关节炎(rheumatoid arthritis , RA)患者疾病活动度的关系。方法： 收集40例类风湿关节炎患者及20例正常对照组的外周血,分离外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMC)及血清,流式细胞术检测PBMC中CD4+CXCR5+Tfh细胞(CXCR5, 趋化因子受体, C-X-C chemokine receptor type 5)的比例及其表面程序性细胞死亡1(programmed death-1, PD-1)、可诱导的协同刺激性因子(inducible co-stimulator, ICOS)、CD40配体(CD40 ligand, CD40L)及白介素21受体（interleukin-21 receptor, IL-21R）的表达情况,实时荧光定量PCR方法检测B 细胞淋巴瘤-6(B-cell lymphoma 6, Bcl-6)、白介素-21(interleukin-21, IL-21)及IL-21R的表达,酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay , ELISA)检测血清中IL-21和B 细胞趋化因子CXC配体13 (B cell-attracting chemokine CXC ligand 13, CXCL13)水平。结果： （1）流式细胞术结果提示,与正常对照组比较,RA患者组外周血CXCR5+ CD4+Tfh细胞表达与正常对照组相比明显升高（16.75±3.92 vs. 7.49±1.84,P＜0.001）;低疾病活动度或缓解组RA外周血CXCR5+ CD4+Tfh细胞表达与正常对照组相比明显升高（16.62±3.43 vs. 7.49±1.84,P＜0.001）;中疾病活动度组RA外周血CXCR5+ CD4+Tfh细胞表达与正常对照组相比明显升高(16.82±3.07 vs. 7.49±1.84, P＜0.001);高疾病活动度组RA外周血CXCR5+ CD4+Tfh细胞表达与正常对照组相比明显升高(16.87±5.50 vs. 7.49±1.84, P＜0.001);RA患者外周血ICOS、PD-1、IL-21R在CD4+CXCR5+细胞的表达与正常对照组相比显著升高 (ICOS+ CXCR5+CD4+细胞, 8.37±4.28 vs. 3.72±1.81, P＜0.001; PD-1+ CXCR5+CD4+细胞, 1.57±1.10 vs. 0.24±0.30, P=0.035; IL-21R+ CXCR5+CD4+细胞, 4.60±4.05 vs. 0.20±0.19, P=0.006),而CD40L在CD4+CXCR5+细胞的表达在两组间差异无统计学意义(3.38±3.71 vs. 0.54±0.34, P=0.135)。（2）RA患者组较正常对照组外周血中IL-21R mRNA升高(5.00±4.94 vs. 0.74±0.55, P<0.001),而转录因子Bcl-6 mRNA ［4.54(3.33, 7.23) vs. 5.31(2.81, 7.44), P=0.329］以及IL-21 mRNA ［0.72(0.26, 3.45) vs. 0.56(0.27, 3.71) P=0.195］表达差异无统计学意义（P>0.05）;Bcl-6、IL-21和IL-21R mRNA的表达在不同组RA患者之间差异也无统计学意义（P>0.05）。（3）RA患者血清中IL-21、CXCL13水平明显高于正常对照组［IL-21, (200.49±154.56) ng/L vs. (8.21±5.95) ng/L, P<0.001; CXCL13, (43.09±1.28)ng/L vs. (93.72±49.72) ng/L,P<0.001］;相关分析显示IL-21、CXCL13浓度与RA疾病活动度正相关（r>0.4）,而血清类风湿因子(rheumatoid factor, RF)和抗环瓜氨酸多肽抗体（anti-citrullinated protein antibody, anti-CCP）与RA疾病活动度无相关性(r<0.2)。结论： 外周血Tfh细胞及其相关细胞因子在RA患者中显著升高,说明Tfh细胞可能参与RA的发病机制,阻断Tfh细胞的产生,有望成为治疗RA患者的新的作用靶点。     

结肠粘膜活检标本中固有层单个核细胞的分离及表型分析

为改进从粘膜活检标本中分离固有层单个核细胞的方法 ,并行初步表型分析 ,从 8例溃疡性结肠炎、5例正常人和 2 2例大肠癌患者各取 1 0块结肠粘膜进行活检 ,比较消化分离各因素对细胞产量的影响 ,并以双色荧光流式细胞术分析淋巴细胞各亚群的变化。结果显示 :溃疡性结肠炎组固有层单个核细胞产量达 1 0 6 个 ,为正常人组及大肠癌组的 2倍 ,各组细胞活力均 >95 % ;其中 T、B细胞百分比在三组间无统计学上的差异 ,而溃疡性结肠炎组 CD3 CD4 、CD3 CD8 T细胞百分比与后两组比较则有显著不同 (P<0 .0 1 )。本研究结果提示 ,从活检标本中可分离出足够数量的固有层单个核细胞进行表型或功能研究 ,这将有助于阐明溃疡性结肠炎发病机理     

炎症诱导性早产小鼠血淋巴细胞CD86和CD69分析

目的 分析小鼠血共刺激分子CD86和各淋巴细胞亚群活化分子CD69的表达,探讨Toll样受体4(TLR4)在脂多糖(LPS)诱发的早产中的作用。方法 在预先阻断TLR4或不阻断TLR4的条件下,腹腔注射LPS建立小鼠炎症诱导性早产模型,计算各组(LPS组、抗TLR4组和对照组)的早产率和死胎率。应用流式细胞仪检测血CD45+CD86+、CD3+CD69+、CD19+CD69+和CD49b+CD69+细胞的百分率。结果 LPS组的早产率\[50.0%(8/16)\]和死胎率\[11.0%(9/82)\]均高于对照组\[0(0/16),3.1%(5/163),P<0.01或P<0.05\],抗TLR4组的早产率\[6.3%(1/16)\]和死胎率\[3.9%(6/154)\]均低于LPS组(P<0.01或P<0.05)。预先阻断TLR4明显抑制LPS所致的血CD45+CD86+、CD3+CD69+和CD49b+CD69+细胞水平的升高(P均<0.01)。结论 LPS与其特异性受体TLR4作用,触发CD86+树突状细胞的活化和动员,导致T细胞和NK细胞等淋巴细胞亚群的激活,在早产的发生中具有重要作用。