孕妇外周血中胎儿游离DNA在产科中的应用

检测孕妇外周血中胎儿游离DNA,为无创产前诊断及妊娠相关性疾病的防治找到了新途径,此种技术具有诸多优势。孕妇外周血中胎儿游离DNA测序可用于胎儿非整倍体疾病、胎儿单基因遗传病、胎儿血型的检测、胎儿性连锁疾病的产前诊断筛查;胎儿游离DNA水平的变化可作为一种新的生物指标为妊娠相关性疾病的诊断及治疗提供帮助。随着分子生物学技术的不断发展,对孕妇外周血中胎儿游离DNA的研究将更加深入。     

小片段游离胎儿DNA检测Y染色体性别决定区的临床意义

目的研究从早孕妇女外周血中提取小片段游离胎儿DNA检测胎儿Y染色体性别决定区（SRY）的方法,提高PCR检测的特异性和敏感性,评估利用小片段游离胎儿DNA对性连锁遗传病进行无创性产前诊断可行性。方法收集80例孕妇外周血,提取游离的胎儿DNA和提纯小片段游离胎儿DNA,PCR检测SRY基因。结果80例受试者中2种样本敏感性和特异性比较差异有统计学意义。结论可利用孕妇外周血中小片段游离胎儿DNA检测胎儿Y染色体性别决定区,敏感性和特异性优于总游离DNA,可用于孕早期性连锁遗传疾病和单基因突变疾病产前诊断。     

孕妇血浆及血清中胎儿游离DNA的研究进展

无创伤性产前诊断是近年来人们关注的热点,孕妇血浆及血清中胎儿游离DNA的存在,为无创伤性产前诊断开辟了新的途径。本文介绍了胎儿游离DNA的来源、生物学特点及在产前诊断中的应用,胎儿游离DNA具有含量高且产后很快清除等优点,有广泛的临床应用价值。     

应用母血中胎儿游离DNA进行无创产前诊断的研究进展

有创性产前诊断是诊断染色体病的金标准,但是不能广泛应用于所有孕妇;孕妇血中胎儿游离DNA的发现为无创性产前诊断提供了广阔前景,借助大规模并行基因组测序技术,建立起无创产前诊断染色体非整倍体的新方法。就胎儿游离DNA的来源、应用胎儿游离DNA进行非整倍体和基因产前诊断进行综述。     

孕妇血浆中的游离胎儿DNA及其意义

传统的产前诊断需要羊膜穿刺或绒毛膜取样，对母体和胎儿均有一定的危险性。胎儿有核细胞可存在于孕妇血循环中。并已被应用于非侵入性产前诊断，但由于母体外周血中胎儿有核细胞很少，每毫升仅含有1．2个细胞，且分离富集胎儿有核细胞的操作技术繁琐复杂。因此其应用受到限制。1997年Lo等首次证实孕妇血浆中存在着胎儿来源的游离DNA,为利用孕妇血浆进行非侵入性产前诊断提供了一条崭新途径。     

母体外周血胎儿游离DNA检测在临床诊断中的应用

目的探讨母体外周血胎儿游离DNA检测在临床中的应用价值。方法选取2013年1-8月在郑州市妇幼保健院优生科进行产前筛查高危的孕妇共727例,其中孕9~12周的孕妇33例为早孕组;孕14~24周的孕妇694例为中孕组。对早孕组和中孕组唐氏筛查为高危的孕妇采用大规模平行测序法对母体外周血中游离胎儿DNA进行染色体非整倍体检测。结果早孕组33例游离胎儿DNA检测结果中,共检出1例染色体数目异常,与羊水染色体核型分析结果完全一致;中孕组694例游离胎儿DNA检测结果中,共检出9例染色体数目异常,4例结构异常,其中2例与羊水染色体核型分析结果不一致;检测准确率为99.7%。结论母体外周血胎儿游离DNA大规模测序,对于早孕期和中孕期染色体非整倍体的检测有较高的准确性,可作为产前筛查高危的补救检测技术及产前诊断的辅助检测方法。     

母体外周血胎儿游离DNA检测在临床诊断中的应用

目的探讨母体外周血胎儿游离DNA检测在临床中的应用价值。方法选取2013年1-8月在郑州市妇幼保健院优生科进行产前筛查高危的孕妇共727例,其中孕9~12周的孕妇33例为早孕组;孕14~24周的孕妇694例为中孕组。对早孕组和中孕组唐氏筛查为高危的孕妇采用大规模平行测序法对母体外周血中游离胎儿DNA进行染色体非整倍体检测。结果早孕组33例游离胎儿DNA检测结果中,共检出1例染色体数目异常,与羊水染色体核型分析结果完全一致;中孕组694例游离胎儿DNA检测结果中,共检出9例染色体数目异常,4例结构异常,其中2例与羊水染色体核型分析结果不一致;检测准确率为99.7%。结论母体外周血胎儿游离DNA大规模测序,对于早孕期和中孕期染色体非整倍体的检测有较高的准确性,可作为产前筛查高危的补救检测技术及产前诊断的辅助检测方法。     

母血浆胎儿游离DNA检测SRY基因

 【目的】 建立一种比较稳定可靠的无创性获取胎儿遗传物质的方法｡【方法】 从孕妇外周血血浆中提取胎儿游离DNA,以Y染色体上的SRY区域为靶序列进行扩增,扩增产物经DNA测序进行确认,由此来确定我们获得的胎儿DNA｡【结果】 我们利用获取胎儿游离DNA的方法对16例孕妇进行检测,10例获得了成功,除1例未随访到结果之外,其他9例的随访结果和我们实验判断结果一致｡【结论】 我们初步建立的这种获得胎儿游离DNA的方法具有可靠性,胎儿游离DNA可以用于性连锁遗传病和单基因疾病的产前诊断｡     

孕妇血浆中游离胎儿DNA对检测胎儿ABO血型40例分析

1997年Lo等研究证实,在母体外周血中存在着相对较为丰富的游离胎儿DNA,这一发现为无创性产前诊断开辟了崭新途径[1].孕妇血浆中的游离胎儿DNA可用来检测胎儿ABO血型,对于预防新生儿溶血病、预测与ABO血型基因连锁的遗传性疾病,治疗血型不合妊娠引起的胎儿溶血性贫血等疾病,具有重要的意义．笔者提取血型为0型、丈夫血型为非0型的孕妇血浆中的胎儿DNA,采用复合PCR—RFLP方法检测胎儿ABO血型．     

母血浆胎儿游离DNA检测SRY基因

【目的】建立一种比较稳定可靠的无创性获取胎儿遗传物质的方法。【方法】从孕妇外周血血浆中提取胎儿游离DNA，以Y染色体上的SRY区域为靶序列进行扩增，扩增产物经DNA测序进行确认，由此来确定我们获得的胎儿DNA。【结果】我们利用获取胎儿游离DNA的方法对16例孕妇进行检测，10例获得了成功，除1例未随访到结果之外，其他9例的随访结果和我们实验判断结果一致。【结论】我们初步建立的这种获得胎儿游离DNA的方法具有可靠性，胎儿游离DNA可以用于性连锁遗传病和单基因疾病的产前诊断。     

Advances on circulating fetal DNA in maternal plasma

The discovery of cell-free fetal DNA in maternal plasma in 1997 has opened up new possibilities for noninvasive diagnosis. By RT-PCR, circulating fetal DNA can be detected in the plasma of pregnant women, even in the first trimester of pregnancy, and thus can be used for noninvasive prenatal diagnosis of sex-linked disorders, the RhD status of fetuses, and single gene disorders such as beta-thalassaemia, congenital adrenal hyperplasia, and achondroplasia. In addition, quantitative aberrations of circulating fetal DNA may indicate various pregnancy-associated disorders, including preeclampsia, preterm labor and fetal trisomy 21.[第一段]     

产前诊断和宫内治疗的技术进展与展望

产前诊断是在胎儿出生前检测胎儿或胚胎是否患有出生缺陷疾病。常见的出生缺陷疾病包括染色体疾病、单基因疾病和多基因疾病等。出生缺陷已成为婴幼儿残疾和死亡的主要原因。全世界每年大约有500万出生缺陷婴儿出生[1],其中85%发生在发展中国家。这不但增加了家庭和社会的经济和精神负担,而且使人口素质降低。中国每年有(80～120)×104出生缺陷儿出生,占全部出生人口的4%～6%。产前诊断可有效检测出生缺陷相关疾病,及早终止重度出生缺陷胎儿的出     

用聚合酶链反应快速诊断胎儿性别

我们用聚合酶链反应(PCR)技术以及Y染色体特异性的引物对绒毛组织的DNA进行基因扩增,用于产前诊断胎儿性别。扩增产物直接用琼脂糖凝胶电泳观察结果,男性胎儿有149bP的特异性扩增带,而女性则无。此种技术较常规的染色体技术简单、快速、准确,临床上可用于性连锁遗传病的辅助诊断。     

孕妇外周血血浆胎儿DNA的检测

目的：建立可靠有效的检测孕妇血浆胎儿DNA的方法,探讨其在非创伤性产前诊断中的价值。方法：采用引物引伸预扩增（PEP）法及巢式PCR技术对65例孕妇外周血血浆DNA进行正常男性SRY基因检测。结果：单用巢式PCR技术和联合应用PEP,PCR技术对怀男胎的孕妇血中SRY基因检出率分别为65．2％（30／46）和89．1％（41／46）,两组差异有极显著性,对怀女胎孕妇血中SRY基因的未检出率为78．9％（15／19）和94．7％（18／19）,两组差异无显著性。结论：应用PEP法可对胎儿DNA进行全基因组扩增使DNA模板量增加,并使继后的PCR技术检测SRY基因的敏感性明显提高,PEP法是解决母血中胎儿细胞数量太少的途径之一,孕妇血浆中胎儿DNA可成为非创伤性产前诊断的胎儿物质来源。     

胎儿有核红细胞在DMD产前基因诊断中的应用

目的探讨胎儿有核红细胞（FNRBCs）在DMD产前基因诊断中的可行性。方法对6例进行性肌营养不良症携带者孕妇（孕12～18周）抽取外周血进行密度梯度离心，富集胎儿细胞，在显微操作下吸取胎儿有核红细胞。对所富集细胞经提取DNA进行人Y染色体特异DNA扩增，判定胎儿性别。将其应用于DMD产前诊断中，并与用羊水进行产前诊断比较。结果SRY片段经PCR后，3例男性胎儿可见特异性条带，3例女性胎儿未见此电泳条带。母体外周血FNRBCs的DNA产前诊断中，2例为女性正常胎儿，1例为女性携带者，2例为正常男性胎儿，1例为DMD患儿，结果与用羊水进行产前诊断和产后个体性别证实一致。结论密度梯度离心结合显微操作方法分离FNRBCs能用于性别鉴定和遗传病的产前诊断。     

孕妇血浆胎儿DNA的父源性α地中海贫血产前基因诊断

目的检测孕妇血浆胎儿DNA的父源性东南亚缺失型α地中海贫血1（SEAα地贫1）基因突变,进行无创伤性产前基因诊断。方法应用荧光聚合酶链反应（PCR）和基因扫描方法分析10例孕妇血浆胎儿DNA的父源性SEAα地贫1基因突变及短串联重复序列（STR）;同时以常规的绒毛、羊水或脐血胎儿DNA的基因诊断结果作对照。结果10例孕妇血浆胎儿DNA均检测到父源性STR等位基因。有4例检出父源性SEAα地贫1基因突变;6例未检出父源性SEAα地贫1基因突变,与常规的绒毛、羊水或脐血胎儿DNA的产前基因诊断结果一致。结论应用荧光PCR和基因扫描方法检测孕妇血浆胎儿DNA的父源性SEAα地贫1基因突变,可排除血红蛋白H病胎儿。     

巢式PCR扩增孕妇血浆中胎儿ZFY基因的研究

目的：建立一种无创伤性产前基因诊断的方法。方法：自行建立巢式PCR方法对46例10～40孕周的初孕妇血浆中游离胎儿Y染色体ZFY基因进行扩增，扩增片段分别为354bp和307bp，46例均采用母体血浆直接作为模板进行巢式PCR。结果：39例妊娠男性胎儿孕妇血浆中有32例出现ZFY基因条带，检出率为82．1％(32／39)，其中24例2次扩增均为阳性，8例第2次扩增才出现阳性条带，巢式PCR可明显提高检测敏感性(从61．5％提高到82．1％)。7例妊娠女性胎儿孕妇血浆2次均未出现阳性扩增带，无假阳性结果。本研究的性别总符合率为84．8％(39／46)。结论：巢式聚合酶链反应检测母体血浆中游离胎儿DNA的敏感性和特异性较高，有希望成为无创伤性产前基因诊断方法应用于临床。     

无创胎儿DNA检测假阳性对产前诊断的影响分析

无创胎儿DNA检测(non-invasive prenatal testing, NIPT)假阳性是导致增加额外的产前诊断和孕妇依从性降低的重要原因,还可能带来非必要的引产。本文就无创胎儿DNA检测假阳性对产前诊断的影响分析进行综述,通过分析NIPT假阳性的原因,在临床应用中结合不同孕妇的个体情况,为个体化、规范化的产前诊断提供指导和理论依据。     

胎儿细胞进入孕妇血循环的实验研究

目的 从胎盘组织中寻找胎儿细胞穿越胎盘屏障，进入孕妇外周血的实验室证据，为利用孕妇外周血进行无创性产前基因诊断提供实验依据。方法 分娩胎盘组织22份(男婴的12份，女婴的10份)，平行切片，分2组：一组HE染色，光镜观察绒毛中胎儿细胞的分布；另一组用Dig-碱性磷酸酶标记SRY区域(Sex determlining region)基因扩增片断制成探针，通过原位杂交鉴定胎盘绒毛内，特别是绒毛间隙胎儿细胞的存在。阳性对照由男性外周血有核细胞涂片经原位杂交提供。结果 HE染色光镜观察：22例胎盘组织切片可见胎儿细胞有穿越绒毛毛细血管内皮和滋养层基膜的现象。胎盘组织原位杂交结果显示：分娩男婴的12份胎盘切片的绒毛毛细血管腔内、绒毛滋养层基膜边缘，以及绒毛间隙，可见阳性信号；分娩女婴的10份胎盘切片均无阳性信号出现；阳性对照涂片杂交后可见清晰阳性信号。结论 胎盘组织切片常规HE染色观察胎儿细胞分布，结合原位杂交技术鉴定绒毛内、绒毛间隙细胞的性质，可以初步反映胎儿微量遗传物质穿越胎盘进入母亲血液循环的过程。