顺铂腹腔注射对小鼠卵巢相关基因表达谱的影响

目的：应用基因芯片技术研究顺铂（Clsplatin）腹腔注射给药对小鼠卵巢相关基因表达的影响,探讨顺铂对卵巢功能损伤的作用机制。方法：建立化疗损伤后卵巢功能低下小鼠模型,按一步法抽提顺铂给药后的小鼠及对照组小鼠卵巢组织的总RNA;经逆转录分别用Cy3、Cy5荧光标记,获得两组小鼠卵巢cDNA的探针,再与cDNA基因表达谱芯片杂交,结果由激光扫描仪扫描,并用计算机软件进行图像分析、标准化处理、ratio值分析和聚类分析。结果：顺铂给药后的小鼠与对照组小鼠卵巢组织基因表达谱分析发现,109个差异表达基因有19个基因低表达,90个基因高表达。结论：本研究从顺铂给药后的小鼠卵巢组织中筛选出大量的差异表达基因,说明这些基因可能参与顺铂对卵巢功能损伤的发生、发展过程,从而为化疗药物损伤性卵巢功能减退的诊治提供依据。     

顺铂致小鼠卵巢功能早衰肝肾阴虚证机制研究

目的探讨化疗药顺铂(CDDP)致卵巢功能早衰(POF)肝肾阴虚证的机制。方法腹腔注射化疗药顺铂,观察小鼠一般状态、体重、皮表温度、卵巢排卵、生殖激素和cAMP的变化情况。结果顺铂腹腔注射后小鼠体重减轻,进食水量减少,尿量减少,体温升高,排卵明显受到抑制。其中3mg/kg给药组血清雌二醇(E2)和孕酮(P)水平降低,促卵泡生成激素(FSH)和黄体生成素(LH)水平升高,血浆环腺苷酸(cAMP)含量升高。结论腹腔注射法所造卵巢功能早衰肝肾阴虚证模型的发病机理与临床病理一致,生物学行为接近于实际症状,其中3mg/kg给药量小鼠的内分泌功能和生化指标变化特征与临床相似,是系统研究卵巢功能早衰肝肾阴虚证的适宜造模方法。     

慢性乙型病毒性肝炎肝肾阴虚证与湿热蕴结证患者外周血的差异基因表达谱分析

目的：通过检测和分析慢性乙型病毒性肝炎（以下简称乙肝）肝肾阴虚证、湿热蕴结证患者的差异基因表达谱,探讨乙肝中医证候分型与基因表达之间的关联。方法：从上海龙华医院肝科选择乙肝患者中诊断为肝肾阴虚证和湿热蕴结证者各3例,并选择3例健康者作为对照。采集乙肝患者和健康者的外周血样本,提取白细胞中的总RNA,运用基因芯片技术检测外周血基因表达情况,并对其表达谱进行比较。另外选择肝肾阴虚证和湿热蕴结证患者各10例和健康者10例,使用实时定量逆转录酶-聚合酶链式反应法验证部分基因的表达情况。结果：在乙肝肝肾阴虚证和湿热蕴结证患者之间、乙肝患者与健康者之间,基因表达谱都存在明显的差异表达。两种证型患者之间共有403个差异表达的基因,其中,239条基因表达有显著性差异（｜差异倍数｜≥2,P〈0.05）,基因表达上调的有142条,下调的有97条。肝肾阴虚证单独调变的基因主要与过氧化物酶的活性和干细胞的维持等相关,湿热蕴结证单独调变的基因主要与细胞因子、免疫应答和炎症反应等相关。实时定量逆转录酶-聚合酶链式反应验证ATP结合盒亚家族C成员3、过氧化物酶增殖体激活受体α等基因的表达与基因芯片检测结果趋势一致。结论：乙肝肝肾阴虚证和湿热蕴结证患者白细胞中基因表达存在差异,提示乙肝中医临床辨证分型具有分子生物学基础,与基因差异表达密切相关。     

原发性肝癌肝肾阴虚证患者外周血单个核细胞的特征性差异基因

目的:探讨原发性肝癌肝肾阴虚证患者外周血单个核细胞的特征性差异基因.方法:选取肝肾阴虚证与非肝肾阴虚证肝癌患者作为研究对象,以肝肾阴虚证肝癌患者为试验组,以非肝肾阴虚证肝癌患者作为对照组;选用全基因组表达谱芯片,研究肝肾阴虚证的基因表达谱,并进行差异表达基因分析,基于Gene Ontology( http://www.geneontology.org/)和KEGG(http.//www.genome.jp/kegg/)数据库对差异基因进行功能(gene ontology,GO)和通路(pathway)注释,并选取显著性差异基因构建共表达网络图.扩大样本量,运用实时荧光定量聚合酶链反应与蛋白质印迹法分别从mRNA及蛋白层面对显著性差异基因进行验证.结果:肝肾阴虚证组和非肝肾阴虚证组间存在差异基因表达特征图谱,获得差异表达的基因共615个.GO注释后,差异基因表达具有278个显著性功能差异,主要涉及跨膜转运、细胞周期停滞、细胞转录、诱导凋亡等.Pathway标记后,上调差异基因参与显著性信号转导通路16项,下调差异基因参与显著性信号转导通路10项,包括抗原加工与递呈转导通路、代谢途径转导通路、细胞周期转导通路、蛋白质输出转导通路等.用差异基因构建共表达网络图,筛选出3个显著性差异基因(SEC62 [SEC62 homolog(S.cerevisiae)]、CCNB1 [cyclin B1]、BIRC3[ baculoviral IAPrepeat-containing 3]).扩大样本量进行验证,肝肾阴虚证肝癌患者SEC62、CCNB1、BIRC3基因的mRNA(P＜0.01)和蛋白(P＜0.01)表达水平均显著低于非肝肾阴虚证肝癌患者.结论:本研究从基因组学的角度反映出肝肾阴虚证肝癌患者与非肝肾阴虚证肝癌患者之间存在着差异表达基因,进一步证实了“证”是多基因在mRNA和(或)蛋白质水平发生改变并导致人体偏离正常状态的假说.     

补肾益脑片对加速衰老小鼠P10/Ta小鼠神经细胞衰老相关基因表达的调节

目的 研究补肾益脑片抗衰老的分子机制.方法 应用DDRT-PCR研究补肾益脑片提取物对SAM(senescence-accelerated mouse)P10/Ta小鼠原代培养的神经细胞基因表达的影响.结果 发现了10个差异表达片段,分别与下列基因或转录产物同源:小鼠mRNA克隆IMAGE 4235872,小鼠RIKEN cDNA A730024A03基因mRNA,小鼠血清淀粉样蛋白A3(SAA3),异种核蛋白AO(HNRNP AO),小鼠OVCAl(Dph211)mRNA,蛋白酶体26S亚单位,ATP依赖线粒体RNA螺旋酶,小鼠线粒体核蛋白s31(Mrps31),小鼠CX43 gene,小鼠tRNA-lie.结论 补肾益脑片可能通过影响与衰老相关的基因表达发挥抗衰老作用.     

卵巢癌基因表达谱的cDNA微矩阵研究

目的： 探讨cDNA微矩阵（基因芯片）研究卵巢癌基因表达谱及分析部分差异表达基因功能的可行性。方法：采用4 097个靶基因点BiostarH-40s表达谱基因芯片, 检测5例卵巢浆液性腺癌及5例正常卵巢组织（cy3-dUTP标记正常卵巢组织的RNA,用cy5-dUTP标记卵巢癌组织的RNA）的基因表达谱。结果：两组病例卵巢癌基因表达谱中,4例以上差异表达基因163个,其中基因表达增高（上调趋势）66个,基因表达降低（下调趋势）97个。明确基因功能分类的差异表达基因37个,其中原癌基因和抑癌基因类基因3个,细胞周期蛋白类基因1个,细胞骨架及运动蛋白类基因6个,DNA结合、转录和转录因子类基因1个,细胞受体类基因2个,免疫相关蛋白类基因5个,代谢类基因7个,蛋白翻译合成类基因2个,发育相关基因3个,其他类基因7个。 结论： 应用cDNA微矩阵研究卵巢癌基因表达谱, 发现差异表达基因及其基因功能分类。     

人鼻咽癌组织中转录因子相关基因的差异表达分析

目的 用cDNA微阵列膜比较鼻咽癌组织及正常组织的基因表达谱,研究鼻咽癌组织中转录因子相关基因的差异表达,为进一步探讨差异表达基因的调控机制奠定基础.方法 24例鼻咽癌组织总RNA和正常对照总RNA(24例正常鼻咽组织RNA等质量混合)分别经逆转录探针标记与微阵列膜杂交.然后用Pathway4.0软件分析杂交结果,并用RT-PCR反应验证微阵列杂交结果.结果 在1625个鼻咽癌差异表达基因中,共有转录因子相关基因35个,12个基因表达上调,23个基因表达下调.结论 在鼻咽癌组织中,多个转录因子相关基因的表达水平发生了变化,这些转录因子在鼻咽癌组织的基因表达调控中发挥重要作用.     

肾阴虚证和肾阳虚证基因表达谱的比较研究

目的 探讨肾阴虚证和肾阳虚证基因表达谱的异同. 方法 选取IgA肾病以及亚健康状态肾阴虚证和肾阳虚证患者作为研究对象,以健康人作为正常对照组;应用基因芯片技术,研究肾阴虚证和肾阳虚证的基因表达谱;结合MAS软件对差异表达基因进行分析. 结果 肾阴虚证组和肾阳虚证组基因表达谱存在明显的差异,全部的差异表达基因有145条;肾阴虚证组、肾阳虚证组与正常对照组比较,二者共同的差异表达基因有9条. 结论 基因芯片是研究中医证候相关基因的比较理想的一种技术方法;肾阴虚证与肾阳虚证差异表达基因存在明显不同,提示可为中医辨证分型提供科学依据.     

原发性肝癌肝肾阴虚证患者外周血单个核细胞的特征性差异基因

目的：探讨原发性肝癌肝肾阴虚证患者外周血单个核细胞的特征性差异基因。方法：选取肝肾阴虚证与非肝肾阴虚证肝癌患者作为研究对象,以肝肾阴虚证肝癌患者为试验组,以非肝肾阴虚证肝癌患者作为对照组;选用全基因组表达谱芯片,研究肝肾阴虚证的基因表达谱,并进行差异表达基因分析,基于GeneOntology（http：／／www．geneontology．org／）和KEGG（http：／／www．genome．jp／kegg／）数据库对差异基因进行功能（geneontology,GO）和通路（pathway）注释,并选取显著性差异基因构建共表达网络图。扩大样本量,运用实时荧光定量聚合酶链反应与蛋白质印迹法分别从mRNA及蛋白层面对显著性差异基因进行验证。结果：肝肾阴虚证组和非肝肾阴虚证组间存在差异基因表达特征图谱,获得差异表达的基因共615个。GO注释后,差异基因表达具有278个显著性功能差异,主要涉及跨膜转运、细胞周期停滞、细胞转录、诱导凋亡等。Pathway标记后,上调差异基因参与显著性信号转导通路16项,下调差异基因参与显著性信号转导通路10项,包括抗原加工与递呈转导通路、代谢途径转导通路、细胞周期转导通路、蛋白质输出转导通路等。用差异基因构建共表达网络图,筛选出3个显著性差异基因（SEC62[SEC62homolog（S．cerevisiae）]、CCNBl[cyclinB1]、BIRC3[baculovirallAPrepeat-containing3]）。扩大样本量进行验证,肝肾阴虚证肝癌患者SEC62、CCNBl、BIRC3基因的mRNA（P〈0．01）和蛋白（P〈0．01）表达水平均显著低于非肝肾阴虚证肝癌患者。结论：本研究从基因组学的角度反映出肝肾阴虚证肝癌患者与非肝肾阴虚证肝癌患者之间存在着差异表达基因,进一步证实了“证”是多基因在mRNA和（或）蛋白质水平发生改变并导致人体偏离正常状态的假说。     

基于差异基因表达谱的慢性乙型肝炎病证结合研究

【目的】通过检测分析慢性乙型肝炎(简称乙肝)典型证候的差异基因表达谱,探讨乙肝中医证候分型与基因表达之间的关联。【方法】采集乙肝患者和健康者的外周血样本,提取白细胞中的总RNA;运用基因芯片技术检测基因表达,并对其表达谱进行比较分析;使用实时定量RT-PCR验证部分基因表达。【结果】乙肝患者与健康者之间以及乙肝肝郁脾虚证、湿热蕴结证和肝肾阴虚证3个证候的患者之间的基因表达谱均存在明显差异。对3个证候组相对于健康组的差异表达基因进行差异基因、聚类、功能(gene ontology,GO)分析和信号传导通路(Pathway)分析发现,肝郁脾虚证单独调变的基因主要与细胞动力学过程等有关;湿热蕴结证单独调变的基因主要与脂质储存的正向调节等有关;肝肾阴虚证单独调变的基因主要与氮氧化合物合成酶调节物活性等有关。采用实时定量RT-PCR验证部分基因的表达,结果与基因芯片检测结果趋势基本一致。【结论】乙肝肝郁脾虚证、湿热蕴结证和肝肾阴虚证患者白细胞具有特征性的基因表达谱和显著性差异表达基因,提示乙肝中医临床辨证分型具有分子生物学物质基础。     

不同证型肝硬化患者的门静脉血流动力学改变

目的:探索不同中医证型肝硬化患者门静脉血流动力学、肝纤维化指标及肝功能分级的关系.方法:应用彩色多谱勒超声显像仪测定147例不同证型肝硬化患者的门静脉内径、脾静脉内径、门静脉血流流速、脾静脉血流流速,并检测不同证型肝硬化患者的总胆红素、丙氨酸氨基转移酶、门冬氨酸氨基转移酶、白蛋白、球蛋白、凝血酶原活动度、透明质酸、Ⅲ型前胶原、层粘蛋白、Ⅳ型胶原等相关指标.结果:不同证型(湿热内蕴、肝气郁结、脾虚湿盛、肝肾阴虚、脾肾阳虚及血瘀证)肝硬化患者门静脉内径无显著性差异;患者门静脉流速、流量,血瘀证与湿热内蕴证比较P<0.05;脾静脉内径,湿热内蕴证与肝肾阴虚证、血瘀证比较P<0.05,与脾肾阳虚证比较P<0.01;脾静脉流速,血瘀证、脾肾阳虚证与湿热内蕴证、肝气郁结证、肝肾阴虚证比较均有显著性差异,P<0.01;脾静脉流量湿热内蕴证与肝肾阴虚证、脾肾阳虚证、血瘀证比较P<0.01;肝纤维化指标透明质酸与Ⅲ型前胶原,肝肾阴虚证与湿热内蕴证比较P<0.05.在Child-Pugh分级中,C级脾肾阳虚证发生率最高,A级肝气郁结证发生率最高.结论:肝肾阴虚证、脾肾阳虚证、血瘀证证型肝硬化患者门静脉血流动力学改变与湿热内蕴证和肝气郁结证间存在明显差异.     

肝癌患者微波热消融治疗术后中医证候特点

目的探讨肝癌微波消融术后中医证候的规律及辨证论治的客观依据。方法对微波消融术后肝癌患者进行回顾性总结,对主症(征)进行频数分析,根据主症归纳证候证型。结果微波消融治疗肝癌术后中医证候中,气滞血瘀证占29.2%,湿热蕴结证占21.9%,脾虚湿困证占18.2%,肝瘀脾虚证占15.8%,肝肾阴虚证占14.7%。结论肝癌患者微波热消融治疗术后中医证型最常见为气滞血瘀证。其次为湿热蕴结证、脾虚湿困证、肝瘀脾虚证、肝肾阴虚证。     

高血压病中医证型与COX-2基因多态性的相关性研究

目的:研究原发性高血压病患者环氧化酶-2(COX-2)基因多态性的分布及其与高血压病中医辨证分型的关系,为中医辨证论治提供新的客观依据。方法:选择178例高血压病患者,辨证分型为肝火亢盛型、阴虚阳亢型、痰湿壅盛型、阴阳两虚型,并设725例正常者为对照组。运用PCR-RFLP技术检测受试者外周血细胞中COX-2基因启动子区-1290A/G、-1195G/A、-765G/C位点基因多态性,并进行基因分型;分析不同中医证型与COX-2基因表达的相关性。结果:COX-765G/C基因在实验组与正常对照组的分布存在差异;COX-1195G/A基因多态性与高血压肝火亢盛证、阴虚阳亢证的发生有相关性,与虚证(阴虚阳亢+阴阳两虚)比较,实证(肝火亢盛+痰湿壅盛)GG、CG+CC基因型频率明显增高。结论:COX-1195G/A基因变异可能是高血压肝火亢盛证、阴虚阳亢证发生过程的重要遗传因素;-765G/C位点GG、CG+CC基因频率可能与高血压病虚实辨证相关。     

以基因芯片技术研究Kkay小鼠2型糖尿病相关基因

目的以基因芯片技术研究Kkay2型糖尿病小鼠的差异表达基因。方法以包含8192条小鼠的cDNA基因表达谱芯片研究Kkay2型糖尿病小鼠肝脏的基因表达谱。结果共筛选出差异表达基因154条,包括全长基因68条,表达序列标识(EST)86条;其中40条基因表达增加,114条表达降低。结论多数已知功能基因的表达异常与以往的研究结论是一致的;cDNA基因芯片技术能够高通量分析糖尿病相关基因。     

子宫颈癌中医证型与TSP-1、VEGF-C表达的相关性

目的探讨子宫颈癌中医证型与血小板反应素1（thrombospondin 1,TSP-1）及血管生长因子C（vascular endothelial growth factor C,VEGF-C）表达的相关性。方法选择子宫颈癌患者100例进行中医辨证分型,宫颈正常者30例为对照组,采用免疫组织化学方法（SP法）检测这两种宫颈组织中TSP-1、VEGF-C的表达量及微血管的密度（microvessel density,MVD）。结果子宫颈癌各中医证型的分布规律为湿热瘀毒证〉肝郁化火证〉肝肾阴虚证〉脾肾阳虚证,各病理类型在各中医证型中的分布无统计学差异;与正常宫颈组织相比,子宫颈癌组织中VEGF-C表达量及MVD计数明显升高,TSP-1表达量则降低,随着中医证型由脾肾阳虚证、肝肾阴虚证、肝郁化火证、热毒蕴结证逐渐加重,VEGF-C阳性率及MVD计数呈增高趋势,TSP-1阳性率呈下降趋势,差异均有统计学意义（P〈0.05）。子宫颈癌组织中TSP-1、VEGF-C的表达与患者的年龄及病理类型无统计学差异。结论 TSP-1及VEGF-C的表达与各个中医证型具有一定相关性,TSP-1抑制宫颈癌血管的生成,VEGF-C则促进其生成、生长,两者共同参与子宫颈癌的血管生成。     

高血压的中医认识

血压高相当于中医的"眩晕"、头痛"等病症。主要由情志、禀赋、饮食、劳倦等多种因素,导致肝、脾、肾三脏阴阳失调,致使肝火亢盛,或痰浊上扰,或肾阴素亏,阴不制阳而引起;病久阴损及阳,可致阴阳两虚之候。根据中医辨证分型标准,将患者辨证分为肝火亢盛证、阴虚阳亢证、痰湿壅盛证和阴阳两虚4型。     

原发性肾病综合征的分子肖像

目的比较原发性肾病综合征患儿和健康儿童外周血单个核细胞基因表达谱的差异，筛选原发性肾病综合征相关基因，绘制原发性肾病综合征的分子肖像，系统阐明原发性肾病综合征发生的分子机制。方法分离6例原发性肾病综合征患儿和6例与之匹配的健康儿童的外周血单个核细胞，用TRIzol一步法提取外周血单个核细胞的总RNA，再用逆转录-PCR法以Cy5和Cy3分别标记原发性肾病综合征患儿和健康儿童的mRNA而成为cDNA探针。将两种探针混合后与点有8096条基因的芯片杂交。经严格洗涤后用GenePix4000B扫描仪扫描杂交信号，用GenePix Pro 3．0软件分析扫描结果。结果8096条被检基因中共有418条在PNS患儿和健康儿童的PBMC中存在差异表达，其中128条基因在PNS患儿的PBMC中表达升高，290条基因表达降低，102条基因在本研究的6对PNS患儿和健康儿童配伍对照中均存在差异表达。这102条基因根据功能可分为10类：免疫相关基因、细胞骨架相关基因、信号转录相关基因、细胞周期及增殖凋亡相关基因、癌基因和抑癌基因、基因复制和表达相关基因、离子通道和转运蛋白相关基因、受体相关基因、代谢相关基因及其它功能尚不清楚的基因。结论原发性肾病综合征的发生、发展是许多相互作用的基因共同作用的结果。