流感及H5N1亚型禽流感病毒液相检测芯片的制备

目的 建立利用液相芯片技术检测甲、乙型流感和H5N1亚型高致病性禽流感病毒的方法,并对该方法进行评价。方法 对GenBank中甲型流感病毒的NP、乙型流感病毒的HA以及高致病性禽流感病毒(H5N1)的H5、N1基因片段序列进行同源性比对,根据保守序列,设计针对各基因的简并引物和寡核苷酸探针,制备探针偶联微球,将样本核酸多重PCR扩增产物与微球进行杂交,以Bio-Plex液相芯片检测系统进行芯片检测。结果 该方法可以对甲型流感病毒的NP基因、乙型流感病毒的HA基因以及高致病性禽流感病毒(H5N1)的H5、N1基因同时进行检测,病毒核酸的最低检出量为1pg,检测特异性高。结论 成功构建了甲、乙型流感病毒和H5N1亚型高致病性禽流感病毒液相芯片检测系统,为流感、禽流感的快速检测、诊断奠定了基础。     

2009～2010年济宁市流行性感冒监测分析

目的了解甲型H1N1流感疫情变化,指导流感防控。方法对流感监测哨点医院报告的流感样病例（ILI）和辖区内报告的暴发疫情进行描述性分析,应用Realtime RT—PER对流感样病例进行流感病毒核酸检测,阳性标本应用MDCK细胞进行病毒分离。结果2009年6月～2010年3月4所流感监测哨点医院共报告门诊病例总数590590例,流感样病例12067例,ILI％为2．04。流感样病例病毒核酸检测阳性544份,其中甲型H1N1流感病毒阳性194份,季节性甲型流感病毒阳性248份,季节性乙型流感病毒阳性102份;细胞培养病毒分离血凝测定阳性143株,其中甲型H1N1流感病毒119株,季节性甲型流感病毒4株,季节性乙型Victoria流感病毒20株,各型流感病毒季节性消长趋势明显。流感样病例暴发疫情22起,病原检测18起流感病毒核酸阳性,其中7起季节性甲型流感、10起甲型H1N1流感和1起季节性甲、乙型流感混合感染。结论流感样病例数与病原学监测结果基本吻合,可以用来反映流感活动的强弱,监测网络的敏感性还有待于进一步提高。     

快速检测人新甲型H1N1、季节性和乙型流感病毒多重PCR方法的建立

目的 建立一种可以同时检测人类新甲型H1N1、季节性H1N1和H3N2亚型流感病毒及乙型流感病毒的多重PCR方法.方法 根据以上4种流感病毒的特异性基因设计4对引物,建立可同时扩增出4个流感病毒特异性片段的多重PCR的方法.用人的GAPDH基因作为内参判断标本来源和实施质量控制的依据.并进行敏感性、特异性和盲样检测评价实验.结果 该方法可同时扩增出流感病毒亚型的HA基因片段长度分别为106 bp(新甲型H1N1)、135 bp(季节性H1N1)、118 bp(季节性H3N2)、170 bp(乙型流感病毒).该实验检测新甲型H1N1(A/colifornia/07/ 2009)的敏感性为102copies/反应.特异性实验结果显示每对引物只检测对应的病毒,32份盲样检测结果特异性好.结论 该多重PCR方法可同时检测新甲型H1N1及季节性流感病毒,敏感性、特异性强,可用于人类流感病毒的鉴别分型检测.     

568份疑似甲型H1N1流感病例标本病原学检测结果分析

目的对河池市568份疑似甲型H1N1流感病例标本进行核酸检测,为甲型H1N1流感疫情的防控提供依据。方法对疑似甲型H1N1流感病例标本用实时荧光定量RT-PCR法（Real-time RT-PCR）检测,检测项目为A型流感病毒核酸、B型流感病毒核酸和甲型H1N1流感病毒核酸,对A型流感病毒核酸阳性而B型流感病毒核酸和甲型H1N1流感病毒核酸均阴性标本再进行季节性流感病毒H1N1、H3N2亚型流感病毒核酸检测。结果检测疑似病例标本568份,其中甲型H1N1流感病毒核酸阳性334份,季节性流感病毒H1N1亚型核酸阳性14份,季节性流感病毒H3N2亚型核酸阳性25份,A未分型流感病毒核酸阳性40份。结论实验室检测为甲型H1N1流感疫情的确认、防控以及病人的处理提供了依据,对提高实验室检测技术的敏感性、特异性和实效性具有重要的意义。     

Real-Time PCR与流感病毒分离关系研究

目的研究提高流感病毒分离率的方法。方法 Real-Time PCR检测500份流感监测病例,选择甲型流感H1N1、H3N2和乙型流感阳性及阴性样品各10份共计40份,分别接种MDCK细胞和鸡胚,用红血球凝集试验测定病毒滴度,以血凝抑制试验鉴定毒株型别。结果阳性样品中,MDCK细胞分离出季节性甲型流感H1N1型8份、H3N2型7份、乙型流感8份;鸡胚分离出季节性甲型流感H1N1型3份、H3N2型0份、乙型流感5份。阴性样品中,MDCK细胞分离出季节性甲型流感H1N1型3份、H3N2型3份;鸡胚分离出季节性甲型流感H1N1型2份、H3N2型0份。结论 MDCK细胞分离流感病毒时,Ct值已经在阴性范围之内的样品也应进行病毒分离,以提高病毒分离率;鸡胚分离流感病毒时,应选择MDCK细胞接毒一代且滴度达到1∶128的强毒株进行分离。     

贵州省流行性感冒历史回顾

流行性感冒(简称流感)是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病,全球各地均有病例报告和疫情暴发。贵州省1957年开始报告流感疫情,起源于贵州的甲型H2N2流感引起世界大流行; 1957年至今,全省流感病毒主要流行毒株为甲型H2N2、甲型H3N2和甲型H1N1,同时有乙型流感的局部流行;在此期间,全省共报告人禽流感病例27例,死亡15例,病死率55. 55%,经调查病例均有禽类接触史或到过活禽市场;贵州省禽间存在H5N1禽流感病毒,H7N9禽流感病毒由省外禽输入。2000年以来,贵州省逐步建立流感监测哨点医院,流感监测网络的建立促进了全省流感流行病原监测及不明原因疾病(禽流感等)诊断能力的提高。     

检测甲型H1N1流感病毒富集方法的初步探索

目的探索甲型H1N1流感病毒的富集方法,提高流感病毒核酸检测的灵敏度。方法分别用ProteinA/G及H1N1特异性血清处理流感病毒样品,根据国家流感中心设计的H1N1亚型检测通用引物,采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法,扩增产物为527bp,来评价病毒的富集效果。结果两种富集方法均能提高检测灵敏度,用ProteinA/G富集处理后检测灵敏度可达10-6,用H1N1特异性血清沉淀富集处理后灵敏度为10-5。结论初步建立的富集甲型H1N1流感病毒方法,有效提高了流感病毒RT-PCR检测的灵敏度,可用于甲型H1N1流感病毒的检测。     

龙华新区H7N9禽流感病毒强化监测分析

目的对龙华新区H7N9强化监测的流感病例、外环境监测标本进行H5、H7和H9亚型禽流感病毒检测,了解禽流感病毒的暴露情况。方法利用实时荧光定量PCR对样本进行流感病毒的AB分型和禽流感病毒H5、H7、H9亚型核酸分型检测。结果在1 570份H7N9禽流感病毒强化监测样本中,检测出A型流感病毒阳性136份,阳性率为8.66%;B型流感病毒阳性86份,阳性率为5.48%;H5、H7、H9亚型核酸检测均为阴性。在278份外环境的检测样本中,禽流感病毒H7亚型阳性17份,H5和H9均为阴性。结论在龙华新区农贸市场的外环境中存在禽流感病毒H7亚型,人们存在感染的风险。目前在流感样病例和不明原因肺炎中尚未检出禽流感病毒H7亚型。     

甲型H1N1、季节性H1N1及H3N2亚型流感病毒的多重荧光RT-PCR方法的建立

目的构建一种可同时检测甲型H1N1、季节性H1N1、H3N2亚型流感病毒的多重荧光RT-PCR方法。方法根据不同流感亚型HA与NA的差异,设计五对引物及五条探针,构建合适的检测体系,分析特异性、灵敏度、可重复性、仪器适用性,并将其与常用检测试剂盒进行比对。结果本研究成功构建多重荧光RT-PCR检测体系,能同时检出甲型H1N1、季节性H1N1及H3N2亚型流感病毒,检测灵敏度为101~102拷贝/μl,可重复性好(变异系数为0.47%~4.03%),比常用检测试剂具有更好的荧光值水平,可适用于多种常见的荧光定量PCR仪。结论本方法所构建检测流感亚型体系具有较好的特异性、灵敏度、可重复性、仪器适用性,适用于各基层疾控及医疗机构。     

2009-2011年贵州省黔西南州流行性感冒监测分析

目的监测和分析黔西南州流行性感冒(流感)的流行动态及病原学特征,为流感的控制预防提供科学依据。方法对2009年8月-2011年12月黔西南州流感监测哨点医院的流感样病例(influenza-like illness,ILI)、病原学监测结果及暴发疫情资料进行描述性流行病学分析。结果 2009年8月-2011年12月流感监测哨点医院共报告门急诊病例数303 058例,流感样病例5 738例,ILI%为1.89%。哨点医院共采集鼻咽拭子标本1 481份,检出流感病毒核酸阳性371份,平均阳性率为25.05%,其中甲型H1N1型、季节性H1N1型、季节性H3N2型、甲型未分型和乙型流感,分别占44.47%、0.54%、22.37%、14.29%和18.33%。流感样病例暴发疫情45起,病原检测36起流感病毒核酸阳性。结论 2009年因新甲型H1N1流感病毒的出现流感流行较活跃,2010年、2011年流行趋势较为平稳。流行优势毒株不断发生变化,甲型H1N1、季节性H3等各亚型和乙型流感阶段性交替形成优势株或混合流行。     

广东从化市首起甲型H1N1流感疫情的调查

目的 探讨从化市首例甲型H1N1流感病例的发生过程,为制订防控措施提供依据.方法 按照2009年卫生部<甲型H1N1流感流行病学调查和暴发疫情处理技术指南(试行)>的要求进行现场流行病学调查.结果 病例潜伏期74 h,体温37.5℃,无明显呼吸道症状;临床症状较轻;咽拭子样本检测,甲型H1N1流感病毒核酸阳性,确诊为甲型H1N1流感病例;未见续发二代病例.结论 本事件为输入性二代病例引发本地感染甲型H1N1流感疫情,感染者在无防护的环境下,接触保留带有甲型H1N1流感病毒的被褥或尘埃后导致感染.     

江苏省常州市某小学一起甲型H1N1流感暴发疫情的调查

目的通过调查分析某小学一起甲型H1N1流感暴发疫情,总结流感防控经验。方法采用现场流行病学方法收集病例发病信息,使用RT-PCR进行流感病毒核酸检测。结果自发生首例病例之后,陆续出现了29例流感样病例,实验室检测甲型H1N1流感病毒核酸阳性。结论该疫情为一起甲型H1N1流感引起的暴发疫情,发病班级有一定的集中性,与学生抵抗力差、学校晨午检工作不规范、医疗机构对流感认识不足等有关。提示今后的工作重点要放在加强医疗培训、做好流感预警等方面。     

开封市首例人感染H7N9禽流感调查报告

目的确定人感染H7N9禽流感疫情,查明感染来源,以便采取相应措施控制疫情,为今后预防控制工作提供科学依据。方法对河南省开封市1例不明原因肺炎病例进行现场流行病学调查,同时采集患者咽拭子,采用荧光定量PCR方法进行流感病毒核酸检测,包括甲型、H1亚型、H3亚型、H5亚型、H7亚型和N9亚型。根据现场流行病学调查和实验室检测结果对该病例进行诊断和分析。结果该患者厨师职业,病初表现为流感样症状,并伴有胸闷,病情持续性加重,临床诊断为重症肺炎、急性呼吸窘迫综合征,不排除人感染H7N9禽流感病毒的可能。患者咽拭标本禽流感病毒(H7N9)核酸阳性。患者发病前未接触过类似病人,但接触过屠宰的禽类。所有密切接触者经医学观察8 d均未出现类似症状。结论该病例确诊为开封市首例人感染H7N9禽流感病例,未发现人传人的现象。     

郑州某高校学生甲型H1N1流感防控知识与心理焦虑调查

甲型H1N1流感病毒为A型流感病毒,遗传物质为RNA,该毒株包含有猪流感、禽流感和人流感3种流感病毒的基因片段,是一种新型流感病毒,可以人传染人,严重的会导致死亡[1].目前部分高校已经出现甲型H1N1流感确诊病例和疑似病例,部分学生有一定的焦虑和紧张情绪.为了解大学生甲型H1N1流感防治知识与心理焦虑情况,2009年10月至11月作者对郑州市某综合大学部分院系的学生进行了调查.     

咸阳市甲型H1N1流感病例的实时荧光定量RT-PCR检测

目的 对咸阳市首例甲型H1N1流感病例进行病毒核酸检测,为此后疫情的防控提供参考;方法采集病人1份咽拭子标本,使用两种不同厂家试剂,利用实时荧光RT-PCR法检测[1]进行甲型H1N1流感病毒核酸检测;结果结果显示两种试剂RTPCR反应体系扩增曲线都有明显对数增长,且Ct值符合质量控制的标准,为甲型H1N1流感病毒核酸阳性,同一份咽拭子标本送陕西省疾控中心复检,结果为甲型H1N1流感病毒核酸检测为阳性;结论这名病人为1例甲型H1N1流感病毒感染者的密切接触者,由于及时采用灵敏度高,特异性强,检测时间短的实时荧光定量R T-P C R方法检测,快速确诊了病例,为疫情的控制争取了时间,防止了2代病例的出现.     

某地区儿童流感病毒感染监测结果分析

目的 :分析某地区儿童流感病毒感染的监测结果.方法 :选取某综合性医院儿科门诊2014年1月~2015年12月0-14岁的门诊患儿为监测对象,对患儿的咽拭子进行采集,将其送往实验室进行检测,对流感病毒进行分型.结果 :2233份咽拭子标本中有426株为流感病毒,其中甲型H3N2流感病毒161例,乙型By型流感病毒152例,新型甲型H1N1流感病毒113例;相对于0-3岁、7-14岁两组儿童,4-6岁流感病毒阳性检出率显著要高.结论 :甲型H3N2流感病毒、乙型流感病毒、新型甲型H1N1流感病毒为该地区主要流感类型,易感人群为学龄前儿童.     

定量实时PCR技术快速检测甲型H1N1流感病毒

目的:对采集来的疑似甲型H1N1流感患者咽拭标本进行核酸检测,不断摸索快速检测流感的PCR方法。方法:实验方法按照WHO标准的实时PCR(Real-time PCR)检测法操作,选取343份疑似甲型H1N1流感咽拭子采用实时定量核酸检测和快速分型。结果:在343份咽拭子标本检测结果中,甲型H1N1流感病毒核酸阳性为52份,阳性率15.16%,乙型流感病毒阳性11份,甲3型流感病毒阳性13份,甲1型流感病毒未检出。结论:实时PCR技术操作方法简便、耗时短、特异性强、灵敏度高,是一种适合应用于甲型H1N1流感病毒可靠、快速诊断的检测方法。     

H7N9禽流感病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立与评价

目的应用Taq Man探针实时荧光RT-PCR技术,建立一种快速检测H7N9禽流感病毒的方法。方法针对H7N9禽流感病毒的HA和NA基因分别设计特异性引物和Taq Man-LNA探针,建立H7N9禽流感病毒特异性实时荧光RT-PCR快速检测方法。结果本研究建立的方法对检测H7N9禽流感病毒株的灵敏度达到10 PFU/ml。该方法特异性强,与其他亚型流感病毒株及呼吸道病原体无交叉反应。与对照方法相比,本研究方法的检测阳性符合率为99.07%,阴性符合率为100%,Kappa值为0.993。结论建立的检测试剂盒具有快速灵敏、结果准确可靠等优点,适用于H7N9禽流感病毒的分子生物学检测和监测。     

2009年海南省甲型H1N1流感病毒核酸检测结果

目的及时了解海南省2009年流感样病例及其密切接触者中甲型H1N1流感病毒感染情况。方法应用实时荧光定量PCR法对呼吸道鼻咽拭子标本中的流感病毒核酸进行定性检测。结果全年共检测哨点监测和爆发疫情标本1 148份,荧光定量PCR法检测结果：流感病毒A型核酸阳性为686份,B型核酸阳性为7份。流感样病例中流行型别以A型为主,占59.6%;A型中甲型H1N1流感病毒核酸阳性为500例,占72.9%（500/686）,其中学生占84.8%（424/500）。10月-11月份达到流行高峰。随机抽取30份核酸阳性标本进行核酸序列测定,27份为甲型H1N1流感病毒。结论 2009年海南省流感样病例中甲型H1N1流感病毒感染主要以学生为主,开展流感病毒核酸检测,有助于尽早了解流感样病例中流感病毒感染情况,为及时了解甲型H1N1流感疫情的动态变化以及制定科学有效的甲型H1N1流感防控策略提供可靠的实验室依据。     

荧光定量RT—PCR检测发热患者甲型H1N1流感效果

目的探讨荧光定量RT—PCR检测新型甲型H1N1流感在发热患者中的分布规律,为甲型H1N1流感疫情的防控提供参考。方法对发热门诊233例患者咽拭子标本进行荧光定量RT—PCR检测甲型H1N1流感病毒核酸。并对检测结果进行统计计算。结果甲型流感病毒检出率为51。5％;甲型H1N1流感病毒的检出率为14．2％;没有猪甲型流感病毒检出。结论方法灵敏度高、特异性强、检测时间短,能安全、及时、有效开展发热门诊甲型H1N1流感病例检测工作。