利拉鲁肽对大鼠急性脊髓损伤后神经细胞自噬与运动功能恢复的作用

目的：探讨利拉鲁肽注射液(Liraglutide)对急性脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后神经细胞的保护作用及其可能机制。方法54只SD大鼠随机分成假手术组(Sham组)、脊髓损伤组(SCI组,损伤后立即腹腔注射0.9%氯化钠注射液50μg/kg)和治疗组(Liraglutide组,损伤后立即腹腔注射利拉鲁肽50μg/kg),每组18只,Allen法建立大鼠脊髓损伤模型,于损伤后3 d取脊髓组织,Western blot检测LC3-Ⅱ、Caspase-3表达,免疫荧光双标染色观察神经元自噬表达水平、神经细胞凋亡情况;于损伤后1 d、3 d、7 d分别进行Basso Beattle Bresnahan (BBB)运动评分。结果与Sham组相比,SCI组LC3-Ⅱ、Caspase-3表达、自噬阳性神经细胞数目、神经细胞凋亡数目均增多(P＜0.01),BBB评分显著降低(P＜0.01);Liraglutide组与SCI组相比,LC3-Ⅱ显著增多,Caspase-3表达降低(P＜0.01);免疫荧光双标染色示自噬阳性细胞数目明显增多(P＜0.01);神经元凋亡双标染色法示神经凋亡细胞数目明显减少(P＜0.01);BBB评分在3 d与7 d时有显著提高(P＜0.01)。结论利拉鲁肽增强大鼠脊髓损伤后神经细胞自噬,降低凋亡相关蛋白表达,减少神经细胞凋亡,促进大鼠运动功能恢复,对脊髓损伤具有保护作用。     

黄芪甲苷对脊髓损伤及脊髓胶质细胞凋亡的影响

目的探讨黄芪甲苷(AS)对脊髓损伤(SCI)及脊髓胶质细胞凋亡的影响。 方法实验分为对照组、SCI组(SCI模型)、AS低剂量组(AS-L组)、AS高剂量组(AS-H组)。比较各组大鼠运动功能、脊髓组织水肿、细胞凋亡、氧化反应情况；蛋白免疫印迹分析各组脊髓组织核因子E2相关因子2(Nrf2)和血红素加氧酶-1(HO-1)水平。 结果与对照组比较,SCI组脊髓组织促凋亡相关的蛋白cleaved Caspase-3和Bax表达升高,出现明显广泛的神经元死亡、胶质细胞凋亡和氧化应激反应,并伴有更严重的功能缺陷。而AS能够呈剂量依赖性逆转上述趋势,且AS-L组、AS-H组脊髓组织Nrf2和HO-1水平高于对照组和SCI组。 结论AS通过调节Nrf2/HO-1信号通路具有抗氧化和抗凋亡作用,进而改善大鼠脊髓损伤,为脊髓损伤的治疗提供新的思路。     

神经干细胞移植对大鼠脊髓损伤后Caspase-3和c-fos表达的影响

目的研究神经干细胞移植对大鼠脊髓损伤后Caspase-3和c-fos表达的影响。方法 SD大鼠45只,随机分成3组(n=15):假手术组、脊髓损伤模型组(模型组)和神经干细胞移植组。假手术组仅打开锥板但不离断脊髓;模型组动物锥板打开后横向断开脊髓,止血并逐层缝合;神经干细胞移植组椎板打开后横向断开脊髓,止血并注入神经干细胞悬液,再逐层缝合。手术后1、2、3和14 d对大鼠进行神经功能评分(BBB评分)。14 d后处死动物,取脊髓组织,部分用于制备切片并进行TUNEL标记,检测神经细胞(神经元)的凋亡;对另一部分脊髓组织进行蛋白提取,Western blotting检测Caspase-3和c-fos蛋白的表达。结果与假手术组相比,模型组和神经干细胞移植组BBB评分均显著下降(P<0.05);但神经干细胞移植组神经功能改善情况好于模型组(P<0.05)。模型组和神经干细胞移植组的细胞凋亡率均显著高于假手术组(P<0.05);神经干细胞移植组细胞凋亡率明显低于模型组(P<0.05)。Western blotting检测结果显示,模型组和神经干细胞移植组大鼠脊髓组织中Caspase-3和c-fos的表达量显著高于假手术组(P<0.05);神经干细胞移植组大鼠脊髓组织中Caspase-3和c-fos的表达量显著低于模型组(P<0.05)。结论在大鼠脊髓损伤后,神经干细胞移植能够加快大鼠损伤后的恢复并降低细胞凋亡率,使Caspase-3和c-fos的表达量减少,对大鼠脊髓损伤具有治疗作用。     

MicroRNA-92a 对大鼠脊髓损伤后 运动功能恢复的影响

目的 分析microRNA-92a（miR-92a）对脊髓损伤大鼠运动功能恢复的影响及可能的作用机 制。方法 第一步,复制大鼠脊髓损伤模型,将30 只大鼠分为假手术组和脊髓损伤组,筛选目标miRNA。 第二步,分析miR-92a 对脊髓损伤大鼠的影响,将剩余54 只大鼠分为假手术组、对照组（脊髓损伤+miR- 92a mimics negative control）和实验组（脊髓损伤+miR-92a mimics）。采用BBB 评分评估大鼠运动功能, TUNEL 染色检测细胞凋亡,qRT-PCR 和Western blotting 检测相关基因和蛋白的表达,双荧光素酶验证人 第10 号染色体缺失的磷酸酶（PTEN）与miR-92a 的靶向关系。结果 ①脊髓损伤组与假手术组大鼠第1、 3、7、14、21 和28 天的BBB 评分在不同时间、不同组间及变化趋势上有差异（P <0.05）,假手术组BBB 评 分高于脊髓损伤组（P <0.05）。脊髓损伤组与假手术组大鼠细胞凋亡率、Caspase-3、Bax、Bcl-2 比较,差异 有统计学意义（P <0.05）。脊髓损伤组与假手术组大鼠miR-92a、miR-132、miR-128、miR-107、miR- 202、miR-451、miR-17 表达水平比较,差异有统计学意义（P <0.05）。②假手术组、对照组、实验组大鼠 第7、14 和28 天的miR-92a 表达水平在不同时间、不同组间及变化趋势上有差异（P <0.05）,实验组miR- 92a 表达水平最高（P <0.05）。假手术组、对照组、实验组大鼠第1、3、7、14、21 和28 天BBB 评分在不同 时间、不同组间及变化趋势上有差异（P <0.05）,假手术组BBB 评分最高（P <0.05）。3 组大鼠细胞凋亡率、 Caspase-3、Bax、Bcl-2 比较,差异有统计学意义（P <0.05）。③对照组与实验组大鼠PTEN-WT 荧光活性比较, 差异有统计学意义（P <0.05）;两组PTEN-MUT 荧光活性比较,差异无统计学意义（P >0.05）。对照组与实 验组大鼠PTEN mRNA 和蛋白相对表达量比较,差异有统计学意义（P <0.05）。PTEN 与miR-92a 表达水平 呈负相关（P <0.05）。结论 大鼠脊髓损伤后miR-92a 表达下调。过表达miR-92a 可促进大鼠运动功能恢复, 抑制细胞凋亡。     

参附抑制缺血再灌注大鼠肠上皮细胞凋亡的作用及机制

目的:研究参附注射液对缺血再灌注大鼠黏膜上皮细胞凋亡的影响,并探讨其可能机制。方法:采用大鼠肠缺血再灌注模型,24只大鼠随机分为对照组(C组)、缺血再灌注组(I/R组)和参附治疗组(SF组),SF组于阻断前30min静注SF液每100g体重2ml。再灌注2h检测回肠黏膜上皮细胞Caspase-3、Bcl-2蛋白的表达及TUNNEL细胞凋亡检测,同时观察回肠黏膜组织TNF-α水平及病理形态学改变。结果:①凋亡细胞检测显示:I/R组凋亡细胞显著增多,SF组凋亡细胞数较I/R组显著减少而多于C组(均P<0.05);②Caspase-3、Fas蛋白的表达:Caspase-3和Fas表达均为I/R组显著多于SF组和C组(P<0.01),SF组与C组无明显差异。Caspase-3及Fas表达与凋亡细胞数目呈正相关(Caspase-3:r=0.9149,P<0.01;Fas:r=0.6694,P<0.01);③TNF-α表达:TNF-α的表达在I/R组显著高于C组和SF组(均P<0.01),SF组与C组无明显差异。TNF-α表达与凋亡细胞数目呈正相关(r=0.9133,P<0.01);④SF组小肠黏膜病理损伤程度明显减轻I/R组(P<0.01)。结论:参附注射液通过抑制TNF-α、Fas和Caspase-3表达而抑制缺血再灌注期间肠黏膜上皮细胞的凋亡,从而减轻肠黏膜缺血再灌注损伤。     

依托咪酯对脊髓损伤大鼠的脑保护作用及其机制研究

目的 探究依托咪酯对脊髓损伤（SCI）大鼠的脑保护作用，并分析相关作用机制。方法 62只SPF级SD雄性大鼠，取50只复制SCI大鼠（成功48只），将模型复制成功大鼠随机分为模型组及依托咪酯低、中、高剂量组，每组12只；剩余12只大鼠为假手术组（只去除T₉～T₁₁锥板，不进行打击锤锥击，其余操作同模型组）。依托咪酯低、中、高剂量组大鼠分别尾静脉注射0.3 mg/kg、0.9 mg/kg、2.7 mg/kg依托咪酯脂肪乳注射液1次/d，连续4周；假手术组和模型组大鼠同时间尾静脉注射等量生理盐水。用药4周后评估各组大鼠神经行为学；采用酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒测定各组大鼠脑脊液白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素18（IL-18）水平；苏木精-伊红（HE）染色观察各组大鼠脊髓组织病理学变化；实时荧光定量聚合酶链反应检测各组大鼠脊髓组织核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NLRP3）和半胱氨酸天门冬氨酸蛋白水解酶-1（Caspase-1）mRNA的表达；Western blotting检测各组大鼠脊髓组织NLRP3和Caspase-1蛋白的表达。结果 与假手术组比较，模型组及依托咪酯低、中、高剂量组大鼠BBB评分降低（P <0.05），脑脊液IL-1β、IL-18水平升高（P <0.05），脊髓组织NLRP3、Caspase-1 mRNA和蛋白相对表达量升高（P <0.05）；但依托咪酯低、中、高剂量组大鼠BBB评分高于模型组（P <0.05），脑脊液IL-1β、IL-18水平低于模型组（P <0.05），脊髓组织NLRP3、Caspase-1 mRNA和蛋白相对表达量低于模型组（P <0.05），均具有剂量依赖性。结论 依托咪酯可发挥SCI脑保护作用，其对中枢神经系统损伤的保护作用可能是通过抑制NLRP3/Caspase-1通路活化，抑制炎症反应实现的。     

黄芪丹参配伍调控ASIC1a/CaMKⅡδ信号抑制酸性微环境中心肌细胞焦亡

  目的  探讨黄芪丹参配伍对乳酸诱导的酸性微环境中心肌细胞焦亡损伤的保护作用及基于酸敏感离子通道1a(ASIC1a)/钙离子-钙调蛋白依赖性激酶Ⅱδ(CaMKⅡδ)信号通路的调控机制。  方法  采用Lactate刺激H9C2心肌细胞建立pH 6.5酸性微环境细胞损伤模型。分为正常对照组、模型组、黄芪丹参提取物(HQ)组、HQ+ASIC激动剂Nocistatin组和ASIC抑制剂NS383阳性药对照组。采用CCK-8法测定心肌细胞活力, 流式细胞术检测心肌细胞凋亡, 免疫荧光检测ASIC1a表达, qPCR分析NLRP3、Caspase-1、IL-1β及GSDMD mRNA表达, Western blot检测ASIC1a、CaMKⅡδ、NLRP3、Caspase-1、Cleaved Caspase-1、GSDMD及GSDME-N蛋白的表达。  结果  在pH 6.5酸性环境中, 心肌细胞活力显著降低(P < 0.01), 细胞凋亡明显增加(P < 0.01), NLRP3、Caspase-1、IL-1β及GSDMD mRNA表达明显增加(P < 0.01), ASIC1a、CaMKⅡδ、NLRP3、Caspase-1、Cleaved Caspase-1、GSDMD及GSDME-N蛋白表达明显增加(P < 0.01)。60 μg · mL-1HQ可显著促进pH6.5酸性微环境中心肌细胞活力(P < 0.01), 抑制心肌细胞凋亡(P < 0.01), 下调NLRP3、Caspase-1、IL-1β、GSDMD mRNA和ASIC1a、CaMKⅡδ、NLRP3、Caspase-1、Cleaved Caspase-1、GSDMD及GSDME-N蛋白表达(P < 0.01)。并且HQ的以上效应可被ASIC激动剂Nocistatin逆转。  结论  黄芪丹参配伍可下调ASIC1a/CaMKⅡδ信号抑制酸性微环境下NLRP3炎症小体介导的心肌细胞焦亡。      

一贯煎对CCl4诱导肝纤维化大鼠肝细胞凋亡及其调控基因表达的影响

目的:研究一贯煎对CCl4诱导的大鼠肝纤维化肝细胞凋亡及其调控基因表达的影响。方法:用50%CCl4橄榄油溶液(1 ml/kg)大鼠腹腔注射造模,每周2次,共9w。于造模3w和6w末,随机抽取正常及模型大鼠处死作动态观察。从第7w始模型大鼠随机分为模型对照组和药物干预组,药物干预组给予一贯煎灌胃,共计3w。9w末检测肝组织Fas、Bax、Bcl-xL、细胞色素(Cyt)C、Caspase-12、Caspase-3蛋白表达和肝细胞凋亡情况。结果:①与正常组大鼠比较,3w、6w及9w时模型大鼠肝组织Fas、Bax和Caspase-12蛋白表达逐渐升高(P<0.05,P<0.01)。与9w模型组比较,一贯煎组Fas、Bax和Caspase-12蛋白表达显著降低(P<0.01),而Cyt C和Bcl-xl蛋白表达在各组之间无显著差异(P>0.05)。②与正常组比较,造模3w时肝组织Caspase-3蛋白表达达到高峰(P<0.01),肝细胞凋亡数量亦达到高峰;6w、9w模型组大鼠Caspase-3蛋白表达和肝细胞凋亡较3w有降低的趋势。与9w模型组大鼠比较,一贯煎组大鼠Caspase-3蛋白表达显著降低,肝细胞凋亡显著减少。结论:一贯煎抑制CCl4诱导大鼠肝纤维化肝细胞凋亡的作用机制可能与干预Fas和内质网凋亡通路有关。     

脊伤颗粒对大鼠急性脊髓损伤后运动功能及Caspase-3表达的影响

目的 研究脊伤颗粒对大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后运动功能及半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达的影响.方法 随机抽取大鼠32只作为假手术组,其余118只大鼠采用改良Allen'S打击器制作大鼠SCI模型,将造模成功的96只大鼠随机分为模型组、甲基强的松龙组(下称甲强龙组)、脊伤颗粒组.分别给予假手术组、模型组生理盐水灌胃,甲强龙组尾静脉注射药物,脊伤颗粒组予以相应药物灌胃.在给药后1、3、7、14 d的4个不同时间点采用BBB行为学功能评分;再分批处死大鼠,取出SCI组织用HE染色观察其病理变化,用免疫组化染色检测Caspase-3表达阳性细胞,原位末端标记法(TUNEL法)标记凋亡细胞.结果 (1)BBB运动功能评分方面,与假手术组比较,模型组评分低(P＜0.01);与模型组比较,脊伤颗粒组、甲强龙组评分高(P＜0.05);与甲强龙组比较,SCI后1、3d,脊伤颗粒组评分偏低,(P＜0.05),SCI后7、14 d脊伤颗粒组评分偏高(P＜0.05).(2)在平均积分光密度值和细胞凋亡率方面,与假手术组比较,模型组数值偏高(P＜0.01);与模型组比较,甲强龙组、脊伤颗粒组平均数值低(P＜0.05);与甲强龙组比较,SCI后1、3d,脊伤颗粒组平均数值偏高(P＜0.05),SCI后7、14 d,脊伤颗粒组平均数值偏低(P＜0.05).结论 脊伤颗粒能部分恢复SCI后模型大鼠的运动功能并可明显抑制细胞Caspase-3表达和细胞凋亡.     

黄芪甲苷对肾缺血再灌注损伤模型大鼠的保护作用

目的:观察黄芪甲苷对肾缺血再灌注损伤模型大鼠fas-bcl-2蛋白表达的影响,并分析黄芪甲苷抗肾缺血再灌注损伤的作用机制。方法:选择40只大鼠制成肾缺血再灌注损伤大鼠模型,将其分为假手术组、模型组、黄芪甲苷组和维生素E组。比较不同时间尿素氮(blood urea mitrogen,BUN)、肌酐(creatinine,Cr)、肾损伤分子-1(kidney injury molecule-1,KIM-1)水平和Fas、Fas L、Bcl-2蛋白表达情况和细胞凋亡指数。结果:与模型组比较,黄芪组和维生素E组在各个时间点血清BUN、Cr和尿液KIM-1水平均明显下降(P0.05);黄芪组和维生素E组各个时间点血清BUN、Cr和尿液KIM-1水平比较,差异均有统计学意义(P0.05)。与模型组比较,黄芪组和维生素E组Fas、Fas L表达均明显下降,Bcl-2阳性表达率高于模型组,神经凋亡指数低于模型组(P0.05)。结论:黄芪甲苷能够下调Fas和Fas L蛋白表达,上调Bcl-2蛋白表达,且可有效抑制细胞凋亡,对肾缺血再灌注损伤模型大鼠具有良好的保护作用。     

内毒素预处理激活大鼠急性脊髓损伤Nrf2蛋白抑制Caspase-3的表达

目的 研究大鼠急性脊髓损伤及经内毒素预处理后损伤脊髓中转录因子Nrf2及凋亡蛋白Caaspase-3的表达.方法SD大鼠132只,随机数字表法分为假手术组、模型组和LPS预处理组.采用改良Allen's打击法制作SD大鼠急性脊髓损伤(acute spinal cord injury,ASCI)模型,在术后1、3、5、7...     

不同强度减重步行训练对脊髓损伤模型大鼠脊髓组织中TrkB和BDNF蛋白表达水平的影响及其对运动功能恢复的促进作用

目的：观察减重步行训练（BWSTT）对脊髓损伤（SCI）大鼠脊髓组织中受体酪氨酸蛋白激酶B （TrkB）及脑源性神经营养因子（BDNF）蛋白表达水平和运动功能的影响,并探讨其可能的作用机制。方法：50只成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、SCI组、BWSTT-A组（低强度训练）、BWSTT-B组（中强度训练）和BWSTT-C组（高强度训练）,每组10只。应用自制的打击器制备SCI模型。假手术组大鼠仅行椎板切除术暴露硬脊膜,不予打击,直接缝合,术后不给予任何治疗;SCI组大鼠造模后不给予任何治疗;BWSTT组大鼠在SCI后给予康复锻炼,3组大鼠步行速度分别为7、15和21 cm·s^-1。在造模后35 d采用Basso、Beattie和Bresnahan （BBB）评分评定SCI大鼠后肢功能恢复情况,免疫蛋白印记法检测各组大鼠脊髓组织中TrkB和BDNF蛋白表达水平,尼氏染色法检测各组大鼠脊髓尼氏小体的形态和数量。结果：与SCI组比较,BWSTT-B组和BWSTT-C组大鼠BBB评分升高（P<0.01）;与BWSTT-A组比较,BWSTT-B组和BWSTT-C组大鼠BBB评分升高（P<0.01）。免疫蛋白印记法检测,与假手术组比较,SCI组大鼠脊髓组织中TrkB蛋白表达水平降低（P<0.01）;与SCI组比较,BWSTT-B组和BWSTT-C组大鼠脊髓组织中TrkB蛋白表达水平升高（P<0.01）;与假手术组比较,SCI组大鼠脊髓组织中BDNF蛋白表达水平降低（P<0.01）;与SCI组比较,BWSTT-B组和BWSTT-C组大鼠脊髓组织中BDNF蛋白表达水平均升高（P<0.01）。尼氏染色法检测,与SCI组比较,BWSTT组细胞尼氏小体数量较多,细胞形态较好。结论：中和高强度的BWSTT可在一定程度上促进SCI大鼠运动功能恢复,其机制可能与上调脊髓组织中TrkB和BDNF蛋白的表达有关。     

Neurocyte Apoptosis and Expressions of Caspase-3 and Fas after Spinal Cord Injury and Their Implication in Rats

Spinal cord injury (SCI) is a serious injury com-monly seen in surgical patients, for which there is no established treatment available at present. After spinal injury, neurocytes and tissues undergo necrosis and apoptosis. Apoptosis is a complex pathophysilogical process, mainly involving protease cascade mediated by the members of caspase family, among which caspase-3 plays a key role. Caspase-3 (CPP32) belongs to the cystine-aspartic proteinase family and plays the central role in the exe…     

褪黑素对脊髓损伤早期大鼠神经生长因子表达的影响

目的:通过观察褪黑素(MT)对脊髓损伤(SCI)早期大鼠体内神经生长因子(NGF)表达的影响,探讨MT治疗SCI的机制。方法:60只成年SD大鼠随机分为3组:模型组、MT组和假手术组,每组20只。前2组以改良的Allen’sWD法建立脊髓T12水平损伤模型,假手术组仅行椎板切除不损伤脊髓。MT组于术后10min腹腔注射MT100mg/kg,模型组则腹腔注射等体积无水乙醇。术后12h对3组大鼠进行BBB运动功能评分后处死,取血液检测NGF水平;取脊髓标本进行病理观察,RT-PCR法检测NGFmRNA,免疫组化SP法检测NGF蛋白。结果:模型组和MT组大鼠于术后均出现了严重的下肢神经功能障碍,2组的BBB运动功能评分差异无统计学意义(P>0.05)。MT组脊髓组织病理变化较模型组减轻。3组大鼠脊髓内NGFmRNA、NGF蛋白表达水平和血清NGF水平差异均有统计学意义(F=336.819,321.762和122.707,P均<0.001),3者均在MT组中最高,SCI组次之,假手术组最低(P<0.01)。结论:MT可通过提高SCI大鼠体内NGF的表达减轻SCI。     

17β-雌二醇对大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响

目的研究17β-雌二醇（E2）对大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响。方法SD大鼠随机分为假手术组（A组）、磷酸盐缓冲液对照组（B组）及E2治疗组（C组）。应用重物打击法建立大鼠急性脊髓损伤模型（A组仅行椎板切除术），分别于伤后7、14、21及28d，按照改良Tarlov评分法和Rivlin斜板试验观察脊髓功能恢复情况。伤后6、24h和3、7、14、28d分别处死动物取材，HE染色观察病理变化，TUNEL法和流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果TUNEL法和流式细胞术检测结果均表明大鼠脊髓损伤后存在细胞凋亡。TUNEL法显示细胞凋亡在伤后3d达高峰，C组伤后24h、3d及7d凋亡细胞比率均显著低于B组（P〈0．01或P〈0．05）；流式细胞术显示细胞凋亡率在伤后7d达高峰，C组细胞凋亡率在24h以后各观察时间点均显著低于B组（P〈0．01或P〈0．05）。14d以后，C组脊髓神经功能恢复显著好于B组（P〈0．01或P〈0．05）。结论E2能减少继发性脊髓损伤后细胞凋亡，促进脊髓功能的恢复。     

不同时间窗高压氧干预对大鼠脊髓损伤后细胞凋亡及脊髓功能恢复的影响

目的:观察不同时间窗高压氧干预下的大鼠脊髓损伤(SCI)后细胞凋亡和脊髓功能的恢复情况,探讨最佳的高压氧治疗方法(HBOT),为临床治疗SCI提供实验依据。方法:160只SD大鼠随机分为模型对照组、HBO-PC组、HBOT组和HBO-PC+HBOT组。采用Allen's打击法建立SCI模型。模型对照组大鼠仅制模,未进行任何干预;HBO-PC组大鼠于高压氧干预10 d后立即制模,制模后未进行任何干预;HBOT组大鼠于制模后立即行高压氧干预;HBO-PC+HOBT组大鼠于高压氧干预10 d后立即制模,制模后继续高压氧干预。各组大鼠分别于制模后第1、2、7和14天取材,免疫组织化学PV-9000二步法检测大鼠Fas和FasL的表达水平,光镜下观察,并对结果进行统计学分析;采用TUNEL法检测细胞凋亡指数(AI),神经功能评价采用BBB评分。结果:与模型对照组比较,HBO-PC组、HBOT组和HBO-PC+HBOT组大鼠各时间点Fas和FasL表达水平均降低,且差异均有统计学意义(P<0.01);HBO-PC+HBOT组大鼠各时间点Fas和FasL表达水平比HBOT组和HBO-PC组降低,且差异有统计学意义(P<0.05);HBOT组大鼠各时间点Fas和FasL表达水平与HBO-PC组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与模型对照组比较,其他各组大鼠细胞AI明显降低,差异均有统计学意义(P<0.01);HBO-PC+HBOT组AI低于HBOT组和HBO-PC组,且差异有统计学意义(P<0.05);HBOT组AI与HBO-PC组比较差异无统计学意义(P>0.05)。术后7和14 d HBO-PC组、HBOT组和HBO-PC+HBOT组大鼠BBB评分均高于模型对照组,且差异有统计学意义(P<0.01);HBO-PC+HBOT组BBB评分高于HBOT组和HBO-PC组,且差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);HBOT组BBB评分高于HBO-PC组,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论:高压氧干预可减少SCI后细胞凋亡,促进脊髓功能的恢复;其治疗时间窗应提前到损伤前,HBO-PC联合HBOT法是治疗SCI的较佳方案。     

细胞凋亡信号调节蛋白1对大鼠脊髓损伤后GFAP、vimentin表达及后肢运动功能的影响

目的探讨细胞凋亡信号调节蛋白1（ASK1）对大鼠脊髓损伤（SCI）后胶质瘢痕中中间丝蛋白胶质纤维酸性蛋白（GFAP）和
波形蛋白（vimentin）的表达及损伤大鼠后肢行为学和电生理变化的影响。方法采用大鼠脊髓夹伤模型,设ASK1特异性抑制
剂Thioredoxin组（Trx组）、ASK1单克隆抗体组（Anti-ASK1组）、生理盐水对照组（Model组）及假手术组（Sham组）,于损伤即刻
在损伤局部分别给予Thioredoxin、ASK1单克隆抗体、生理盐水各10 μl,Sham组大鼠仅打开椎板暴露脊髓,不造成SCI。各组大
鼠定期（SCI后1、7、14、28 d）应用Western blot和免疫荧光法检测GFAP、vimentin的表达,BBB评分检测大鼠后肢行为学变化,
体感诱发电位及运动诱发电位检测电生理的变化。结果SCI后1 d各组GFAP、vimentin的表达无明显差异,7、14、28 d Trx组、
Anti-ASK1组GFAP、vimentin的表达较Model组明显下降（P<0.01）;SCI后1、7、14 d各组BBB评分及体感诱发电位、运动诱发
电位无明显差异,SCI后28 d,Trx组、Anti-ASK1组BBB评分较Model组明显升高（P<0.01）,体感诱发电位及运动诱发电位潜伏
期明显缩短,波峰值明显升高（P<0.01或P<0.01）。结论抑制ASK1可减弱大鼠SCI胶质瘢痕局部GFAP、vimentin的表达,并可
促进大鼠后肢运动功能的恢复和电生理的改善。
     

大鼠脊髓损伤模型的制备与评估

目的：制备大鼠急性脊髓损伤（spinal cord injury,SCI）模型并对模型进行评估,为探究SCI 继发性反应的发生机制及SCI 早期干预治疗奠定基础。方法：将10 周龄的雄性SD 大鼠随机分为SCI 组和假手术（Sham）组（n=12）,SCI 组行第9~11 胸椎（T9-11）椎板切除术,于T10 处用标定力为50 g 的动脉瘤夹完全钳夹脊髓并维持40 s,以制备急性SCI 大鼠模型。Sham 组大鼠仅行T9-11 椎板切除手术,而不损伤脊髓组织。SCI 后,根据BBB评分标准对实验动物后肢运动功能进行评价,采用HE 染色和TUNEL 染色检测实验动物脊髓组织的病理学变化和细胞凋亡,并采用 Western blot 对细胞凋亡密切相关蛋白：B淋巴细胞瘤-2（ B-cell lymphoma-2,Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X protein,Bax）和cleaved caspase3（c.caspase3）的相对含量进行检测。结果：     

丙戊酸对大鼠急性脊髓损伤后BDNF及NT-3表达的影响

目的探讨丙戊酸（VPA）对脊髓损伤后脑源性神经营养因子（BDNF）和神经营养素3（NT-3）表达的影响。方法将60只雄性SD大鼠随机分为三组：对照组（C组）、损伤组（SCI组）和丙戊酸保护组（VPA组）。采用改良Allen法制作脊髓损伤动物模型。VPA组术后即刻及其后每12 h皮下注射VPA 300 mg/kg;C组和SCI组在相应时间点注射等体积的生理盐水。于伤后24、48、72 h和1周取材。利用BBB评分标准进行不同时段的行为学评分。通过免疫组化法观察各组大鼠脊髓损伤后BDNF及NT-3表达的变化。结果 BBB评分显示,C组运动功能未受影响,VPA组的BBB评分均高于SCI组,在伤后48、72 h和1周两者比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。与C组比较,SCI组和VPA组的BDNF及NT-3表达在各时间点均明显增加（P〈0.05）,但VPA组各时间点的BDNF及NT-3表达均明显高于SCI组（P〈0.05）。结论 VPA可促进大鼠脊髓损伤后神经功能恢复,其机制可能与促进BDNF及NT-3表达有关。     

大剂量甲基强的松龙对大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响

目的:探讨大剂量甲基强的松龙(Methylprednisolone,MP)对大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响。方法:60只Wistar成年大鼠分为MP治疗组与对照组。Allen氏重物坠击法制作T8脊髓损伤模型,治疗组经尾静脉注射大剂量MP,对照组注入等量生理盐水。术后1、3、7、14、28 d取脊髓组织分别进行HE染色、TUNEL法检测凋亡细胞、SABC法检测bcl-2和bax的含量,并对大鼠神经功能评分。结果:大鼠脊髓损伤后神经细胞发生凋亡,1 d后出现,3 d达高峰,28 d下降明显。MP组凋亡率较对照组明显降低,其bcl-2/bax比例增加,大鼠双下肢运动功能改善明显。结论:大剂量MP通过增强大鼠脊髓损伤后bcl-2/bax比例,抑制神经细胞凋亡,从而减轻损伤后的继发性损害。