内毒素预处理激活大鼠急性脊髓损伤Nrf2蛋白抑制Caspase-3的表达

目的 研究大鼠急性脊髓损伤及经内毒素预处理后损伤脊髓中转录因子Nrf2及凋亡蛋白Caaspase-3的表达.方法SD大鼠132只,随机数字表法分为假手术组、模型组和LPS预处理组.采用改良Allen's打击法制作SD大鼠急性脊髓损伤(acute spinal cord injury,ASCI)模型,在术后1、3、5、7...     

急性脊髓损伤合并内毒素攻击时脊髓内源性锌脂蛋白A20表达

目的:研究急性脊髓损伤合并内毒素攻击时小鼠脊髓组织中锌脂蛋白A20的表达规律.方法:将健康昆明种小白鼠225只(雌雄不拘,体重18～24g)随机分为4组:正常对照组(N组,n=9),单纯尾静脉注射生理盐水0.1ml;脊髓损伤组(A组,n=72),按改良Allen's法制作T10-T11节段脊髓损伤模型;内毒素组(B组,n=72),不进行脊髓损伤只行尾静脉注射内毒素(5mg/kg)0.1ml;脊髓损伤合并内毒素注射组(C组,n=72),制作脊髓损伤模型后再行尾静脉注射内毒素(5mg/kg)0.1ml.A、B、C组分别于处理后0.5、1、2、4、8、12、24、48h,N组于处理后48h,取T10～T11节段脊髓组织.以HE染色观察脊髓损伤程度.以免疫组化(IHC)、逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术分别检测脊髓组织中A20蛋白及mRNA表达.结果:HE染色显示N组和B组各时相点脊髓组织无明显变化;A组打击后0.5h即出现染色质凝聚,染色变深,细胞核偏位、核固缩等现象,神经细胞肿胀,可见片状出血,炎性细胞浸润;至打击8h后可见到核仁消失、核碎裂、核溶解,鬼影细胞现象;C组较A组脊髓损伤更为明显,8h除可见核固缩、碎裂、溶解外,还可见到细胞自溶、空泡形成,并随损伤时间的延长而逐渐加重.IHC显示N组未见A20蛋白阳性表达,A、B组未见或仅有少量A20蛋白阳性表达,C组2h时少量表达,8h表达达高峰.RT-PCR示N组A20 mRNA呈微量表达;A组与N组比较表达升高,与B、C组比较表达高峰延迟,且在12～24h表达高于B、C组;B组在注射内毒素后0.5h,锌脂蛋白A20 mRNA较N组升高明显,1～2h为A20 mRNA表达的高峰期;C组锌脂蛋白A20 mRNA表达最明显,表达高峰在1～8h.结论:在脊髓损伤的早期就出现神经细胞变性死亡的进行性加重,同时伴有锌脂蛋白A20表达增高,合并内毒素注射时尤其明显,锌脂蛋白A20可能对于渊控脊髓损伤的炎症反应具有重要意义.     

低剂量脂多糖诱导PC12细胞中Nrf2的表达及其抗ROS作用的实验研究

目的 研究低剂量脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的PC12细胞中核因子E2相关因子2 (nuclear factor-erythroid 2-related factor-2 ,Nrf2)的表达及其抗活性氧(reactive oxygen species,ROS)的作用.方法 分别以浓度为0 ...     

内毒素耐受的分子机制研究进展

内毒素(Endotoxin,ET)又名脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS),是革兰氏阴性细菌(G-negative)细胞壁上的主要成分,它能激发过度的炎症反应,是临床上全身炎症反应综合征或感染性休克的常见原因.同时细菌的内毒素也引起生物体的耐受现象,这是生物在长期进化中形成的一种保护性调节机制,以避免机体对内毒素刺激过度反应而造成损伤,是机体防御机制的重要组成部分.内毒素耐受是指动物或体外培养的单核/巨噬细胞等在给予小剂量的内毒素预处理后,对LPS再次刺激时无反应或反应性明显降低,表现为炎症因子分泌减少,机体炎症损伤减轻,动物在致死剂量内毒素再次刺激后的存活率提高.近年来,有关LPS耐受的分子机制已有较多报道,主要集中在与LPS相互作用的受体及受体后细胞信号转导途径,本文拟就这方面的最新进展进行阐述.     

低剂量LPS对PC12细胞抗氧化能力的影响

目的:探讨低剂量脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)对PC12细胞抗氧化能力的影响。方法:分别以浓度为0、0.01、0.025、0.05、0.1、0.25、0.5、1μg/μl的LPS刺激PC12细胞24小时,MTT法检测细胞活性确立对细胞没有毒性作用的安全剂量;采用安全剂量刺激PC12细胞24小时,收集培养基上清和细胞,采用试剂盒检测上清中的总抗氧化能力(T-AOC),细胞中超氧化物歧化酶(SOD)的表达,Western blot检测细胞内Bcl-2蛋白的表达;流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)、钙离子(Ca2+)的平均荧光强度。结果:LPS浓度小于0.1μg/μl对细胞没有明显毒性作用(P>0.05);采用0、0.01、0.025、0.05、0.1μg/μlLPS分别刺激PC12细胞24小时,培养上清中T-AOC呈下降趋势,以0.05、0.1μg/μl组明显(P<0.01),细胞内SOD呈上升趋势(0.05μg/μl组,P<0.05;0.1μg/μl组,P<0.01),细胞内Bcl-2表达逐渐升高(0.025~0.1μg/μl组,P<0.01),细胞内ROS呈下降趋势(0.1μg/μl组,P<0.01),钙离子未见明显变化(P>0.05)。结论:低剂量LPS处理PC12 24小时具有剂量依赖性增强细胞抗氧化能力,并可能藉此参与应激耐受。     

姜黄素对大鼠急性脊髓损伤的保护作用及机制的初步研究

目的研究姜黄素对急性脊髓损伤的保护作用及其可能机制。方法采用改良Allen’s打击法建立大鼠急性脊髓损伤模型,将60只SD雌性大鼠随机平均分为假手术组、模型组、姜黄素低剂量组(40mg/kg,CUR-L组)、姜黄素高剂量组(100mg/kg,CUR-H组),每组各15只。术后7d采用脊髓损伤后后肢运动功能评分系统(BBB法)评测大鼠后肢运动功能;化学比色法检测大鼠脊髓组织中丙二醛(MDA)含量变化;蛋白质印迹(Western blot)及免疫组化检测核因子E2相关因子2(Nrf2)、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)蛋白表达;苏木精-伊红(HE)染色观察脊髓组织的病理改变。结果与模型组相比,姜黄素组大鼠后肢功能明显改善;脊髓组织中MDA含量降低;Nrf2、γ-GCS蛋白的表达上调;脊髓组织病理损伤减轻。结论姜黄素对大鼠急性脊髓损伤有保护作用,其机制可能是通过激活Nrf2/抗氧化反应原件(ARE)通路从而上调γ-GCS蛋白表达来实现的。     

联合用药治疗急性脊髓损伤的临床研究

目的:分析单唾液酸四己糖神经节苷脂钠联合甲泼尼龙治疗急性脊髓损伤的疗效。方法:按照随机数字表法将2016年7月至2018年7月重庆医科大学附属永川医院收治的急性脊髓损伤患者84例分为对照组和观察组,每组42例。对照组给予甲泼尼龙治疗,观察组给予单唾液酸四己糖神经节苷脂钠联合甲泼尼龙。采用美国脊髓损伤协会(ASIA)评分标准评定两组患者运动功能和感觉功能,比较治疗效果和不良反应发生率。结果:两组治疗后(出院时)ASIA评分(运动、触觉、痛觉)均有明显提高,且观察组高于同期对照组,差异具有统计学意义(P 0.05)。观察组的总有效率为92.86%,明显高于对照组的69.05%,组间比较,差异具有统计学意义P 0.05);两组患者不良反应的发生率比较,差异均无统计学意义(P 0.05)。结论:单唾液酸四己糖神经节苷脂钠联合甲泼尼龙治疗急性脊髓损伤具有较好的临床疗效,且安全性较高。