二甲双胍对大鼠脊髓损伤后内质网应激和细胞凋亡的影响

目的:研究二甲双胍(MET)对大鼠脊髓损伤(SCI)后内质网应激(ERS)和细胞凋亡的影响,探讨二甲双胍对SCI的保护作用及机制。方法:成年雌性SD大鼠随机分为3组,分别是假手术组(Sham组)、单纯脊髓损伤组(SCI组)和二甲双胍干预组(MET组)。采用Allen方法制备大鼠SCI模型,MET组和SCI组大鼠建模后,立即腹腔注射MET(50 mg·kg~(-1)·d~(-1))或等量生理盐水,连续处理7天后,取脊髓组织,用实时定量PCR检测各组脊髓组织中葡萄糖调节蛋白78 (GRP78),CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)和半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-12(caspase-12)的mRNA水平,免疫印迹检测各组脊髓组织中GRP78、CHOP、caspase-12和active caspase-3的蛋白水平,免疫荧光染色检测各组脊髓组织中GRP78、CHOP和caspase-12的蛋白水平,TUNEL染色法检测各组脊髓组织中细胞凋亡水平,BBB评分检测大鼠SCI后运动功能情况。结果:与Sham组相比,SCI组中GRP78、CHOP和caspase-12的mRNA和蛋白水平明显升高,activecaspase-3蛋白表达和细胞凋亡数目明显增加,BBB评分明显降低;与SCI组相比,MET组中GRP78、CHOP和caspase-12的mRNA和蛋白水平明显降低,active caspase-3蛋白表达和细胞凋亡数目明显减少,BBB运动评分明显升高。结论:二甲双胍可以抑制大鼠SCI后细胞凋亡,促进后肢运动功能恢复,其机制可能与抑制ERS有关。     

HIF-1α和EGFP双基因共表达重组腺病毒载体的构建及鉴定

目的 构建pAdeno-EGFP-HIF-1α 重组腺病毒载体,探讨其在脊髓损伤中的作用。 方法 采用聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR） 法扩增目的基因HIF-1α 并亚克隆到含有报告基因EGFP 的pShuttle-CMV-EGFP 穿梭载体中,得到pShuttle-EGFP-HIF-1α 重组穿梭质粒。将已构建的重组穿梭质粒转移至pAdeno 骨架载体上,获得pAdeno-EGFP-HIF-1α 重组腺病毒质粒,继而在H293 细胞中扩增,纯化后进行PCR 鉴定并测定病毒滴度。 结果 pShuttle-EGFPHIF-1 α 经KpnI/BamHI 双酶切后琼脂糖凝胶电泳可见阳性克隆组在2.5 kb 和5.1 kb 处出现两条带,而阴性克隆组只有5.1 kb 处一条带,证明pShuttle-EGFP-HIF-1α 重组穿梭质粒构建成功;pShuttle-EGFP-HIF-1α 重组穿梭质粒与pAdeno 载体重组后,经XhoI 单酶切后琼脂糖凝胶电泳可见阳性克隆组出现14.5 kb,11.7 kb,2.66 kb,2.6 kb,2.48 kb,2.47 kb,1.45 kb,0.6 kb 八条带,而阴性克隆的腺病毒空载组有14 kb,11.8 kb,4.0 kb,2.47 kb,1.45 kb,0.6 kb 六条带,证明重组pAdeno-EGFP-HIF1α 腺病毒质粒构建成功;pAdeno-EGFP-HIF-1α 重组腺病毒成功包装纯化后经PCR 鉴定,实验组和阳性对照组中均扩增到2.5 kb 片段,证明目的病毒中成功整合了HIF-1α 基因;TCID50 法测定纯化后的病毒滴度为2×10 10 PUF/ml 。 结论 成功构建了HIF-1α 和EGFP 双基因共表达重组腺病毒载体,为进一步研究其在脊髓损伤中的作用奠定了基础。     

BMSCs移植对大鼠脊髓损伤后VEGF表达及细胞凋亡的影响

[目的]研究骨髓基质细胞(BMSCs)移植对大鼠脊髓损伤(SCI)后血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达及神经细胞凋亡的影响,探讨骨髓基质细胞移植治疗脊髓损伤的机制.[方法]取大鼠股骨和胫骨骨髓培养BM-SCs并传代.参照Taoka's方法制作大鼠脊髓压迫损伤模型.脊髓损伤后30 min,进行BMSCs或DMEM培养液损伤周围注射.术后3、7和14 d,应用Westem Blot法检测损伤脊髓组织内VEGF蛋白的表达,应用TUNEL方法检测脊髓损伤周围神经细胞凋亡情况.[结果]移植术后3、7、14 d,BMSCs组VEGF蛋白的表达水平呈时间依赖性增加,与DMEM组相比,术后3 d两组VEGF蛋白表达水平没有显著性差异(P>0.05),而术后7和14 d,BMSCs组VEGF蛋白表达水平显著高于DMEM组(P<0.01).此外,与DMEM组大鼠相比,移植术后3、7和14 d,BMSCs移植显著减少脊髓损伤周围区凋亡的神经细胞数目(P<0.05).[结论]脊髓损伤后,BMSCs移植能够增加VEGF蛋白的表达并且抑制神经细胞凋亡.     

混合型颈椎后纵韧带骨化症的前路手术治疗

[目的]探讨混合型颈椎后纵韧带骨化症前路椎体次全切除减压的方法及其临床效果。[方法]对37例混合型颈椎后纵韧带骨化症的患者采用一期前路手术治疗,手术依据钙化的后纵韧带和硬脊膜粘连的情况采用彻底切除钙化后纵韧带或使之"漂浮"的方法。其中男24例,女13例;平均54.3岁。患者椎管狭窄率在32%~85%,平均51.4%。神经功能JOA(Japanese orthopaedic association)评分术前4~14分,平均7.9分。[结果]所有患者随访6个月~3年,平均16个月。术后3个月评分10.3分,术后12个月评分11.1分。优良率分别为72.7%和78.8%。[结论]一期行前路椎体次全切术治疗混合型颈椎后纵韧带骨化症,能够获得彻底的椎管减压和良好的临床效果。     

趋化因子受体CXCR4在骨髓基质细胞中的表达及分析

目的 研究骨髓基质细胞的CXCR4表达,分析其表达规律.为改善和提高骨髓基质细胞的增殖和迁移能力寻找更有效的途径.为临床骨髓基质细胞更广泛的应用奠定基础.方法 体外培养大鼠骨髓间充质干细胞,观察其增殖及生长特性,应用免疫组化和RT-PCR方法对MSCs的CXCR4受体及CXCR4 mRNA表达水平进行检测,并应用神经胶质细胞进行对比,探讨其表达异常的因素.结果 骨髓基质细胞CXCR4m RNA表达水平稳定,CXCR4在各代骨髓基质细胞中表达小于5%,且随传代数增加而减少.结论 CXCR4在骨髓基质细胞中表达量很少,如果促进其CXCR4表达将会极大增强骨髓基质细胞的增殖与迁移能力.     

血管内皮生长因子(VEGF)基因治疗骨科缺血性疾患进展

骨科缺血性疾患在青年及中年人群中发病率正在逐年上升，传统的治疗方案在此类疾病中作用不明显，为了改善这种状况，需要有一种新的治疗方案加以采用。基因治疗可能是其方向之一，血管内皮生长因子（VEGF）因其在骨形成、骨重建、骨愈合、血管再生中的重要作用，故以VEGF基因治疗骨科缺血性疾患已被许多的学者所关注，并在动物实验及临床应用中取得了显著的效果。     

注射型rhBMP-2/PLGA/FS缓释微球载体系统用于兔桡骨骨缺损修复的实验研究

探讨注射型重组人骨形态发生蛋白-2/聚乳酸-羟基乙酸/纤维蛋白胶(rhBMP-2/PLGA/FS)缓释微球载体系统在修复兔桡骨节段性骨缺损中的作用。制作新西兰大白兔桡骨缺损模型,将其分为实验组(rhBMP-2/PLGA/FS),对照组(FS)和空白组(不作处理)。在缺损局部注入各组材料后,通过X射线观察各组动物的骨缺损修复情况;取兔桡骨损伤节段定量分析其骨密度值,评估其成骨质量;利用HE及Masson染色,观察骨组织形态及骨再生情况,评估其修复作用。结果表明:rhBMP-2/PLGA/FS缓释微球载体组在骨缺损修复、成骨质量及成骨能力方面均显著优于对照组和空白组,能够显著促进兔骨缺损修复,是一种较为理想、高效的骨组织工程材料。     

以岗位胜任力为导向的医保人才培养模式研究

目的研究以岗位胜任力为导向的医疗保险专业人才培养模式。方法选择锦州医科大学人文与管理学院2015级医疗保险专业本科生两班中(1班、2班)随机抽取1个班共40名学生,按照学号奇偶数分为实验组与对照组各20名学生;实验组学生进入医院临床应用按照胜任力模型进行培养、经历院医保中心、临床及相关科室、市医管局科室轮转,对照组学生进入保险公司按照常规实践教学,两组学生均实习12个月,实习结束后采用问卷调查,评价两组学生胜任力。结果实验组学生实习结束后理论考核、实践技能考核评分均高于对照组,P 0.05。结论医疗保险专业人才培养模式坚持以岗位胜任力为导向原则,可为社会输出应用型医疗保险专业人才。     

氨基胍对大鼠急性脊髓损伤后脊髓水肿的作用机制研究

目的氨基胍(aminoguanidine,AG)能显著减轻脑外伤及中风动物模型脑水肿,提高神经功能恢复程度。探讨AG对大鼠急性脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后脊髓水肿的作用及相关机制。方法取成年雄性SD大鼠150只(体重230～255 g),分为对照组(A组,25只)、假损伤组(B组,25只)、SCI后未治疗组(C组,25只)和SCI后AG治疗组(75只);AG治疗组按给药剂量分为AG 75 mg/kg组(D组,25只)、AG 150 mg/kg组(E组,25只)和AG300 mg/kg组(F组,25只)。A组未行任何处理,B组仅行椎板切除术但不治疗;C、D、E、F组制备静压型大鼠SCI模型后,C组腹腔注射5%DMSO,D、E、F组腹腔注射相应剂量AG。于造模后0、12、24、48 h用干湿重法检测受损脊髓组织含水量以筛选最佳剂量,进一步用伊文思兰(Evans blue,EB)法评测血-脊髓屏障功能,用RT-PCR检测水通道蛋白4(aquaporins 4,AQP4)mRNA表达,Western blot和免疫组织化学染色检测AQP4蛋白表达。结果脊髓组织含水量检测示,E组在造膜后12、24、48 h对SCI后脊髓组织水肿有明显抑制作用(P<0.05),选择该剂量组用于后续实验。造模后12、24、48 h,E组EB含量明显低于C组(P<0.05),降低血-脊髓屏障通透性。RT-PCR检测结果示造模后12、24、48 h,B、E组AQP4 mRNA表达明显低于C组;Western blot检测示造模后24、48 h,B、E组AQP4蛋白表达明显低于C组;免疫组织化学染色示造模后48 h,B、E组AQP4蛋白表达明显低于C组,差异均有统计学意义(P<0.05);但各指标各时间点B、E组间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论急性SCI后大鼠经150 mg/kg AG治疗后,能降低AQP4表达,改善脊髓水肿,减轻损伤。     

PTEN基因沉默对BMSC 氧糖剥夺模型的保护作用及其对Bcl-2 凋亡通路的影响

 目的研究RNA 干扰沉默第10 号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白（PTEN）PTEN基因对骨髓间充质干细胞（BMSC）氧糖
剥夺模型的保护作用,并探讨其对Bcl-2 敏感的凋亡通路的影响,分析其保护作用的机制。方法体外分离培养BMSC并鉴定,
通过脂质体法转染PTEN基因特异的siRNA 沉默PTEN基因;RT-PCR 检测PTEN基因的表达;制备体外氧糖剥夺模型观察
PTEN基因的沉默对细胞的保护作用。Western blot 检测Bcl-2 蛋白表达的变化。结果成功培养BMSC并鉴定。RT-PCR 检测
结果显示siRNA 成功干扰了PTEN基因的表达,流式细胞仪检测结果显示PTEN基因沉默后的细胞对氧糖剥夺模型有较强的
耐受能力,Western blot检测结果显示Bcl-2 蛋白明显增多。结论PTEN基因的沉默使BMSC 更能耐受氧糖剥夺的环境,增强
了细胞的存活能力,其机制可能是通过Bcl-2 敏感的凋亡通路抑制细胞凋亡。