一例罕见AB类孟买血型的鉴定分析

目的：对一例AB类孟买血型的先证者进行血型血清学鉴定和分子生物学机制研究。方法：采用血型血清学技术分别对先证者红细胞上ABH抗原、唾液中ABH血型物质、红细胞上Lewis抗原及血浆中红细胞不规则抗体进行检测;采用PCR技术分别扩增先证者ABO 基因第6、第7外显子及FUT1、FUT2 基因全部编码区域,PCR产物纯化后直接测序,通过Chromas软件与人类红细胞血型基因数据库进行基因序列比对,查找突变位点。结果：血清学实验结果表明,先证者红细胞上检到弱A抗原、Leb抗原,未检到B抗原、H抗原及Lea抗原,唾液中检到A、B、H血型物质,血浆中检到IgM类抗HI抗体。DNA测序结果显示先证者ABO 基因型为*A1.02 /*B.01;FUT1 基因存在c.551_552delAG杂合缺失突变及c.881_882delTT杂合缺失突变,FUT2 基因存在c.357C＞T纯合多态性。结论：FUT1 基因双杂合缺失突变是导致先证者为AB类孟买血型的主要原因。     

FUT1基因突变个体的表型及分子遗传学研究

目的研究FUT1基因突变的分子生物学基础。方法通过常规血清学方法和基因分型方法检测先证者及其家系成员的红细胞血型,用PCR方法扩增FUT1基因并测序,测序结果与参考序列(GeneBank:Z69587)比对分析。结果测序结果显示,先证者为FUT1基因C658T纯合突变,先证者的父母、姐姐和儿子为杂合突变,妻子和妹妹无突变。结论 FUT1基因C658T突变是导致H抗原缺失的原因之一。     

类孟买型个体FUT1、FUT2基因测序研究

目的分析类孟买型个体FUT1和FUT2基因座位的点突变情况。方法通过常规血清学方法确定研究对象的红细胞表型,用聚合酶链反应（PCR）扩增FUT1基因和FUT2基因,产物纯化后直接测序,分别与参比序列GenBankM35531（FUT1）、GenBankU17894（FUT2）比对。结果待研究个体的血清学表型为类孟买Ah-分泌型。基因分析显示,在FUT1座位的nt880—882的3个T缺失2个,致编码区294住发生读码框移位而提前形成终止密码,影响到控制膜抗原的a21岩藻糖转移酶的活性,使血清学表型表现出H缺陷;FUT2座位的nt357发生同义突变（C—T）,编码的天冬酰胺没有变化,nt385A为野生型,没有影响到体液中H物质的表达。结论FUT1座位编码区nt880—882的IT缺失是本例类孟买型的分子生物学基础。     

云南傈僳族FUT2、FUT3基因多态性研究

目的：了解云南少数民族人群FUT2、FUT3基因多态性,同时探讨与汉族人群的差异。方法：随机选取149例云南地区傈僳族人群,利用血型血清学方法分析其Lewis表型;利用直接测序法,对其FUT2、FUT3进行基因检测,采用卡方检验比较各等位基因频率在傈僳族人群与汉族人群间的差异。结果：149例云南傈僳族人群的各表型频率分别为Le（a-b+）46.3%、Le（a+b-）34.9%、Le（a-b-）18.7%,FUT2基因发现1例白种人中常见的G428A突变,但其与A171G、C357T、A385T、G739A突变同时发生;FUT3基因发现7个突变位点,其中C762A为首次发现的突变位点。单倍体分析显示,除功能性的Le等位基因外,还发现可疑为功能性等位基因Le732（732C>T）1种,非功能性的等位基因8种;云南傈僳族人群与汉族人群比较,Se357、se357,385、se385、se357,571、se171,428,739,960、le59、le1067、le508、le59,508阳性率的差异均存在统计学意义（P < 0.05）。结论：中国云南傈僳族人群FUT2、FUT3等位基因具有广泛的遗传多态性。     

一个类孟买家系的分子遗传学分析

目的探讨一个类孟买家系的分子遗传学机制。方法采用血清学方法鉴定先证者及其父母的红细胞H抗原。采用高保真PCR扩增先证者及其父母的α1,2岩藻糖基转移酶(FUT1)基因编码区序列。PCR产物经TA克隆后进行测序、比对分析FUT1基因编码区序列。结果凝胶电泳分析证实成功扩增FUT1基因编码区序列;克隆后测序、比对分析发现先证者检出1种已知突变(h1nt547-552△AG),为h1/h1纯合子;先证者父母为H/h1杂合子。结论 FUT1基因突变以常染色体隐性遗传方式导致先证者类孟买血型的形成。     

肿瘤患者Lewis血型血清学与FUT2和FUT3基因分子生物学分析

目的 采用血清学和分子生物学方法对存在Lewis同种抗体的肿瘤患者进行Lewis抗原检测分析.方法 选取2014年8月至2018年6月经中国医学科学院肿瘤医院输血科鉴定存在Lewis血型同种抗体的肿瘤患者112例,分别进行Lewis血型血清学及FUT2、FUT3基因检测.结果 112例患者中,结直肠癌32例(28.6％),肺癌26例(23.2％),食管癌 12例(10.7％),宫颈癌 11 例(9.8％),其他肿瘤31 例(27.7％);抗 Lea67例(59.8％),抗 Leb12例(10.7％),抗 Lea合并抗 Leb 27例(24.1％),抗Lea合并其他抗体6例(5.4％).血清学分型结果均为Le(a-b-);FUT2基因测序发现5种等位基因,分别为分泌型(SeSe、SeSew、Sese)与弱分泌型(SewSew、Sewse),未发现非分泌型(sese);FUT3基因测序均为Lewis糖基转移酶失活型即lele,共23种等位基因组合.结论 存在Lewis同种抗体的肿瘤患者Lewis血型血清学检测结果与基因测序结果一致,血清学检测可用于存在Lewis血型抗体的肿瘤患者Lewis分型的准确检测.     

Lewis系统抗体阳性产妇FUT2/FUT3基因的多态性分析

目的：对Lewis血型血清学分型和基因分型结果进行对比分析，分析单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism，SNP）对Lewis血型表型的影响及相关表型的血清抗体。方法：用全自动血型仪采用微柱凝胶法进行抗体筛查和鉴定，使用人类红细胞Lewis血型基因分型试剂盒和测序试剂盒依照说明书进行Lewis血型血清抗体阳性标本的分型和序列测定。结果：24例Lewis抗体阳性产妇中，抗Lea 19例，占79.17%（19/24），抗Leb 5例，占20.83%（5/24）；基因检测结果和血清学检测结果相符，测序结果显示FUT2基因多态性4种，分别是357C>T、385A>T、759C>A、849G>A，检测到FUT3基因多态性6种，分别是59T>C、202T>C、314C>T、508G>A、612A>G、1067T>A。FUT2的357C>T、385A>T、849G>A在中国人中比较常见，其中357C>T是同义突变，385A>T突变会导致FUT2酶的活性降低至野生型的20%，849G>A突变会导致终止密码子提前出现，失去FUT2酶的活性。759C>A突变之前未见报道。6种FUT3基因多态性除59T>C突变降低FUT3酶的活性外，其余均导致FUT3酶活性丧失。结论：SNP是导致Lewis血型系统两种酶活性降低或丧失的主要因素，其编码基因多态性与血清学表型之间有很好的对应关系。     

抗原减弱AB亚型的血清学表型与基因检测

目的 鉴定血清学正定型A、B抗原减弱或丢失的疑难血型。方法 收集2021—2022年河南省人民医院A或B抗原减弱的标本，血清学常规采用ABO、RhD血型鉴定微住凝胶卡式法，基因检测采用序列特异性引物-聚合酶链式反应(PCR-SSP)和Sanger测序两种方法，扩增ABO等位基因1～7外显子。结果 血清学方法8例标本正定型A或B抗原减弱或丢失，反定型为AB型。PCR-SSP法显示，8例标本均含有A和B抗原，基因分型为AB型。Sanger测序显示8例标本有7个共有的突变位点；与A1.01/B.01基因型相比，A1.02/B.01特异性突变位点为c.467C>T,A1.02/Bw.12特异性突变位点为c.278C>T、c.467C>T,A1.02/Bw.07特异性突变位点为c.467C>T、c.1055G>A,c.278C>T、c.467C>T引起编码的第93位、156位氨基酸由脯氨酸变成亮氨酸，c.1055G>A引起第352位氨基酸由精氨酸变成谷氨酰胺。8例标本中1例基因型为A1.01/B.01,1例基因型为A1.02/Bw.07,2例基因型...     

中国新疆维吾尔族人群与汉族人群FUT2基因结构的比较研究

目的　探讨中国新疆地区维吾尔族和汉族人群的FUT2基因分子结构。方法　对 4 0例的维吾尔族和 4 1例汉族人群随机供者血样进行DNA抽提 ,并进行FUT2基因测序分析。结果　共发现维吾尔族人群的FUT2有 35 7,385 ,4 2 8,739四处位置上存在突变。它们的基因频率分别为 :35 7T =71 2 5 % ,35 7C =2 8 75 % ,385A =77 5 0 % ,385T =2 2 5 0 % ,4 2 8G =70 % ,4 2 8A =30 % ,739G =72 5 0 % ,739A =2 7 5 0 %。中国汉族人群的FUT2基因不存在 4 2 8和 739两处突变 ,但是存在 35 7和 385两处位置的突变。它们的基因频率分别为 :35 7T =90 2 4 % ,35 7C =9 76 % ,385A =5 8 5 4 % ,385T =4 1 4 6 %。结论　根据中国新疆维吾尔族人群的FUT2基因结构的特点 ,提示中国新疆维吾尔族人群与汉族人群间存在着一定程度的遗传多态性差异     

一例ABO血型A抗原减弱的血清学及其基因变异分析

目的 分析1例A抗原表达减弱患者的血清学及分子生物学特点,并探讨其分子生物学机制及输血策略。方法 应用常规血清学方法进行ABO血型鉴定,测序分型确定ABO基因型。结果 血清学格局为A抗原减弱,基因测序表明外显子6存在c.261delG杂合突变、外显子7存在c.467C>T杂合突变、内含子6存在c.374+5G>A杂合突变,患者基因型为A102/AEL04/O01,表型为Ael。结论 A等位基因内含子6的c.374+5G>A突变,导致转录过程形中成不同剪接变异体,造成A型糖基转移酶的活性减弱或失活,是本例患者A抗原减弱的主要原因。     

类孟买血型OHmB的血型血清学及家系调查

目的：发现类孟买血型OHm^B先证者家系中其他表现型个体，为紧急输血时寻找相合供者．方法：对类孟买血型OHm^B先证者家系成员进行ABO血型正反定型、Lewis血型鉴定、吸收放散试验检测红细胞表面的ABH抗原及血清中抗-A、抗-B及抗-H，中和抑制试验检测唾液中血型物质．结果：类孟买血型OHm^B先证者及其2位同胞兄弟均被鉴定为类孟买血型OHm^B，其中2例检出抗-H抗体，1例未检出抗-H抗体，先证者及其兄弟的子女中均未发现类孟买血型OHm^B表现型个体．结论：类孟买血型符合隐性遗传规律，对于罕见的类孟买型个体的家系，尤其是同胞兄妹进行血型血清学调查，有发现新的相同表现型个体的可能，需输血时可互为供者．     

全外显子组测序发现FUT6基因在1例糖尿病肾病中的终止突变

目的:检测与糖尿病肾病相关的致病基因。方法: 应用外显子捕获技术和高通量测序技术对1例临床病理确诊的DN患者的全基因组外显子进行测序,将测序数据筛选出的可能对基因功能有影响的非同义突变和剪切位点突变,与公共数据库YH、dbSNP129、8HapMapexome和dbSNP thousands genome进行对比过滤,然后对筛选出的候选基因进行免疫组化染色研究其表达量的变化。结果:通过数据的对比过滤,共发现509个突变位点,其中包括497个错义突变和12个无义突变。发生无义突变并且在肾脏高表达的基因有ANKRD35、ACSM2A、 FUT6和HAAO。其中FUT6基因的315TAC>TAA,氨基酸残基由酪氨酸突变为终止密码子,免疫组化证实FUT6在该患者的肾活检组织中表达量减少。结论: 糖尿病肾病患者中发现FUT6基因终止突变及其表达的显著降低,提示FUT6可能与DN的发病有关。     

一个遗传性抗凝血酶缺陷症家系的表型与基因突变分析

目的：对一例遗传性抗凝血酶（AT）缺陷症患者及其家系成员进行凝血指标和基因表型分析,初步探讨其分子发病机制。方法：在Stago仪器上检测家系各成员外周血的血浆AT活性（AT:A）、AT抗原（AT:Ag）等凝血指标;提取外周血DNA并测序,定位基因突变位点;利用生物信息学软件分析突变对蛋白功能的影响。结果：先证者及其外祖母、父亲、母亲和弟弟的AT:A均有不同程度降低,且AT:Ag同步下降,所有家系成员蛋白S活性（PS:A）和蛋白C活性（PC:A）指标均无明显异常,表现为I型AT缺陷症。基因分析显示：先证者SERPINC1 基因存在第1号外显子c.1A＞G杂合错义突变（p.Tyr2stop）以及第5号外显子c.1005G＞A杂合同义突变;其父亲携带c.1A＞G杂合错义突变,其外婆、母亲和弟弟携带c.1005G＞A杂合同义突变。保守性分析显示,Tyr2在同源物种间高度保守;MutationTaster、PolyPhen-2和LRT三个在线生物信息学软件分析均显示p.Tyr2stop突变为“致病的、有害的”;蛋白模型分析显示,p.Tyr2stop突变会引起AT基因翻译过程提前终止,产生截短蛋白。结论：该先证者及家系成员AT:A和AT:Ag不同程度降低与SERPINC1 基因上存在的c.1A＞G杂合错义突变和c.1005G＞A杂合同义突变有关。     

一例β-地中海贫血病例中罕见基因突变的鉴定

目的 对海口市人民医院血液科一例47岁男性经临床检查存在贫血、脾大等症状的疑似β地中海贫血的先证者进行病因确诊,并对其家系成员进一步研究分析。方法 采用血常规、脾脏B超、血红蛋白电泳、跨越断点PCR （Gap-PCR）和高通量测序（next generation sequencing, NGS）技术对先证者和5名家系成员进行检测,评估他们贫血、脾脏肿大和基因突变等方面的情况,采用Sanger测序法对高通量测序所检测出的基因突变进行验证,并通过家系连锁分析确定所检测基因突变的遗传方式。结果 先证者同时检测出HBB:c.2T>G和HBB:c.-113A>G两种突变,其中HBB:c.2T>G为常见β突变,HBB:c.-113A>G为新的突变,其母亲及儿子均检出HBB:c.-113A>G杂合突变,其女儿检出HBB:c.2T>G杂合突变,除先证者外其他家系成员并未表现出明显的地贫症状。结论 HBB:c.2T>G杂合复合HBB:c.-113A>G杂合突变会加重β地贫的临床表现,进而表现出脾大症状,该基因突变的发现,丰富了地贫基因突变数据库。全面的检测技术应用于地贫常规检测对临床病人的病因确诊、治疗和遗传咨询都具有重要意义。     

a-1, 2岩藻糖基转移酶II在肺鳞癌组织中的表达及对肺鳞癌细胞增殖的影响

目的：探讨a-1，2岩藻糖基转移酶II（FUT2）在肺鳞癌中的表达情况及其对肺鳞癌细胞增殖的影响。方法：应用UALCAN数据库分析FUT2在临床肺鳞癌患者组织中的差异表达及其与肺鳞癌患者临床TNM分期、年龄及性别因素的相关性；采用瞬时转染技术，将FUT2的shRNA质粒转染进H226细胞株中构建FUT2低表达的肺鳞癌细胞模型；利用CCK-8、平板克隆及Western blot实验检测FUT2对肺鳞癌细胞的生长、单克隆细胞团形成及PCNA蛋白表达的影响。结果：FUT2在肺鳞癌尤其是肺鳞癌TNM早中期呈现高表达趋势（P＜0.05），而与年龄和性别无关。低表达FUT2可以抑制肺鳞癌细胞的生长速率和单克隆细胞团的形成数，同时，可以抑制肺鳞癌细胞PCNA蛋白的表达水平，差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论：FUT2在肺鳞癌中高表达且促进肺鳞癌细胞的增殖能力，有望成为肺鳞癌的早期诊断指标。     

基因分型技术首次应用于类孟买型家系ABO基因的研究

目的 探计将基因分型技术用于解决临床输注中血型血清学难题。方法 报告首次在国内用基因分型技术用于一个类孟买型家系5口人ABO基因多态性的研究。在吸收放散试验、唾液血型物质凝集抑制等血清学试验基础上，采用快速盐析法提取外周血中的DNA，用PCR—SSP法扩增ABO血型等位基因。结果 一家5人中，兄弟3人均为类孟买型，ABO基因分型分别为A102B、A102B、Al20O1，而其父母血型基因与血清学血型相符合。结论 ABO PCR—SSP基因分型是一种方便、快速、可靠的技术，与血型血清学相比有着显优势。     

维生素A缺乏对初生鼠FUT8表达与心脏发育关系的影响

目的 本研究通过研究维生素A缺乏(vitamin A deficiency, VAD)对初生鼠FUT8(α-1,6fucosyltransferase, α-1,6FUCT)的表达,探讨VAD对初生鼠心脏发育的关系及其在糖分子水平上可能的机制。方法 通过美国营养学会的改良配方建立VAD大鼠模型。VAD饲料喂养母鼠及所产仔鼠为实验组(VAD组),正常饲料喂养母鼠及所产仔鼠为对照组,在初生鼠中进行比较两组FUT8表达与心脏发育。通过高效液相色谱检测维生素A含量并比较两组产仔率,利用HE染色观察两组心脏发育,采用反转录聚合酶链反应和小扁豆凝集素点印迹的方法检测两组初生鼠FUT8的表达。结果 对照组母鼠产仔率高于VAD组(P<0.001);RT-PCR及LCA凝集素点印迹示VAD组子鼠FUT8的表达量在转录水平和蛋白水平均高于对照组;HE染色发现VAD组子鼠心血管内皮细胞形态变得不规则、分散,而且VAD组心肌细胞胞质变得疏松。结论 维生素A缺乏组会引起FUT8表达的升高,影响心肌细胞形态的改变,这说明VAD与心脏发育有关,维生素A可能促进心脏发育。