激活α7烟碱型乙酰胆碱受体减轻大脑皮质神经元氧糖剥夺损伤

目的 研究激活α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7 nicotinic acetylcholine receptor,α7nAchR)对大脑皮质神经元氧糖剥夺损伤的作用及可能机制.方法 取体外培养7d的原代大脑皮质神经元,随机分为3组:对照组、氧糖剥夺组、PNU-282987(α7nAchR激动剂)组.氧糖剥夺组细胞氧糖剥夺12 h;PNU-282987组用PNU-282987预处理细胞24 h,然后氧糖剥夺12h.采用CCK-8测定3组大脑皮质神经元存活率,比色法检测上清液乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenate,LDH)含量,流式细胞术检测细胞凋亡率和活性氧(reactive oxygen species,ROS)产量,蛋白质印迹法检测血红素氧化酶(hemeoxygenase-1,HO-1)、缺氧诱导因子1α (hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)表达量.结果 与氧糖剥夺组相比,PNU-282987可提高大脑皮质神经元存活率(P＜0.05),降低LDH含量(P＜0.05),抑制细胞凋亡(P＜0.05),降低ROS产量(P＜0.05),同时使HO-1蛋白表达升高、HIF-1α蛋白表达减少(P＜0.05).结论 激活α7nAchR具有抗大脑皮质神经元氧糖剥夺损伤作用,该作用可能与抗氧化应激有关.     

氧、糖剥夺预处理对大鼠海马神经元热休克蛋白70、c-fos表达的影响

目的:观察氧、糖剥夺预处理对体外培养大鼠海马神经元热休克蛋白70(HSP70)、c-fos基因表达的影响,探讨预处理的神经保护机制.方法:取新生SD大鼠海马组织神经元进行原代培养,培养至12d时,随机分为4组:对照组,单纯氧、糖剥夺组,氧、糖剥夺预处理组和致死性氧、糖剥夺组(n=30).以换用无糖Earle's液培养作缺糖处理,通入含体积分数为85%N2、含体积分数为10%H2和含体积分数为5%CO2混合气体作缺氧处理,各组均采用相应的处理方法.应用免疫细胞化学SP法检测各组神经元HSP70及c-fos的表达.结果:HSP70及c-fos的表达在4组比较差异有统计学意义(F=31.76,50.44,P＜0.05);氧、糖剥夺预处理组HSP70及c-fos的表达较对照组、单纯氧、糖剥夺组和致死性氧、糖剥夺组显著增加.结论:氧、糖剥夺预处理可能通过诱导HSP70及c-fos的表达,发挥其神经保护作用.     

JNK抑制剂及NAC对氧糖剥离后复氧复糖所致脊髓神经元损伤的保护作用

目的:初步探讨JNK(The c-Jun NH-terminal kinase)抑制剂及N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)对脊髓神经细胞氧糖剥夺复糖复氧的保护作用。方法:离体脊髓神经元氧糖剥夺复糖复氧损伤(oxggen-glucose deprivation/regain,OGD/R)模型建立。随机分组:A组对照组(n=6);B组JNK抑制剂组(n=6);C组NAC处理组(n=6)。分别于脊髓神经元氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)4 h后,再复氧复糖4、12、24 h,应用MTT法检测细胞凋亡。结果:成功建立OGD/R模型;脊髓神经元OGD/R后,B组和C组MTT各时间点吸光值均高于A组,但B组和C组间差异不显著。结论:JNK抑制剂及NAC能有效抑制体外培养的脊髓神经元氧糖剥夺复糖复氧所引起的凋亡。     

缺氧后亚低温对大鼠海马神经元氧糖剥夺损伤保护作用的研究

目的本文将对缺氧后亚低温对大鼠海马神经元氧糖剥夺(OGD)损伤保护作用进行研究。方法本实验拟体外培养新生SD大鼠原代海马神经元,通过培养箱缺氧同时合并培养基缺糖来模拟神经元缺血、缺氧,建立氧糖剥夺损伤模型,给予亚低温干预,研究氧糖剥夺后亚低温干预对神经元缺氧、缺糖损伤的保护作用。结果单纯OGD组细胞凋忘率最高,caspase-3活性最高。结论缺氧后亚低温对体外培养大鼠海马神经元氧糖剥夺损伤具有保护作用。     

脱氟烷诱导神经元HO-1mRNA表达信号通路的研究

目的 研究脱氟烷(desflurane)诱导氧糖剥夺损伤神经元血红素氧合酶-1表达的信号转导通路,探讨脱氟烷脑保护机制.方法 将96孔和6孔培养板上培养7d的大鼠海马神经元随机分为6组(n=12):正常培养组(C组),神经元按正常培养方法培养;氧糖剥夺组(I/R组),神经元缺糖缺氧后复糖复氧处理;氧糖剥夺 6% desflurane组(Des组),神经元缺糖缺氧的同时接受6% desflurane麻醉;氧糖剥夺 6% desflurane 10μmol/L tin-protoporphyrin (HO-1抑制剂)组(Tin组)、氧糖剥夺 6% desflurane 10μmol/L LY 294002 (PI3-K抑制剂)组(LY组)、氧糖剥夺 6% desflurane 10μmol/L Triciribin (Akt抑制剂)组(Tri组)神经元进行缺糖同时分别加入tin-protoporphyrin、 LY 294002或Triciribin使其终浓度均为10μmol/L后同D组处理.96孔培养板的神经元进行细胞存活率的检测.6孔培养板的神经元进行神经元纯度鉴定、神经元凋亡、HO-1mRNA表达、PI3-K和Akt蛋白表达的检测.结果 Des组PI3K和Akt蛋白表达增加,HO-1mRNA表达增加,神经元存活率增加、凋亡率降低(vs I/R组,P<0.01).Tin组PI3K和Akt蛋白表达变化不明显(vs Des组,P0.05), HO-1mRNA表达降低,神经元存活率降低、凋亡率增加 (vs Des组,P<0.01). LY组PI3K和Akt表达降低,HO-1mRNA表达降低,神经元存活率降低、凋亡率增加(vs Des组,P<0.05或P<0.01). Tri组PI3K表达变化不明显(vs Des组,P0.05), Akt表达降低,HO-1mRNA表达降低,神经元存活率降低、凋亡率增加(vs Des组,P<0.05或P<0.01).结论 Desflurane通过PI3-K/Akt信号转导通路诱导大鼠海马神经元HO-1表达,保护了神经元.     

体外培养大鼠海马神经元糖氧剥夺/复氧轴突损伤模型的建立

目的 建立体外培养大鼠海马神经元糖氧剥夺/复氧轴突损伤模型.方法 取体外培养7 d的海马神经元,分为正常对照组和糖氧剥夺/复氧组.后者分别在糖氧剥夺0.5、1.0、1.5 h再复糖复氧.常氧状态下检测各组复氧后1、5、24、48、72 h培养液中的LDH活性,并观察神经元形态和轴突长度的变化.结果 糖氧剥夺/复氧后的神经元折光性降低,胞体肿胀,并且轴突逐渐变短,同时LDH水平随时间延长增加.其中糖氧剥夺0.5 h再复氧组效果最佳,其轴突缩短明显且神经元存活率较高.结论 成功建立了体外培养SD大鼠海马神经元糖氧剥夺/复氧轴突损伤模型.     

大鼠原代神经元中依达拉奉对糖氧剥夺损伤的保护及对ROS/TXNIP/NLRP3通路的影响

目的 探讨依达拉奉后处理对神经元糖氧剥夺损伤的保护作用及对活性氧(ROS)/硫氧还蛋内结合蛋白（TXNIP)/NOD样受体相关蛋白3( NOD-like receptor associated protein 3, NLRP3)信号通路的影响。方法 培养新生SD大鼠皮质神经元,经免疫荧光染色鉴定后随机分为神经元组、依达拉奉组、糖氧剥夺组、糖氧剥夺+依达拉奉组4组。各组神经元在完成处理后以CCK-8试剂盒检测神经元活力;以细胞凋亡试剂盒检测神经元凋亡情况;以ELISA试剂盒检测神经元ROS产生情况;以蛋白免疫印迹法检测ROS/TXNIP/NLRP3信号通路相关蛋白的表达水平。结果 神经元缺糖缺氧后细胞活力显著降低,依达拉奉处理后又显著上升,差异有统计学意义（P＜0.01）;糖氧剥夺后,神经元凋亡水平、ROS含量、ROS/TXNIP/NLRP3通路相关IL-1β、TXNIP、IL-18、Caspase-1、ASC和NLRP3蛋白表达水平升高,依达拉奉处理后又显著下降,差异有统计学意义（P＜0.01）。结论 依达拉奉对神经元糖氧剥夺损伤具有保护作用,可能与其对R0S/TXN1P/NLKP3信号通路的抑制有关。     

HO-1对氧糖剥夺海马神经元线粒体运动调节蛋白的影响

目的 研究HO-1对氧糖剥夺海马神经元线粒体运动调节蛋白的影响.方法 将培养7 d的大鼠海马神经元随机分为4组:正常培养组(C组)、正常培养+血晶素组(C+H组)、氧糖剥夺组(D组)、氧糖剥夺+血晶素组(D+H组).C组正常培养方法 培养.C+H组在正常培养的神经元培养液中加入血晶素使其终浓度为10μmol/L后按正常培养24 h.D组神经元进行缺糖、缺氧后复糖、复氧处理.D+H组神经元用10μmol/L血晶素处理24 h后进行缺糖、缺氧后复糖、复氧处理.进行神经元纯度鉴定,细胞存活率,HO-1-mRNA表达,HO-1、Mirol、Miro2和Milton蛋白表达,神经元凋亡的检测.结果 C+H组神经元H0-1-mRNA和HO-1表达高于C组(P＜0.01),Mirol、Mirio2和Milton蛋白表达高于C组(P＜0.01),神经元存活率和神经元凋亡率变化无统计学差异(P＞0.05);D组神经元HO-1-mRNA和HO-1表达高于C组(P＜0.01),Mirol、Miro2和Milton蛋白高于C组(P＜0.01),神经元存活率低于C组(P＜0.01),神经元凋亡率高于C组(P＜0.01);D+H组神经元HO-1-mRNA和HO-1表达高于D组(P＜0.01),Mirol、Miro2和Milton蛋白高于D组(P＜0.01),神经元存活率高于D组(P＜0.01),神经元凋亡率低于D组(P＜0.01).结论 HO-1增加海马神经元线粒体运动调节蛋白Mirol、Miro2和Milton的表达,抑制神经元的凋亡.     

七氟烷诱导HO-1基因表达抑制氧糖剥夺神经元凋亡机制的研究

目的：探讨七氟烷诱导HO—1基因表达抑制氧糖剥夺神经元凋亡的机制。方法：将96孔和6孔培养板上培养7d的海马神经元随机分为5组（n=10）：正常培养组（C组）、氧糖剥夺组（D组）、氧糖剥夺组＋2％七氟烷组（s1组）、糖剥夺组十4％七氟烷组（S2组）、糖剥夺组＋4％七氟烷＋Znpp组（Z组）。C组神经元按正常培养方法培养。S1组在神经元缺糖缺氧的同时接受2％七氟烷麻醉。S2组在神经元缺糖缺氧的同时接受4％七氟烷麻醉。Z组在神经元进行缺糖同时加入Znpp使其终浓度分别为10μmol／L后同s2组处理。96孔培养板的神经元进行细胞存活率的检测。6孔培养板的神经元进行神经元纯度鉴定、神经元凋亡率、HO-1-mRNA和Fas蛋白表达的检测。结果：与D组比较S1组海马神经元HO-1—mRNA的表达增加，Fas蛋白表达减少，神经元存活率增加、凋亡率降低（P〈0．05）。与S1组比较S2组海马神经元HO-1-mRNA的表达增加，Fas蛋白表达减少，神经元存活率增加、凋亡率降低（P〈0．05）。与S2组比较Z组海马神经元HO-1-mRNA的表达减少，Fas蛋白表达增加，神经元存活率降低、凋亡率增加（P〈0．05）。结论：七氟烷通过诱导神经元HO-1-mRNA的表达而抑制了凋亡因子Fas，最终抑制了氧糖剥夺神经元的凋亡。     

七氟烷后处理对原代海马神经元氧糖剥夺/复氧损伤及自噬的影响

目的 探讨七氟烷后处理对原代海马神经元氧糖剥夺/复氧(OGD/R)损伤、氧化应激及自噬的影响。方法 取(18±0.5)d孕鼠子宫内胎鼠海马组织,收集海马神经元进行培养,7d后培养的海马神经元随机分为3组：正常对照组(CON组)、氧糖剥夺/复氧组(OGD/R组)、七氟烷后处理组(OGD/R+SEVO组)。CON组正常培养;OGD/R组：氧糖剥夺1.5 h,复氧复糖24 h,建立OGD/R损伤模型;OGD/R+SEVO组经氧糖剥夺后即刻予2.4%七氟烷后处理1 h,复氧复糖23 h。处理结束后,比色法检测各组乳酸脱氢酶(LDH)的活性,原位末端标记法(TUNEL)检测各组神经元凋亡变化,免疫荧光法检测各组神经元线粒体活性氧和微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)的表达,Western blot检测丝氨酸/苏氨酸激酶(PINK1)、E3泛素连接酶(Parkin)的表达。结果 与CON组比较,OGD/R组LDH释放增加(P<0.01),神经元凋亡增加,线粒体活性氧和自噬标志性蛋白LC3B表达增加(P<0.01), PINK1蛋白和Parkin蛋白表达上调(P<0.001,P<...     

肝癌细胞PI3K/Akt信号通路在干扰素2α上调ISG15表达中的作用

  目的  探讨肝癌细胞中干扰素2α(IFN-2α)通过磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路上调ISG15表达的机制。  方法  向培养的肝癌细胞HepG2细胞系中加入IFN-2α和/或PI3K抑制剂(LY294002)。采用蛋白免疫印迹检测各组Akt、磷酸化-蛋白激酶B(p-Akt)和干扰素刺激基因15(ISG15)的蛋白表达水平;采用免疫荧光分析p-Akt和ISG15表达情况。多组间比较采用单因素方差分析。  结果  Western印迹分析表明,IFN-2α组中的ISG15表达水平较对照组明显增加,IFN-2α+LY294002组中的ISG15表达水平较IFN-2α组明显降低;免疫染色分析显示,IFN-2α组ISG15荧光强度显著高于对照组和IFN-2α+LY294002组。Western印迹分析显示,和对照组比较,IFN-2α组的p-Akt(Ser473)水平显著降低,而p-Akt(Thr308)水平明显增加;免疫荧光结果显示IFN-2α组中p-Akt(Thr308)的荧光强度显著高于对照组和IFN-2α+LY294002组。  结论  在HepG2细胞中,IFN-2α通过增加PI3K/Akt通路中的p-Akt(Thr308)上调ISG15的表达。      

IGF-1R调控乳腺癌细胞增殖和迁移的信号转导通路研究

目的：使用小分子抑制物LY294002和PD98059分别抑制磷脂酰肌醇-3激酶（ PI3K）通路和有丝分裂活化蛋白激酶（MAPK）通路的信号转导,给予胰岛素样生长因子-1（IGF-1）刺激,检测乳腺癌细胞的增殖和迁移能力的变化。方法使用CCK-8法和体外迁移实验分别检测IGF-1干预下细胞的增殖能力,并以信号通路抑制剂处理后细胞作为对照组,同样使用CCK-8法和体外迁移实验检测其增殖能力。结果 IGF-1干预第2～4天,不同浓度IGF-1（20,50,100mg/L）均显著促进MDA-MB-231细胞增殖,与对照组比较,差异有统计学意义（P＜0．05）;当IGF-1浓度为50mg/L时促进作用最明显;使用LY294002（25μM）或PD98059（50μM）分别阻断PI3K通路和MAPK通路后,不仅抑制MDA-MB-231细胞基础水平的增殖,而且抑制IGF-1刺激下的细胞增殖能力,与DMSO对照组比较,差异有统计学意义（P＜0．01）;在不同浓度IGF-1（20,50,100mg/L）作用下,MDA-MB-231细胞迁移能力均增强,与对照组比较,差异有统计学意义（ P＜0．01）。结论 IGF-1干预后MDA-MB-231细胞的增殖和迁移能力明显增强,PI3K通路和MAPK通路均参与了IGF-1促进乳腺癌细胞增殖和迁移的信号转导。     

P13K抑制剂对肺癌Akt2、p-Akt表达影响的试验研究

目的探讨P13K抑制剂LY294002对肺癌Akt2、p-Akt表达的影响。方法体外实验是取对数生长期的A549细胞制备细胞爬片,体内实验先用裸鼠建立移植瘤模型,通过P13K抑制剂LY294002干预后,分别用免疫组织化学法和W estern b lot法检测Akt2、p-Akt蛋白的表达。结果肺腺癌细胞株A549细胞中存在Akt2和p-Akt蛋白的高表达,应用P13K抑制剂LY294002可抑制该细胞株细胞中Akt2和p-Akt蛋白的表达,而且其表达呈浓度依赖型降低。LY294002组移植瘤组织Akt2和p-Akt蛋白的表达用免疫组织化学法检测较对照组染色变淡,用W estern b lot法检测显示其蛋白表达量低于对照组。结论LY294002可通过抑制P13K活性,抑制Akt的表达及活化,使Akt2和p-Akt蛋白的表达降低,提示抑制P13K/Akt途径可能是LY294002发挥抗癌作用的重要机制,P13K/Akt可能成为肺癌治疗的靶点。     

原花青素B2通过调控P13K/Akt/Nrf2信号通路减轻氯氰菊酯所致神经元损伤

目的 探讨原花青素B2（PCB2）是否通过调控P13K/Akt/Nrf2信号通路保护氯氰菊酯（CYP）导致的神经元氧化损伤。方 法 原代培养C57BL/6小鼠大脑皮层神经元,将细胞随机分成5组：正常对照组;PCB2处理组（将5 μg/mL的PCB2与细胞共培养24 h）;CYP暴露组（将50 μmol/L的CYP与细胞共培养24 h）;PCB2预处理组（将5 μg/mL的PCB2 与细胞预处理30 min后加入CYP 50 μmol/L共培养24 h）;LY294002处理组（先将20 μmol/L的 LY294002与细胞预处理30 min,然后加入PCB2预处理30 min,后与CYP共培养24 h）。采用CCK-8分析各组细胞活性,采用荧光探针DCFH-DA及流式细胞术检测细胞内ROS水平,通过Hoechst 33342观察细胞核形态变化,采用JC-1检测线粒体膜电位异常,利用Western blot检测Nrf2、HO-1、p-Akt、Akt蛋白表达。结果 CYP暴露降低细胞活性（P<0.001）,引起线粒体膜电位下降、促使细胞核出现固缩、浓染等凋亡特征,导致ROS产生异常。PCB2预处理提高细胞存活率（P=0.006）,改善细胞核形态异常,逆转CYP导致的线粒体膜电位下降,减弱细胞内ROS产生。CYP暴露引起Nrf2核易位,Nrf2、HO-1、p-Akt蛋白表达上调（P<0.001）。PCB2预处理调节Nrf2、HO-1、p-Akt蛋白过度表达。抑制P13K/Akt信号通路消除了PCB2对CYP诱导损伤的保护作用（P<0.05）。结论 PCB2通过激活P13K/Akt信号通路,调控Nrf2/ARE通路,减轻CYP所致小鼠大脑皮层神经元氧化损伤。     

6-姜酚对海马神经元缺糖缺氧后SGK1表达的影响

目的观察6-姜酚对海马神经元氧糖剥夺（OGD）损伤的保护作用,并对其作用机制进行初步的探讨。方法建立原代培养的海马神经元氧糖剥夺（OGD）模型,实验分为4组：正常对照组、OGD组、6-姜酚（10μmol/L）＋OGD处理组和6-姜酚（30μmol/L）＋OGD处理组。采用MTT检测细胞活性,Western bolt方法检测SGK1蛋白表达变化。结果1~90μmol/L浓度的6-姜酚对正常条件培养海马神经元的存活率（MTT检测）无明显影响,经OGD处理后,海马神经元的存活率明显降低（P〈0.01）,给予10μmol/L和30μmol/L浓度的6-姜酚可使OGD处理的海马神经元存活率升高（P〈0.05）。Western blot显示OGD模型组SGK1蛋白表达明显减少,与正常对照组相比有明显的差异性;预先给予6-姜酚可显著提高细胞中SGK1蛋白表达,与OGD组相比有明显差异性,并且呈现剂量依赖性。结论6-姜酚对OGD所致海马神经元损伤有保护作用,并且SGK1这种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶也参与6-姜酚对OGD所致神经元损伤的保护作用过程。     

补阳还五汤激活PI3K-AKT通路促进氧糖剥夺再灌注损伤的脑微血管内皮细胞血管生成

目的：探讨补阳还五汤促进氧糖剥夺再灌注（OGD/R）损伤的大鼠脑微血管内皮细胞（RBMEC）血管生成的机制。方法：RBMEC经补阳还五汤含药血清孵育24?h后,构建OGD/R细胞损伤模型。将细胞随机分为正常对照组、模型对照组、补阳还五汤组（给予补阳还五汤含药血清）和LY294002组[给予补阳还五汤含药血清前使用磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）抑制剂LY294002预处理1?h]。采用CCK-8法、细胞划痕实验和Transwell迁移实验、管腔形成实验分别检测细胞增殖、迁移和形成管腔能力。蛋白质印迹法检测PI3K、蛋白激酶B（AKT）、低氧诱导因子（HIF）-1α及血管内皮生长因子（VEGF）等蛋白的表达。结果：与模型对照组比较,补阳还五汤组RBMEC存活率、迁移能力及管腔形成能力显著增强（均P<0.01）,磷酸化PI3K、磷酸化AKT、HIF-1α和VEGF蛋白表达增加（均P<0.05）,而LY294002可阻断上述效应。结论：补阳还五汤含药血清可促进OGD/R损伤的RBMEC血管生成,其机制可能与其激活PI3K-AKT信号通路上调HIF-1α和VEGF表达有关。     

蛋白激酶B激活对脑缺血再灌注海马CA3区神经元的保护作用

目的 探讨丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶B（Protein kinase B,Akt）对脑缺血再灌注损伤后海马CA3区神经元的保护作用.方法 采用四动脉结扎法建立大鼠全脑缺血模型,再灌注0 min、30 min、3h、6h、12h、1d和3d各时间点,运用免疫印迹技术检测海马CA3区Akt1的磷酸化水平,采用免疫组化和焦油紫染色分别检测LY294002（PI3K/Akt特异性抑制剂）对缺血再灌注后磷酸化Akt1（p-Akt1）的表达及神经元存活的影响.结果 缺血再灌注后30 min,与假手术（sham）组相比,海马CA3区p-Akt1的表达显著升高（P＜0.05）,再灌后3h至峰值,一直持续至3d仍维持在较高水平（P＜0.05）;与相应的再灌注组相比,给予LY294002后,p-Akt1的蛋白表达明显降低[R6 h组和LY294002＋ R6 h组的阳性细胞数（个/mm^2）分别为（134.6±7.8）和（54.8±5.1）],海马CA3区的神经元大量死亡[R5 d组和LY294002 ＋R5 d组神经元数量（个/mm^2）分别为（152.0±17.4）和（62.7±5.1）]（P＜0.05）.结论 脑缺血再灌注后蛋白激酶Akt的持续激活,是海马CA3区神经元存活的重要因素.     

黄芪甲苷对高胰岛素诱导人肾小球系膜细胞损伤的保护作用及机制研究

目的：研究黄芪甲苷（As-IV）对高胰岛素诱导人肾小球系膜细胞（HMCs）损伤的保护作用及其机制。方法以HMCs 为研究对象，用 MTT 法检测不同浓度胰岛素作用不同时间后对 HMCs 增殖的影响，筛选胰岛素的量效与时效关系；实验设正常组、高胰岛素（64 nmol／L）组、二碘苯（DPI 10μmol／L）组、抗氧化剂 Tempol（100μmol／L）组、PI3K／Akt 信号通路抑制剂 LY294002（10μmol／L）组与黄芪甲苷（As-Ⅳ25、50、100μmol／L）组。培养48 h 后，MTT 法检测 HMCs 的细胞增殖状况，DCFH-DA 法测定细胞内活性氧（ROS）含量， Western blot 法检测 NADPH 氧化酶4（NOX4）、磷酸化蛋白激酶 B（p-PKB）（又称 p-Akt）、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）蛋白表达的变化。结果随着浓度增加与作用时间延长，胰岛素对 HMCs 增殖有促进作用且有量效与时效关系；与高胰岛素组比较，DPI 组、Tempol 组、LY294002组与 As-IV 25、50、100μmol／L 组均能有效抑制高胰岛素诱导的细胞增殖，减少细胞内 ROS 含量，降低 NOX4、p-Akt、p-mTOR 蛋白的高表达（P ＜0．05，P ＜0．01）。结论胰岛素呈时间和浓度依赖性促 HMCs 细胞增殖；As-IV 对高胰岛素诱导的 HMCs 有保护作用，其作用机制可能与抑制 HMCs 的过度增殖，减少细胞内 ROS 生成，降低 NOX4、p-Akt、p-mTOR蛋白高表达有关。     

缺血后处理对肝缺血再灌注损伤后磷脂酰肌醇-3激酶和细胞外信号调节激酶的影响和意义

目的观察缺血后处理对肝缺血再灌注后磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)和细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)表达的影响,探讨肝缺血后处理的作用机制。方法采用大鼠70%肝缺血再灌注损伤模型,进行3次循环的再灌注1 min-阻断1 min的缺血后处理,观察假手术(S)组、LY294002+假手术(LY+S)组、PD98059+假手术(PD+S)组、缺血再灌注(IR)组、缺血后处理(IPO)组、LY294002+缺血后处理(LY+IPO)组和PD98059+IPO(PD+IPO)组的肝功能、细胞凋亡、Akt和ERK1/2磷酸化程度的变化。结果缺血后处理能明显减轻缺血再灌注造成的肝功能损害,增加Akt和ERK1/2的磷酸化程度,应用LY294002或PD98059后都可以取消IPO的作用。结论缺血后处理可能通过激活PI3K和ERK1/2减轻肝缺血再灌注损伤。     

GM1对PC12细胞缺氧缺糖损伤中HO-1表达的影响及PI-3K/Akt通路在此过程中的作用

目的:探讨PC12细胞缺氧缺糖损伤中,单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM1)对血红素加氧酶(HO-1)表达的影响,并研究PI-3K/Akt通路在此过程中的作用。方法:用连二亚硫酸钠(Na2S2O4)消除培养基中的氧合并培养基质缺糖制造PC12细胞缺氧缺糖损伤(OGD)模型,用RT-PCR和Western blot方法检测不同剂量(25-100μmol/L)GM1和PI-3K抑制剂LY294002对缺氧缺糖损伤时PC12细胞HO-1mRNA及蛋白表达的影响。结果:与对照组和单纯缺氧缺糖组相比,GM1可显著上调缺氧缺糖PC12细胞的HO-1mRNA和蛋白表达,且两者呈明显的剂量依赖关系;PC12细胞经LY294002预处理后,GM1上调HO-1mRNA和蛋白表达的作用均受到抑制。结论:GM1可上调缺氧缺糖损伤时PC12细胞HO-1mRNA和蛋白表达,PI-3K/Akt通路在此过程中发挥了一定的信号转导作用。