体外特异微环境诱导人胎盘间充质干细胞分化成子宫平滑肌细胞的研究

目的 体外建立人胎盘间充质干细胞(pMSC)的分离扩增方法,研究其在模拟的特异性微环境中向子宫平滑肌细胞(uSMC)的分化.方法 取足月健康新生儿胎盘组织,纯化并扩增pMSC,检测表面标志和并鉴定多向分化潜能.同时原代培养uSMC,改良Transwell培养体系,建立模拟特异性微环境,共培养诱导pMSC向uSMC定向分化.并通过标志性蛋白及细胞功能进行鉴定.结果 pMSC同骨髓间充质干细胞一样,具有活跃增殖的能力,表达干细胞标志,具有间充质细胞的特征及多向分化能力.pMSC与uSMC共培养后,其形念逐渐向uSMC形态过渡,并表达uSMC最具特异性的分化晚期标志蛋白肌球蛋白重链(MHC).诱导获得的细胞表达雌激素受体,并对雌激素的刺激具有反应性的功能变化.结论 利用胎盘组织可获取大量pMSC,为组织工程的种子细胞和基因工程的载体细胞提供新的、可行的来源.pMSC的分化具有环境依赖性,在体外模拟的特异性微环境中pMSC可分化为有功能的子宫平滑肌细胞.     

人工生物可降解支架聚乳酸-聚乙醇酸种植人食管上皮细胞的实验研究

目的研究人食管上皮细胞在聚乳酸-聚乙醇酸(PLGA)三维支架上的贴附和生长情况,利用组织工程技术培养工程化人工食管.方法制作PLGA三维细胞支架;分离培养成人食管上皮细胞,体外扩增后种植到PLGA支架上.在体外和裸鼠体内分别培养食管上皮细胞-支架复合物,分期终止培养,进行组织学染色、扫描电镜、细胞角蛋白免疫组织化学检测.结果体外培养发现,人食管上皮细胞在支架材料上贴附生长良好,长期培养仍保持食管上皮细胞特性,裸鼠体内培养4周后可形成食管黏膜样组织.结论 PLGA支架适合食管上皮细胞黏附生长,可作为食管组织工程的细胞载体.利用组织工程的方法可获得适于移植的工程化人工い食管.     

CyclinE蛋白在食管鳞状细胞癌组织中的表达及意义

目的 观察CyclinE在食管鳞状细胞癌和癌周正常食管组织的表达,从量化角度阐明其在食管鳞状细胞癌组织中表达的病理学意义.方法 常规石蜡包埋、HE切片确诊,免疫组化MaxVision法检测CyclinE在食管鳞状细胞癌和癌周正常食管组织的定位和表达,Image-pro plus图像分析软件对其表达强度进行定量分析,并用表达的阳性单位(positive unit,PU)反映其表达强度.结果 CyclinE蛋白在食管鳞状细胞癌和癌周正常食管组织中的表达主要定位在细胞核.食管鳞状细胞癌表达的PU值高于癌周正常食管组织(P<0.01),CyclinE蛋白表达的PU值与食管癌分化程度有关(P<0.01),低分化鳞状细胞癌表达的PU值高于高分化及中分化鳞状细胞癌.CyclinE蛋白表达的PU值与食管癌患者的性别、年龄、转移和TNM分期未见明显相关性(P>0.05).结论 CyclinE蛋白表达程度与食管鳞状细胞癌及分化程度具有相关性,可能成为判断其指标之一.     

Expression and clinical significance of transcription factor FoxO1 in human esophageal squamous carcinoma

目的 检测FoxO1在食管鳞状细胞癌组织中的表达水平,分析其与食管鳞状细胞癌各临床病理因素的关系.方法 应用实时荧光定量PCR SYBR Green荧光染料法,检测42例手术切除的食管鳞癌组织及配对的正常食管黏膜组织中FoxO1 mRNA的表达;免疫组化S-P法检测FoxO1蛋白的表达及组织学定位.结果 正常食管黏膜组织中FoxO1mRNA及蛋白均呈低表达,而食管鳞癌组织中FoxO1 mRNA及蛋白表达显著升高(P＜0.01).高分化食管鳞癌组织的相对表达量显著高于中低分化食管鳞癌组织(P＜0.01).食管鳞癌组织中FoxO1 mRNA及蛋白表达与患者性别、年龄、肿瘤发生部位、TNM分期及有无淋巴结转移无明显相关性(P＞0.05).结论 FoxO1在正常食管黏膜组织和食管鳞癌组织中的表达存在明显差异,其表达水平与肿瘤分化程度密切相关.     

食管鳞状细胞癌组织中细胞胀亡及微血管密度检测

目的 :检测人食管鳞状细胞癌组织中细胞胀亡及微血管密度 (MVD)。方法 :利用透射电镜和免疫组织化学技术 ,对 6 0例手术切除的食管癌组织进行细胞胀亡和MVD检测 ,分析胀亡指数 (OI)与肿瘤MVD、临床病理分期、分化的关系。结果 :食管鳞状细胞癌组织中存在胀亡细胞 ;N0 期癌组织中OI高于N1 期 (P <0 .0 5 ) ;随分化程度的升高 ,OI升高 (P <0 .0 0 5 ) ;MVD高表达组OI高于低表达组 (P <0 .0 0 1 ) ,OI与T分期无关。结论 :食管鳞状细胞癌组织中存在胀亡细胞 ,其与食管癌的生物学行为有一定相关性     

食管癌癌细胞核CyclinD1和CyclinE表达的定量检测及分析

目的 观察CyclinD1、CyclinE在食管癌和癌周正常食管组织的表达,从量化角度阐明其在食管癌组织中表达的病理学意义.方法 常规石蜡包埋、HE切片确诊,用免疫组化MaxVision法检测CyclinD1,CyclinE在食管癌和癌周正常食管组织的表达,Image-pro plus图像分析软件对其表达强度进行定量分析,并用表达的阳性单位(positive unit,PU)反映其表达强度.结果 CyclinD1、CyclinE蛋白在食管癌和正常食管组织中的表达主要定位在细胞核;CyclinD1、CyclinE蛋白在食管鳞状细胞癌和腺鳞癌癌细胞棱中表达的PU值高于正常食管组织(P<0.001);CyclinD1、CyclinE蛋白表达的PU值与食管鳞状细胞癌分化程度有关(P<0.001);随着食管鳞状细胞癌分化程度的降低,CyclinD1蛋白表达量逐级增高;CyclinE蛋白在低分化鳞状细胞癌表达的PU值高于高分化及中分化鳞状细胞癌.CyclinD1与CyclinE在食管癌中表达具有相关性(r=0.652,P<0.01).结论 CyclinD1、CyclinE蛋白的表达与食管癌的发生、发展及食管鳞状细胞癌恶性程度有关,可能成为判断其指标之一.食管癌CyclinD1的表达与CyclinE的表达密切相关,CyclinD1和CyclinE可能在食管癌癌变过程中起协同作用.     

Expression and clinical signifcance of tight junction proteins(occludin and ZO-1) in human esophageal squamous cell carcinoma

目的 探讨紧密连接蛋白occludin及ZO-1在食管鳞状细胞癌及手术切缘正常食管黏膜组织中的表达及其临床意义.方法 采用组织芯片和免疫组化法检测49例食管鳞状细胞癌患者的癌组织及手术切缘正常食管黏膜组织(距肿瘤组织＞5 cm)中occludin和ZO-1的表达,分析食管鳞状细胞癌癌组织中occludin、ZO-1表达与肿瘤的增殖、侵袭和转移之间的关系.结果 食管鳞状细胞癌组织中occludin及ZO-1的阳性表达明显低于手术切缘正常食管粘膜组织 (P＜0.01),且癌组织中occludin、ZO-1的表达与其分化程度及淋巴结转移有关(P＜0.05).结论 食管鳞状细胞癌的occludin和ZO-1的表达下调或缺失与肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移有关,在食管癌的进展中起重要作用.     

运用生物材料促进关节软骨修复与再生的研究进展

关节软骨损伤通常由外伤引起,由于愈合能力有限,随着时间的推移最终会导致骨性关节炎发生[1].组织工程[2]是以生物材料作为支架,结合细胞及信号调节的细胞增殖、分化和组织形态发生等细胞过程,可在结构和功能方面重建或重构一个组织,所以是治疗软骨损伤的理想选择.生物材料作为一种和软骨修复有关的微环境信号调节传递系统,对软骨修复和再生发挥着非常重要的作用.本文就生物材料调节微环境信号传递促进关节软骨修复与再生的研究进展作一综述.     

食管鳞状细胞癌P-gp、GST-π、TopoⅡ的表达及临床意义

目的 探讨耐药基因蛋白P-gp、GST-π和TopoⅡ在食管鳞状细胞癌及正常食管组织中的表达及其与临床病理的关系.方法 应用免疫组织化学方法检测144例手术切除的食管鳞状细胞癌组织和30例正常食管组织中P-gp、GST-π和TopoⅡ的表达.结果 P-gp、GST-π、TopoⅡ的表达与患者年龄、性别、淋巴结转移、肿瘤大小及浸润深度无关(P＞0.05),与肿瘤的分化程度有关,高分化、中分化和低分化鳞癌组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 食管鳞状细胞癌耐药由多种耐药基因共同参与,联合检测多项耐药相关蛋白表达,对指导临床化疗药物选择具有意义.     

SDF-1/CXCR4与骨髓干细胞移植治疗脑卒中

骨髓干细胞(BMSC)在许多组织器官显示巨大的细胞分化潜能,其治疗脑卒中成为当前研究的热点.已知局部缺血可诱导BMSC的动员,内外源性干细胞能"感受"组织损伤而定向迁移到损伤区并进行分化.BMSC的可塑性、分化功能和迁移作用依赖于损伤组织局部微环境的特异信号.     

去分化脂肪细胞多向分化潜能与应用

去分化脂肪细胞(DFAT cells)来源于成熟脂肪细胞,且具有多向分化潜能,其特征类似于干细胞的一种细胞.在体外可通过天花板培养法提取出DFAT细胞,经过诱导后,DFAT细胞可向脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞、内皮细胞、肌细胞、神经细胞等分化.因此,DFAT细胞是一种在组织工程和干细胞治疗中很好的潜在资源,从而广泛应用于多种疾病及组织损伤修复的研究当中.     

微环境中β-连环蛋白对毛囊干细胞增殖分化的影响

近年来对毛囊干细胞的研究不断深入,其中干细胞所处的微环境在细胞增殖、分化中的作用更是备受关注.微环境调控干细胞增殖与分化是通过细胞与细胞、细胞与细胞外基质、细胞因子及细胞微环境中信号分子之间的相互作用实现的.     

干细胞标志物研究

干细胞是一类具有自我更新能力和多向分化潜能的细胞，能在体外扩增、定向诱导分化、功能激活与调控，在细胞替代治疗、基因治疗、组织工程等领域受到广泛关注。因此在干细胞移植前的体外培养期间，对其进行性质鉴定就显得非常重要。     

细胞凋亡与食管贲门癌组织病理学特性的关系

目的探讨细胞凋亡与食管、贲门癌组织病理学特性的关系．方法来用组织病理学方法检测３８例食管癌和４０例贲门癌手术切除标本癌组织中细胞调亡的状况，并进行定量分析，进而比较其与过组织的分化程度、浸润深度以及淋巴结转移之间的关系．结果食管、贲门边组织中均可见不同程度的细胞凋亡．并且细胞凋亡指数（即１０个高倍视野内凋亡细胞和凋亡小体数）与癌组织的分化程度及淋巴结转移有关（Ｐ＜０．０５），而与浸润深度无关（Ｐ＞ｏ．０５）．结论细胞调亡与食管、贲门癌的组织病理学特性有关．     

干细胞研究与糖尿病治疗的研究进展

在一定条件下,干细胞可分化为肝细胞、胰岛素分泌细胞、血管内皮细胞等组织细胞类型;干细胞具备的增殖能力和分化潜能使其成为胰岛素分泌细胞的潜在来源。将一定数量的干细胞通过动脉导管注入胰腺组织中,干细胞在胰腺组织微环境的诱导下可分化增殖为胰岛样细胞,替代损伤的胰岛β细胞合成胰岛素等功能,起到治疗糖尿病的作用。本文就干细胞与糖尿病治疗的研究进展进行综述。     

体外诱导牙髓干细胞成牙本质向分化的研究进展

牙髓干细胞在体内牙髓组织特殊的微环境中,能保持干细胞未分化状态,有分化形成多种细胞的功能特性. 在某些条件下,牙髓干细胞可以向成牙本质样细胞方向分化. 目前众多研究表明,在体外培养下不同的诱导因子,可以作为调控器通过相关的信号通路在一定程度上参与调控牙髓干细胞成牙本质向分化和定向诱导. 本文对近年来诱导因子与牙髓干细胞成牙本质分化的关系研究做一综述.     

急性髓细胞白血病骨髓基质细胞对其白血病祖细胞体外生长的影响及其与疗效关系的初探

用cactromalaspina法对11例急性髓细胞白血病骨髓基质细胞进行体外培养,观察其对CFU-L(液相-半固相集落培养法)体外生长的影响及疗效的关系.发现基质细胞数与CFU-L高峰值呈正相关.随基质细胞产率的增加其悬浮细胞及CFU-L液相集落也增加.基质细胞与CFU-L50%衰减时间越长,首次诱导缓解效果越差.基质细胞是具有多分化、多功能的细胞,参与骨髓造血微环境组成,具有支持及调节造血的作用.白血病诱导缓解的治疗效果除了与CFU-L集落形成能力有关外,也与CFU-L及基质细胞由高峰值衰减50%的时间密切相关,时间越长,治疗效果越差,可见白血病的治疗不但要消灭白血病细胞,也要摧毁白血病细胞赖以生存增殖的异常微环境.     

转录因子FoxO1在食管鳞癌组织中的表达及其临床意义

目的检测FoxO1在食管鳞状细胞癌组织中的表达水平,分析其与食管鳞状细胞癌各临床病理因素的关系。方法应用实时荧光定量PCR SYBR Green荧光染料法,检测42例手术切除的食管鳞癌组织及配对的正常食管黏膜组织中FoxO1 mRNA的表达;免疫组化S-P法检测FoxO1蛋白的表达及组织学定位。结果正常食管黏膜组织中FoxO1mRNA及蛋白均呈低表达,而食管鳞癌组织中FoxO1 mRNA及蛋白表达显著升高(P<0.01)。高分化食管鳞癌组织的相对表达量显著高于中低分化食管鳞癌组织(P<0.01)。食管鳞癌组织中FoxO1 mRNA及蛋白表达与患者性别、年龄、肿瘤发生部位、TNM分期及有无淋巴结转移无明显相关性(P>0.05)。结论 FoxO1在正常食管黏膜组织和食管鳞癌组织中的表达存在明显差异,其表达水平与肿瘤分化程度密切相关。     

食管鳞状细胞癌组织中Claudin-7和E-cadherin蛋白的表达

目的:研究食管鳞状细胞癌组织中Claudin-7和E-cadherin的表达及其与食管癌生物学行为的关系.方法:采用免疫组织化学SP法检测72例食管鳞状细胞癌术后标本中Claudin-7和E-cadherin的表达,并分析二者与食管鳞状细胞癌患者临床病理特征的关系.结果:食管鳞状细胞癌组织中Claudin-7的异常表达率为72%(52/72),其与食管鳞状细胞癌的分化程度、浸润深度、TNM分期和淋巴结转移有关(P均<0.05).食管鳞状细胞癌组织中E-cadherin的异常表达率为66.7%(48/72),其与食管鳞状细胞癌的分化程度、浸润深度、TNM分期、淋巴结转移和静脉侵犯有关(P均<0.05).Claudin-7和E-cadherin的表达呈正相关(rs=0.735,P=0.001).结论:食管鳞状细胞癌组织中Claudin-7和E-cadherin的表达与食管癌的发生发展、侵袭转移和预后密切相关,两指标的联合检测对食管鳞状细胞癌的治疗和预后的判断有指导作用.     

曲古抑菌素干预骨髓间充质干细胞向心肌细胞特化体外实验

目的:在体外以新生大鼠心肌细胞(Cardiomyocytes,CM)与骨髓间充质干细胞((Mesenchymal stem cells,MSCs)共同培养的方式模拟体外心肌微环境,研究间质干细胞在HDAC酶抑制剂曲古抑菌素(Trichostatin A,TSA)干预后乙酰化酶活性与MSCs向心肌细胞特化之间的联系.方法:分离大鼠MSCs将已标记的MSCs与心肌细胞、分别加入不同浓度TSA干预后的MSCs与心肌细胞混合培养.贴壁法分离大鼠MSCs在体外培养纯化后进行细胞标记.培养至第4代.根据实验需要分为3组:阳性对照组,实验组,阴性对照组.用4.6-二乙酰基-2-苯基吲哚(DAPI)和5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)对核进行双标.分别在共培养1周后用免疫荧光染色检测MSCs细胞中的心肌结构功能蛋白:肌球蛋白重链(Myosin heavy chain,MHC)、心肌组织缝隙连接的特异性组成蛋白质Connexin43(Cx43)的表达情况.结果:①MSCs与搏动的心肌细胞共培养1周,MSCs开始出现心肌样分化说明建立了心肌微环境;②阳性对照组中,MSCs经TSA干预48 h后与心肌细胞混合培养.出现心肌样分化并表达心肌结构功能蛋白表达.③阴性对照组中的部分MSCs可少量表达心肌结构功能蛋白.在共培养的7 d,经TSA诱导后经Brdu-DAPI双标MSCs的核,MHC和Cx43荧光显示分化率与阳性对照组的分化率有显著差别.结论:MSCs与经HDAC酶抑制剂干预后的MSCs在心肌微环境中,HDAC酶抑制剂对MSCs向心肌样细胞的特化有促进作用,提示乙酰化酶活性与细胞特化之间的存在联系.