三七总甙对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖及胶原合成的作用

目的　观察三七总甙对体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞增殖及胶原合成的作用 ,以寻找治疗人增生性瘢痕的有效药物。方法　体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞 ,分别应用MTT比色法和3H 脯氨酸掺入法检测三七总甙作用后细胞增殖及胶原合成的变化。结果　和对照组相比 ,三七总甙能够显著抑制成纤维细胞增殖及胶原合成 (P <0 0 1)。结论　三七总甙具有体外抗纤维化作用 ,可能成为治疗增生性瘢痕的有效药物     

三羟基异黄酮抑制增生性瘢痕成纤维细胞转分化作用的研究

目的 观察三羟基异黄酮(Genistein)对人增生性瘢痕(hypertrophic scar,HS)成纤维细胞向肌成纤维细胞转分化的影响,探讨其抑制组织纤维化的作用机制.方法 体外培养人HS成纤维细胞,分别以25、50、100μmol/L浓度的Genistein进行处理,流式细胞术检测体外培养HS成纤维细胞中α-SMA阳性细胞率;Western blot检测细胞α-SMA蛋白的表达;观察HS成纤维细胞三维培养组织的收缩情况.结果 在Genistein作用下,α-SMA阳性细胞率及α-SMA蛋白表达与对照组比较均降低(P＜0.05);其中50、100 μmol/L组与对照相比较具有非常显著性差异(P＜0.01).HS成纤维细胞三维培养组织持续收缩,加入Genistein作用后,组织块的收缩现象减弱,第48、72小时,50 μmol/L与100 μmol/L组收缩指数(CI)显著低于对照组(P＜0.01),呈现明显的时效-剂量关系.结论 Genistien能抑制HS成纤维细胞向肌成纤维细胞的转分化,可能是其抗组织纤维化的作用机制之一.     

5-氟尿嘧啶对瘢痕疙瘩成纤维细胞MMPS及TIMPS表达的影响

目的 研究5-氟尿嘧啶对体外培养的人类瘢痕疙瘩成纤维细胞MMP-1,MMP-2/TIMP-1,TIMP-2mRNA表达的影响,探讨5-氟尿嘧啶对瘢痕疙瘩的作用机制.方法 组织块法培养人瘢痕疙瘩及正常皮肤组织成纤维细胞,用不同浓度的5-氟尿嘧啶作用于体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞,检测MTT值;利用半定量RT-PCR分析用药前后MMP-1,MMP-2,TIMP-1,TIMP-2 mRNA表达变化.结果 5-氟尿嘧啶在体外能明显降低人瘢痕疙瘩成纤维细胞TIMP-1mRNA的表达;对MMP-1,MMP-2,TIMP-2mRNA的表达无显著影响.结论 5-氟尿嘧啶可能通过降低TIMP-1的表达,从而使MMP-1/TIMP-1相对比例增加,达到促进胶原降解,减少瘢痕形成的作用.     

壳多糖对不同来源成纤维细胞生物学特性的影响

目的:探讨壳多糖对异常瘢痕成纤维细胞生物学活性的作用.方法:以瘢痕疙瘩及增生性瘢痕成纤维细胞为研究对象,正常皮肤成纤维细胞为对照,用含0、0.01%、0.02%、0.04%、0.08%、0.16%、0.24%、0.48%壳多糖培养液对不同来源成纤维细胞体外培养72 h.MTT法检测不同来源成纤维细胞生长增殖情况,24 h 3H-脯氨酸标记法检测胶原的相对量,定量酶联免疫试剂盒检测TGF-β1、b-FGF、IL-8含量,同时观察细胞形态的变化.结果:不同浓度壳多糖呈剂量依赖性抑制不同来源成纤维细胞增殖及胶原、TGF-β1、b-FGF的分泌,同时促进IL-8的分泌,且对异常瘢痕组织的作用明显强于正常皮肤(P<0.05,P<0.01), 而瘢痕疙瘩和增生性瘢痕组间无明显差异.不同来源成纤维细胞无明显形态结构区别.结论:壳多糖可以抑制瘢痕疙瘩和增生性瘢痕成纤维细胞的生长、增殖、合成及分泌胶原功能,有望在异常瘢痕的防治中发挥重要作用.     

大黄素抑制增生性瘢痕成纤维细胞胶原合成及细胞周期的研究

目的 检测大黄素对人增生性瘢痕成纤维细胞的抑制作用,探索大黄素防治瘢痕的机制.方法 进行人增生性瘢痕成纤维细胞的体外培养,将不同浓度的大黄素作用于细胞,以3H-脯氨酸掺入法检测成纤维细胞胶原合成的情况,并以流式细胞术检测成纤维细胞的细胞周期.结果 在不同浓度组大黄素的处理下,人增生性瘢痕成纤维细胞的胶原合成呈现出抑制的趋势;大黄素可以提高细胞G1期比例,而降低S期和G2期比例.结论 大黄素对人增生性瘢痕成纤维细胞胶原合成有显著的抑制作用,其机制和细胞周期阻滞在G1期从而抑制细胞增殖有关.     

五倍子瘢痕膏水溶液对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响

目的探讨五倍子瘢痕膏治疗瘢痕疙瘩的作用机制。方法采取瘢痕疙瘩成纤维细胞原代培养,用四甲基偶氮唑盐比色法测定不同浓度药物对原代培养的第4~8代瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响。结果各不同浓度的药物组对瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖都有一定的抑制作用(P<0.01),并且有时间和剂量依赖。对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞周期研究表明,各药物组S期的细胞百分比显著高于对照组,其间有显著性差异(P<0.01);而各药物组G2 M期细胞百分比却明显低于对照组,其间有显著性差异(P<0.01),并且这种对S期的阻滞作用和对G2 M期细胞的抑制作用随药物浓度的增加而增强(P<0.05)。结论不同浓度的五倍子瘢痕膏水溶液对瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖都有一定的抑制作用,其重要的作用途径是使瘢痕疙瘩成纤维细胞S期的细胞数上升,出现S期阻滞,分裂期的细胞数下降,从而抑制了瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖,并且这种抑制作用有一定的时间和剂量依赖。     

姜黄素对体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞的生物学作用

目的：观察姜黄素体外抗增生性瘢痕的作用．方法：以增生性瘢痕成纤维细胞为靶细胞,分别用不同浓度的姜黄素培养液培养,MTT法测定细胞的增殖情况,透射电镜进行形态学检测,流式细胞仪技术结合PI及Annexin V双标记染色检测姜黄素的促凋亡作用,实时荧光定量聚合酶链反应检测Ⅰ,Ⅲ型前胶原及Bcl-2 mRNA的表达情况．结果：姜黄素对增生性瘢痕成纤维细胞的增殖有抑制作用;透射电镜观察发现,处理组凋亡细胞增多,凋亡细胞表现出典型的超微结构特征;流式细胞仪检测发现,随着药物浓度的增加,增生性瘢痕成纤维细胞的凋亡率也在逐渐升高;实时荧光定量聚合酶链反应检测结果显示,姜黄素处理后Ⅰ、Ⅲ型前胶原及Bcl-2 mRNA的表达水平均下调．结论：姜黄素具有一定的体外抗增生性瘢痕的作用．     

几丁糖作用后不同来源成纤维细胞分泌功能的变化

目的 :探讨几丁糖对异常瘢痕成纤维细胞生物学活性的作用。　方法 :以瘢痕疙瘩及增生性瘢痕成纤维细胞为研究对象 ,正常皮肤成纤维细胞为对照 ,用组织块法进行不同标本成纤维细胞体外培养。分别用 3 H 脯氨酸掺入法检测几丁糖对不同来源成纤维细胞合成及分泌胶原功能的影响 ,定量酶联检测试剂盒测定转化生长因子 β1(TGF β1 )、成纤维细胞生长因子 AB(FGF AB)、白细胞介素 8(IL 8)等。　结果 :几丁糖对不同来源成纤维细胞分泌胶原、TGF β1 、FGF AB等的功能均呈剂量依赖性抑制 ,对IL 8则增加 ,且对各组的影响无显著差异 (P >0 .0 5 )。　结论 :几丁糖可以抑制瘢痕疙瘩和增生性瘢痕成纤维细胞的胶原合成及分泌功能 ,有望在异常瘢痕的防治中发挥重要作用     

α-促黑素细胞激素对瘢痕疙瘩成纤维细胞分泌转化生长因子-β1的影响

目的：研究α-促黑素细胞激素(α-MSH)对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞分泌转化生长因子-β1(TGF—β1)的影响，为研究瘢痕疙瘩的病因提供新的依据。方法：取人的瘢痕疙瘩组织，利用组织块培养法进行成纤维细胞原代培养，DMEM培养液传代、扩增培养，加入10^-6mmol／L浓度的α-MSH，应用ELISA方法检测其水平，分析α-MSH对人瘢痕疙瘩成纤维细胞分泌TGF-β1的影响。结果：10^-6mmol／L浓度的α-MSH可明显促进瘢痕疙瘩成纤维细胞TGF-β1的分泌。结论：一定剂量的α-MSH对体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞TGF-β1的分泌具有促进作用。     

干扰素α-2b对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及端粒酶活性的影响

目的:观察干扰素α-2b(IFNα-2b)对瘢痕疙瘩成纤维细胞生长增殖及端粒酶活性的影响,探讨其在瘢痕疙瘩治疗中的作用机制.方法:取来自8例瘢痕疙瘩和8例正常皮肤的标本进行成纤维细胞原代培养,第3～4代的细胞用于实验.分别于24、48、72、96、120 h以浓度为50、500、5 000、10 000和20 000 IU/ml干扰素α-2b作用于体外培养的瘢痕疙瘩和正常皮肤成纤维细胞,细胞计数和MTT法检测成纤维细胞生长增殖情况,PCR-ELISA法检测不同处理浓度和时间成纤维细胞端粒酶活性.结果:5 000、10 000及20 000 IU/ml IFNα-2b对瘢痕疙瘩和正常皮肤成纤维细胞有生长抑制作用,可明显下调成纤维细胞端粒酶活性,和对照组相比其差异具有非常显著性意义(P＜0.01);经浓度为10 000 IU/ml IFNα-2b处理,在72、96、120 h,处理组细胞生长明显受到抑制、端粒酶活性明显降低,与对照组比较其差异有显著性意义(P＜0.05);且呈现出明显的剂量-效应和时间-效应关系.结论:作为一个负性调节因子,干扰素α-2b能抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的生长增殖,降低成纤维细胞端粒酶活性是其重要作用机制之一.     

无花果叶水提物对体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的抑制

目的探讨无花果叶水提物对人瘢痕疙瘩成纤维细胞的生长抑制作用。方法用无花果叶水提物处理体外培养的人成纤维细胞后,进行细胞形态学检测,细胞增殖试验（MTT法）、氯胺T法检测无花果叶提取物对成纤维细胞胶原蛋白合成的抑制。结果无花果叶提取物处理后,成纤维细胞增殖活性降低;同时,胶原蛋白的合成受到抑制。结论无花果叶提取物对瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖有显著地抑制作用,并抑制其合成胶原蛋白。     

人参皂苷Rg3对培养人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖活性的影响

目的：研究人参皂苷Rg3(GS-Rg3)对体外培养人瘢痕疙瘩的直接抑制作用及可能机制。方法：通过活细胞计数法与MTT比色法分别检测不同浓度GS-Rg3(25、50、100和200 mg·L^-1)在不同作用时间(24、48和72 h)对成纤维细胞增殖活性的影响。 结果：与对照组相比GS-Rg3对瘢痕疙瘩成纤维细胞有抑制作用,随着时间延长及浓度增加,抑制作用有增加趋势。最大抑制浓度为100 mg·L^-1。 结论：GS-Rg3对体外培养人瘢痕疙瘩成纤维细胞有抑制作用,且随着时间延长及浓度增加,其抑制作用增强。     

黄芩素对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨黄芩素对人体瘢痕疙瘩成纤维细胞在增殖、凋亡的影响,为临床瘢痕疙瘩的治疗提供实验基础。方法 MTT法测定黄芩素干预后瘢痕疙瘩成纤维细胞的活力和乳酸脱氢酶的含量;Annexin V-FITC分析成纤维细胞在干预后的细胞凋亡率;蛋白印迹实验检测凋亡蛋白表达水平的变化。结果黄芩素对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖有抑制作用(P0.01),抑制效应呈剂量依赖性,作用24 h后,黄芩素50μM组抑制率为65%,IC50值为(31.34±0.29)μM;黄芩素还可诱导瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡,黄芩素25μM组凋亡率达22.7%,和对照组相比,差异有统计学意义(P0.01);但不影响乳酸脱氢酶的含量。黄芩素作用后明显降低线粒体膜电位,上调凋亡蛋白裂解半胱天冬酶3和裂解半胱天冬酶9的表达,裂解半胱天冬酶8的表达不受影响。结论黄芩素通过抑制细胞增殖和促进细胞凋亡来抑制瘢痕疙瘩生长。     

黄芪总苷液对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖凋亡的影响

目的 探讨黄芪总苷液对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖与凋亡的影响.方法 不同浓度黄芪总苷液(10、20、40ng/mL)干预瘢痕疙瘩成纤维细胞,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;实时(real-time) PCR测定成纤维细胞凋亡抑制基因survivin及细胞凋亡因子p53及Bcl-2的表达;Western blot检测成纤维细胞survivin、p53及Bcl-2蛋白水平表达.结果 MTT法检测发现,与对照组(不加黄芪总苷液)比较,各黄芪总苷液各浓度组细胞490 nm处吸光度(A)值明显降低,瘢痕疙瘩细胞增殖均明显受抑制且呈剂量依赖性(P＜0.05).real-time PCR及Western blot检测结果显示,黄芪总苷液对瘢痕疙瘩成纤维细胞的凋亡相关因子survivin、Bcl-2有不同程度的抑制作用,对P53有不同程度的促进作用,且呈浓度依赖性.结论 黄芪总苷液能抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖,调控其凋亡,从而达到有效治疗瘢痕疙瘩的效果.     

鞘氨醇激酶在人瘢痕疙瘩成纤维细胞中的表达及其作用

目的 探讨鞘氨醇激酶(SphK)1和SphK2在人瘢痕疙瘩成纤维细胞中的表达及其作用.方法 取12例瘢痕疙瘩患者手术切除的瘢痕疙瘩及其周围正常皮肤标本,原代组织块法培养成纤维细胞,分为正常皮肤组、瘢痕疙瘩组和瘢痕疙瘩加转化生长因子β1(TGF-β1)组(瘢痕疙瘩+TGF-β1组).用免疫荧光法观察各组细胞中SphK1和SphK2蛋白的分布;实时PCR法检测SphK1和SphK2 Mrna的表达;蛋白质印迹法检测SphK1和SphK2蛋白的表达.结果 Sphk1蛋白在3组成纤维细胞中均主要分布于细胞核;而Sphk2蛋白在细胞核和胞质中均有表达.瘢痕疙瘩组SphK1mRNA和蛋白表达(分别为0.0608±0.0190、0.8308±0.1093)明显高于正常皮肤组(分别为0.0383±0.0147、0.6800±0.1126,均P＜0.05),但明显低于瘢痕疙瘩+TGF-β1组[分别为0.0790±0.0280(P＜0.05)、1.4267±0.1938(P＜0.01)];SphK2 Mrna和蛋白在3组中的表达差异无统计学意义(均P＞0.05).结论 SphK1在瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖过程中具有重要作用.TGF-β1可促进SphK1在瘢痕疙瘩成纤维细胞中的表达,提示SphK1可能参与了TGF-β信号转导通路的调节.     

Effects of connective tissue growth factor antisense oligonucleotides on the proliferation and collagen synthesis of the cultured human keloid fibroblasts in vitro

Keloid ,akindofcommonlyseenpathologicalscarinclinicalpractice ,characterizedascontinuousinfiltratinggrowthwithhighpostoperativerecurrencerate ,isakeyre searchtopicinthefieldofplasticsurgery .However,thepathogenesisofkeloidisnotclear.Connectivetissuegrowthfactor (CTGF)isthecytokinethatplaysaveryim portantroleinthecourseoffibrosis ,anditsexcessiveex pressionmaybeinvolvedinsomefibroticdiseasessuchasscleroderma ,renalfibrosis ,pulmonaryfibrosis,arterio sclerosis[1] .Inourstudy ,weusedantisensest…     

青蒿琥酯对体外瘢痕疙瘩成纤维细胞的抑制作用

目的:探讨青蒿琥酯对瘢痕疙瘩(Keloid)成纤维细胞(Fibroblast,fb)的增殖抑制作用及其作用机制.方法:将60mg/L的青蒿琥酯作用于体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞24 h,MTT法检测细胞生长抑制率,免疫细胞化学和western blotting法检测分化抑制因子1(Inhibitor of differentiation 1,Id1)的表达情况.结果:在青蒿琥酯的作用下,成纤维细胞的Id1表达降低.结论:青蒿琥酯抑制成纤维细胞的机制可能与抑制Id1的表达有关.     

胶原三螺旋重复蛋白1（Cthrc1）及CD34在瘢痕疙瘩中的表达及其意义

目的探讨胶原三螺旋重复蛋白1（Cthrc1）在瘢痕疙瘩中的表达及其与血管增生的相关性。方法采用免疫组化方法检测了34例瘢痕疙瘩组织及10例正常前胸皮肤组织中Cthrc1、CD34的表达。结果瘢痕疙瘩皮损中Cthrc1表达较其在正常人成纤维细胞中的表达显著增强（P〈0.05）,正常人成纤维细胞弱阳性表达或者不表达;瘢痕疙瘩皮损真皮乳头微血管数较正常人真皮乳头显著增多（P〈0.05）;瘢痕疙瘩皮损中Cthrc1的表达水平与血管密度计数（mi-crovessel density,MVD）均呈显著相关性（r=-0.4889,P〈0.05）。结论 Cthrc1在瘢痕疙瘩皮损中表达异常,高水平的Cthrc1表达可能与瘢痕疙瘩侵袭性有关,并促进真皮乳头血管形成。     

Transforming growth factor-β1 phage model peptides isolated from a phage display 7-mer peptide library can inhibit the activity of keloid fibroblasts

Background Transforming growth factor-β1 (TGF-β1) is known to have a role in keloid formation through the activation of fibroblasts and the acceleration of collagen deposition. The objective of this current study was to isolate TGF-β1 phage model peptides from a phage display 7-mer peptide library to evaluate their therapeutic effect on inhibiting the activity of keloid fibroblasts.Methods A phage display 7-mer peptide library was screened using monoclonal anti-human TGF-β1 as the target to obtain specific phages containing ectogenous model peptides similar to TGF-β1. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was performed to select monoclonal phages with good binding activity, which underwent DNA sequencing. MTT assay and apoptosis assessment were used to evaluate the biological effects of the phage model peptides on keloid fibroblasts. Immunofluorescence assay was employed to show the binding affinity of the model peptides on phages causing keloid fibroblasts. Quantitative real-time PCR analysis was carried out to detect the expressions of nuclear factor κB (NF-κB) mRNA, connective tissue growth factor (CTGF) mRNA and TGF-β receptor Ⅱ (TβRII) mRNA in keloid fibroblasts.Results Specific phages with good results of ELISA were beneficiated. Four phage model peptides were obtained. The data of MTT showed that TGF-β1 and one phage model peptide (No. 4) could promote keloid fibroblasts proliferation,however, three phage model peptides (No. 1-3) could inhibit keloid fibroblasts proliferation. The results of apoptosis assessment showed that the three phage model peptides could slightly induce the apoptosis in keloid fibroblasts. The data of immunofluorescence assay revealed that the model peptides on phages rather than phages could bind to keloid fibroblasts. The findings of quantitative real-time PCR analysis suggested that the expressions of NF-κB mRNA and CTGF mRNA in the three phage model peptide groups decreased, while the expression of TβRII mRNA slightly increased.Conclusions Three phage model peptides isolated from a phage display 7-mer peptide library can inhibit keloid fibroblasts proliferation and induce the apoptosis in keloid fibroblasts. They can inhibit the activity of keloid fibroblasts by blocking TGF-β1 binding to its receptor and then regulating the expressions of NF-κB, CTGF and TβRII.     

ALA-PDT对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖抑制作用的研究

目的 探讨5-氨基酮戊酸光动力疗法(ALA-PDT)在体外对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响,并确定合适的光敏剂浓度和激光能量密度密度.方法 体外培养人体瘢痕疙瘩成纤维细胞.实验分为空白对照组、激光组(仅予不同能量密度He-Ne激光照射)、光敏剂组(仅予不同浓度光敏剂ALA同时培养)和ALA-PDT组(先后予ALA培养和He-Ne激光照射).采用MTT法计算各组细胞增殖抑制率.结果 激光组和光敏剂组对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖无明显抑制作用.ALA-PDT组中,当He-Ne激光剂量(>10 J/cm~2)与ALA浓度(>0.125 mmol/L)达到一定程度时,抑制作用明显,随激光能量密度和药物浓度的同时增大,抑制作用逐渐增大.结论 ALA-PDT对体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖有明显抑制作用,其抑制作用随药物浓度和激光能量密度增加而增加,最佳的参数:ALA浓度为0.25 mmol/L,He-Ne激光能量密度为40 J/cm~2.