洛伐他汀对人类肾小球系膜细胞增殖及细胞周期的影响

目的探讨洛伐他汀(LOV)对人类肾小球系膜细胞(HMC)增殖及细胞周期的影响。方法人类系膜细胞常规培养。实验分为3组:正常对照组(10%胎牛血清)、洛伐他汀组(10μmol/LLOV)、甲羟戊酸(MVA)干预组(10μmol/LLOV 100μmol/LMVA)。每组分别在干预因素作用24,48h时用MTT法检测HMC在490nm波长处的光吸收(A490nm)值,观察LOV对HMC增殖的影响。用流式细胞仪测定HMC的细胞周期G1(DNA合成前期)与S期(DNA合成期)的比率,观察LOV对HMC周期进展的影响。结果MTT法结果显示24,48hLOV抑制HMC增殖,A490nm值分别为0.108±0.010和0.216±0.009,与正常组比较P<0.05。100μmol/LMVA可逆转其作用。细胞周期结果显示24,48hLOV抑制HMC细胞周期进展,S/G1比例分别为0.150±0.009和0.301±0.010,与正常组比较P<0.05。100μmol/LMVA可逆转其作用。结论LOV抑制HMC增殖,阻止细胞周期进展,MVA可逆转其抑制作用。     

氧化低密度脂蛋白对人肾小球系膜细胞增殖周期的影响

目的　研究氧化低密度脂蛋白 (Oxidizedlowdensityliporotein ,Ox LDL)对培养的人肾小球系膜细胞 (Humanme sangialcell ,HMC)增殖周期的影响。方法　将与不同浓度Ox LDL共培养后的HMC制成单细胞悬液 ,经流式细胞仪检测后 ,计算出细胞周期中的G0 G1 期、S期、G2 +M期各时期的百分比及S期抑制百分比、细胞增殖指数。结果　低浓度 ( <10 0 μg ml)的Ox LDL明显刺激HMC增殖 ,表现为G0 G1 期细胞百分比减少及S期细胞增加 ;细胞的S期抑制百分比明显下降 ,而细胞的增殖指数则显著增高 (P <0 .0 1) ;高浓度 ( >15 0 μg ml)的Ox LDL明显抑制HMC增殖 ,表现为G0 G1 期细胞百分比增加及S期细胞减少 ,细胞的S期抑制百分比明显增加 ,而细胞的增殖指数则显著降低 (P <0 .0 1)。结论　不同浓度的Ox LDL可能通过对MC增殖周期的不同影响 ,参与肾小球硬化过程中从MC过多状态到MC过少状态的一系列病理过程     

肿瘤坏死因子α介导内皮素所致人肾小球系膜细胞增殖

目的:探讨内皮素-1(endothelin-1,ET-1)致人肾小球系膜细胞(human mesangial cell, HMC)增殖的介导途径.方法:用ET-1和抗肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNFα)中和抗体孵育HMC,3H-胸腺嘧啶参入法测定HMC增殖,Northern杂交方法测定mRNA表达及放射免疫法测定TNFα蛋白质水平.结果:10-7 mol·L-1 ET-1能刺激HMC增殖,使TNFα mRNA表达上调及TNFα蛋白质分泌增多(12、24 h两组与对照组比较,差异有显著性);抗TNFα中和抗体(0.10～1.00 mg·L-1)能部分抑制ET-1所致HMC增殖,但对ET-1所致HMC TNFα mRNA表达上调无明显影响.结论:ET-1能够刺激HMC增殖并使HMC合成和分泌TNFα;ET-1所致HMC该增殖效应可能部分由TNFα介导.     

甲羟戊酸对人类肾小球系膜细胞增殖的影响

目的探讨甲羟戊酸(MVA)对人类肾小球系膜细胞(HMC)增殖的作用和机制。方法用酶联免疫检测仪检测不同浓度MVA作用下HMC在490 nm波长处的光吸收(A490 nm)值以测定不同浓度和时间点MVA作用下HMC的增殖水平。结果MVA在10-100 nmol/L范围内对HMC增殖有促进作用,且作用呈浓度依赖性,100 nmol/L MVA作用下A490 nm值从正常组0.408±0.019上升到0.509±0.011。100 nmol/L MVA对HMC的增殖作用在12-48 h内呈时间依赖性。12,24,48 hA490 nm值分别为0.201±0.040,0.326±0.019,0.509±0.011。结论MVA是HMC增殖的促进剂。     

IgA肾病患者血清IgA1活化细胞外信号调节激酶并诱发肾小球系膜细胞增殖的作用

目的探讨IgA肾病(IgAN)患者血清IgA1对体外培养的正常人肾小球系膜细胞(HMC)细胞外信号调节激酶(ERK)磷酸化及细胞增殖的刺激作用,并比较其与正常人血清IgA1作用力的异同.方法亲和层析提取正常人及患者血清IgA1,加热聚合(aIgA1),原代培养正常人HMC,Western 杂交测定ERK 蛋白磷酸化,DNA荧光标记技术结合流式细胞仪观察HMC细胞周期变化,直接计数检测HMC增殖.结果 (1)患者及正常人aIgA1均呈时间依赖性诱发HMC ERK信号蛋白磷酸化、DNA 合成和细胞增殖,二者作用趋势相似,作用高峰时间分别为孵育15 min、24～36 h和48～72 h;(2)患者aIgA1刺激强度显著高于正常人aIgA1,在作用高峰时间,患者组和正常人组磷酸化ERK/总ERK 的比值分别为49.5%±10.1%和30.7%±4.4%,S-G2-M期细胞数所占的比例分别为(33.0%±0.3%和30.7%±0.7%,HMC计数分别为(57.78±2.45)×104/ml和(50±1.51)×104/ml,差异均有显著意义(P<0.05);(3)阻断ERK通路只能部分抑制患者aIgA1对HMC增殖的诱导作用. 结论 IgAN患者血清IgA1可以诱导正常人HMC ERK信号蛋白磷酸化并刺激细胞增殖,其作用强于正常人血清IgA1.     

肾舒胶囊对人系膜细胞增殖及分泌肿瘤坏死因子-α和纤连蛋白的影响

目的 :研究肾舒胶囊对人系膜细胞 (HMC)增殖及分泌肿瘤坏死因子 -α(TNF -α)和纤连蛋白 (FN)的影响。方法 :采用血清药理学方法 ,将肾舒胶囊含药血清加入培养的HMC中 ,MTT法测定HMC增殖情况 ,ELISA法测定HMC分泌TNF -α及FN情况。结果 :肾舒胶囊含药血清可明显抑制HMC增殖及其分泌TNF -α和FN ,且其抑制作用呈一定的浓度依赖性和时间依赖性。结论 :肾舒胶囊可能通过抑制MC增殖及其分泌TNF -α等炎症介质和FN等细胞外基质 (ECM)防治肾小球硬化     

Lovastatin对HL-60细胞HMG-CoA还原酶mRNA表达及细胞增殖功能的影响

目的探讨胆固醇合成抑制剂洛伐他汀(10vastatin,LOV)对HL-60细胞HMG-CoA还原酶mRNA表达及细胞增殖功能的影响.方法采用MTT比色法、生长曲线测定、计算细胞生长抑制率、流式细胞仪分析、以及RT-PCR等技术方法,观察LOV对HL-60细胞体外增殖能力、细胞周期分布及HMG-CoA还原酶mRNA表达的影响.结果HL-60细胞经LOV处理后,生长减慢,细胞周期被阻滞在G0/G1期,LOV剂量越大,时间越长,增殖抑制作用越明显;LOV处理HL-60细胞1～3 d,低剂量组(4 lμmol/L)HMG-CoA还原酶mRNA表达上调;而中剂量组(8μnol/L)和高剂量组(16μmol/L)第1天有增加趋势,第2～3天明显降低.结论LOV能显著抑制HL-60细胞增殖,使细胞受阻于G0/G1期,该作用有明显剂量-效应和时间依赖关系;随洛伐他汀处理剂量和时间的不同,HL-60细胞HMG-CoA还原酶mRNA表达表现为上调或下调变化.     

二烯丙基二硫对人白血病细胞HL-60增殖、细胞周期及p21表达的影响

目的观察二烯丙基二硫(DADS)作用于人白血病细胞系HL-60后，细胞增殖、细胞周期及细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白p21表达的变化，探讨DADS抑制HL-60增殖、诱导G／M阻滞的作用机制。方法不同浓度DADS作用HL-60后，MTF法检测细胞增殖情况，流式细胞仪检测细胞周期，Western blot检测p21蛋白水平。结果在一定浓度范围之内，DADS能抑制HL-60细胞增殖，细胞周期发生G2／M期阻滞，并上调p21蛋白水平。结论DADS能通过上调p21的表达而抑制HL-60增殖，诱导其G／M期阻滞。     

ATRA对A549人肺腺癌细胞株增殖、细胞周期的影响及其机制研究

目的探讨全反式维甲酸（all-trans retinoic acid,ATRA）对A549人肺腺癌细胞株增殖、细胞周期的影响及其可能的分子机制。方法ATRA处理人肺腺癌细胞株A549,观察A549细胞生长情况并运用MTT法检测其生长抑制情况,流式细胞仪进行细胞周期分析,Western blot检测CDK4、Rb、p-ERK1/2蛋白的表达,荧光定量PCR法检测CyclinD1mRNA水平。结果ATRA具有抑制A549细胞增殖、使细胞周期阻滞于G0/G1期,并下调p-ERK1/2蛋白表达及CyclinD1mRNA水平的作用。结论ATRA可能通过下调A549细胞p-ERK1/2蛋白表达及CyclinD1mRNA水平,使细胞周期阻滞于G0/G1期,从而影响其DNA的合成,抑制其恶性增殖。     

肾舒胶囊对人系膜细胞增殖及分泌肿瘤坏死因子—a和纤连蛋白的影响

目的：研究肾舒胶绕对人系膜细胞(HMC)增殖及分泌肿瘤坏死因子—a(TMF—a)和纤连蛋白(TN)的影响。方法：采用血清药理学方法，将肾舒胶囊含药血清加入培养的IDMC中，MTT法测定HMC增殖情况，ELLSA法测定HMC分泌TNF-a及FN情况。结果：肾舒胶囊含药血清可明显抑制HMC增殖及其分泌TNF-a和FN，且其抑制作用呈一定的浓度依赖性和时间依赖性。结论：肾舒胶囊可能通过抑制MC增殖及其分泌TNF-a等炎症介质和FN等细胞外基质(ECM)防治肾小球硬化。     

辛伐他汀对人网膜前脂肪细胞细胞周期及caspase-3表达的影响

目的：观察辛伐他汀对人网膜前脂肪细胞细胞周期和caspase-3表达的影响。方法：分离、培养、鉴定人网膜前脂肪细胞,用不同浓度的辛伐他汀干预人网膜前脂肪细胞,MTT法测定细胞增殖,流式细胞仪测定细胞周期,免疫细胞化学法测定caspase-3的表达。结果：实验分离出的人网膜前脂肪细胞经诱导16d后分化为多脂滴的成熟脂肪细胞,10-4mol/L辛伐他汀对人网膜前脂肪细胞的增殖有显著地抑制作用,细胞周期测定显示细胞被阻滞在G0/G1期,且干预后人网膜前脂肪细胞caspase-3表达阳性率显著增加。结论：辛伐他汀可以通过阻滞细胞周期抑制人网膜前脂肪细胞增殖,可能通过增加caspase-3的表达诱导细胞凋亡。     

熊果酸对人肝癌SMMC-7721细胞周期的影响

目的探讨熊果酸（UA）对人肝癌SMMC-7721细胞周期的影响。方法用不同浓度的UA处理SMMC-7721细胞,采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪检测细胞周期的变化,RT-PCR检测细胞周期相关基因p21、p53及增殖细胞核抗原（PCNA）的表达。结果 UA对SMMC-7721细胞生长有显著的抑制作用,且此作用呈明显的时间、剂量依赖性;UA可以诱导SMMC-7721细胞阻滞在S期,RT-PCR结果显示其能够上调p21和p53基因,下调PCNA基因。结论 UA能明显抑制SMMC-7721细胞的生长,引起细胞周期阻滞;细胞周期阻滞的发生与p21、p53、PCNA基因变化相关。     

白藜芦醇对鼠纤维肉瘤S180细胞周期影响及其机制研究

目的:研究白藜芦醇对鼠纤维肉瘤S180细胞的抗肿瘤作用,并探讨其分子机制.方法:用MTT法检测白藜芦醇对鼠纤维肉瘤细胞系S180增殖的影响;PI单标流式细胞术检测白藜芦醇对S180细胞周期分布的影响;Western blot方法检测白藜芦醇对S180细胞 cyclinD1,P21Cip1蛋白表达的影响.结果:白藜芦醇对S180细胞增殖呈双相作用:低浓度促进细胞增殖;高浓度抑制细胞增殖,其抑制作用呈时效和量效关系.白藜芦醇治疗组S180细胞周期发生变化,细胞周期被阻滞于 G0/G1期.白藜芦醇以时间依赖方式下调周期蛋白 cyclinD1 的表达.上调白藜芦醇P21Cip1蛋白表达.结论:白藜芦醇低浓度促进S180细胞增殖,高浓度抑制细胞增殖.白藜芦醇可通过凋节细胞周期蛋白 cyclinD1,p21Cip1的表达调控细胞周期进程,抑制细胞增殖.     

以二氢吡唑为先导的新型化合物靶向hTERT 抑制 SMMC-7721的增殖

目的：观察以二氢吡唑为先导的新型化合物对人肝癌细胞株 SMMC-7721增殖抑制的影响。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法筛选对 SMMC-7721细胞株增殖的抑制作用较强的小分子化合物,并用流式细胞周期实验观察化合物对细胞周期的影响,采用改良的端粒重复序列扩增程序(TRAP)实验检测端粒酶的活性, Western blot 法检测化合物对hTERT 蛋白表达的影响。结果与香豆素类衍生物相对比,新型二氢吡唑类化合物显示出较好的抑制肿瘤细胞增殖的作用;流式细胞周期检测结果显示该化合物通过 S 期阻滞影响细胞增殖;改良的 TRAP 实验结果显示该化合物对端粒酶的活性具有较明显的抑制作用;Western blot 法结果显示该化合物可以显著降低 hTERT 蛋白的表达。结论以二氢吡唑为先导的新型化合物具有抑制 SMMC-7721细胞的增殖的作用和周期阻滞作用,初步发现这主要是通过靶向 hTERT抑制端粒酶的活性实现的。     

c-myc反义寡核苷酸对HL-60细胞增殖及c-myc基因表达的影响

目的：观察c-myc基因反义寡核苷酸(ASODN)对HL-60细胞增殖及c-myc基因表达的抑制作用．探讨ASODN作为药物进行白血病基因治疗的可行性、方法：应用c-myc反义寡核苷酸封闭HL-60细胞c-myc基因、RTPCR方法检测该基因表达抑制情况．流式细胞仪进行细胞周期分析,倒置显微镜观察细胞形态变化．绘制细胞生长曲线,MTT法检测细胞增殖状态。结果：c-myc基因反义寡核苷酸转染HL-60细胞后,c-myc基因表达明显受抑;S期细胞比值由55.6％降至16．7％;细胞生长受抑,增殖能力减弱,其抑制作用具有序列特异性及剂量依赖性。结论c-myc基因反义寡核苷酸对HKL-60细胞增殖及c-myc基因的表达具有明显的抑制作用,有望成为抑制白血病细胞增殖的核酸药物。     

脂质体介导gp130反义寡核苷酸对PC-3细胞增殖影响的研究

目的:研究脂质体介导gp130反义寡核苷酸对人雄激素非依赖性前列腺癌(AIPC)细胞PC-3体外增殖活性的影响。方法:采用细胞计数及MTT比色法评价反义寡核苷酸对PC-3细胞体外增殖的影响,应用荧光免疫细胞化学法检测gp130基因的蛋白表达情况,流式细胞计数评价其对细胞周期的影响。结果:脂质体介导gp130反义寡核苷酸组与正义寡核苷酸组及对照组比较,PC-3细胞增殖活性受到明显抑制。转染48h后,gp130蛋白表达完全受到抑制,细胞周期明显阻滞于G0/G1期,细胞增殖抑制率为53.7%,细胞凋亡率高达51.28%。结论:脂质体介导gp130反义寡核苷酸可抑制人AIPC细胞PC-3体外增殖活性。应用反义技术为AIPC的基因治疗提供了新的思路和探索。     

Inhibition of mesangial cell proliferation by antisense oligodeoxynucleotide targeting preproendothelin-1 mRNA in vitro

Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ１（ＥＴ１）ｏｎｍｅｓａｎｇｉａｌｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｉｎｖｉｔｒｏＭｅｔｈｏｄｓ　Ａｎｔｉｓｅｎｓｅｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ（ＡｓＯＤＮ）ａｎｄｉｔｓｃｏｎｔｒｏｌｓｅｑｕｅｎｃｅｓ,ｓｅｎｓｅ（ＳｅＯＤＮ）ａｎｄｍｉｓｍａｔｃｈ（ＭｉｓＯＤＮ）ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ,ｔａｒｇｅｔｉｎｇｐｒｅｐｒｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ１（ｐｐＥＴ１）ｍＲＮ…     

西咪替丁对肝癌细胞HepG2的抑制作用

目的探讨两咪替丁对人肝癌细胞HepG2生长的抑制作用。方法将不同浓度两咪替丁作用于人肝癌细胞HepG2,运用四氮唑盐法（MTT法）检测西咪替丁对HepG2细胞生长的影响,每个药物浓度6个复孔,实验重复3次,结果取平均值;流式细胞仪检测细胞凋亡和周期。结果MTT法结果显示两咪替丁对HepG2细胞的生长起抑制作用,在浓度（500～3000）mg／L范围内呈时间和剂量依赖性。流式细胞术结果表明,一定范嗣内随着两咪替丁浓度增加HepG2细胞凋亡率也增加,G．期的细胞数增多。结论体外实验中两咪替丁能够抑制人肝癌细胞HepG2增殖．呈时间和剂量依赖性。     

柯里拉京对人胰腺癌Bxpc-3细胞抑制作用的初步研究

目的 观察柯里拉京(Corilagin)对人胰腺癌Bxpc-3细胞的抑制作用。方法 采用MTT法和流式细胞仪技术。结果 Corilagin显著抑制了Bxpc-3细胞的增殖，且呈时间-剂量依赖性；流式细胞仪分析结果显示，Corilagin主要作用于细胞周期的S期，同时也作用于G2-M期。并且有凋亡峰出现。结论 Corilagin可有效抑制Bxpc-3细胞增殖，阻滞细胞于S期和诱导凋亡可能是其作用机制之一。