吉米沙星对肺炎支原体诱导A549细胞分泌IL-6和IL-8的影响

目的 观察吉米沙星对肺炎支原体(Mp) 诱导A594细胞产生IL-8和TNF-α的影响,为临床治疗肺炎支原体肺炎提供理论依据.方法 培养A549细胞和Mp,用不同感染复数的Mp刺激A549细胞,同时加入不同浓度的吉米沙星与之共同孵育,ELISA检测IL-8和TNF-α的分泌情况.结果 Mp能诱导A549细胞产生IL-8和TNF-α,1～20mg/L吉米沙星对其具有抑制作用,但随着Mp感染复数的增加,该抑制效应降低.结论 吉米沙星可抑制Mp诱导的A549细胞分泌IL-8和TNF-α,提示吉米沙星在治疗Mp感染当中可能具有抗菌、抗炎的双重作用.     

甲泼尼龙对肺炎支原体诱导A549细胞分泌IL-8和TNF-α的影响

目的 观察甲泼尼龙(MPL)对肺炎支原体(MP)诱导A549细胞产生细胞因子白细胞介素-8(IL-8)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响,为临床在MP肺炎中合理应用糖皮质激素(GCs)提供理论依据.方法 体外培养A549细胞和MP,用不同感染复数的MP诱导A549细胞,将0.015%的MPL加入到MP诱导的A549细胞中共同孵育,采用双抗体夹心ELISA法检测MPL作用于A549细胞后细胞分泌的IL-8 和TNF-α的含量.结果 MP能显著诱导A549细胞分泌IL-8和TNF-α,0.015%MPL能明显抑制A549细胞分泌IL-8和TNF-α(P<0.01),随着MP感染复数的增加,MPL的抑制作用降低.结论 GCs可抑制MP诱导的A549细胞IL-8和TNF-α的分泌,提示在重症MP肺炎早期,适当应用合理剂量的GCs可减轻炎症反应的强度.     

肺炎支原体诱导A549细胞分泌肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-8的相关性

目的:观察肺炎支原体(MP)诱导A549细胞产生肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-8(IL-8)的相关性,为MP肺炎的临床诊治提供依据。方法:体外培养A549细胞和MP,用感染复数为1:20的MP加入到A549细胞中共同孵育,采用双抗体夹心ELISA法检测不同刺激时间的MP作用A549细胞后分泌TNF-α和IL-8的含量。结果:MP能显著诱导A549细胞分泌TNF-α和IL-8(均P<0.01),经相关回归分析,其产生的水平与刺激时间具有依赖性(r=0.821,0.911,P<0.01),且二者之间具有量的正相关(r=0.942,P<0.01)。结论:MP诱导A549细胞产生的炎性细胞因子TNF-α和IL-8具有量的正相关性。     

IL-1β与IL-18在急性肺损伤中的表达及临床意义

目的 基于细胞焦亡理论研究白介素(IL)-1β与IL-18在急性肺损伤(ALI)中的表达及临床意义.方法 选取2016年1月至2017年1月在广州中医药大学第一附属医院重症医学科收治的符合ALI患者100例为观察组,期间同时招募50例健康体检者为对照组.酶联免疫法检测并比较两组受试者入组后IL-1β及IL-18的血清浓度水平,并比较观察组中存活患者与病死患者血清IL-1β与IL-18的含量.结果 观察组患者经常规治疗后,病死率为38.00%(38/100),而存活率为62.00%(62/100);入组后,两组受试者血清IL-18[(106.43±21.73)pg·mL-1 vs(174.29±36.31)pg·mL-1]与IL-1β[(62.14±15.88)pg·mL-1 vs(94.35±16.23)pg·mL-1]水平比较,对照组均明显低于观察组,差异均有统计学意义(P<0.05);在临床结局方面,病死组和存活组患者的IL-1β[(118.32±19.52)pg·mL-1 vs(87.86±16.49)pg·mL-1]与IL-18[(195.64±36.13)pg·mL-1 vs(136.74±23.09)pg·mL-1]水平比较,病死组均明显高于存活组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 细胞焦亡是ALI患者的重要病理机制之一,ALI的发生发展和IL-1β与IL-18的参与有关.     

NF-kB p65基因在TNF-α诱导的肺泡上皮细胞氧化损伤中的作用

目的 建立急性肺损伤肺泡上皮细胞炎症模型,探讨NF-kB p65基因在炎症诱导的氧化应激损伤中的作用.方法 以肿瘤坏死因子α(TNF-α,10 ng/mL)刺激A549细胞,运用RNA干扰技术沉默核因子KB(NF-KB)p65基因,采用RT-PCR及Western blot法检测沉默效率,ELISA法检测细胞培养上清中自细胞介素1β(IL-1β)、IL-4、IL-6等炎症因子浓度,比色法检测细胞内丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)浓度,MTT法检测细胞存活率.结果 TNF-α刺激A549细胞可在基因及蛋白水平上调NF-KB p65的表达,并增加NF-kB蛋白的核转位;同时细胞培养上清中IL-1β、IL-4、IL-6的浓度升高,细胞内MDA增多,SOD减少,细胞存活率降低.预转染NF-kB p65 siRNA可在基因水平及蛋白水平有效沉默NF-kB p65表达,降低TNF-α诱导的上述各炎症因子及MDA浓度的增高,减少SOD的耗损,A549细胞存活率升高(P＜0.05).结论 NF-kB能介导TNF-α触发的过度炎症反应和氧化应激,导致细胞存活率明显降低;沉默NF-kB p65基因可有效下调炎症反应水平及其诱发的氧化应激,减轻肺结构细胞的损伤.     

慢性乙型肝炎患者干扰素α治疗后T淋巴细胞亚群及细胞因子变化

目的 :探讨干扰素 α(赛若金 )治疗慢性乙型肝炎 (乙肝 )疗效与机体免疫状态的关系。方法 :采用抗体致敏的红细胞花环试验及双抗体夹心酶联免疫吸附测定 ( ELISA)大剂量干扰素α治疗前后乙肝患者 T淋巴细胞亚群 CD4+ 、CD8+ 及 CD4+ /CD8+ 、IL - 1 0、IL- 1 2、TNF-α含量。结果 :干扰素 α治疗前 T淋巴细胞亚群 CD4+、CD8+、CD4+ /CD8+比值及 IL- 1 0、IL- 1 2和 TNF- α含量分别为 ( 39.91± 4.5 2 ) %、( 34.1 3± 4.2 4 ) %、( 1 .1 3± 0 .1 2 ) %及 ( 30 .61± 1 1 .2 1 ) pg· L-1 、( 5 8.1 2± 1 3.5 2 ) pg· L-1 和 ( 2 65 .83± 60 .63) pg· L-1 ,治疗 6个月后治疗有效组分别为 ( 4 3.1 2±4.31 ) %、( 30 .81± 5 .1 3) %、( 1 .41± 0 .1 1 ) %及 ( 1 6.5 1± 8.63) pg·L-1 、( 92 .93± 2 1 .5 2 ) pg·L-1 、( 1 2 6.92± 5 3.83) pg·L-1。结论 :大剂量干扰素 α治疗后慢性乙型肝炎患者抗病毒免疫状态明显增强。     

IL-4对TNF-α和IL-1β诱导的肺癌细胞分泌C3及B因子的研究

目的：探讨IL-4对TNF-α和IL-1β诱导的肺癌细胞分泌C3及B因子的影响。方法：分别用ELISA及RT-PCR法检测C3、B因子蛋白及mRNA表达。结果：TNF-α和IL-1β增强A549细胞分泌C3及B因子分别是对照组的6．4．7．5倍和6．0、8．9倍；IL-4增强A549细胞分泌C3是对照组的4．8倍，对B因子的分泌没有影响，但剂量依赖性上调TNF-α和IL-1β诱导的A549细胞分泌C3及下调TNF-α和IL-1β诱导的A549细胞分泌B因子。C3及B因子的mRNA表达与蛋白水平的结果相一致。结论：IL-4、TNF-α和IL-1β相互作用调节A549细胞分泌C3及B因子。     

铜绿假单胞菌生物被膜诱导肺泡上皮细胞分泌炎性细胞因子的研究

目的：通过研究经铜绿假单胞菌生物被膜作用后,肺泡上皮细胞分泌炎性细胞因子水平的变化,探讨铜绿假单胞菌生物被膜在感染性肺纤维化中的作用。方法：采用体外诱导铜绿假单胞菌形成生物被膜,应用乙醇沉淀法提取细菌被膜并纯化;选用人肺泡Ⅱ型上皮细胞株A549,采用ELISA法定量检测在铜绿假单胞生物被膜藻酸盐作用后上皮细胞上清液中炎症因子IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α的水平。结果：铜绿假单胞菌生物被膜藻酸盐作用后,A549细胞分泌IL-1β和TNF-α能力在48 h内持续升高,但IL-6和IL-8则在24 h达到高峰,此后下降。结论：铜绿假单胞菌生物被膜能诱导A549细胞分泌IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α能力增强或一过性增强,可能与其诱导肺泡炎症,进而促进成纤维细胞活化、增殖及转化有关。     

NF-κB p65基因在TNF-α诱导的肺泡上皮细胞氧化损伤中的作用

目的建立急性肺损伤肺泡上皮细胞炎症模型,探讨NF-κB p65基因在炎症诱导的氧化应激损伤中的作用。方法以肿瘤坏死因子α（TNF-α,10 ng/mL）刺激A549细胞,运用RNA干扰技术沉默核因子κB（NF-κB）p65基因,采用RT-PCR及Western blot法检测沉默效率,ELISA法检测细胞培养上清中白细胞介素1β（IL-1β）、IL-4、IL-6等炎症因子浓度,比色法检测细胞内丙二醛（MDA）及超氧化物歧化酶（SOD）浓度,MTT法检测细胞存活率。结果 TNF-α刺激A549细胞可在基因及蛋白水平上调NF-κB p65的表达,并增加NF-κB蛋白的核转位;同时细胞培养上清中IL-1β、IL-4、IL-6的浓度升高,细胞内MDA增多,SOD减少,细胞存活率降低。预转染NF-κB p65 siRNA可在基因水平及蛋白水平有效沉默NF-κB p65表达,降低TNF-α诱导的上述各炎症因子及MDA浓度的增高,减少SOD的耗损,A549细胞存活率升高（P〈0.05）。结论 NF-κB能介导TNF-α触发的过度炎症反应和氧化应激,导致细胞存活率明显降低;沉默NF-κB p65基因可有效下调炎症反应水平及其诱发的氧化应激,减轻肺结构细胞的损伤。     

白细胞介素-4在脂多糖诱导急性肺损伤模型中的保护作用

  目的  探讨白细胞介素-4（IL-4）在急性肺损伤（acute lung injury,ALI）中的保护作用。  方法  脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导A549细胞形成ALI细胞模型。使用不同浓度的IL-4（0.1 μg/mL、1 μg/mL、10 μg/mL）在不同时长下干预该模型,通过流式细胞术检测A549细胞凋亡率,ELISA法测定A549细胞分泌IL-1、IL-6、IL-10、TNF-α、TNF-γ情况。  结果  IL-4可降低ALI模型中A549细胞凋亡率、抑制Caspase3表达（P < 0.05）,其效果随IL-4浓度增加及干预时长延长而加强;同时促进Bcl-2表达（P < 0.05）,IL-4浓度1 μg/mL干预12 h时效果最佳。上述条件下,IL-4可降低ALI模型中A549细胞的IL-1、IL-6、TNF-α、TNF-γ,并增加IL-10（P < 0.05）。  结论  IL-4可以通过改善ALI体外模型中细胞因子分泌情况,在急性肺损伤中发挥正向调节作用。     

腹腔注射全氟化碳对急性肺损伤大鼠肿瘤坏死因子水平的影响

目的观察腹腔注射全氟化碳对急性肺损伤大鼠肿瘤坏死因子(TNF-α)水平的影响。方法62只雄性Wista大鼠随机分为脂多糖(LPS)组、全氟化碳组(PFC组)、正常对照组(NC组)。PFC组于实验前48 h腹腔注射C8F18 15 ml.kg-1,实验日LPS组、PFC组静脉注射内毒素7 mg.kg-1,分别于2、46、h后处死,比较各组肺脏病理、血清和肺泡灌洗液中TNF-α水平。结果PFC组注射LPS后6 h肺泡灌洗液中TNF-α为9.60±0.61 pg.ml-1,明显低于LPS组(10.750±1.095 pg.ml-1)(P<0.05),其余时间点及血清中TNF-α水平两组无显著差异(P>0.05)。PFC组与LPS组病理评分无明显差异(P>0.05)。结论腹腔注射C8F18原液可以部分降低肺内的TNF-α水平,这可能可以减轻肺部的炎性损伤。     

心先安对缺血预处理心肌保护作用的影响

目的探讨缺血预处理对缺血-再灌注心肌的保护作用及心先安干预的影响。方法32只雄性新西兰大耳白兔,在冠状动脉左室支的上3/4~4/5处穿以丝线,造成心肌缺血再灌注(MIR),随机分为四组:MIR组、心先安+MIR组(MCA+MIR)、缺血预处理IP+MIR组(IP+MIR)、心先安+IP+MIR组(MCA+IP+MIR)。实验结束后测定血浆中内皮素(ET)、心钠素(ANP)和血清肌酸肌酶(CK)的含量,分析心肌梗死范围。结果(1)血浆ET浓度,MIR组和MCA+MIR组分别为67.15±5.10 pg.ml-1和58.44±3.47pg.ml-1(P<0.01);IP+MIR组和MCA+IP+MIR组分别为58.94±3.16 pg.ml-1和53.14±3.24 pg.ml-1(P<0.01)。(2)血浆ANP浓度,MIR组和MCA+MIR组分别为910.09±112.29pg.ml-1和955.33±106.06 pg.ml-1(P>0.05);IP+MIR组和MCA+IP+MIR组分别为1356.18±93.41 pg.ml-1和1402.43±138.78 pg.ml-1(P>0.05),但较MIR组和MCA+MIR组明显增加(P<0.01)。(3)血清CK浓度,MCA+MIR组和IP+MIR的分别为177.25±31.04 mmol.L-1和169.25±31.37 mmol.L-1(P>0.05),明显低于MIR组(554.00±148.62 mmol.L-1)(P<0.01);MCA+IP+MIR组为105.00±13.18 mmol.L-1,明显低于其他组(P<0.01);(4)心肌梗塞范围,MCA+MIR组和IP+MIR组分别为21.13±1.78%和21.58±2.22%,(P<0.05),明显低MIR组32.85±3.18%(P<0.01);MCA+IP+MIR组为13.69±1.01%,较其他组明显减少(P<0.01)。结论(1)IP可使MIR过程中ET、CK浓度和ANP浓度增高,并减少MIR所致的心肌坏死。(2)MCA可降低MIR血浆中ET和CK浓度,并减少MIR所致的心肌坏死。(3)MCA能加强IP降低MIR对血清CK浓度的作用。     

C-反应蛋白增强不稳定性心绞痛病人单核细胞肿瘤坏死因子α的分泌

目的 :比较不稳定性心绞痛 (UAP)与稳定性心绞痛 (SAP)病人和健康志愿者 (对照组 )血单核细胞对C 反应蛋白 (CRP)刺激的反应 ,并观察氟伐他汀的干预效应。方法 :采集并培养UAP病人 (n =13,UAP组 )、SAP病人 (n =15 ,SAP组 )和健康志愿者 (n =15 ,对照组 ) 3组的外周血单核细胞 ,分别用CRP(终浓度 2 0 μg·ml-1,刺激状态 )或不用CRP刺激 (基础状态 ) 2 4h。氟伐他汀干预实验采用不同浓度 (1× 10 -6,5× 10 -6,1× 10 -5mol·L-1)的氟伐他汀预先孵育细胞 2h ,再用CRP刺激 2 4h。酶联免疫吸附试验 (ELISA)检测培养液上清中的TNF α水平。结果 :比较 3组刺激状态与基础状态下TNF αD的分泌 ,CRP刺激条件下 3组的TNF α分泌均明显增加。而刺激状态组组间比较 ,UAP组TNF α为 (15 5 4± 784 ) pg·ml-1,高于SAP组和对照组 [(5 6 0± 135 ) ,(5 5 8± 15 2 ) pg·ml-1],P <0 .0 5。不同浓度 (1× 10 -6,5× 10 -6,1× 10 -5mol·L-1)氟伐他汀干预后 ,UAP组TNF α分泌下降程度高于SAP组和对照组。结论 :CRP直接增强UAP患者血单核细胞TNF α的分泌。氟伐他汀剂量依赖性降低CRP诱导的单核细胞TNF α的分泌。     

Perfluorocarbon attenuates lipopolysaccharide-mediated inflammatory responses of alveolar epithelial cells in vitro

Background  Toll-like receptor-4 (TLR-4) is integrally involved in lipopolysaccharide (LPS) signaling and has a requisite role in the activation of nuclear factor-κB (NF-κB). The exact mechanisms that lend perfluorocarbon (PFC) liquids a cytoprotective effect have yet to be elucidated. Therefore we examined in an in vitro model the cytoprotective effect of PFC on LPS-stimulated alveolar epithelial cellls (AECs). 

Methods  AECs (A549 cells, human lung adenocarcinoma cell line) were divided into four groups: control, PFC, LPS and LPS + PFC (coculture group) groups. Intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1) was detected by ELISA, tumor necrosis factor-α (TNF-α) and interleukin-8 (IL-8) were detected by radioimmunological methods. The expression of TLR-4 mRNA and protein was detected by real time PCR and Western blotting, respectively. The activation of NF-κB was detected by Western blotting (proteins of I-κBα and NF-κB p65). 

Results  ICAM-1, TNF-α and IL-8 were significantly increased in LPS-stimulated AECs groups. The expression of TLR-4 mRNA and protein in LPS-stimulated groups was markedly increased. Meanwhile, NF-κB was activated as indicated by the significant degradation of IκB-α and the significant release of NF-κB P65 and its subsequent translocation into the nucleus. There were no significant effects of PFC alone on any of the factors studied while the coculture group showed significant downregulation of the secretion of ICAM-1, TNF-α and IL-8, the expression of TLR-4 mRNA and the activity of NF-κB. 

Conclusions  Taken together, our results demonstrate that LPS can induce AEC-related inflammatory injury via the activation of TLR-4 and subsequent activation of NF-κB. PFC is able to protect AECs from LPS-induced inflammatory injury by blocking the initiation of the LPS signaling pathway, which is indicated by the significant decrease of TLR-4 expression and NF-κB activation.

     

利鲁唑对戊四氮致癫痫大鼠海马CA3区IL-1β、TNF-α的影响

目的 探讨利鲁唑对戊四氮(PTZ)致癫痫大鼠海马CA3区白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响.方法 将45只大鼠按完全随机设计方法分为对照组、癫痫模型组(PTZ组)和利鲁唑组(Riluzole组),每组15只;造模大鼠连续给予PTZ(35 mg·kg-1·d-1)腹腔注射30 d,3次Ⅳ级或以上发作大鼠为癫痫造模成功;免疫组织化学法检测各组大鼠海马CA3区IL-1β、TNF-α的表达和分布.结果 对照组、PTZ组及Riluzole组大鼠的IL-1β阳性细胞平均光密度值(OD)分别为(0.210±0.002)、(0.241±0.002)和(0.220±0.002),不同组间比较差异均有统计学意义(P<0.05);TNF-α阳性细胞OD值分别为(0.191±0.003)、(0.230±0.003)和(0.202±0.003),不同组间比较差异均有统计学意义(P<0.05);大鼠海马CA3区IL-1β与TNF-α表达水平呈显著正相关(r=0.969,P<0.01).结论 利鲁唑通过抑制癫痫大鼠脑内神经细胞过度表达IL-1β、TNF-α,可能降低其对正常神经细胞的损伤作用,可能减缓癫痫发病对正常神经细胞的损伤,产生神经保护作用.     

阿尔茨海默病患者血清补体C5a水平及其与炎症因子的相关性

目的 探讨阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)患者血清补体C5a水平及其与炎症因子的相关性,阐明其临床意义。 方法 选择杭州市第七人民医院2018年1月—2018年12月的AD患者110例作为AD组,同期健康体检者110例作为对照组。测定血清C5a水平及血清高敏C-反应蛋白(high sensitive C-reaction protein,hs-CRP)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平。 结果 AD组简易精神状态量表(simple mental state scale,MMSE)评分[(15.62±3.21)分]低于对照组[(29.34±3.82)分],t=28.839,P<0.05,C5a水平[(73.51±9.42)pg/mL]高于对照组[(64.29±9.34)pg/mL],t=7.290,P<0.05。AD组血清hs-CRP、IL-1β、IL-6、TNF-α水平[(5.03±0.60)pg/mL、(37.49±7.46)pg/mL、(105.34±13.13)pg/mL、(196.54±12.06)pg/mL]高于对照组(t=45.395、9.939、25.704、7.086,均P<0.05)。AD患者血清C5a、hs-CRP、IL-1β、IL-6、TNF-α水平与MMSE评分均呈负相关(r=-0.421、-0.523、-0.436、-0.445、-0.507,均P<0.05)。AD患者血清C5a与血清hs-CRP、IL-1β、IL-6、TNF-α水平均呈正相关(r=0.564、0.602、0.641、0.539,均P<0.05)。 结论 AD患者血清补体C5a水平升高,C5a水平与AD患者认知功能和血清炎症因子水平关系密切。