组合化学技术在标记化合物研发中的应用

利用生物靶分子在体外对组合文库进行筛选是人为化的理想条件,不能准确模拟体内各种生物分子互相作用(如代谢)的真实情况,且药物的诊疗效果与药物在靶组织的分布密切相关.因此,体内高通量药物筛选已经成为迫切需要.理论上,核素示踪技术可以为体内高通量筛选提供一种无创伤性、高灵敏和定量分析手段.为了证实这一假设,我们合成了99mTc-标记三肽组合文库,并在体内成功地进行了高通量筛选.用99mTc-标记三肽组合文库作为范例,通过无创伤性显像或组织Gamma计数测定组合文库的组织分布和代谢,成功地进行了体内高通量筛选,可用于发现、优化和设计具有组织特异性分布的(标记)化合物.从大于8 000不同化学结构的99mTc-标记三肽化合物中,发现了许多具有组织靶向性特征的99mTc-标记三肽化合物.作者等创立的标记组合文库体内示踪技术是一种可靠、简易、灵敏的体内高通量药物筛选技术,可用于药物(特别放射性药物)的研究开发.     

11C标记的放射性药物在PET/CT中的应用

^11C标记的放射性化合物是用放射性^11C原子取代母体化合物分子中的非放射性^11C原子形成标记化合物,标记前后化合物的结构完全一致,因此不会改变化合物的化学及生物学性质,可以如实地反映物质在体内的分布、代谢及排泄过程。由于生物体内的有机物绝大多数含有C原子,^11C标记能制备的物质种类较多,同时由于^11C标记药物的制备较^18F方便,所用靶材料价廉,因此广泛应用于PET／CT的研究和诊断。     

抗人胰腺癌细胞单克隆抗体SZ-121的放射免疫显像实验研究

目的研究^99mTc标记抗人胰腺癌单克隆抗体SZ-121在荷人胰腺癌裸鼠体内的显像及生物分布,探讨其用于胰腺癌早期诊断的可行性。方法采用皮下种植法建立荷人胰腺癌裸鼠移植瘤模型,以2-亚氨基噻吩盐酸盐（2-IT）修饰SZ-121,^99mTc-葡庚糖酸钠（GH）配体交换法标记SZ-121,经裸鼠尾静脉注入^99mTc-SZ-121后1、4h对裸鼠进行γ显像,于24h测定荷瘤小鼠体内组织的放射性分布。结果γ显像及生物分布显示,^99mTc-SZ-121被静脉注入荷瘤鼠后1h,肿瘤即清晰显影,随时间延长趋于增浓,且瘤组织与非瘤组织的放射性比值（T/NT）也逐渐增高,肿瘤每克组织百分注射剂量率（%IDPg）均高于注射^99mTc-IgG的对照组（P〈0.05）。结论^99mTc-SZ-121具有活体内定位导向能力,显像时间短,可能是一种有前途的胰腺癌显像剂。     

γ计数仪测定99mTc-3PRGD2在肺癌肿瘤模型小鼠中的组织分布

目的 建立一种由γ计数仪测定放射性肿瘤显像剂锝[99mTc]标记的联肼尼克酰胺-3聚乙二醇-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸环肽二聚体(99mTc-3PRGD2)的方法,并研究肺癌肿瘤模型小鼠注射该显像剂后体内组织分布特点.方法 设置4个正常分布组和1个冷肽封闭组(对照组),均经由尾静脉注射该显像剂(8μg/kg)于肺癌肿瘤模型小鼠,正常分布组分别于0.5、1、2和4 h取其组织,对照组在注射放射性药物前0.5 h,腹腔注射0.2 ml 3PRGD2生理盐水溶液(浓度2.5 mg/ml),并于2 h取其组织,肿瘤及其他组织使用γ计数仪检测其放射强度.结果 模型小鼠的肿瘤中放射性药物含量很高,脑组织药物透过量极少;肾和膀胱放射性都很高,提示该药物可能主要经肾排泄;对照组小鼠除肾和膀胱外,其他组织的放射性均很低.结论 该显像剂具有肿瘤靶向性;冷肽可竞争性地抑制99mTc-3PRGD2与整合素αvβ3受体结合.     

99mTc标记的新型肺癌多肽分子探针及其生物学分布

目的探讨99mTc标记特异性靶向肺癌小分子多肽的标记方法,观察99mTc-多肽在正常动物体内的动力学特性及体内生物学
分布特点。方法采用NHS-MAG3双功能螯合法进行99mTc标记小分子多肽（cNGQGEQc）,纸层析法测定标记率,通过体外稳定
性实验、半胱氨酸置换实验及血清蛋白结合实验评价99mTc-多肽的放化特性,测定标记物静脉注射后在新西兰大白兔不同时相
血液放射性清除曲线;分别测定经尾静脉注射7.4 MBq标记物后的小鼠体内各脏器质量数和放射性计数,计算各脏器每克组织
百分注射剂量率（%ID/g）;经耳缘静脉注射37 MBq标记物,应用SPECT显像法观察标记物在大白兔体内的放射性动态分布
变化。结果99mTc 标记多肽的标记率>90%,室温下和血清中37 ℃下放置12 h 放化纯度分别为91%和85%;半胱氨酸置换率
<7%;血清蛋白结合率<5%。99mTc标记多肽在兔体内血放射性清除迅速;在小鼠体内清除较快,主要通过肾脏排泄,其余脏器内
放射性均较低（P<0.05）。结论99mTc标记基于肺癌特异性靶向多肽的标记方法简单,标记率高,具有良好的体内外稳定性,具有
比较理想的体内分布动力学特性。
     

噬菌体展示肽库技术应用的研究进展

噬菌体展示肽库技术是一种新的肿瘤筛选技术，它将随机多肽文库表达于丝状噬菌体的表面，使高通量筛选多肽配体变得容易些。该技术在研究蛋白质之间的相互作用、寻找肿瘤特异性抗原和治疗性靶肽以及在新型诊断试剂和疫苗研制中都有重要用途。     

99mTC-5-FU免疫纳米粒在荷人胃癌SCID鼠模型体内的分布

目的 探索制备99mTc标记载5-FU抗VEGF单克隆抗体纳米粒(99mTc-5-FU-Ab-NPs)的方法,并观察99mTc-5-FU-Ab-NPs胃癌移植瘤模型体内的分布情况.方法 用改进的Schwarz方法对载5-FU抗VEGF单克隆抗体纳米粒进行99mTc标记,经SephadexG250柱分离纯化,用纸层析法测定标记率与放化纯度;ELISA法和免疫组化法测定标记物的免疫活性;经荷人胃癌鼠静脉注射99mTc-Ab-5-FU-NPs(实验组)及99mTc标记鼠源性多克隆IgG纳米粒(对照组),并于2、6 h行放射免疫ECT显像,用感兴趣区(ROI)技术获得实验组和对照组荷人胃癌鼠全身和肿瘤放射性计数及肿瘤与对侧正常组织(T/NT)的放射性比值;24 h显像后处死鼠,测定体内放射性分布,计算每克组织百分注射剂量率(%ID/g)及T/NT比值.高效液相色谱法检测两组鼠肿瘤组织和血液中5-FU的浓度.结果 制备所得99mTc-5-FU-Ab-NPs标记率为90%～95%,抗体的活性在标记前后无明显下降;荷人胃癌鼠放射免疫显像结果提示静脉注射99mTc-5-FU-Ab-NPs 2 h后肿瘤已显影,随时间延长到6 h更清晰,2和6 h肿瘤组织ID%/g均显著高于对照组;6 h时实验组肿瘤组织ID%/g和肿瘤与血液的放射性比值较2 h时升高;同时,实验组肿瘤组织中5-FU浓度随着时间延长呈持续升高且与对照组5-FU浓度相比有显著性差别.结论 本研究制备所得99mTc-5-FU-Ab-NPs能较好地满足放射免疫显像的要求;抗VEGF单克隆抗体的免疫导向作用可靠,注射后6 h,99mTc-5-FU-Ab-NPs在肿瘤组织中有相对较高的特异性浓聚.     

睾丸内注射pEGFP-N1体内转染精子并在山羊早期胚胎成功表达

目的考察自制低叶酸饲料对叶酸复合物分子靶向肿瘤程度的影响。方法采用放射性核素标记方法制备[^99mTc]DTPA-叶酸。两组不同叶酸含量饲料喂养的荷SGC-7901瘤裸鼠行尾静脉注射[^99mTc]DTPA-叶酸，检测4h后组织分布。结果与普通饲料组相比，低叶酸饲料组中[^99mTc]DTPA-叶酸在肿瘤组织分布量显著提高，相对增加量达34．5％，其他非靶组织的分布则明显减少。结论喂食自制低叶酸饲料能显著提高DTPA-叶酸对肿瘤组织的靶向程度，为叶酸复合物分子的肿瘤靶向诊断和治疗时选用低叶酸饲料提供了依据。     

药物代谢稳定性筛选的研究进展

在药物发现过程中，药代动力学研究成本高、耗时长，已成为制约新药开发速度和成功的瓶颈。因此，有必要在药物发现过程的早期阶段进行代谢稳定性检测，及早淘汰代谢性质不良的化合物。随着组合化学和高通量药理活性筛选技术的发展，在药物发现早期阶段进行高通量代谢稳定性检测的需求日渐迫切，本文综述了新药筛选过程中代谢稳定性的研究进展。     

^99mTc标记Laminin—YIGSR肿瘤小显像的实验研究鼠模型

目的探讨^99mTc—YIGsR作为一种新型的肿瘤显像剂在埃氏腹水肿瘤受体显像中的应用价值。方法①制备^99mTc—MAG3-YIGSR探针．以S-乙基-琥珀酰亚胺-巯乙苷肽（S—Acetly-NHS-MAG3）为螯合剂，将^99mTc标记到层黏素多肽片断YIGSR上；②对肿瘤模型组及封闭模型组行^99mTc—YIGSR生物学分布实验；③观察肿瘤模型组、炎症模型组及封闭模型组动物模型显像。结果①反相Sep-PakC18柱层析结果表明，YIGSR可以很好地与S-Acetly—NHS-MAG3偶联，偶联物在室温及中性条件下可完成^99mTc标记，标记率为62形．纯化后放射化学纯度〉95％。室温放置1、2、4h，放射化学纯度分别是91％，86％及81％。未与S—Acetly—NHS-MAG3偶联之YIGSR进行标记时，标记率为4％；②生物学分布结果显示^99mTc—YIGSR在小鼠血液内清除迅速，主要经。肾脏排泄，其次为肝脏；③^99mTcYIGSR静脉注入肿瘤模型组小鼠体内后，15min肿瘤部位有摄取．3h摄取达高峰，肿瘤／对侧肢体比值为11．36．此后显像剂清除较为缓慢，8h时下降至7．50。封闭模型组肿瘤细胞的摄取明显低下，肿瘤／对侧肢体比值是4．61（3h）、0．89（8h）；炎症模型组中，炎症／对侧肢体比值是3．72（3h）、1．29（8h）。与炎症模型组及封闭模型组比较．肿瘤模型组3h、8h肿瘤／对侧肢体的比值明显增高（P〈0．01）。结论通过螯合剂S-Acetly—NHS-MAG。可顺利完成层黏素多肽片段YIGSR的^99mTc标记^99mTcTc—YIGSR用于肿瘤显像具有显像时间早，显像清晰．灵敏度高．特异性强，靶／非靶比值高等特点，是一种有发展前景的新型肿瘤受体显像剂。     

天然抗病毒药物的组合微生物转化

抗病毒药物的研发是现今药物开发的热点,也是难点。分析抗病毒药物研发的关键性困难和障碍,在生物合成药物学、天然药物的生物转化学、药物设计学、免疫学、病毒学等学科知识基础上,借鉴组合化学、组合生物催化、高通量筛选等当今较前沿的药物研发途径和技术,提出了“组合微生物转化”的研发理念和相应途径,以应用于天然抗病毒药物的研发和药理毒理改造。     

青蒿素组合生物合成的研究进展

青蒿素是来自菊科艾属植物青蒿Artemisia annua中的一种抗疟有效成分,近年国际市场对其需求量快速增长。组合生物合成法将成为制备青蒿素的主要有效手段,在该研究领域也取得了重要进展。综述了青蒿素生物合成途径、高产青蒿素工程菌的构建以及青蒿素组合生物合成的基因调控等方面的最新研究进展,分析了该领域目     

中医术语单字格概念与动态组合英译法初探

单字格的使用是古汉语的一大特点.为了证实中医术语以及中医英语翻译中也有此重要的语言现象,本研究采用人工分析结合计算机技术,对中医术语进行初步的多因素研究.首先,从汉语单字着手,分析单字在中医术语群中的词频与占有比例、单字与中医术语内部语法结构的关系以及与中医术语翻译的关系,以此证实提出单字格中医术语这一基本概念的必要性.然后,在单字格术语的基础上,进一步分析单字格与其他字格中医术语的相关性,从而显现出不同字格中医术语的构建与翻译存在高度相关性.最后,以上述分析数据为基础,推出以单字格为基础的中医术语动态组合译法,以期能够为中医术语乃至中医英语翻译开拓新的研究思路.     

确定多元医学参考值范围的三类指标组合指标法

目的建立确定多元医学参考值范围的三类指标组合指标法。方法用概率理论推导公式，用医学实践资料检验三类指标组合指标法确定的多元医学参考值范围的实用性。结果确定多元医学参考值范围的三类指标组合指标法的公式已被建立起，用三类指标组合指标法建立多元医学参考值范围可用于医学实践。结论确定多元医学参考值范围的三类指标组合指标法是一个非常好的统计方法。     

从噬菌体抗体库中筛选D二聚体特异的Fab抗体

目的:从人源性噬菌体抗体库中筛选抗人D二聚体单克隆抗体并进行可溶性表达。方法:以人D二聚体标准品为抗原对所构建的噬菌体抗体库进行两轮“吸附-洗脱-扩增”筛选,从中筛选出抗人D二聚体的噬菌体Fab抗体,并在大肠杆菌细胞中进行可溶性表达。结果:经4次电转化构建了库容为2. 8×108cfu的抗体库,滴度为4. 1×1014PFU/mL,Fab基因重组率为46%。经过淘筛后携带抗人D二聚体抗体的特异性噬菌体得到了明显的富集。用试剂盒以ELISA法检测对人D二聚体的结合活性,得到抗人D二聚体单克隆抗体。筛选出的阳性克隆成功在大肠杆菌细胞中可溶性表达筛选出的阳性克隆在大肠杆菌细胞中可溶性表达。结论:人D二聚体标准品对抗体库的淘筛,富集了表面呈现抗人D二聚体的单克隆抗体的噬菌体,成功构建了人源性抗D二聚体噬菌体抗体,并成功在大肠杆菌细胞中可溶性表达。     

尿苷肽类抗生素生物合成研究进展

尿苷肽类抗生素是一类具有相同母核结构的化合物,其化学结构独特、作用机制新颖、抗菌谱窄,是寻找新型低毒、窄谱抗菌药物的先导化合物或候选药物的最佳选择之一。本文介绍了尿苷肽类抗生素的化学结构特征以及构效关系,着重介绍了其生物合成机制的最新研究进展。尿苷肽类抗生素肽链的合成由非核糖体肽合成酶（non-ribosomal peptide synthetase, NRPS）以非线性机制催化完成,肽链的组装始于中心模块2,3-二氨基丁酸（2,3-diaminobutyric acid, DABA),其后的延伸包括N端氨基酸或二肽与DABA β-氨基间的缩合,以及C端的脲二肽与DABA α-氨基间的缩合。3′-脱氧-4′,5′-烯酰胺尿苷由尿苷经过3步反应转化而来,并在NRPS的催化下与四肽或五肽缩合形成尿苷肽类抗生素。尿苷肽类抗生素生物合成机制的阐明为利用组合生物合成技术获得新结构的尿苷肽类化合物奠定了基础。     

人胸腺素原α的克隆、表达和活性初步研究

目的:构建由免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合的噬菌体展示文库,为应用各种类型免疫球蛋白对该文库进行体外分子进化筛选研究打下基础.方法:PCR扩增制备分别编码Protein A的A、D结构域、Protein G的B2结构域和Protein L的B3结构域的序列片段,片段两端引入Xba Ⅰ酶切位点,3′端引入分别编码0、1、2、3个氨基酸大小随机连接肽的序列,并克隆于pMD-18T载体构建重组质粒.以上述16种重组质粒为模板,PCR扩增分别制备各种单结构域片段及两端部分T载体序列,XbaⅠ酶切,各种酶切片段混合后连接,并克隆于噬菌体展示载体pCANTAB5S,构建噬菌体展示免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合文库,挑取单克隆进行序列测定,评价文库的随机性.结果:噬菌体展示免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合文库库容量为2×107,滴度为1.3×1011;文库中含77%以上的阳性克隆,其中由2个以上单结构域组成的阳性克隆占24%;序列分析显示组合文库包含上述4种单结构域序列,连接方式符合随机连接的特点,随机连接肽的编码核酸也呈随机分布.结论:成功构建了免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合文库,该文库库容、多样性和随机性完全可满足进行体外分子进化研究的要求.     

运用医护配合教学方法进行手术学基本技能综合性实验的探讨

目的 探讨运用医护配合教学方法进行手术学基本技能综合性实验的教学效果.方法 随机抽取济宁医学院2006级本科临床医学专业和护理学专业各2个班共222名学生作为研究对象.其中,临床医学专业和护理学专业各1个班的学生为实验组,运用医护配合教学方法搭配组合共同进行手术学基本技能综合性实验课;另外的临床医学专业和护理学专业各1个班的学生为对照组,按照传统的医护专业分开式教学方法进行手术学基本技能综合性实验教学.教学结束后,比较两组学生的手术学操作考核成绩,并对两组学生进行问卷调查.结果 考核成绩及问卷调查结果表明,运用医护配合教学方法开展手术学基本技能综合性实验,不仅可以提高学生的手术操作技能,而且能够提高学生的学习兴趣,有助于培养学生的团队协作精神,教学效果明显优于传统的医护专业分开式教学方法.结论 医护配合教学方法是一种适合于手术学基本技能综合性实验的教学方法.     

瑞芬太尼对椎间盘退变模型大鼠椎间盘的影响及机制

目的：观察瑞芬太尼对椎间盘退变（intervertebral disc degeneration,IDD）模型大鼠椎间盘的保护作用,并探讨其作用机制。方法：将40只健康SD大鼠随机分为假手术组、模型组和瑞芬太尼低、中、高剂量组,每组8只;采用针刺纤维环法构建IDD模型;瑞芬太尼低、中、高剂量组于造模后以0.2、0.6、1.2μg/（kg·min）经大鼠尾静脉泵注瑞芬太尼30 min,模型组和假手术组给予等量生理盐水泵注。采用苏木精-伊红（hematoxylin-eosin,HE）染色观察椎间盘组织病理变化;酶联免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）检测血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)水平;Western blot检测椎间盘组织过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子-1α(peroxisome proliferator-activated receptor-1α,PGC...     

一线抗痨药物均耐药结核菌体外组合药物作用效果研究

目的 对临床主要一线抗痨药异烟肼(isoniazidum,H)、利福平(rifampin,R)、链霉素(streptomycin,S)和乙胺丁醇(ethambatal,E)均耐药结核菌株进行体外组合药物作用效果研究,拟探讨结核病主要一线药物均耐药再联合用药时,化疗是否有效的临床耐多药结核病治疗问题.方法 采用BacT/ALERT 3D分支杆菌培养系统对10株常规L-J法药敏至少对H、R、S和E(或同时对R)依赖的结核菌株及H37Rv标准敏感菌株,以MIC和平均血药峰浓度分别进行H、R、S及E单一药物和H+E+S及H+S+E+R组合药物药敏平行实验;将3D培养42d结果为阴性的实验瓶混悬液再平行转种于L-J管继续培养,以确定药物作用的效果(观察细菌是否真正被药物杀死).结果 单一药物3D法与L-J法的药敏结果基本一致.3D法单一药物均耐药菌株组合药物MIC和平均血药峰浓度实验结果显示为同程度报告阳性时间延长趋势.3D法单一药物耐药,组合药物未报告阳性的实验瓶,特种于L-J管继续培养均报告阳性.殶例追踪10株分离株均为一线正规化疗失败的复治肺结核患者.结论 小样本菌株实验研究结果提示:体外3D法H、R、S及E单一药物均耐药的临床结核菌株,组合药物(MIC和平均血药峰浓度)对其细菌可有不同程度的相对抑制作用,但没有最终协同杀灭细菌,其实验结果与患者临床疗效相符合.