黄芩苷对糖尿病肾病小鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响*

目的 研究黄芩苷对核因子E2相关因子2-抗氧化反应元件（Nrf2-ARE）信号通路的影响,探讨黄芩苷对糖尿病肾病（DN）的治疗机制。方法 30只C57BL/6雄性小鼠随机分成空白对照组（对照组）、DN模型组（DN组）和黄芩苷干预组（干预组）,每组10只。通过腹腔注射链脲佐菌素复制DN模型并给予黄芩苷药物干预。ELISA法检测小鼠尿白蛋白。对肾小管上皮细胞进行分组：①高糖组：细胞在含25?mmol/L 葡萄糖的高糖培养基中培养。②激活组：细胞在高糖组处理的基础上,用Nrf2激活剂NK-252（20?μmol/ml） 预处理肾小管上皮细胞24?h。③黄芩苷组：细胞在高糖组处理的基础上,用黄芩苷（100?μmol/L）预处理肾小管上皮细胞24?h。④干扰对照组：高糖培养基中培养的细胞在加入黄芩苷的同时,通过Lipofectamine 2000对肾小管上皮细胞转染si-control（si-Nrf2的阴性对照）,24?h后收集细胞。⑤Nrf2干扰组：高糖培养基中培养的细胞在加入黄芩苷的同时,通过Lipofectamine 2000对肾小管上皮细胞转染si-Nrf2（Nrf2的小干扰RNA）,24?h后收集细胞。Western blotting检测Nrf2的表达水平,流式细胞仪检测肾小管上皮细胞凋亡状况。结果 与DN组比较,干预组小鼠的尿白蛋白水平降低、Nrf2的表达水平升高、ARE的活性增强,差异均有统计学意义（P?<0.05）,且干预组小鼠的肾小管扩张变形程度减轻。细胞实验中发现,与高糖组比较,加入Nrf2激活剂或黄芩苷后,均能激活Nrf2,上调ARE活性,降低丙二醛（MDA）表达水平,并抑制肾小管上皮细胞凋亡（P?<0.05）。同时,干扰Nrf2能逆转黄芩苷的作用,促进肾小管上皮细胞凋亡（P?<0.05）。结论 黄芩苷可能通过上调Nrf2-ARE信号通路抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞凋亡,发挥治疗DN的作用。     

黄芩苷通过上调miR-126诱导乳腺癌细胞凋亡的机制研究

目的 用黄芩苷干预人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,观察黄芩苷对乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响及作用机制.方法 用qRT-PCR检测miR-126的表达变化,Western-blot检测Bcl-2、Caspase-9、Caspase-3、p-p38和p53的表达,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡.结果 miR-126在乳腺癌MDA-MB-231细胞中的表达比正常乳腺细胞低,黄芩苷干预乳腺癌细胞后miR-126上调最为明显(P<0.05).用miR-126 mimics、miR-126 inhibitors转染乳腺癌细胞,Western-blot显示黄芩苷及miR-126 mimics作用于人乳腺癌细胞后Bcl-2表达水平下降,Caspase-9和Caspase-3的裂解产物、p-p38、p53表达增加,差异有统计学意义(P<0.05).MTT法显示黄芩苷和miR-126均可抑制乳腺癌细胞的增殖,流式细胞术显示黄芩苷与miR-126 mimics促进癌细胞凋亡.结论 黄芩苷可以抑制乳腺癌细胞的增殖,促进其凋亡,其机制可能与通过上调miR-126调节凋亡相关基因有关.     

Nrf2/HO-1通路通过调控内质网应激改善小鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的作用研究

目的：探讨Nrf2/HO-1信号上调对小鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的改善作用及相关机制。方法：小鼠原代心肌细胞分为正常培养处理和缺氧/复氧处理,其中缺氧/复氧处理的心肌细胞分为模型组、Nrf2过表达组、HO-1过表达组、HO-1沉默+Nrf2过表达组。采用MTT法检测细胞活性,TUNEL染色检测细胞凋亡,ELISA法检测细胞培养上清中心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)及肌酸激酶同工酶(CK-MB)含量,荧光定量PCR检测内质网应激相关分子水平。结果：小鼠心肌细胞缺氧/复氧处理后,心肌细胞活性降低、细胞凋亡增加及细胞培养上清中cTnⅠ和CK-MB含量升高(P<0.05)。Nrf2或HO-1过表达可有效减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤(P<0.05)。给予HO-1基因沉默预处理后,Nrf2过表达产生的细胞保护作用明显减弱(P<0.05)。此外,缺氧/复氧处理后,心肌细胞内GRP78、ATF6、CHOP和Caspase-3的mRNA表达量升高(P<0.05)。Nrf2或HO-1过表达引起GRP78、ATF6、CHOP和Caspase-3表达水平下调(P<0.05),而下调...     

金丝桃苷通过激活Keap1/Nrf2/HO-1通路保护小鼠GC-2细胞的氧化损伤

目的 从Keap1/Nrf2/HO-1通路角度研究金丝桃苷（Hyp）对H2O2所诱导的小鼠精母细胞（GC-2）氧化损伤的保护作用。方法 将GC-2细胞随机分为正常组、模型组、氮乙酰半胱氨酸组（阳性组,NAC,2.5 mmol/L)以及金丝桃苷组（50、100、200 μmol/L）,各组按剂量孵育48 h后,除正常组外其余各组细胞加入H2O（2 150 μmol/L）处理2 h,正常组给予等容量培养基。采用CCK-8法检测细胞的活力,流式细胞仪检测细胞凋亡水平,酶联免疫法检测超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）、过氧化氢酶（CAT）活力以及丙二醛（MDA）含量,Western blot和RT-qPCR检测Nrf2、Keap1、HO-1蛋白及mRNA的相对表达水平,免疫荧光法检测Nrf2核转位水平。结果 150 μmol/L H2O2干预2 h可制备GC-2细胞氧化损伤模型。与正常组比较,模型组GC-2细胞增殖率以及SOD、GSH、CAT活力显著降低,MDA含量、细胞凋亡率,Keap1和Nrf2 mRNA表达显著升高（P<0.05）以及Keap1蛋白表达水平显著升高（P<0.01）。与模型组比较,NAC组和金丝桃苷200 μmol/L组细胞增殖率和SOD、GSH-PX、CAT活力显著升高,MDA含量、细胞凋亡率显著下降（P<0.05）;金丝桃苷200 μmol/L组Keap1 mRNA表达显著下降,HO-1 mRNA表达显著升高（P<0.01）;金丝桃苷200 μmol/L组Nrf2核蛋白（NEs-Nrf2）以及HO-1的蛋白表达显著升高（P<0.05）,Keap1蛋白表达显著下降（P<0.01）;金丝桃苷组出现了明显的核转位现象（P<0.05）。结论 金丝桃苷可能通过激活Keap1/Nrf2/HO-1信号通路,对H2O2诱导的GC-2细胞氧化损伤具有保护作用。     

miR-221对糖尿病肾病小鼠胰岛β细胞功能的保护作用及其机制

目的：研究miR-221对糖尿病肾病（DN）小鼠胰岛β细胞功能的影响,阐明miR-221在DN中的保护作用机制。方法：8周龄野生型雄性C57BL/6J小鼠20只随机分成对照组和DN组,每组10只,对照组小鼠给予正常饮食,DN组小鼠给予高脂饮食,并注射100 mg·kg^-1链脲佐菌素（STZ）诱导部分胰岛素缺陷,对照组小鼠注射同体积柠檬酸缓冲液。之后DN组继续给予高脂饮食,对照组给予正常饮食,饲养10周后收集小鼠血液和尿液,检测血糖、血肌酐、血尿素氮浓度和24 h尿白蛋白排泄率等生理参数。在DN组小鼠中分离得到胰岛细胞。利用Real-time PCR检测胰岛细胞中SOCS3 mRNA表达水平,采用MTT法检测胰岛细胞增殖情况,ELISA法检测胰岛细胞中胰岛素含量和胰岛素的释放水平,荧光素酶报告基因法检测SOCS3活性荧光酶素报告基因活性。结果：成功构建DN小鼠模型。DN组小鼠的血糖、血肌酐、血尿素氮浓度和24h尿白蛋白排泄率均高于对照组（P<0.05）。过表达miR-221后,DN组小鼠胰岛细胞中SOCS3 mRNA表达水平低于正常胰岛细胞（P<0.05）,过表达miR-221后胰岛细胞的增殖能力低于正常胰岛细胞（P<0.05）,荧光素酶报告基因法确定SOCS3为miR-221下游靶基因。过表达miR-221后,胰岛细胞中胰岛素质量分数和胰岛素释放水平均高于正常胰岛细胞（P<0.05）。结论：miR-221通过下调SOCS3水平促进胰岛细胞合成和分泌胰岛素的功能,改善DN小鼠中胰岛细胞的功能障碍。     

miR-122在糖尿病肾病小鼠肾组织中表达变化及作用机制

目的探讨miR-122在糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)小鼠肾组织中的表达变化以及沉默miR-122对DN小鼠肾组织的影响及可能的机制。方法采用链脲佐菌素(STZ)腹腔注射联合高糖高脂饮食建立C57BL/6小鼠DN模型。将造模成功的30只DN小鼠随机分为模型组、antagomir-NC组、antagomir-122组,每组10只,另外选取未做任何处理的健康C57BL/6小鼠10只作为正常对照组。造模成功后,antagomir-122组和antagomirNC组每7 d分别给予尾静脉注射antagomir-122和antagomir-NC进行干预,模型组和正常对照组给予尾静脉注射等量生理盐水代替。8周后收集血清、尿液后处死小鼠取得肾标本,自动生化仪检测血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)和24 h尿蛋白定量水平,过碘酸雪夫(PAS)染色评价肾组织病理学变化,qRT-PCR检测肾组织miR-122的表达水平,试剂盒检测肾组织谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平,Western blot检测肾组织Sirt1、α-SMA、fibronectin蛋白的表达水平。结果与正常对照组比较,模型组小鼠肾小球硬化评分上升(P0.05),肾组织miR-122和α-SMA、fibronectin蛋白的表达明显升高(P0.05),血清Cr、BUN水平,24 h尿蛋白定量水平,肾组织MDA水平明显增高(P0.05),肾组织GSH-Px和SOD水平、Sirt1蛋白表达水平均明显降低(P0.05)。模型组与antagomir-NC比较,各项指标差异无统计学意义(P0.05)。与antagomir-NC组比较,antagomir-122组小鼠肾小球硬化评分下降(P0.05),肾组织miR-122和α-SMA、fibronectin蛋白的表达明显降低(P0.05),血清Cr、BUN水平,24 h尿蛋白定量水平,肾组织MDA水平明显下降(P0.05),肾组织GSH-Px和SOD水平、Sirt1蛋白表达水平均明显升高(P0.05)。结论 miR-122在DN小鼠肾组织中表达升高。沉默miR-122通过抗氧化应激和纤维化对DN小鼠肾组织起到明显的保护作用,其机制可能与其对Sirt1基因的调控有关。     

miR-483-5p在棕榈酸损伤的足细胞中的作用及机制

目的 探究miR-483-5p在棕榈酸损伤的足细胞中的作用及机制.方法 采用不同浓度棕榈酸、miR-483-5p in-hibitor、miR-483-5p mimic和KLF2质粒处理小鼠肾足细胞.Starbase和双荧光报告实验确定miR-483-5p与KLF2的靶向关系.CCK-8实验检测细胞活力,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-483-5p和KLF2水平,流式细胞仪检测细胞凋亡,比色法检测丙二醛(MDA),超氧化物歧化酶(SOD)水平,Western blot 检测 C caspase3、Nephrin 及 Podocin 蛋白表达水平.结果 棕榈酸呈浓度依赖性,抑制足细胞的细胞活力(P＜0.05),升高 miR-483-5p 表达水平(P＜0.05);0.5 mmol/L棕榈酸抑制细胞活力(P＜0.05)、促进细胞凋亡(P＜0.05)以及氧化应激(P＜0.05)的作用可以部分被miR-483-5p inhibitor 逆转.miR-483-5p 直接靶向 KLF2,miR-483-5p mimic能够进一步促进棕榈酸对细胞活力(P＜0.05)及Nephrin、Podocin表达水平(P＜0.05)的抑制作用,及其对氧化应激(P＜0.05)和C caspase3表达水平的促进作用,而KLF2可以部分逆转miR-483-5pmimic的作用.结论 miR-483-5p可以通过调节KLF2的表达进而影响棕榈酸诱导的足细胞损伤,这种调控机制结果有助于对糖尿病肾病患者预后问题的研究.     

miR-200c-3p通过靶向Zeb1调控骨关节炎小鼠模型中软骨细胞凋亡和炎症反应

研究miR-200c-3p在骨关节炎（OA）中的作用及其下游的分子机制。方法 通过破坏内侧半月板的稳定性构建骨关节炎小鼠模型,采用脂多糖（LPS）处理小鼠原代软骨细胞构建骨关节炎细胞模型。采用RT-qPCR检测骨关节炎小鼠模型样本以及对照组小鼠样本中miR-200c-3p的表达水平。采用RT-qPCR检测LPS处理前后小鼠原代软骨细胞中miR-200c-3p和Zeb1的表达水平变化。CCK-8实验检测miR-200c-3p过表达对骨关节炎细胞模型增殖能力的影响;流式细胞术检测miR-200c-3p过表达对骨关节炎细胞模型凋亡水平的影响;酶联免疫吸附试验检测miR-200c-3p过表达对骨关节炎细胞模型中炎症因子（IL-1β、 IL-6、 TNF-α）含量的影响。生物信息学分析RNA pull down实验和荧光素酶报告实验验证miR-200c-3p和下游靶基因相互作用。功能拯救实验验证Zeb1对miR-200c-3p作用的影响。结果 miR-200c-3p在OA小鼠关节软骨组织和LPS处理的软骨细胞中显著下调。Zeb1在LPS处理的软骨细胞中显著上调。miR-200c-3p上调显著抑制了脂多糖诱导的软骨细胞凋亡和炎症损伤。Zeb1是miR-200c-3p的下游靶基因。Zeb1过表达逆转miR-200c-3p过表达对骨关节炎小鼠模型中软骨细胞凋亡和炎症反应的影响。结论 miR-200c-3p 通过靶向Zeb1抑制骨关节炎小鼠模型中软骨细胞凋亡并且缓解炎症反应,有助于发现骨关节炎治疗的有效靶点。     

MicroRNA-200c 对Ox-LDL 介导的 人主动脉内皮细胞损伤的影响

目的 探讨microRNA-200c（miR-200c）在氧化低密度脂蛋白（Ox-LDL）损伤人主动脉内皮细胞 （HAEC）中的表达及其对细胞活力、凋亡的影响及相关机制。方法 采用qRT-PCR 检测Ox-LDL 损伤HAEC miR-200c 的表达水平;转染miR-200c inhibitor 抑制miR-200c 的表达后,分别运用MTT 和流式细胞术检测 细胞活力和细胞凋亡情况;Western blot 检测Slit2 蛋白表达水平;荧光素酶报告系统检测miR-200c 对Slit2 的 靶向调节。结果 Ox-LDL 呈浓度和时间模式刺激HAEC 中miR-200c 表达上调。抑制miR-200c 表达可上调 细胞活力,抑制Ox-LDL 诱发的细胞凋亡。抑制miR-200c 可上调Slit2 蛋白表达水平。双荧光素酶报告实验转 染In-miR-200c 的细胞内Slit2 相对荧光强度高于对照组。沉默Slit2 可部分逆转In-miR-200c 对细胞活力的促 进作用和对细胞凋亡的抑制作用。结论 miR-200c 在Ox-LDL 诱导的HAEC 表达上调,抑制miR-200c 的表达 可通过靶向作用于Slit2 抑制Ox-LDL 诱导的细胞凋亡。     

褐藻素通过调控Nrf2/Keap1通路缓解糖尿病大鼠心肌肥大

目的 探索褐藻素（FX）对糖尿病心肌病的保护效应和作用机制。方法 腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型,进行分组：糖尿病组（DM）、褐藻素干预糖尿病组（DM+FX）和二甲双胍干预糖尿病组（DM+Met）,另取正常大鼠给予正常喂养作为正常组（Con）。造模成功后连续12周每日灌胃给药,褐藻素组每日给予200 mg/kg褐藻素灌胃,二甲双胍组每日给予230 mg/kg灌胃,糖尿病组同步灌胃生理盐水。HE染色观察各组大鼠心脏细胞肥大情况;Western blot法检测大鼠心脏中纤维化蛋白TGF-β1和FN蛋白表达水平。H9C2细胞分为3组：正常糖组（NG,5.5 mmol/L葡萄糖）、高糖组（HG,45 mmol/L葡萄糖）和褐藻素干预高糖组（HG+1 μmol/L FX）。FITC标记的鬼笔环肽检测大鼠心肌细胞H9C2表面积变化;qRT-PCR法测定各组细胞肥大因子ANP、BNP和β-MHC基因表达变化;Western blot法检测各组大鼠心脏组织和H9C2细胞中Nrf2、Keap1、HO-1、SOD1蛋白表达水平;DCFH-DA探针检测细胞内活性氧水平变化。结果 褐藻素改善糖尿病大鼠心肌纤维化和心肌细胞肥大,同时上调心脏组织中Nrf2和HO-1蛋白表达,抑制Keap1蛋白表达（P<0.05）。褐藻素可抑制高糖诱导H9C2心肌细胞表面积增加,降低ANP、BNP和β-MHC的mRNA表达水平（P<0.05）。褐藻素可促进高糖诱导的H9C2细胞中Nrf2入核,上调下游靶蛋白SOD1和HO-1蛋白表达（P<0.05）来增强细胞抗氧化能力,降低细胞内活性氧的水平。结论 褐藻素具有良好的抗糖尿病心肌纤维化和心肌细胞肥大作用,同时上调Nrf2信号通路并促进下游抗氧化蛋白SOD1和HO-1的表达,降低活性氧水平。     

Keap1-Nrf2/ARE信号通路介导黄连素调节氧化应激改善小鼠糖尿病肾病

目的 采用小鼠糖尿病肾病的模型并结合氧化应激,探讨黄连素改善糖尿病并发症中肾脏病变的作用和机制。方法 将糖尿病肾病（DN）小鼠分别灌胃给予二甲双胍（0.2g/kg）、黄连素低、中、高剂量（0.036、0.072、0.144g/kg）8周。检测血清中相应指标;检测肾脏中活性氧（ROS）及超氧化物歧化酶（SOD）水平,Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1（Keap1）、核因子E2相关因子2（Nrf2）及还原型辅酶Ⅱ氧化酶4（NOX4）蛋白表达;检测24h尿蛋白等指标。结果 黄连素可显著降低DN小鼠血糖,增加胰岛素分泌,降低24h尿蛋白、血清尿素氮和肌酐、上调SOD和Nrf2水平,下调ROS、Keap1及NOX4水平。结论 黄连素具有改善小鼠糖尿病肾病的作用,且中、高剂量作用较优,其相关机制可能与调控Keap1-Nrf2/ARE信号通路,从而改善氧化应激有关。     

miR-34a通过靶向抑制Notch信号通路减轻糖尿病肾病小鼠的足细胞损伤

目的 探讨miR-34a介导Notch信号通路对糖尿病肾病（DN）足细胞损伤及凋亡的影响。方法 体外实验：通过RT-PCR法检测高糖（30 mmol/L）环境下足细胞中miR-34a表达水平,构建miR-34a过表达足细胞系（miR-34a组）及其阴性对照（miR-NC组）,使用荧光素酶实验验证miR-34a与Notch 1的靶向关系,构建Notch 1过表达足细胞系（Notch 1组）和miR-34a、Notch 1均表达升高细胞系（miR-34+Notch 1组）;采用CCK-8法检测足细胞存活情况,流式细胞法检测细胞凋亡情况,Western blot法检测细胞凋亡关蛋白水平。体内实验：通过高脂饮食和链脲佐菌素建立DN小鼠模型并分为模型组、miR-34a组（n=15/组）,另选15只不做干预小鼠为对照组,miR-34a组和模型组小鼠分别尾静脉注射agomir-34a[80 mg/(kg·d)]、agomir-NC[80 mg/(kg·d)],连续注射3 d,4周后,HE染色、TUNEL法分别观察肾组织病理、凋亡情况,Western blot检测肾组织凋亡相关蛋白和Notch 1蛋白表达水平。结果 高糖环境下足细胞中miR-34a表达水平低于正常糖诱导下足细胞和高渗透压下作用下的足细胞（P<0.05）,miR-34a组足细胞中Notch 1表达水平低于miR-NC组（P<0.05）;Notch 1 wt/miR-34a组荧光素酶活力值低于Notch 1 wt组（P<0.05）,而Notch 1 mut/miR-34a组和Notch 1 mut/miR-NC组荧光素酶活力值差异无统计学意义（P>0.05）;miR-34a组足细胞的A值高于miR-NC组（P<0.05）,而细胞凋亡率和caspase-3、caspase-9、Bax/Bcl-2蛋白水平均低于miR-NC组（P<0.05）;Notch 1组足细胞的A值低于miR-NC组（P<0.05）,而细胞凋亡率和caspase-3、caspase-9、Bax/Bcl-2蛋白水平均高于miR-NC组（P<0.05）;miR-34a+Notch 1组足细胞的A值低于miR-34a组（P<0.05）,而细胞凋亡率和caspase-3、caspase-9、Bax/Bcl-2蛋白水平均高于miR-34a组（P<0.05）。对照组小鼠肾组织结构清晰完整,模型组小鼠肾小球肿胀、体积增大,miR-34a组小鼠肾组织病变程度得到改善;模型组小鼠肾组织 miR-34a 表达水平低于对照组（P<0.05）,miR-34a 组小鼠的肾组织 miR-34a 表达水平高于对照组（P<0.05）;模型组小鼠肾组织凋亡指数和caspase-3、caspase-9、Notch 1蛋白水平高于对照组（P<0.05）,miR-34a组小鼠肾组织凋亡指数和caspase-3、caspase-9、Notch 1蛋白水平低于模型组（P<0.05）。结论 miR-34a可通过靶向作用Notch 1改善DN足细胞损伤和凋亡。     

miR-141-3p靶向MYT1L促进结肠癌细胞的恶性进展

目的：探究微小RNA-141-3p(miR-141-3p)通过靶向作用髓磷脂转录因子1(MYT1L)蛋白对结肠癌细胞迁移、增殖、凋亡的影响。方法：在结肠癌HCT8细胞中转染miR-141-3p模拟物(miR-141-3p mimic),qRT-PCR检测miR-141-3p的mRNA表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell法检测侵袭和迁移,Western blot检测MYT1L的蛋白表达水平。生物信息学软件预测MYT1L可能是miR-141-3p的靶基因后用荧光素酶报告基因鉴定。结果：miR-141-3p在结肠癌组织细胞中显著上调且对患者预后有显著影响,在转染了miR-141-3p的HCT8细胞中,细胞的增殖、迁移能力均显著提高,而细胞凋亡显著下降。双荧光素酶报告基因的结果显示miR-141-3p与MYT1L基因可以靶向结合。共转染MYT1L过表达载体和miR-141-3p mimic的细胞中,相对于只转染了MYT1L过表达载体的细胞来说,细胞表型恶化程度显著升高。结论：miR-141-3p通过靶向调控MYT1L的表达促进结肠癌细胞表型的恶化。     

活血胶囊激活 PI3K/Akt/Nrf2/HO-1通路对血管内皮细胞发挥抗氧化损伤作用

目的研究活血胶囊(HXJN)对血管内皮细胞的抗氧化损伤作用分子机制。方法 采用WST-1法检测细胞活力；qRT-PCR和Western blot技术检测血红素加氧酶-1（HO-1）的表达；检测 HXJN对Akt和转录因子Nrf2的激活作用，并分析其对HO-1表达的影响。结果 HXJN可显著减轻 H2O2 对细胞活力的抑制作用。HXJN可上调HO-1表达水平。HXJN可诱导Akt和Nrf2磷酸化，并促进Nrf2核转位；LY294002、perifosine和ML385均抑制 HXJN对HO-1的上调，LY294002可抑制Nrf2核转位。结论 HXJN促进HO-1表达而发挥抗氧化损伤作用，Akt和Nrf2参与调控HO-1表达。     

脂氧素A4 通过激活PPARγ/Nrf2/HO-1途径保护HK-2细胞缺氧/复氧损伤

目的:探讨脂氧素A4(lipoxin A4,LXA4)在人肾脏近曲小管上皮细胞(HK-2)缺氧/复氧损伤中的保护作用及可能机制?方法:LXA4预处理HK-2细胞后进行缺氧/复氧处理,CCK-8法检测细胞活性水平,ELISA法检测细胞上清液γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)?氨基葡萄糖苷酶(NAG)和亮氨酸氨基肽酶(LAP)水平,羟胺法检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性,硫代巴比妥酸法检测细胞丙二醛(MDA)水平,实时定量PCR 和Western blot法分别检测HK-2细胞的过氧化物酶体增殖子活化受体γ(PPARγ)和血红素加氧酶-1(HO-1)的mRNA和蛋白表达的变化,利用RNA干扰技术干扰PPARγ表达后检测HO-1和核因子E2相关因子2(Nrf2)的表达?结果:LXA4预处理的缺氧/复氧组细胞活性和SOD活性明显升高,细胞中γ-GT?NAG?LAP和MDA水平降低,而加入HO-1抑制剂锌原卟啉(ZnPP)和转染PPARγ的siRNA后,LXA4对HK-2细胞缺氧/复氧损伤的保护作用被阻断;此外,LXA4预处理的缺氧/复氧组HO-1?PPARγ和Nrf2表达均明显升高,并且LXA4预处理诱导的HO-1和Nrf2过表达能够被PPARγ siRNA所抑制?结论:LxA4预处理能够通过诱导HK-2细胞的HO-1高表达对抗HK-2细胞缺氧/复氧损伤,其机制与激活PPARγ/Nrf2有关?     

黄连素激活核因子E2相关因子/血红素氧合酶-1增强内皮细胞抗过氧化氢损伤

目的探讨核因子E2相关因子(Nrf2)/血红素氧合酶-1(HO-1)是否参与黄连素(BBR)介导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)抗过氧化氢(H2O2)引起的凋亡以及潜在的机制。方法不同浓度BBR(5和10μmol/L)预处理细胞12 h后,应用H2O2(200μmol/L,4 h)构建细胞损伤模型,CCK-8法检测细胞活性; TUNEL标记凋亡细胞; DCFH-DA检测细胞活性氧(ROS)水平;免疫荧光法标记Nrf2细胞内的分布情况; Western blot法检测Nrf2/HO-1通路和凋亡相关蛋白含量。此外,应用干扰核糖核酸(siRNA)特异性阻断Nrf2/HO-1后,重复上述检测。结果相对于对照组,H2O2降低细胞活性,增加细胞凋亡及ROS水平(P 0.05)。不同浓度的BBR有效抑制上述变化,且呈"剂量依赖性"(P 0.05)。同时,BBR进一步促进H2O2导致的Nrf2核内移位及HO-1表达增加(P 0.05)。应用siRNA不仅可以显著抑制Nrf2/HO-1的活化,而且明显逆转BBR对HUVECs的保护作用(P 0.05)。结论 BBR通过激活Nrf2/HO-1通路,增强HUVECs清除ROS的能力,从而发挥抗H2O2损伤的作用。     

低氧经miR-130a-3p靶向Sirt7对人滋养细胞迁移、侵袭及上皮-间质转化的影响

目的 探究低氧条件下miR-130a-3p靶向去乙酰化酶7(Sirt7)对人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo迁移、侵袭及上皮-间质转化(EMT)的影响及其作用机制。方法 以HTR-8/SVneo细胞为研究对象，将miR-130a-3p inhibitor及其阴性对照inhibitor-NC转染至细胞中或联合Sirt7抑制剂97491干预，采用低氧(1%O₂)处理48 h, qRT-PCR检测细胞中miR-130a-3p及Sirt7 mRNA表达水平；Transwell检测细胞迁移和侵袭能力；Western blot检测细胞中Sirt7、HIF-1α、MMP-2、MMP-9、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平；TargetScan Human 7.1在线软件和双荧光素酶报告基因实验预测并验证miR-130a-3p与Sirt7的靶向关系。结果 低氧可上调HTR-8/SVneo细胞中miR-130a-3p表达水平，下调Sirt7 mRNA和蛋白表达水平；miR-130a-3p低表达可升高Sirt7 mRNA表达水平；提高细胞迁...     

miR-98对肝癌 HepG2细胞增殖、凋亡以及侵袭、迁移能力的影响

目的：研究 miR-98对肝癌 HepG2细胞增殖、凋亡和侵袭、迁移能力的影响及其可能机制。方法将 miR-98mimics、mimics-NC、miR-98inhibitor、inhibitor-NC 瞬时转入肝癌 HepG2细胞内,应用噻唑盐( MTT)法、流式细胞仪、Tr-answell 小室实验检测 miR-98对肝癌 HepG2细胞增殖、凋亡以及侵袭、迁移能力的影响,进一步用 Western blot 法检测各组 Bcl-2蛋白的表达水平。结果 MTT 实验表明 miR-98过表达后,肝癌细胞的增殖能力明显低于对照组;Annexin V-FITC / PI 凋亡实验证实上调 miR-98表达后,细胞的凋亡率较对照组升高;Transwell 小室实验表明上调 miR-98可使肝癌细胞的侵袭、迁移能力减弱。而当 miR-98被抑制后,肝癌HepG2细胞的增殖及侵袭、迁移能力则明显增强,凋亡率则下降。 Western blot 实验检测发现 miR-98过表达后,Bcl-2的表达降低。结论 miR-98可能在肝癌的发生、发展中发挥着抑癌基因的作用;miR-98可能通过下调 Bcl-2的表达,促进肝癌 HepG2细胞凋亡。     

miR-222下调高糖下小鼠系膜细胞TIMP3表达

目的探讨miR-222是否通过靶向调控TIMP3表达参与糖尿病肾病的发生过程,从而进一步揭示糖尿病肾病的发病机制。方法运用qRT—PCR检测经25mmol／L葡萄糖处理的小鼠系膜细胞（HG组）和对照小鼠系膜细胞（5mmol／L葡萄糖,NG组）中miR-222和TIMP3的表达;将miR-222mimics转染小鼠系膜细胞,以TIMP3siRNA为阳性对照,采用Westernblot检测其对TIMP3蛋白表达水平的影响。结果qRT—PCR检测结果显示,miR-222在经高糖处理的小鼠系膜细胞中的表达相对比正常浓度糖处理的小鼠系膜细胞中明显上调,而TIMP3在经高糖处理的小鼠系膜细胞中mRNA的表达相对比正常浓度糖处理的小鼠系膜细胞中明显下调;Westernblot结果显示,过表达miR-222或干扰TIMP3可抑制TIMP3蛋白的表达（P〈0．05）。结论miR-222可能通过调控TIMP3的表达参与糖尿病肾病的发生发展。     

miR-27a对胃癌细胞凋亡影响的体外研究

目的:探讨miR-27a对胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:分别构建miR-27a过表达和敲除FOXO1的SGC-7901细胞株,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况。蛋白质印迹法（Western blot）检测细胞凋亡和自噬相关蛋白p53、BCL-2、LC3I、LC3II水平,同时检测上调及下调miRNA-27a的胃癌细胞FOXO1的表达水平。双荧光素酶报告基因分析法验证miR-27a的靶基因。实时聚合酶链式反应（Realtime PCR） 检测miR-27a高表达质粒、miR-27a低表达质粒的转染效率,并检测过表达/敲低miRNA-27a的胃癌细胞中FOXO1 mRNA的水平。结果:（1）上调miR-27a的细胞凋亡率较对照组明显下降,且凋亡相关蛋白BCL-2表达上调,p53水平下降,自噬相关蛋白LC3I、LC3II的表达较对照组下调（P<0.05）。而敲低胃癌细胞中FOXO1后得到了与上调miR-27a相似的实验结果。（2）双荧光素酶报告基因验证结果显示miR-27a与FOXO1存在靶点关系。miR-27a高表达质粒、miR-27a低表达质粒分别成功转染至胃癌细胞中。上调或下调胃癌细胞中miR-27a后,SGC-7901细胞中FOXO1 mRNA水平无明显变化（P>0.05）,FOXO1基因表达在蛋白水平相应下调或上调。结论:体外实验中,miR-27a可通过靶向抑制FOXO1的表达抑制胃癌细胞凋亡,miR-27a/ FOXO1轴可以为胃癌治疗提供新的策略。