自噬抑制剂在内质网应激状态下对肝癌HepG2细胞和正常肝细胞L-02作用的差异

目的：研究自噬在内质网应激( ERS)状态下对肝癌HepG2细胞和正常肝细胞L-02作用的差异。方法体外常规培养的人肝癌HepG2细胞和正常肝细胞L-02,分别给予衣霉素( TM)单药和TM联合自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤( TM+3-MA)或氯喹( TM+CQ)作用12、24、48 h后,采用噻唑蓝( MTT)法检测细胞活力变化,流式细胞术检测细胞凋亡率, Western blot法检测自噬蛋白LC3的变化。结果 TM可引起HepG2细胞和L-02细胞死亡并呈时间依赖关系,3-MA或CQ均可增加TM对HepG2细胞的生长抑制作用,24 h细胞存活率分别为TM+3-MA组(60%)、TM+CQ组(72%)、TM组(86%),差异有统计学意义(P<0．01);但对于L-02细胞,其存活率分别为83%、84%、83%,活力没有明显差异;流式细胞术显示TM+3-MA、TM+CQ和TM组对HepG2细胞的凋亡率分别为15%、11%、7%,差异有统计学意义( P<0．01),但对L-02细胞,凋亡率分别为16%、17%、16%,未见明显差异;Western blot法结果显示TM作用引起两种细胞自噬增加,自噬抑制剂3-MA与CQ可引起两种细胞自噬作用减弱。结论自噬抑制剂(3-MA 或 CQ)均可显著增加TM对肝癌HepG2细胞的生长抑制作用,但对正常肝细胞L-02的生长抑制作用差异无统计学意义。自噬在ERS状态下可对肝癌细胞的生存提供保护,但对正常肝细胞无保护作用。     

miR-98对肝癌 HepG2细胞增殖、凋亡以及侵袭、迁移能力的影响

目的：研究 miR-98对肝癌 HepG2细胞增殖、凋亡和侵袭、迁移能力的影响及其可能机制。方法将 miR-98mimics、mimics-NC、miR-98inhibitor、inhibitor-NC 瞬时转入肝癌 HepG2细胞内,应用噻唑盐( MTT)法、流式细胞仪、Tr-answell 小室实验检测 miR-98对肝癌 HepG2细胞增殖、凋亡以及侵袭、迁移能力的影响,进一步用 Western blot 法检测各组 Bcl-2蛋白的表达水平。结果 MTT 实验表明 miR-98过表达后,肝癌细胞的增殖能力明显低于对照组;Annexin V-FITC / PI 凋亡实验证实上调 miR-98表达后,细胞的凋亡率较对照组升高;Transwell 小室实验表明上调 miR-98可使肝癌细胞的侵袭、迁移能力减弱。而当 miR-98被抑制后,肝癌HepG2细胞的增殖及侵袭、迁移能力则明显增强,凋亡率则下降。 Western blot 实验检测发现 miR-98过表达后,Bcl-2的表达降低。结论 miR-98可能在肝癌的发生、发展中发挥着抑癌基因的作用;miR-98可能通过下调 Bcl-2的表达,促进肝癌 HepG2细胞凋亡。     

a-硫辛酸对早期糖尿病性视网膜病变大鼠视网膜组织血管内皮生长因子和蛋白激酶-C表达的影响

目的:观察a-硫辛酸对早期糖尿病性视网膜病变大鼠视网膜组织血管内皮生长因子(VEGF)和蛋白激酶-C(PKC)表达的影响,探讨a-硫辛酸防治早期糖尿病视网膜病变的作用机制.方法:雄性Wistar大鼠57只,其中42只采用链脲佐菌素一次性腹腔注射制作糖尿病模型,造模成功后随机分为a-硫辛酸治疗组(19只)和糖尿病组(18只),另外15只大鼠为正常对照组.a-硫辛酸治疗组隔d给予a-硫辛酸腹腔注射,精尿病组及正常对照组给予等量生理盐水,连续12周,记录给药4、8及12周各组空腹血糖.12周后处死实验大鼠,取眼球.制作视网膜组织切片,采用免疫组织化学染色检测VEGF和PKC蛋白的表达.结果:①给药4、8及12周,3组大鼠空腹血糖水平相比,差异有统计学意义(F时间=3.21,P:0.02),其中a-硫辛酸治疗组和糖尿病组空腹血糖水平均高于正常对照组(F组间=615.31,P<0.001),但2组间空腹血糖水平差异无统计学意义(P>0.05).②给药12周后3组大鼠‘视网膜VEGF和PKC蛋白表达水平差异有统计学意义(F=74.02和169.69,P均<0.01),其中糖尿病组与a-硫辛‘酸治疗组大鼠均较正常对照组VEGF和PKC蛋白表达水平上调(P均<0.05),但a-硫辛酸治疗组视网膜组织VEGF和PKC蛋白表达水平较糖尿病组降低(P均<0.05).结论:a-硫辛酸可下调早期糖尿病大鼠视网膜组织中PKC和VEGF蛋白的表达,干预早期糖尿病视网膜病变的发生、发展.     

葡萄糖调节蛋白和环氧合酶-2在肝癌组织中的表达及其相关性研究

目的 研究葡萄糖调节蛋白(GRP78)和环氧合酶-2(COX-2)在肝癌组织中表达及与临床病理资料的关系.方法 采用免疫组化法检测144例肝癌组织芯片中GRP78和COX-2的表达情况.结果 肝癌组织中GRP78、COX-2的阳性表达率分别为47.22%、56.94%;GRP78与乙肝病毒感染史、丙氨酸氨基转移酶(ALT)差异有统计学意义(P<0.05),但与性别、年龄、肝硬化病史、甲胎蛋白(AFP)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、肿瘤大小、分期、分化程度差异无统计学意义(P>0.05),COX-2的表达与肿瘤组织分化程度差异有统计学意义(P<0.025),与性别、年龄、肝硬化病史、乙肝病毒感染史、AFP、AST、ALT、ALP、肿瘤大小、分期差异无统计学意义(P>0.05);COX-2与GRP78蛋白的表达呈正相关(r=0.204,P<0.025).结论 COX-2的表达与肝癌组织分化程度显著相关,GRP78阳性表达的肝癌组织中COX-2的表达升高,两者在肝癌组织中的关系密切.     

丹皮酚逆转内质网应激诱导的HepG2细胞凋亡抵抗

目的 探讨丹皮酚逆转内质网应激诱导的HepG2肝癌细胞凋亡抵抗的作用机制.方法 采用MTT及末端双脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口标记技术(TUNEL)观察内质网应激诱导剂衣霉素对正常人肝细胞株HL-7702及人肝癌细胞株HepG2细胞的增殖抑制及凋亡作用;Western blot法测定内质网应激诱导剂衣霉素对正常肝细胞HL-7702及肝癌细胞HepG2的环氧合酶-2(COX-2)表达的影响;采用Western blot法及TUNEL法观察COX-2的选择性抑制剂塞来昔布对内质网应激下的肝癌细胞HepG2 COX-2的表达及凋亡的影响;采用MTT及TUNEL法观察丹皮酚对内质网应激下的HepG2肝癌细胞的增殖抑制及凋亡作用;Western blot法观察丹皮酚对内质网应激诱导的HepG2肝癌细胞 COX-2表达的影响:结果与正常肝细胞HL-7702相比,在 TM诱导的内质网应激作用下肝癌细胞HepG2的增殖抑制率及凋亡率减少(P＜0. 05),并且内质网应激可诱导肝癌细胞HepG2产生COX-2蛋白.而丹皮酚可下调内质网应激诱导的HepG2肝癌细胞中COX-2的表达,并使内质网应激诱导的肝癌细胞的凋亡增加.结论 丹皮酚可通过下调COX-2的表达从而逆转内质网应激诱导的HepG2肝癌细胞凋亡抵抗.     

小鼠肝癌细胞外泌体对树突状细胞成熟与功能的影响

目的 探讨小鼠肝癌细胞(Hepa1-6)来源的外泌体对树突状细胞成熟和功能的影响.方法 提取小鼠Hepa1-6细胞的外泌体,用透射电镜来鉴定外泌体的外形,Western blot方法测定外泌体的标志蛋白CD63和TSG101的表达,使用小鼠Hepa 1-6细胞外泌体冲击树突状细胞(DCs),DCs成熟相关表面分子CD40、CD80、CD83、CD86、MHC-Ⅱ的表达使用流式细胞术检测;将小鼠T淋巴细胞和小鼠Hepa1-6细胞外泌体致敏的DCs一起孵育5d,使用CFSE染色标记和流式法来测定共孵育T细胞的分裂增殖情况.结果 透射电镜可以观察到从Hepa1-6细胞的上清液中收集到的外泌体,表现为圆形或类圆形膜性囊泡样结构,符合外泌体的典型特征;Western blot检测表明小鼠Hepa1-6细胞来源的外泌体表达CD63、TSG101标志性蛋白,不表达细胞色素C;从小鼠Hepa1-6细胞提取来的外泌体致敏DCs,可上调表面MHC-Ⅱ类分子、成熟标志分子CD83和共刺激分子CD40、CD80、CD86(P ＜0.05).且随着外泌体浓度的增加,DC表面分子表达增高;同时可促进T淋巴细胞的增殖(P＜0.05).结论 小鼠Hepa 1-6细胞提取的外泌体可促进DC2.4的朝向成熟表型分化,并促进T细胞的增殖.     

miR-107对HepG2细胞增殖和细胞周期的影响

目的探讨miR-107对HepG2细胞增殖和细胞周期的影响,以及对CDK6蛋白表达的调控。方法将50 nmol/L的miR-107 mimics 或阴性对照序列由 Lipofectamine 2000转染入人肝癌细胞株 HepG2中;qRT-PCR 法检测转染后HepG2细胞内miR-107表达水平;四甲基偶氮唑蓝( MTT)法检测细胞增殖能力;流式细胞术分析转染后细胞周期的变化;Western blot法检测CDK6蛋白表达水平。结果转染后24 h,miR-107 mimics转染组细胞内miR-107表达水平较空白对照组明显升高(P<0.05);与空白对照组相比,miR-107 mimics转染组HepG2细胞增殖受抑制( P<0.05),处于G0/G1期的细胞增多( P <0.05), CDK6蛋白表达下调( P <0.05)。结论 miR-107能够抑制 HepG2细胞增殖并诱导HepG2细胞G0/G1期阻滞,这可能与其抑制 CDK6蛋白的表达有关。     

COX-2和Survivin、cIAP-2、Livin在肝癌组织中的表达及相关性研究

目的 研究肝细胞癌中COX-2和凋亡抑制蛋白Survivin、cIAP-2、Livin的表达情况及相关性.方法 采用组织芯片平台,应用免疫组织化学方法检测114例肝细胞癌中COX-2和凋亡抑制蛋白Survivin、cIAP-2、Livin的表达.结果 肝癌组织中的COX-2、Survivin、cIAP-2、Livin的阳性率分别为71.05%、77.19%、63.46%、16.67%;COX-2和Survivin蛋白的表达成显著正相关(r=0.192,P<0.05),COX-2和cIAP-2、Livin蛋白的表达无相关性(P>0.05);COX-2和Survivin、cIAP-2、Livin的表达与肿瘤大小、肿瘤分化程度、淋巴结转移、临床分期均无相关性(P>0.05).结论 在肝细胞癌中COX-2、Survivin、cIAP-2均高表达,Livin为低表达.COX-2与Survivin的表达呈显著正相关,COX-2表达与cIAP-2和Livin的表达无相关性.     

Cox-2和Her-2/neu在胃癌组织中的表达及相关性研究

目的研究环氧合酶-2（Cyclooxygenase-2,Cox-2）和Her-2/neu表达的相关性,以及与胃癌临床病理的关系。方法采用免疫组织化学技术,取安徽医科大学第一附属医院病理科存档的胃癌石蜡标本419例,,分别检测Cox-2和Her-2/neu的表达情况,分析其与胃癌临床病理的关系。结果用SPSS 13.0统计软件进行分析。结果 419例胃癌组织中Cox-2的阳性表达率为66.35%（278/419）,Cox-2的表达与胃癌的肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移、分期、远处转移、浸润深度均无显著相关性（P〉0.05）。Her-2/neu的阳性表达率为13.6%（57/419）,Her-2/neu的表达与胃癌的分化程度有显著相关性（P〈0.05）,而与肿瘤大小、淋巴结转移、分期、远处转移、浸润深度无显著相关性（P〉0.05）。Cox-2与Her-2/neu表达密切相关（P〈0.025）。结论 Her-2/neu的表达与高中分化胃癌显著相关,Her-2/neu阳性表达的胃癌组织中Cox-2的表达明显升高,两者在胃癌组织中的表达密切相关。