人类白细胞抗原-DR标准血清学分型与基因分型的比较研究

目的比较研究顺序特异引物聚合酶链反应（ＰＣＲ－ＳＳＰ）方法与标准血清学方法对人类白细胞抗原－ＤＲ（ＨＬＡ－ＤＲ）分型的精确性和临床应用价值。方法选择肾移植受者１０１例，供者６１例，采用ＰＣＲ－ＳＳＰ和血清学方法同步双盲行ＨＬＡ－ＤＲ分型，比较其检测时间、敏感性、特异性和临床实用性。结果１６２份样本，ＰＣＲ－ＳＳＰ分型均获成功，检出ＤＲ等位基因总数３０８个，分型时间５小时，特异性和重复性１００％。血清学分型耗时２０小时，８个位点不肯定，２９个分型错误，３５个空白位点中２０个存在第二个位点，总误差率３０．２％。结论ＰＣＲ－ＳＳＰ方法用于ＨＬＡ－ＤＲ分型较血清学方法快速、精确，试剂与临床样本易行，适合于临床应用。     

用顺序特异引物聚合酶链反应技术行HLA-A抗原DNA分型

作者采用顺序特异引物聚合酶链反应技术（ＰＣＲ－ＳＳＰ）,建立了汉族人群ＨＬＡ－Ａ位点ＤＮＡ分型方法。研究采用ＰＣＲ－ＳＳＰ对３４５例肾移植供受者样本ＤＮＡ行ＨＬＡ－Ａ位点基因分型均获得成功。共检出Ａ位点等位基因总数６３５个,其中纯合子５５例,杂合子２９０例;可准确分辨ＨＬＡ－Ａ位点等位基因２０个,无假阳性和假阴性出现,重复率１００％,总耗时５小时。分型结果经标准ＤＮＡ验证和美国加州大学配型中心双盲验证完全符合。与标准血清学方法比较显示,６９份血清学空白位点中１６份存在第二个位点,１３份血清学分型错误,血清学总误差率９．０％。由此表明,用该研究建立的ＰＣＲ－ＳＳＰ方法行ＨＬＡ－Ａ位点ＤＮＡ分型,具有高分辨度、高特异性和简捷快速的特点,分型结果较血清学方法更加精确可靠,适合于临床应用。     

人类白细胞抗原-Ⅰ类抗原的DNA分型与临床应用

目的采用顺序特异引物聚合酶链反应技术（ＰＣＲＳＳＰ）建立汉族人群白细胞抗原Ⅰ（ＨＬＡⅠ）类抗原Ａ、Ｂ位点ＤＮＡ分型方法。方法设计合成８１个特异性引物和１对阳性对照引物，组成２０个ＰＣＲ反应用于Ａ位点分型、４１个ＰＣＲ反应用于Ｂ位点分型，建立一步法ＰＣＲＳＳＰ方法，应用于６２份标准ＤＮＡ和３４５例肾移植供受者的ＨＬＡⅠ类ＤＮＡ分型。结果所有样本ＰＣＲＳＳＰ基因分型均获得成功，无假阳性和假阴性出现，４０份样本的重复率１００％，总耗时５小时。分型结果经双盲验证完全符合。可准确分辨出Ａ位点等位基因１９个、Ｂ位点等位基因４１个；实际检出汉族人群Ａ抗原特异性１３个、Ｂ抗原特异性３２个。结论ＰＣＲＳＳＰ技术行ＨＬＡⅠ类Ａ、Ｂ位点ＤＮＡ分型，分辨率高、特异性强、重复性好、相对简捷快速，分型结果较血清学方法更加精确可靠，适合于临床应用     

人类白细胞抗原—DR标准血清学分与基因分型的比较研究

目的比较研究顺序特异引物聚合酶反应（ＰＣＲ－ＳＳＰ）方法与标准血清学方法以夫类白细胞抗原ＤＲ（ＨＬＡ－ＤＲ）分型的精确性和临床价值。方法 选择肾移植受者１０１例，供者６１例，采用ＰＣＲ－ＳＳＰ和血清学方法同步双盲行ＨＬＡ－ＤＲ分型，比较其检测时间、敏感性、特异性和临床实用性。结果１６２份样本，ＰＣＲ－ＳＳ分型均获成功，检出ＤＲ等位基因总数３０８个，分型时间５小时，特异性和重复性１００％。血清学分耗     

顺序特异引物聚合酶链反应技术HLA－DR1，DR51组的基因快速分型

采用快速基因分型技术对人类白细胞抗原（ＨＬＡ）－ＤＲ１、ＤＲ５１组准确分型，为临床选择理想配型的供受者提供依据。根据核苷酸序列合成系列特异引物，借助ＰＣＲ技术，建立顺序特异引物聚合酶链反应方法（ＰＣＲ－ＳＳＰ）快速基因分型方法，对６９例肾移植供受者ＨＬＡ－ＤＲ１、ＤＲ１５、ＤＲ１６和ＤＲ１０分型，同时与血清学方法对比研究。分型结果采用限制性内切酶分析和寡核苷酸探针杂交证实。结果：６９例供受者ＨＬＡ－ＤＲ１、ＤＲ５１组ＰＣＲ－ＳＳＰ分型均获成功，无假阳性和假阴性，总耗时５ｈ，分型结果经酶切分析和探针杂交证实符合。血清学分型耗时２４ｈ，误差率达３２．４％。结论：ＰＣＲ－ＳＳＰ用于ＨＬＡ－ＤＲ１、ＤＲ５１组基因分型，具有快速、精确的特点，适合于临床应用。     

肾移植供受者DNA水平人类白细胞抗原－DR配型的研究

探讨利用聚合酶链反应方法（ＰＣＲ－ＳＳＰ），进行人类白细胞抗原（ＨＬＡ）－ＤＲ基因分型，并应用于肾移植临床的可行性，以准确选择理想配型的供受者，提高移植物长期存活率。方法作者应用分子生物学技术根据ＨＬＡ－ＤＲ核苷酸序列设计合成３０个特异引物，快速盐析法提取模板ＤＮＡ，借助ＰＣＲ技术建立ＰＣＲ－ＳＳＰ方法，对１７１例肾移植供受者和１４份标准ＤＮＡ进行ＨＬＡ－ＤＲ基因水平分型。扩增条件为９４℃、３０秒、６０℃、５０秒，７２℃、４０秒，共３４个循环。分型结果采用标准ＤＮＡ，限制性内切酶分析和特异性探针杂交等予以确证。结果所有１７１份样本和１４份标准ＤＮＡ采用ＰＣＲ－ＳＳＰ进行ＨＬＡ－ＤＲ基因分型均获成功。特异性扩增产物与引物设计预期大小相同，无假阳性和假阴性，总耗时５小时。分型结果经标准ＤＮＡ、内切酶分析和探针杂交等证实符合，特异性和重复性为１００％。结论ＰＣＲ－ＳＳＰ用于ＨＬＡ－ＤＲ基因分型是一种快速而精确的方法，适合于器官移植，尤其是尸肾移植供受者配型选择的临床应用。     

器官移植HLA—Ⅱ类基因分型研究及应用

目的：提高ＨＬＡ－Ⅱ类基因ＤＲ、ＤＱ位点分型的准确性，选择合适的供受者对，延长移植物的存活时间。方法：对４２９例肾移植供受者ＨＬＡ－Ⅱ类基因分型进行了研究。ＰＣＲ－ＳＳＰ（聚合酶链式反应－序列特异性引物），全过程耗时３小时。结果：（１）用ＰＣＲ－ＳＳＰ方法可同时、同条件进行ＩＬＡ－Ⅱ类ＤＲ、ＤＱ基因分型。（２）１７２例次供受者ＨＬＡ－ＤＲ位点０个错配（０ＭＭ），其移植肾１年存活率为１００％；１个错配（１ＭＭ）为９２６％；２个错配（２ＭＭ）为８６５％。（３）在与疾病相关的研究中发现，尿毒症患者ＤＲ１０比例明显高于正常人。供受者ＤＲ、ＤＱ位点基因频率及单倍型连锁不平衡参数与国内外报道大致相同。结论：初步建立起一套完整的ＨＬＡ分型手段，为进一步研究ＨＬＡ打下了基础。     

用顺序特异引物聚合酶链反应技术行HLA—A抗原DNA分型

作者采用顺序特异引物聚合酶链反应技术（ＰＣＲ－ＳＳＰ）建立了汉族人群ＨＬＡ－Ａ,位点ＤＮＡ分型方法。研究采用ＰＣＲ－ＳＳＰ对３４５例肾移植供受者样本ＤＮＡ行ＨＬＡ－Ａ位点基因分型均获得成功,共检出Ａ位点等位基因总数６３５个,其中纯合子５５例,杂合子２９０例,可准确分辨ＨＬＡ－Ａ位点等基因２０个,无假阳性和假阴性出现,重复率１００％,总耗时５小时分型结果经标准ＤＮＡ验证和美国加州大学配型中心双盲验证     

人类白细胞抗原—I类抗原的DNA分型与临床应用

目的 采用顺序特异引物聚合酶链反应技术（ＰＣＲ－ＳＳＰ）建立汉族人群白细胞抗原－Ｉ（ＨＬＡ－Ｉ）类抗原Ａ、Ｂ位点ＤＮＡ分型方法。方法 设计合成８１个特异性引物和１对阳性对照引物,组成２０个ＰＣＲ反应用于Ａ位点分型、４１个ＰＣＲ反应用于Ｂ位点分型。结果 所有样本ＰＣＲ－ＳＳＰ基因分型均获得成功,无假阳性和假阴性出现,４０份样本的重复率１００％,总耗时５小时。分型结果经双盲验证完全符合。可准确分辨出Ａ     

联合应用PCR/SSCP和PCR/SSO提高HLA基因分型的精确性

ＰＣＲ／ＳＳＯ分析７０例无血缘关系湖南汉族正常人ＨＬＡＤＰＡ１位点等位基因多态性，并对全部样本ＨＬＡＤＰＡ１基因第二外显子作银染ＰＣＲ／ＳＳＣＰ分析。发现ＰＣＲ／ＳＳＯ误将一例ＤＰＡ１＊０１／０２杂合子定为单一的ＤＰＡ１＊０１基因；经ＰＣＲ／ＳＳＣＰ完善获得湖南汉族正常人ＤＰＡ１＊０１，０２基因频率值分别为０．２６３２和０．７３２７；ＰＣＲ／ＳＳＣＰ法显示湖南汉族人ＤＰＡ１＊０２基因由单一亚型构成。结果表明，ＰＣＲ／ＳＳＣＰ可用于进一步分析ＰＣＲ／ＳＳＯ分型中杂交信号不典型或难以准确定型的样本，用于分析ＳＳＯ序列以外的ＨＬＡＤＮＡ多态性，完善分型精确性     

HLA氨基酸残基配型标准在肾移植中的应用

目的 评价HLA氨基酸残基配型新标准在肾移植中的应用。方法 应用血清学和基因分型方法对134例肾移植供受者进行HLA-Ⅰ，Ⅱ类抗原分型，并比较氨基酸残基配型标准与传统的HLA六抗原无错配标准的关系。结果 HLOA氨基酸残基配型标准可以提高肾移植供受者的相配率，六抗原无错配率可由0.75%提高到2.24%，六抗原安全错配的几率由15.67%降至2.24%。结论 HLA氨基酸残基配型标准是一种更为实用的同种异体移植配型策略。     

Role of Molecular Typing in Live Related Donor Renal Transplantation

In renal transplantation, a good HLA-DR match is associated with higher success rate of graft outcome. It is particularly so In high risk recipients. Serological HLA-DR typing is not always easy due to a number of technical problems. In view of this, a comparison of serological and molecular typing was done in our institutions. A total of 64 live related donor patients of renal transplantation were studied. Serological typing was done by conventional methods. Molecular HLA class II typing was done by polymerase chain reaction (PCR) based sequence specific oligonucleotide probe (SSOP) hybridization technique. An overall discrepancy of 19.5% was observed in the DR typing obtained by serology and PCR-SSOP of all the recipients and donors. 14.5% of cases showed discrepancy in the results of only one DR antigen. Serological typing failure was seen in 10.9% of total cases. In 19.5% cases, only one DR antigen was assigned by PCR-SSOP as compared to two antigens by serological methods. Maximum number of discrepancies were seen in DR 2 antigens. There was no appreciable difference of graft survival shown in the patients typed by both methods. However, higher incidence of acute graft rejection episodes were seen in patients with 1 antigen mismatch as compared to zero mismatch. It is concluded that HLA-DR typing should be carried out by molecular methods as these have been found to be more specific and accurate.Key Words: HLA-DR, Molecular typing     

Ⅰ型自身免疫性肝炎与人类白细胞抗原DR4的相关性

目的：分析人类白细胞抗原（HLA）－DRB1等位基因与Ⅰ型自身免疫性肝炎（AIH）的相关性。方法：采用序列特异性多聚酶链反应（PCR－SSP），对32例Ⅰ型AIH型患者和48例健康对照者进行HLA－DRB1等位基因及有关基因亚型分析。结果：HLA－DR4基因频率在Ⅰ型AIH型患者中较健康对照组显著增高（相对危险度＝3．35，P＝0．014）。对HLA－DR等位基因型的分析表明，Ⅰ型AIH型患者组DRB1*0405的基因频率较健康对照有增加趋势（P＝0．04，但Pc=0.08）。HLA－DRβ分子的第三等位基因高变区第71位精氨酸残基的频率在Ⅰ型AIH型患者中显著增高（相对危险度＝3．82，P＝0．008）。结论：Ⅰ型AIH的发病与HIA－DR4相关。     

地高辛标记PCR-SSOP法进行HLA-A02等位基因检测

目的：建立聚合酶链反应－序列特异笥革酸探讨（ＰＣＲ－ＳＳＯＰ）分型方法,并分析其「实用价值。方法：采用一对引物扩增所有ＨＬＡ－Ａ２特生抗原法和黄嘌呤用２３个探针和扩增产物杂文,探针用地高辛系统标记和检测,可鉴定Ａ２的２５个等位基因,并在中国人群ＨＬＡ－Ａ＾＊０２等位基因的检测中进行应用,用Ｂ淋巴母细胞朱作阳笥对照,同时与聚合酶链反应－序列特异性引物（ＰＣＲ－ＳＳＰ）检测方法作比较。结果：采用本方法     

湖南汉族群体HLA-DQA1位点等位基因多态性分析

目的 :分析湖南汉族群体HLA DQA1位点等位基因多态性。方法 :应用PCR/SSP和银染PCR/SSCP技术对 60名无血缘关系湖南汉族健康个体作HLA DQA1基因分型。结果 :检出 1 0种HLA DQA1等位基因 ,基因频率范围为 0 .0 1 67～ 0 .2 2 54 ;HLA DQA1 0 30 2 , 0 50 1 , 0 1 0 2为常见等位基因 ,HLA DQA1 0 1 0 1 , 0 2 0 1 , 0 4 0 1为少见等位基因。检出 2 6种基因型 ,基因型观察值和理论值分布符合Hardy Weinberg平衡 (P >0 .0 5)。 5例样本的PCR/SSP分型只能确定一个等位基因 ,另一等位基因经PCR/SSCP确认。结论 :提供了湖南汉族群体HLA DQA1位点等位基因频率正常值     

HLA-DRB1基因芯片与PCR-SSP分型的比较

目的：比较基因芯片和PCR-SSP用于汉族南方人群HLA-DRB1基因分型的结果，评价分型芯片的准确性。方法：77份待分型样本，分别用等位基因特异的PCR-SSP和基因分型芯片对DRB1分型。芯片分型通过组间特异引物扩增基因组DNA，扩增用荧光标记。扩增标记后的产物与分型芯片的探针杂交，通过杂交产生的荧光信号确定样品的HLA-DRB1基因亚型，比较两种方法分型所获得的结果，不吻合的样本全部经第三方验证或测序。结果：77份样本，两种方法分型全部成功。分型结果的吻合率为93％。不吻合样本6份，其中SSP定型纯合子4份，芯片分型全部为杂合子。经第三方验证，证实芯片对纯合子和杂合子的分型全部正确。另外2份不吻合的样本经测序，证实SSP分型错误1份，芯片分型错误1份。芯片的重复率为96％。结论：基因芯片是一种理想的分型方法，具有特异性高、重复性好、操作简便、所需样本量少、一次可作多份样本的优点。     

武汉籍汉族类风湿关节炎患者HLA-DRB1*04、*01基因分型和临床相关性研究

为探讨人类白细胞抗原(HLA)-DRB1*04、*01基因与武汉籍汉族类风湿关节炎(RA)的相关性.采用聚合酶链反应-序列特异性引物法(PCR-SSP),对78例RA患者和126例健康者的HLA-DRB1*01、*04基因型进行检测.结果显示RA患者DR4基因频率为52.5%,对照组为21.6%,2组有显著性差异(P＜0.01),DR1基因频率两组无差异(P＞0.05).RA患者HLA-DR4的主要亚型为DRB1*0405(32.1%)与对照组(6.3%)有显著性差异(P＜0.01).DR4阳性的RA患者的关节压痛数、关节肿胀数、类风湿因子(RF)阳性率、关节侵蚀性病变明显高于DR4阴性的患者(P＜0.01).提示HLA-DR4基因与RA患者易感性及疾病严重性相关,其主要亚型为DRB1*0405、DRB1*0401.DR4基因检测可作为一项病情严重程度及预后判断的辅助指标.     

EXPERIENCE ON HLA TYPING FOR ALLOGENEIC MARROW TRANSPLANTATION IN 217 MEMBERS OF 30 FAMILIES

From April 1978 to Oct 1990, 217 members of 30 families who requiredallogeneic marrow transplantation were examined for HLA typing, with HLA standardantiserum and mixed lymphocyte culture (MLC). The following conclusions could bedrawn: (1) when the HLA-A, B, C loci between donor and recipient were identical, theD locus also was generally identical too, but, in some rare cases the HLA-A, B, C wereidentical while the D locus remained different detected by MLC SI which wassignificantly increased; (2) in addition to twin, the sib were the main candidates of donorsin allogeneic marrow transplantation, however, if the phenotype of children was compati-ble to that of their parents with no significant stimulation in MLC, the parents could alsobe considered as a donor; (3) if the HLA-A, B, C typing was identical between fatherand motaher, the parents can also be considered as an eligible donor. Using HLA-A, B,C, DR and D loci identical sibs as donor, 9 of 11 cases (aplastic anemia 9 cases andANLL-M2 2 cases who received allogeneic marrow transplantation) had the evidence ofengraftment. Much attention should be paid to the difference of the minorhistocompatibility antigens, such as sex associated antigen between donor and recipient, be-cause even in 11 cases with HLA-A, B, C, DR and D loci identical sibs as donors formarrow transplantation, 5 cases still had the manifestation of GVHD in various degree,4/5 died of severe GVHD.     

供体特异性输血与嵌合体发生及肾移植急性排斥反应的关系

目的：研究供体特异性输血(DST)患者末梢血中嵌合体的发生及其与肾移植急性排斥反应的关系。 方法：肾移植患者60例,分为：A组,未行DST 的尸体肾移植35 例(2 or 3 HLA-mismatched);B组,未行DST的活体肾移植3例,HLA配型各位点无错配;C组,术前行DST 的活体肾移植22例(1 or 2 HLA-mismatched),利用PCR-SSP法检测患者末梢血中的HLA-DRB1基因。 结果：A组12例(34.3%)、B组3例(100%)、C组19例(86.3%)发现了供体的HLA-DRB1基因,证实有嵌合体发生。在34例有嵌合体发生的病例中14例(41.2%)、26例无嵌合体存在的病例中有10例(38.5%)发生过急性排斥反应,但两组间比较差异无显著性(P>0.05), 同时排斥反应发生的频率、次数比较差异也无显著性(P>0.05)。另外,C组病例中嵌合体现象消失,PCR-SSP检测转为阴性时未见排斥反应病例发生。结论：DST 有利于促进嵌合体的形成,嵌合体现象与急性排斥反应间无相关性,不能以嵌合体现象的有无作为诊断急性排斥反应的依据。     

HLA—DR两种分型方法的比较

目的 探讨肾移植供受体HLA-DR血清学分型与PCR-SSP基因分型方法的优缺点。方法 对已作HLA-DR血清学分型的供受体标本,进行PCR-SSP基因分型法作HLA-DR抗原分型;并对4例血清学分型为HLA-DR一个位点,而PCR-SSP为两个位点的受者,重新抽血作HLA-DR血清学业分型。结果 血清学法耗时80min,PCR-SSP法耗时145min;血清学方法误差率（不包括重新血清学分型的例数）为11.3%(受者14.7%,供者8.0%).重新作血清学分型的4例中,有1例结果为两个们点,与PCR-SSP结果一致,其余与原结果相同.结论 改进的血清学方法暂时还适合我国尸体供肾快速配型的需要.PCR-SSP法分型具有准确、简便、快速的优点,随着其方法学的不断发展将逐步取代血清学方法在HLA-DR分型中的应用。