聚合酶链反应在结核病诊断中的应用

目的：探讨聚合酶链反应（ＰＣＲ）对结核病的诊断价值。方法：应用ＰＣＲ技术检测４７份结核病患者的各种临床标本，并与传统细菌学检测结果比较。结果：ＰＣＲ检测阳性率为５７．４５％（２７／４７），明显高于传统细菌学检测者（１７．０２％，８／４７）（Ｐ〈０．００５）。其中，ＰＣＲ检测胸膜结核性胸水与脑膜结核性脑脊液的阳性率均显著高于传统学检测者（Ｐ〈０．０５）。ＰＣＲ检测的假阳性率为５．１３％（４／７８），     

ELISA检测HBsAg中阴性对照吸光值的探讨

为了探讨酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）检测乙型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）阴性对照吸光值（Ｎ）小于０．０５时，以０．０５作Ｎ值对实验结果的影响，用实际阴性对照吸光值（Ｎ实）和０．０５分别计算阳性对照吸光值（Ｐ）与Ｎ的比值（Ｐ／Ｎ），并用放射免疫法（ＲＩＡ）和聚合酶链法（ＰＣＲ）作进一步检测。结果：ＥＬＩＳＡ所测３３例标本中，Ｐ／０．０５小于２．１的标本１８例，Ｐ／Ｎ实小于２．１的８例，ＲＩＡ检测上述Ｐ／０．０５小于２．１的１８例标本中，５例阳性，ＰＣＲ检测的ＨＢＶＤＮＡ７例阳性。结论：ＥＬＩＳＡ检测ＨＢｓＡｇ，当Ｎ小于０．０５时，以０．０５计算Ｐ／Ｎ值，可导致结果的假阴性     

乳腺癌组织ER,PR,P53,CEA表达及其相互关系和临床意义

应用ＰＡＰ法及ＡＢＣ免疫组化法检测７６例乳癌组织，结果：ＥＲ阳性占５４％，ＰＲ阳性占５１．３％，Ｐ５３阳性占３４．２％，ＣＥＡ阳性占６３．２％。激素受体与Ｐ５３呈负相关（Ｐ〈０．０５），与ＣＥＡ呈正相关（Ｐ〈０．０１），Ｐ５３和ＣＥＡ呈负相关（Ｐ〈０．０５）。３年生存率肿瘤组织ＥＲ／ＰＲ阳性，Ｐ５３、ＣＥＡ阴性者为１００％；ＥＲ／ＰＲ阴性，Ｐ５３、ＣＥＡ阳性者为零。提示这４种蛋白的异常表达，在乳腺     

鼻咽癌患者EB病毒免疫酶法与PCR检测结果的比较分析

应用免疫酶法及ＰＣＲ同时检测４２例ＮＰＣ患者及１３例头颈部其它肿瘤患者的ＥＢ病毒。结果ＮＰＣ患者血清ＩｇＡ／ＶＣＡ、ＩｇＡ／ＥＡ抗体滴度较高，其阳性率分别为７３．８％（３１／４２）、７１．４％（３０／４２），两者比较差异无显著性（Ｐ＞０．０５），而ＰＣＲ检测的阳性率高达９７．６％（４１／４２），与免疫酶法比较差异有高度显著性（Ｐ＜０．０１）。表明ＰＣＲ技术有极高的灵敏度和较强的特异性。其阳性检出率高于沿用的免疫酶法     

卡氏肺孢子虫DNA的PCR检测

①目的探讨卡氏肺孢子虫的检测方法及感染状况。②方法收取病人痰液、肺组织及支气管灌洗液，常规方法提取ＤＮＡ，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测卡氏肺孢子虫ＤＮＡ，并与吉氏染色结果进行比较。③结果８６例住院病人，卡氏肺孢子虫ＤＮＡ的ＰＣＲ检出率为４１．９％，卡氏肺孢子虫包囊吉氏染色法的检出率为１４．９％，两种方法的检出率比较，差异有显著性（ｕ＝６．６３８，Ｐ＜０．０５）。尿毒症、肺癌、血液病和肺部炎症病人卡氏肺孢子虫ＤＮＡ的ＰＣＲ检出率分别为３７．５％，６１．５％，５０．０％和２０．８％，差异有显著性（χ２＝９．０１，Ｐ＜０．０５）。痰液、肺组织和支气管灌洗液标本，卡氏肺孢子虫ＤＮＡＰＣＲ的检出率分别为２８．６％，６１．９％和７７．８％，差异有极显著意义（χ２＝１２．３０，Ｐ＜０．０１）。吉氏染色法检测出的１０份卡氏肺孢子虫包囊阳性标本，ＰＣＲ检测皆为阳性；５７份阴性标本，ＰＣＲ检测出１５份为阳性。４份结核标本ＰＣＲ检测皆为阴性。④结论ＰＣＲ技术检测肺组织和支气管灌洗液标本中的卡氏肺孢子虫ＤＮＡ，具有较高的敏感性和特异性     

乳腺癌雌激素受体表达与增殖细胞核抗原表达和AgNOR计数关系的研究

目的研究乳腺癌雌激素受体（ＥＲ）表达与增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）表达和ＡｇＮＯＲ计数关系。方法采用ＡｇＮＯＲ染色技术和免疫组化Ｓ－Ｐ法，用抗ＥＲ单克隆抗体及抗ＰＣＮＡ单克隆抗体（ＰＣ１０），研究５０例乳腺癌ＥＲ与ＰＣＮＡ表达及ＡｇＮＯＲ计数。结果３３例乳腺癌ＥＲ阳性者与１７例ＥＲ阴性者相比，ＰＣＮＡ表达低（Ｐ＜０．０５），ＡｇＮＯＲ平均颗粒少（分别为４．９１±１．６９，６．５２±２．１３，Ｐ＜０．０１）。结论乳腺癌ＥＲ表达与ＰＣＮＡ表达及ＡｇＮＯＲ计数有相关关系，ＰＣＮＡ表达率及ＡｇＮＯＲ计数对评估乳腺癌预后有一定意义     

大肠癌上皮c-myc蛋白、表皮生长因子受体和增殖细胞核抗原的表达及其与预后意义

应用免疫组化ＬＳＡＢ法检测ｃ－ｍｙｃ、表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）和增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）对有随访资料的大肠癌的表达。结果提示：ｃ－ｍｙｃ阳性表达中，大肠癌（７０４９％）明显高于正常粘膜（２６６％，Ｐ＜０．０５）。正常大肠粘膜未发现ＥＧＦＲ阳性表达，而大肠癌有较高表达（７７０４％）。ＰＣＮＡ阳性表达中，大肠癌（４６４０±２６．５）％明显高于正常粘膜（１５１２±５．４４）％，Ｐ＜０．０５）。ＥＧＦＲ表达与大肠癌Ｄｕｋｅｓ分期有关（Ｐ＜０．０５）。ＰＣＮＡ表达与大肠癌分化程度及Ｄｕｋｅｓ分期有关（Ｐ＜０．０５）。大肠癌４年生存率ＥＧＦＲ和ＰＣＮＡ表达＞６５％组均明显低于＜２５％组（Ｐ＜０．０５），ＥＧＦＲ－ＬＩ和ＰＣＮＡ－ＬＩ与生存期均有明显负相关。结论表明：ｃ－ｍｙｃ、ＥＧＦＲ和ＰＣＮＡ表达与大肠癌的大肠癌细胞增殖有相关性。ＥＧＦＲ和ＰＣＮＡ表达与大肠癌的生存期均有明显负相关，该两项指标对大肠癌临床诊治和预后的评估有重要价值。     

P^16蛋白,增殖细胞核抗原在肾癌的表达及与预后的关系

目的　探讨多肿瘤抑制基因Ｐ１６／ＭＴＳ１蛋白在肾细胞癌（ＲＣＣ）的表达及与临床病理指标、预后的关系。方法　采用免疫组化方法对Ｐ１６蛋白和增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）在５６例ＲＣＣ的表达进行病理观察。结果　Ｐ１６蛋白在ＲＣＣ的阳性率为６０．７％（３４／５６）,各组织学分级的阳性率差异有显著性（Ｐ＜０．０１）,其阳性组和阴性组的５年生存率差异无显著性。ＰＣＮＡ标记指数（ＰＣＮＡＬＩ）在１％～８５％,平均为１９．７％,在不同组织学分级及临床分期中差异有显著性（Ｐ＜０．０１）。ＰＣＮＡ高表达组和ＰＣＮＡ低表达组的５年生存率差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。Ｐ１６蛋白的表达与ＰＣＮＡ无一致性（Ｐ＜０．０５）。结论　ＰＣＮＡＬＩ是反映ＲＣＣ组织分化程度及预后的良好指标,Ｐ１６蛋白的胞浆型表达对肾癌临床分期及预后无明显影响。     

荧光定量PCR技术在检测HCV—RNA中的应用

目的 评价荧光定量ＰＣＲ技术测定ＨＣＶ－ＲＮＡ水平的价值,探讨ＰＢＭＣ中检出ＨＣＶ－ＲＮＡ的意义。方法 采用荧光定量ＫＲ及ＲＴ－ＰＣＲ技术同时检测８７例血液透析患者的血清和淋巴细胞中ＨＣＶ－ＲＮＡ。结果血清、淋巴细胞中ＨＣＶ－ＲＮＡ的荧光定量ＰＣＲ检出率（４９．４％、６９．０％）,分别高于相应标本中ＨＣＶ－ＲＮＡ的ＲＴ－ＰＣＲ阳性率（３３．３％、３５．６％）（Ｐ ＜０．０５）。血清、淋巴细胞中同时检出ＨＣＶ－ＲＮＡ的一致率,荧光定量ＰＣＲ法（３１．０％）显著高于ＲＴ－ＰＣＲ定性法（６．９％）（Ｐ＜０．００１）． 荧光定量ＰＣＲ法,淋巴细胞中ＨＣＶ－ＲＮＡ检出率高于血清（Ｐ＜０．０１）。结论 与 ＲＴ－ＰＣＲ相比,荧光定量ＰＣＲ技术检测 ＨＣＶ－ＲＮＡ敏感性较高,对ＰＢＭＣ内ＨＣＶ－ＲＮＡ检测有利于提高ＨＣＶ检测的阳性率。     

幽门螺杆菌感染与肝硬化的关系初探

用ＰＣＲ法、快速尿素酶试验及组织学染色检查法检测３５例肝硬化患者和３２例胃十二指肠病患者的Ｈｐ感染率，分别为７１．４％与６５．６％，两组比较差异无显著性（Ｐ＞０．０５）。有肝功能损害者，Ｈｐ感染率较肝功能正常者高，分别为７９．３％与３３．３％（Ｐ＜０．０５）。认为肝硬化患者Ｈｐ感染率较高，后者可能是肝性脑病的危险因素之一     

ELISA与PCR方法检测HBV结果对比

为探讨检测ＨＢＶ的有效方法，对１２８例乙型肝炎患者血清采用酶联免疫（ＥＬＩＳＡ）及聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法进行二对半及ＨＢＶ－ＯＮＡ测定，其阳性检出率分别为５９．３８％、７１．８８％，经统计学处理，ｘ＾２＝４．４３，Ｐ〈０．０５，差别有显著性意义，ＰＣＲ法比ＥＬＩＳＡ法检测灵敏度高，特异性强，值得推广。     

聚合酶链反应法与荧光免疫法检测沙眼衣原体的比较研究

为了评价聚合酶链反应法（ＰＣＲ）对泌尿生殖道标本中沙眼衣原体的检测结果，每份临床标本进行了ＰＣＲ法和荧光免疫法（ＤＦＡ）平行检测比较，检测临床标本９３例，ＰＣＲ法阳性率为２５．８％，ＤＦＡ法的阳性率为１７．２％（Ｐ〉０．０５），结果说明ＰＣＲ是一高度特异和敏感的检测方法。     

ELISA检测HBsAg中阴性对照吸光值的探讨

为了探讨酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）检测乙型肝炎表面抗原阴性对照吸光值小于０．０５时，以０．０５作Ｎ值对实验结果的影响，用实际阴性对照吸光值（Ｎ实）和０．０５分别计算阳性对照吸光值（Ｐ）与Ｎ的比值（Ｐ／Ｎ），并用放射免疫法（ＲＩＡ）和聚合酶链法（ＰＣＲ）作进一步检测。结果：ＥＬＩＳＡ所测３３例标本中，Ｐ／０．０５小于２．１的标本１８例，Ｐ／Ｎ实小于２．１的８例，ＲＩＡ检测上述Ｐ／０．０５小于２．１     

p16,CDK4和PCNA蛋白在滋养细胞肿瘤中的表达

用ＳＰ法检测滋养细胞肿瘤，葡萄胎和正常绒毛中ｐ１６蛋白，ＣＤＫ４及ＰＣＮＡ的表达，发现：（１）ｐ１６蛋白在肿瘤表达低于绒毛中（Ｐ〈０．０５），ｐ１６蛋白阳性标本的ＰＣＮＡ表达率低于ｐ１６阴性者（Ｐ〈０．０５）。（２）ＣＤＫ４表达在滋养细胞肿瘤，葡萄胎和绒毛三者间及与ＰＣＮＡ表达间无差异（Ｐ〉０．０５）。（３）ｐ１６阳性肿瘤患者３年存活率较高，提示ｐ１６基因突变可能是滋养细胞癌变的重要原因，检测ｐ１     

先天性巨结肠症根治术的经验体会

本文报告８７例先天性巨结肠症采用四种不同根治术式。术后早期并发症发生率：Ｓｏａｖｅ＇ｓ法（Ｓ法）４５％（１８／４０例，Ｐ＜０．０１），Ｄｕｈａｍｅｌ－Ｇｒｏｂ＇ｓ法（Ｄ－Ｇ法）３５％（５／１４例，Ｐ＞０．０５），Ｉｋｅｄａ＇ｓ法（Ⅰ法）１１％（３／２７例，Ｐ＞０．０５），Ｒｅｈｂｅｉｎ＇ｓ法（Ｒ法）１６％（１／６例）。５６例获得随访，术后晚期并发症发生率，Ｄ－Ｇ法２０％（２／１０例，Ｐ＞０．０５），Ｒ法５０％（３／６例），Ｓ法和Ⅰ法无术后晚期并发症（Ｐ＞０．０５和Ｐ＞０．０５）。随访病例排便功能评分：Ｓ法优、良７０％（１４例，Ｐ＞０．０５），差、极差３０％（６例，Ｐ＞０．０５），Ｄ－Ｇ法优、良９０％（９例，Ｐ＞０．０５），差、极差１０％（１例，Ｐ＞０．０５）；Ⅰ法优、良７８．９％（１５例，Ｐ＞０．０５），差、极差２１．１％（４例，Ｐ＞０．０５）；Ｒ法优、良３例，差、极差３例。我们的经验Ⅰ法和Ｄ－Ｇ法是根治先天性巨结肠的较理想的术式。     

一步及半巢式PCR检测石蜡包埋B细胞淋巴瘤组织克隆性IgH重排的比较

目的：建立一种简便有效的方法,来检测Ｂ细胞非霍奇金淋巴瘤（Ｂ－ＮＨＬ）石蜡包埋组织的免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）基因重排。方法：以ＩｇＨ的第三互补决定簇区（ＩｇＨ－ＣＤＲ３）为标志,用消化煮沸法和酚－氯仿法提取３６例Ｂ－ＮＨＬ及１０例扁桃体炎的石蜡包埋组织的基因组ＤＮＡ,比较两进行一步及半巢式聚合酶链反应（ＳｎＰＣＲ）,聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染后检测克隆性ＩｇＨ重排的结果。结果：Ｂ－ＮＨＬ组,３４例经酚－氯仿法提取ＤＮＡ,其一步及ＳｎＰＣＲ检测克隆性ＩｇＨ－ＣＤＲ３重排的阳性率分别为２６．５％和７６．５％（Ｐ〈０．０５）;２７例经消化煮沸法提取ＤＮＡ,其一步及ＳｎＰＣＲ的阳性率分别为７．４％和６６．７％（Ｐ〈０．０５）;２５例同时用上述２种方法提取ＤＮＡ,ＳｎＰＣＲ的阳性率分别为７６％和６８％（Ｐ〉０．０５）。对     

高分化型和低分化型肝细胞性肝癌的PCNA及ER的表达

本实验用增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）单抗ＰＣ１０及雌激素受体（ＥＲ）多抗对７０例肝细胞性肝场组织（高分化型４９例，低分化型２１例）作免疫组织化学染色，观察不同分化肝场组织ＰＣＮＡ表达及ＥＲ与肿瘤增殖的关系。结果显示５３例肝癌组织ＰＣＮＡ阳性，其中高分化３７例（７５．５％），低分化１６例（７６．２％）．二者阳性率无明显差异，ＥＲ染色２４例阳性，包括高分化１３例（２６．５％），低分化１１例（５２．４％）．后者阳性率显著高于前者（Ｐ＜０．０５），且ＥＲ表达与ＰＣＮＡ正相关（Ｐ＜０．０５）。以上结果提示仅凭ＰＣＮＡ判断肝癌分化程度及患者预后是不妥当的；雌激素系统可能对肝细胞性肝癌增殖有促进作用。     

雌,孕激素受体在大肠癌中的表达与预后关系

采用免疫组织化学ＰＡＰ法，测定１０５例大肠癌癌组织ＥＲ、ＰＲ表达情况和预后之间关系。结果发现大肠癌ＥＲ、ＰＲ阳性率分别为３４．３％（３６／１０５）和２１．０％（２２／１０５）。大肠癌ＥＲ、ＰＲＲ性与病人性别、年龄、肿瘤部位、大小、浸润深度无关（Ｐ＞０．０５）．而与大肠癌的组织分化程度、Ｄｕｋｅｓ分期、淋巴结转移相关（Ｐ＜０．０５）。ＥＲ（＋）ＰＲ（＋）和ＥＲ（＋）ＰＲ（－）者（９５．５％．９０．９％，８６．４％：１００．０％，７８．６％，７１．４％）的一、三、五年生存率均显著高于ＥＲ（一）ＰＲ（－）者（７１．０％，４４．９％，３７．７％）（Ｐ＜０．０５）。本实验证实大肠癌可能是一种激素依赖性肿瘤·对其激素受体的检测有可能成为判断大肠癌预后和选择内分泌治疗的重要标志之一。     

双带PCR提高检测血清HBV—DNA质量的意义

应用双带ＰＣＲ方法（ＤＢ－ＰＣＲ）检测了２４０份血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ。该方法能直接观察和判断假阴性和假阳性结果，提高了检测的准确性，与国内其它ＰＣＲ试剂比较，符合率分别为９４．０５％（ＤＢ－ＰＣＲ／华美产品）和９５．２８％（ＤＢ－ＰＣＲ／长城产品），ＨＢｅＡｇ阳性的血清，经ＤＢ－ＰＣＲ检测ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性者达９３．５５％（２９／３１）ＰＣＲ产物Ｓｏｕｔｈｅｍｂｌｏｔ后能与ＨＢＶ－ＤＮＡ探针杂交。     

p16,CDK_4和PCNA蛋白在滋养细胞肿瘤中的表达

用ＳＰ法检测滋养细胞肿瘤、葡萄胎和正常绒毛中ｐ１６蛋白、ＣＤＫ４及ＰＣＮＡ的表达，发现：①ｐ１６蛋白在肿瘤中表达低于绒毛中（Ｐ＜０．０５），ｐ１６蛋白阳性标本的ＰＣＮＡ表达率低于ｐ１６阴性者（Ｐ＜０．０５）。②ＣＤＫ４表达在滋养细胞肿瘤、葡萄胎和绒毛三者间及与ＰＣＮＡ表达间无差异（Ｐ＞０．０５）。③ｐ１６阳性肿瘤患者３年存活率较高。提示ｐ１６基因突变可能是滋养细胞癌变的重要原因。检测ｐ１６蛋白表达有助于估计患者预后。