不同浓度牛磺酸对兔角膜内皮细胞的影响

目的 探讨牛磺酸对兔眼角膜内皮细胞的毒副作用。方法 取家兔6只（共12眼）,每只眼制取6片组织片,用组织块培养法培养兔角膜内皮细胞,细胞接种于12孔培养板,分别加入2%、4%、6%、8%、10%的牛磺酸液（同一动物的左右眼加同一浓度牛磺酸溶液）,设立空白对照。倒置显微镜观察角膜内皮细胞的生长情况;在培养的第1、2、4、6、8天,将部分培养细胞用Wright染色后观察细胞形态。结果 空白对照和加入2%、4%、6%牛磺酸溶液培养的角膜内皮细胞,1周后均形成内皮细胞层,细胞形态呈六角形或类圆形。加入8%牛磺酸液培养的角膜内皮细胞,在第4天时生长不良,细胞胞体小;第8天时培养细胞死亡。加入10%牛磺酸液培养的角膜内皮细胞,在第2天时出现生长不良,细胞胞体小,部分细胞已死亡。同一动物的左右眼角膜内皮细胞生长速度和细胞形态相似。结论 2%~6%牛磺酸对兔角膜内皮细胞的生长无不良影响,提示该浓度范围的牛磺酸对角膜内皮细胞无毒副作用。     

牛磺酸对体外培养的兔角膜基质细胞增殖的影响

目的观察牛磺酸对兔角膜基质细胞增殖的影响。方法将体外培养的原代兔角膜基质细胞传至2～3代用于实验,分别加入25、50、100、200、400mmol／L的牛磺酸,用药后2、4、6、8天倒置显微镜下加台盼蓝染色活细胞计数,计算细胞抑制率,并于2、4、6天进行MTT方法检测。结果细胞计数和MTT法均显示牛磺酸浓度≥100mmol／L时,作用2天、4天和6天对兔角膜基质细胞增殖均有明显的抑制作用,其抑制作用呈剂量依赖性。结论牛磺酸具有抑制兔角膜基质细胞增殖的作用,该研究结果为防治PRK和LASEK术后角膜上皮下混浊（haze）形成提供了客观依据。     

兔眼角膜成纤维细胞原代培养

目的:建立眼角膜成纤维细胞体外培养的方法。方法:采用全角膜组织培养法培养兔角膜成纤维细胞。结果:在培养皿中培养1天后细胞开始贴壁,6天有新生细胞分出,形成梭形的成纤维细胞。传代细胞经4-6天可形成密集的成纤维细胞,细胞呈纤维状,呈漩涡形排列,排列整齐,局部细胞相互平行,第4、5代生长情况良好,细胞生长旺盛,细胞呈密集漩涡形排列。结论:眼角膜成纤维细胞全角膜组织培养法是可行的。     

角膜内皮层培养及后板层移植的实验研究

目的探讨体外构建角膜内皮层并进行移植的可能性.方法体外培养的兔角膜内皮细胞种植于羊膜基底膜上,形成单层角膜内皮层,并进行形态学、组织学及超微结构的观察.将构建的角膜内皮层对切除后板层的兔角膜进行移植,同时以无培养内皮细胞的羊膜移植作为对照,术后观察角膜透明度及厚度,对内皮层进行形态学和组织学观察.结果角膜内皮细胞在羊膜上生长呈单层,细胞为多角形,排列紧密,其形态及结构与正常兔角膜内皮组织相似.培养内皮层移植后,角膜维持相对透明及薄度;而对照眼角膜严重水肿、混浊,厚度明显大于实验眼角膜(P<0.01).培养内皮移植后具正常内皮层的结构和功能.结论羊膜是培养角膜内皮细胞移植的良好载体,培养角膜内皮移植有望治疗角膜内皮失偿疾病.     

水蛭素对体外培养的兔血管内皮细胞及平滑肌细胞生长的影响

目的探讨水蛭素对体外培养的兔血管内皮细胞及平滑肌细胞生长的影响及剂量依赖关系。方法用体外培养兔血管内皮细胞及平滑肌细胞第3~5代,加入96孔细胞培养板,同时加入不同浓度的水蛭素0.78、1.56、3.13、6.25、12.5、25 mg/L,每6孔为一个浓度组,1640培养液为空白对照组,共7组,培养48 h后用噻唑蓝比色试验(MTT法)测定各孔贴壁细胞的吸光值(OD)。结果与空白对照组相比,低、中、高浓度水蛭素作用于体外培养的兔血管内皮细胞后,细胞形态无明显改变,贴壁良好,生长无明显抑制作用(P>0.05);而水蛭素作用于兔血管平滑肌细胞后,与空白对照组相比,低浓度水蛭素对平滑肌细胞形态无明显改变,中、高浓度水蛭素作用于平滑肌细胞后,细胞密度有所减小、排列松散,OD值下降,呈现抑制平滑肌细胞的生长(P<0.05)。结论不同浓度水蛭素对体外培养兔血管内皮细胞生长无显著抑制作用;低浓度水蛭素对体外培养兔血管平滑肌细胞生长无明显抑制作用,中、高浓度水蛭素可抑制兔血管平滑肌细胞的生长。     

兔角膜上皮细胞体外原代培养和鉴定

目的 建立体外原代培养兔角膜上皮细胞简单经济实用的方法,并观察其体外生长的生物学特性.方法 采用全角膜组织培养法培养兔角膜上皮细胞并进行传代培养,通过形态学观察并应用免疫组织化学方法对细胞进行鉴定.结果 兔角膜上皮原代培养第2天,组织边缘有细胞游出,细胞和细胞核均呈圆形,胞核位于细胞中央或旁中央区;第3天,细胞呈扁平多...     

角膜内皮层培养及后板层移植的实验研究

目的探讨体外构建角膜内皮层并进行移植的可能性。方法体外培养的兔角膜内皮细胞种植于羊膜基底膜上,形成单层角膜内皮层,并进行形态学、组织学及超微结构的观察。将构建的角膜内皮层对切除后板层的兔角膜进行移植,同时以无培养内皮细胞的羊膜移植作为对照,术后观察角膜透明度及厚度,对内皮层进行形态学和组织学观察。结果角膜内皮细胞在羊膜上生长呈单层,细胞为多角形,排列紧密,其形态及结构与正常兔角膜内皮组织相似。培养内皮层移植后,角膜维持相对透明及薄度;而对照眼角膜严重水肿、混浊,厚度明显大于实验眼角膜(P<0.01)。培养内皮移植后具正常内皮层的结构和功能。结论羊膜是培养角膜内皮细胞移植的良好载体,培养角膜内皮移植有望治疗角膜内皮失偿疾病。     

兔角膜内皮细胞的原代培养

目的: 探讨兔角膜内皮细胞的培养方法。方法: 显微分离兔角膜后弹力层-内皮细胞层,采用贴壁法、贴壁消化法及两种消化法培养,观察每种方法细胞生长的特点。结果: 4种方法培养的兔角膜内皮细胞均呈单层密集生长,形态为六角形或多边形,具有活体细胞的形态特征。培养周期最短约为1周。结论: 将揭取的附有内皮细胞的后弹力层预培养1天后再进行消化培养的方法,可为实验研究提供有效的角膜内皮细胞培养方法。     

三种不同方法保存的兔角膜内皮细胞形态学观察

目的 通过观察兔角膜内皮细胞形态,了解不同保存方法和不同保存时期及时间点对角膜内皮细胞活性和密度的影响.方法 采用短期湿房4 ℃保存6 h、D-X角膜中期保存液4 ℃保存3 d、长期深低温保存3个月,取3组各自限定时间的保存角膜片进行检测,分别行角膜内皮细胞茜素红和台盼蓝活性染色、光学显微镜观察及图像分析.结果 长期深低温保存后的兔角膜内皮细胞活性率、细胞密度及六边形细胞率低于前两组,细胞面积高于前2组,均具有统计学差异.结论 正确掌握3种方法,维持角膜内皮细胞生物活性,虽然深低温保存方法对角膜内皮细胞活性和密度有一定影响,但其活性率在80%以上,仍在角膜移植手术可接受的范围内.     

兔角膜缘干细胞的体外原代培养和生物学鉴定

目的 建立兔角膜缘干细胞体外培养方法，观察其生物学特性。方法 用含20％胎牛血清1640培养液对兔角膜缘干细胞进行体外培养，倒置显微镜观察培养细胞体外生长的形态，电镜观察培养细胞的超微结构并进行免疫细胞化学和间接免疫荧光鉴定。结果 植块48～72h细胞开始贴壁生长，7～10d形成良好的单层，细胞呈圆形、卵圆形或多边形，类似角膜上皮细胞；电镜下，可见细胞表面有许多微绒毛，细胞间有桥粒连接，胞质丰富，胞质细胞器较多，含有线粒体等结构；免疫细胞化学和间接免疫荧光染色显示，培养第8天少量细胞角蛋白K3(AE5)免疫反应呈阳性，细胞质被染色，培养第14天和第21天，较多细胞．AE5免疫反应阳性。结论 含20％胎牛血清1640培养液能作为角膜缘干细胞培养的基础液。应用组织培养方法获得的原代培养细胞具有与正常角膜缘干细胞相一致的生物学特性。     

兔角膜上皮细胞培养后增殖能力的观察

目的:了解培养的兔角膜缘上皮细胞在原代及第2代细胞汇合时的增殖能力。方法:选健康新西兰白兔7只,显微镜下手术切取左眼上方少量角膜缘组织,采用组织块法分别进行培养,在原代上皮细胞汇合传代时(6鄄8d)和第2代细胞汇合时(10鄄12d),用流式细胞仪(FCM)检测样本的细胞周期和凋亡细胞。结果:培养的原代及第2代上皮细胞汇合时平均的增殖指数(PI)为19.1%和9.8%,凋亡细胞比例分别为0.57%和0.37%,处于增殖期细胞的比例在减少,而凋亡细胞的比例一直较低。结论:组织块法适合兔角膜缘上皮细胞培养,并且原代培养的兔角膜缘上皮细胞比第2代细胞具有更强的增殖能力,更适合进行细胞移植。     

Nd：YAG激光治疗后发性白内障对角膜内皮影响的研究

目的探讨Nd：YAG激光治疗后发性白内障对角膜内皮细胞的数量及形态的影响。方法实验组：对32例（32眼）后发性白内障患者行Nd：YAG激光后囊切开术,分别于术前0．5h,术后1d、1周、1个月与3个月测定术眼角膜内皮细胞密度及六边形细胞比例;同时选取32例、32眼（Phaco＋IOL后,后囊混浊未行Nd：YAG激光后囊切开术）作为对照组。记录并分析两组内皮细胞变化趋势。诘果两组术后随访期内角膜内皮细胞密度变化差异无统计学意义,但六边形细胞的比例下降程度实验组大于对照组。结论一定能量范围的Nd：YAG激光对角膜内皮细胞的密度无明显影响,而对内皮细胞的正常形态产生影响。     

牛磺酸对角膜基质细胞增殖和移行的影响

目的:观察牛磺酸(taurine)对体外培养的兔角膜基质细胞增殖和移行的影响。方法:将原代培养的兔角膜基质细胞传至2代～3代用于实验,分别加入不同浓度的牛磺酸,用细胞计数法和MTT法检测牛磺酸对角膜基质细胞增殖的影响;用缺损闭合法观察牛磺酸对角膜基质细胞移行的影响。结果:细胞计数法和MTT法均显示牛磺酸浓度≥100 mmol/L时对兔角膜基质细胞增殖均有明显的抑制作用,其抑制作用呈剂量依赖性。缺损闭合法显示牛磺酸对角膜基质细胞移行具有抑制作用。牛磺酸浓度低于100 mmol/L时对兔角膜基质细胞抑制作用不明显。结论牛磺酸具有抑制兔角膜基质细胞增殖和移行的作用,对于防治角膜创伤修复后瘢痕形成,特别是准分子激光术后角膜上皮下雾状混浊的形成具有十分重要的意义。     

虹膜固定型屈光性人工晶状体植入术对角膜内皮细胞的影响

目的 评价虹膜固定型屈光性人工晶状体植入术对患者角膜内皮细胞的影响。方法我院采用虹膜固定型屈光性人工晶状体植入术治疗高度近视患者12例（19眼）。分别于术前、术后3个月及6个月,检测所有患者角膜内皮细胞计数、计算角膜内皮丢失率以及人工晶状体与角膜的距离,并作比较分析。结果所有患眼均手术成功．术后第1天11眼角膜透明,8眼角膜上皮轻度水肿,经局部及全身糖皮质激素对症治疗后,于术后3～5d消退;术后随访6个月,所有患者角膜均透明。术后3、6个月角膜内皮计数[（2783±214）、（2749±232）个／mm^2）]均较术前[（2937±196）个／mm^2]明显减少（均P〈0．05）;而术后6个月角膜内皮计数、角膜内皮丢失率[（5．76±0.23）％]以及人工晶状体与角膜的距离[（2．69±037）mm]与术前3个月[（5．24±0．11）％、（2．73±0．18）mm]均无明显差异（均P〉0．05）。结论虹膜固定型屈光性人工晶状体植入术后,角膜内皮细胞近期存在丢失现象,但3个月后趋于稳定,中远期效果尚需进一步观察和研究。     

角膜内皮细胞计数影响因素的相关性分析

目的 探讨影响角膜内皮细胞的相关因素以及角膜内皮检查在内眼手术前的重要性.方法 回顾性分析2010-04～2010-05在广西区人民医院住院病人100例术前测量角膜内皮细胞计数,采用SPSS17.0统计软件进行相关分析及t检验.结果 年龄、性别、民族及眼外伤与角膜内皮细胞计数相关程度低,内眼手术与角膜内皮细胞计数相关程度普通,患者手术眼内皮细胞计数低于对侧未手术眼内皮细胞计数（P〈0.05）,而眼外伤患者伤眼与对侧健眼角膜内皮细胞数比较,差异无统计学意义（P〉0.05）.结论 角膜内皮检查在内眼手术前具有相当的重要性,角膜内皮检查有利于减少临床上内眼手术后角膜内皮失代偿的发生.     

手法小切口白内障手术对糖尿病白内障患者角膜变化的影响

手法小切口白内障手术（MSICS）对糖尿病白内障患者角膜内皮细胞和角膜厚度变化的影响。方法60 例2 型糖尿病白内障患者60 只眼睛（糖尿病组）以及60 例年龄匹配的非糖尿病棕色白内障60 只眼睛（对照组）接受MSICS。术前、术后1、6 和12 周采用非接触角膜内皮显微镜检测所有患者角膜内皮细胞及角膜中央厚度。并且评估角膜内皮细胞形态学和六角形细胞百分比变化。结果对照组术前平均角膜内皮细胞计数高于糖尿病组（p <0.05）。两组术后角膜内皮细胞均减少（单因素方差分析p<0.05）。糖尿病组术后角膜内皮细胞数的减少（14.19%, p<0.05）高于非糖尿病组（8.05%）。糖尿病组角膜中央厚度增加大于对照组（p <0.05）。糖尿病组六角形细胞百分比的变化大于对照组（p <0.05）。组间变异系数的差异无统计学意义（p <0.05）。结论与非糖尿病患者相比,糖尿病患者MSICS 术后角膜内皮细胞损伤更多。建议糖尿病患者接受眼内手术前,对角膜内皮细胞进行评估。     

Phakic 6H型有晶状体眼前房型人工晶状体植入矫正高度近视术后角膜内皮细胞密度临床观察

目的 观察Phakic 6H型有晶状体眼前房型人工晶状体(ACP-IOL)植入矫正高度近视手术后远期角膜内皮细胞密度,并评价手术的安全性.方法 收集2001年9月-2006年3月间行Phakic 6H型ACP-IOL.植入术矫正高度近视患者共170例(283眼),经连续随方,对最终行ACP-IOL取出的7例(7眼)患者的临床资料进行回顾性分析.使用SP-2000P型角膜内皮显微镜定期测量角膜中央、上方、下方、颞侧及鼻侧5个方位的角膜内皮细胞密度.结果 7例患者平均随访时间为5年,6例平均角膜内皮细胞丢失数为2 105个/mm2,平均丢失率为73.71％(1例因角膜失代偿无法测量出内皮细胞密度).4例行ACP-IOL取出+透明晶状体摘除+后房型人工晶状体(IOL)植入,1例行ACP-IOL取出+超声乳化白内障吸除+后房型IOL植入,2例行ACP-IOL取出.结论Phakic 6H型ACP-IOL对角膜内皮的远期影响可致角膜内皮功能临界失代偿甚至失代偿,发现角膜内皮功能处于临界失代偿或内皮有明显损伤时须尽快取出ACP-IOL.